一種同時測定液體保健食品中非法添加的多種化學(xué)藥物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥非法添加品的測定，具體地說，是涉及一種同時測定液體保 健食品中非法添加的多種化學(xué)藥物的方法，屬于醫(yī)藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前我國已批準(zhǔn)的保健食品的保健功能有減肥、緩解體力疲勞、輔助降血脂、輔助 降血壓、輔助降血糖、輔助改善記憶力等27種，近年來，隨著社會競爭壓力的不斷增大和老 年化社會的擴大，輔助改善記憶力類保健品正步入人們的學(xué)習(xí)、工作和生活中，常見功能有 改善記憶力、補充大腦營養(yǎng)等。"輔助改善記憶"的保健功能主要通過補充大腦正常運行所 必須的物質(zhì)、增加大腦細胞對氧氣的利用、提供能夠促進腦部新陳代謝排出的物質(zhì)等功效。 然而不法商家為了使保健品起效快，以達到增加銷售量目的，會在保健品中非法添加化學(xué) 藥物，但化學(xué)藥物的副作用往往會嚴(yán)重影響人們的身體健康。
[0003] 目前用于輔助改善記憶力類保健食品非法添加的篩查方法較少，同時檢測多種非 法添加藥物的方法更是少之又少。因此，針對此類保健食品中潛在的、可能添加化學(xué)藥物建 立一種有效的、準(zhǔn)確的檢測方法，預(yù)防輔助改善記憶類保健食品進入市場后導(dǎo)致的不良事 件發(fā)生，確保其安全性。本研宄依據(jù)相關(guān)發(fā)明通過對17種促智類化學(xué)藥品（多奈哌齊、石杉 堿甲、依達拉奉、倍他司汀、煙酸占替諾、吡拉西坦、加蘭他敏、咖啡因、茴拉西坦、氟馬西尼、 雌三醇、氟桂利嗪、萘普生、己烯雌酚、尼莫地平、阿米三嗪、雙氯芬酸鈉）建立高效液相色 譜分析方法，應(yīng)用于改善記憶力類保健食品中非法添加化學(xué)藥物的篩查。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種同時測定液體保健食品中非法添加的多 種化學(xué)藥物的方法，該方法操作簡便、準(zhǔn)確、快速檢測液體保健食品中17種非法添加化學(xué) 物，可用于輔助改善記憶類保健食品中非法添加化學(xué)藥品的定性篩查和定量檢測。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：
[0006] 一種同時測定液體保健食品中非法添加的多種化學(xué)藥物的方法，依次包括下述步 驟：
[0007] 1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
[0008] 分別精密稱取17種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，加80%乙醇水溶液使成濃度為0.lmg/mL，檢測 17種化學(xué)藥物單標(biāo)色譜和混標(biāo)色譜圖；
[0009] 2)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
[0010] 取標(biāo)準(zhǔn)溶液適量加80%乙醇水溶液，分別配制成100yg/mL、200yg/mL、300yg/mL、400yg/mL、500yg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶；
[0011] 3)樣品前處理
[0012] 取相當(dāng)于一次口服劑量，置于50mL容量瓶中，加10mL80%乙醇水溶液，超聲處理 20分鐘，用乙醇-水溶液定容至刻度，搖勻，過濾，濾液待用；
[0013] 稱取相當(dāng)于一次口服劑量，置于100mL錐形瓶中，精密加入50mL80%乙醇水溶 液，稱其重量，超聲提取20分鐘，冷卻，用乙醇-水溶液補足重量，過濾，濾液待用；
[0014] 4)凈化
[0015] 精密量取上述濾液lmL以約lmL/min流速通過C18-SPE柱，用3mL乙醇-水洗脫， 合并流出液與洗脫液，用0. 22ym有機濾膜過濾即得待測樣品。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案建立了使用同一種色譜條件同時測定輔 助改善記憶類保健食品中可能添加的17種化學(xué)藥物含量的高效液相方法，在20min內(nèi)完成 了對各化合物的分析測定，在保證分離度的情況下，實現(xiàn)了快速有效的高通量分析，可為監(jiān) 測輔助改善記憶類保健食品非法添加藥物提供強有力的技術(shù)支持。
【具體實施方式】
[0017] 下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任 何人在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改仍在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
[0018] 實施例1
[0019] 1材料與方法
[0020] 1. 1 材料
[0021] LL1樣品來源
[0022] 輔助改善記憶力類保健食品來源于市場銷售樣品。
[0023] 1. 1. 2主要儀器與試劑
[0024] Agilent1260高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器，美國Agilent)，XA20OTU電 子分析天平（瑞士梅特勒公司），ClassicUVF超純水器（英國ELGA公司），P300H超聲 波清洗器（德國Elma公司），Sigma3K15高速離心機（德國賽多利斯公司），C18-SPE柱 (60mg/3mL,天津博納艾杰爾科技有限公司）。
[0025] 多奈哌齊、石杉堿甲、依達拉奉、倍他司汀、煙酸占替諾、吡拉西坦、加蘭他敏、咖啡 因、茴拉西坦、氟馬西尼、雌三醇、氟桂利嗪、萘普生、己烯雌酚、尼莫地平、阿米三嗪、雙氯 芬酸鈉對照品均購于中國食品藥品檢定研宄院，純度均多98. 5% ;甲醇和乙腈（液質(zhì)級， B&J)，其它試劑均為分析純。實驗用水為經(jīng)ELGAPURELABClassicUVF凈化系過濾的去離 子水。
[0026] 1. 2 方法
[0027] 1. 2. 1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
[0028] 1. 2. 1. 1標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密稱取17種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，加80%乙醇水溶液使成濃 度為 0?lmg/mL。
[0029] 1. 2. 1. 2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：取標(biāo)準(zhǔn)溶液適量加80%乙醇水溶液，分別配制成100yg/ mL、200yg/mL、300yg/mL、400yg/mL、500yg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液。
[0030] 1.2. 2樣品前處理
[0031] 稱取相當(dāng)于一次口服劑量，置于100mL錐形瓶中，精密加入50mL80%乙醇水溶 液，稱其重量，超聲提取20分鐘，冷卻，用乙醇-水溶液補足重量，過濾，濾液待用。
[0032] 1. 2. 2. 4凈化：精密量取上述濾液lmL以約lmL/min流速通過C18-SPE柱（使用 前分別以3mL甲醇，水活化），用3mL乙醇-水洗脫，合并流出液與洗脫液，用0. 22ym有機 濾膜過濾即得待測樣品。
[0033] 1. 2. 3色譜條件
[0034] 色譜柱：ThermoAccliaimTMMixed-ModeWCX-1 柱（150mm2. 1mm，3ym);流動 相：A:水；B:800mmol/L醋酸一醋酸鈉緩沖液，pH6. 0 ;C:乙腈；梯度洗脫程序：0~lOmin， 15%~45%A、10%B、5%~45%C;10~12min，45%A、10%B、45%C;12~15min， 45%~31%A、10%~14%B、45%C;15 ~15.lmin，31%~0%A、14%~50%B、50%C; 15.1~17min，0%A、50%B、50%C;17~17.1min，0%~85%A、50%~10%B、50%~5% C;17. 1 ~20min，85%A、10%B、5%C;在 85%A、10%B、5%C下平衡 3min。流速：0? 8mL/ min;柱溫：45°C;進樣量：2y1 ;檢測波長：220nm為主要檢測波長；254nm、280nm輔助定性； 各化合物的最大吸收波長（見表1)。
[0035] 2.結(jié)果與討論
[0036] 2. 1色譜條件的選擇
[0037] 2. 1. 1色譜柱的選擇
[0038] 選用美國Thermo公司的三種液相色譜柱進行比較，分別為syncronis C18-AQ4.6X250mm，5ym)、Hilic-10(2.1X150mm，3ym)以及AcclaimTMMixed-Mode WCX-1 (2. 1X150mm，3um)，由于17種待測物，大多為堿性物質(zhì)，也有少部分酸性物質(zhì)，C18色 譜柱與Hilic柱未能實現(xiàn)17種化合物一次性分離，而離子混合型WCX色譜柱作分離，則能 實現(xiàn)一次進樣對所有物質(zhì)進行分離。
[0039] 2. 1. 2流動相的選擇
[0040] 由于待分析的化合物種類較多，極性差別較大，選用離子混合型WCX色譜柱的同 時，流動相pH的變化會直接影響各物質(zhì)的出峰時間，本發(fā)明提供的技術(shù)方案正是通過三種 溶劑的梯度變化洗脫，從而改變分析時的pH變化，達到17種物質(zhì)能在WCX色譜柱上分離， 但緩沖鹽的pH應(yīng)為6. 3~6. 5,否則吡拉西坦、萘普生和咖啡因難以分離。
[0041] 2. 1. 3檢測波長的選擇
[0042] 因17種化學(xué)藥物最大吸收波長在210~280nm不等，吡拉西坦在此范圍更無最 大吸收波長，故本發(fā)明采用二極管陣列檢測器，選用220nm為主要檢測波長，254nm、280nm 輔助定性；可同時檢測到17種化學(xué)藥物，結(jié)果只需將254nm、280nm波長響應(yīng)值與220nm響 應(yīng)值做比值對比，可實現(xiàn)輔助定性。
[0043] 2. 2標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的穩(wěn)定性
[0044] 對標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液分別在0小時、1小時、8小時、12小時與24小時進針，考察溶液的 穩(wěn)定性。研宄表明，對照溶液有效使用在8小時內(nèi)的有吡拉西坦，12小時內(nèi)的有加蘭他敏、 倍他司汀、己烯雌酚、阿米三嗪、多奈哌齊、氟桂利嗪，24小時以內(nèi)的有萘普生、咖啡因、依達 拉奉、雙氯芬酸鈉、茴拉西坦、氟馬西尼、煙酸占替諾、雌三醇、石杉堿甲、尼莫地平。
[0045] 2. 3線性關(guān)系、檢出限、回收率試驗
[0046] 2. 3. 1線性關(guān)系、檢出限
[0047] 取標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按1. 2的色譜條件進樣分析，以峰面積Y對標(biāo)準(zhǔn)品的濃度X(mg/L) 進行回歸分析，按照S/N:3計算檢出限（LOD)、S/N:10計算檢出限（L0Q)、17種化學(xué)藥物的 回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限。（見表1)
[0048] 表1 17種化學(xué)藥物檢測數(shù)據(jù)
[0049]
【主權(quán)項】
1. 一種同時測定液體保健食品中非法添加的多種化學(xué)藥物的方法，其特征在于，依次 包括下述步驟： 1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 分別精密稱取17種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，加80 %乙醇水溶液使成濃度為0.lmg/mL，檢測17 種化學(xué)藥物單標(biāo)色譜和混標(biāo)色譜圖； 2) 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 取標(biāo)準(zhǔn)溶液適量加80 %乙醇水溶液，分別配制成100yg/mL、200yg/mL、300yg/mL、 400yg/mL、500yg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶； 3) 樣品前處理 取相當(dāng)于一次口服劑量，置于50mL容量瓶中，加IOmL80%乙醇水溶液，超聲處理20分 鐘，用乙醇-水溶液定容至刻度，搖勻，過濾，濾液待用； 4) 凈化 精密量取上述濾液ImL以約lmL/min流速通過C18-SPE柱，用3mL乙醇-水洗脫，合并 流出液與洗脫液，用0. 22ym有機濾膜過濾即得待測樣品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時測定液體保健食品中非法添加的多種化學(xué)藥物的方法旨在提供一種操作簡便、準(zhǔn)確、快速，能實現(xiàn)液體保健食品中17種非法添加化學(xué)物的同時分析，可用于輔助改善記憶類保健食品中非法添加化學(xué)藥品的定性篩查和定量檢測；其技術(shù)方案是這樣的：該方法依次包括下述步驟：1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備；2)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；3)樣品前處理；4)凈化；屬于醫(yī)藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104820058
【申請?zhí)枴緾N201510242808
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 羅達龍, 劉慧妍
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月12日