一種二十五味珊瑚丸的一測(cè)多評(píng)快速定性與定量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種二十五味珊瑚丸的一測(cè)多評(píng)快速定性與定量檢測(cè)方法?？焖俣ㄐ?方法是指采用薄層鑒別方法，對(duì)紅花、西紅花、打箭菊、甘草、獐牙菜、訶子、木香、丁香和藏 菖蒲9味中藥的快速薄層鑒別；快速定量方法是指用高效液相色譜方法，雙通道不同檢測(cè) 波長(zhǎng)，對(duì)丁香酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的一測(cè)三評(píng)定量測(cè)定。
【背景技術(shù)】
[0002] 在中藥復(fù)方制劑中，特別是二十五味以上組方的復(fù)方制劑，由于藥味多，各藥味的 劑量低，眾多的微量有效成分相互干擾，薄層鑒別率低，定量測(cè)定指標(biāo)少，以2010年版中國(guó) 藥典一部為例，收載的二十五味以上的復(fù)方制劑，粗略的計(jì)算了一下約有14個(gè)品種，其薄 層鑒別收載率平均為12%左右，定量測(cè)定指標(biāo)，按測(cè)定的成分計(jì)算，平均不到1種成分。也 就是說(shuō)在一個(gè)二十五味以上組方的制劑中，只有3-4味藥材能夠識(shí)別其有無(wú)投料，一種成 分能控制其含量，而眾多的藥材與有效成分是無(wú)法控制其投料情況與含量的，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)識(shí) 別水平太低，無(wú)法給質(zhì)量監(jiān)督提供有力支撐。
[0003] 即便在質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)相對(duì)較多的品種中，薄層鑒別也多是一個(gè)品種，如有N項(xiàng)鑒 另IJ，就要制備N種供試品溶液，N塊薄層板，展開(kāi)N次，鑒別N味藥材的傳統(tǒng)鑒別模式。為排 除干擾，樣品的前處理程序多復(fù)雜、煩瑣，需用大量的有機(jī)試劑反復(fù)純化處理，費(fèi)力、費(fèi)時(shí)、 費(fèi)試劑、污染環(huán)境，危害健康，檢測(cè)周期長(zhǎng)。這樣，一個(gè)含6~7項(xiàng)薄層鑒別和二項(xiàng)含量測(cè)定 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)完成，一般要花費(fèi)一周的時(shí)間，如遇復(fù)試，時(shí)間翻倍，檢測(cè)速度嚴(yán)重制約著 中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)速度。所以尋找簡(jiǎn)便、快捷的檢測(cè)方法、提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)成本，也是 中藥質(zhì)量控制必須突破的難關(guān)。以中國(guó)藥典2010年版一部收載的金蒲膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為例 剖析如下。該品種由24味中藥組成，其標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下收載了 7項(xiàng)薄層鑒別和兩項(xiàng)含量測(cè)定。具 體方法如下：
[0004] 【鑒別】(1)取本品內(nèi)容物4g，加甲醇20ml，浸漬10分鐘，濾過(guò)，取濾液10ml，蒸干， 殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸lml，置水浴中加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提 取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液。另取 大黃對(duì)照藥材0. lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅 膠G薄層板上，以體積比為15 : 5 : 1的30~60°C的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶 液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變成紅色。
[0005] (2)取本品內(nèi)容物4g，加濃氨試液Iml與三氯甲烷20ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾 過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇 制成每1ml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液20 μ 1、對(duì)照品溶液1 μ 1，分別 點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10 : 6 : 1的正己烷-三氯甲烷-甲醇為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰，揮盡薄層板上吸附的碘，置紫外光燈365nm 下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0006] (3)取本品內(nèi)容物3g，加三氯甲烷25ml，加熱回流5小時(shí)，濾過(guò)，濾液中加活性炭 0. 3g，振搖，放置30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶 液。另取華蟾酥毒基對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取 供試品溶液10 μ 1、對(duì)照品溶液2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4 : 3 : 3 的環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱 至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0007] (4)取本品內(nèi)容物6g，加80 %丙酮溶液20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液， 作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材〇.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各 1〇μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7 : 0.4 : 2 : 3的乙酸乙酯-甲醇-甲 酸-水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點(diǎn)。
[0008] (5)取本品內(nèi)容物6g，加甲醇50ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加1 %氫氧化 鈉溶液洗滌2次，每次20ml，取正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干， 殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含Img 的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液10 μ 1、對(duì)照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以體積比為13 : 7 : 2的三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出， 晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，l〇5°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；置紫外光燈365nm下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0009] (6)取本品內(nèi)容物5g，加三氯甲烷20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作為 對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液10 μ 1、對(duì)照品溶液4 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以 體積比為15 : 7 : 5的異辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0010] ⑵取本品內(nèi)容物10g，加三氯甲烷30ml，加熱回流4小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干， 殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液。另取穿山甲對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥 材溶液。吸取上述兩種溶液各1〇μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 : 1 的甲苯-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴以體積比為9 : 1的醋酐-硫酸的混合溶液， 80°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點(diǎn)。
[0011] 苦參含量測(cè)定
[0012] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為 18 : 18 : 70 : 0.1的乙腈-甲醇-pH6. 8的磷酸鹽緩沖液-三乙胺為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220nm，理論板數(shù)，按苦參堿峰計(jì)算不低于8000。
[0013] 對(duì)照品溶液制備取苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60 μ g的 溶液，即得。
[0014] 供試品溶液制備取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0. 5g，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，加濃氨溶液2ml使?jié)駶?rùn)，再加三氯甲烷25ml，以功率250w，頻率33kHz，超聲處 理20分鐘，濾過(guò)，取濾液，再用三氯甲烷洗滌殘?jiān)⑷萜骷盀V器4次，每次5ml，濾過(guò)，合并濾 液，置水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得。
[0015] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
[0016] 本品每粒含苦參以苦參堿C16H24N2O計(jì)，不得少于0. 16mg。
[0017] 蟾酥含量測(cè)定
[0018] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為 43.5 : 56. 5的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm，理論板數(shù)，按華蟾酥毒基峰計(jì)算應(yīng)不 低于4000。
[0019] 對(duì)照品溶液制備取華蟾酥毒基對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 〇· 16mg的溶液，即得。
[0020] 供試品溶液制備取本品40粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，研細(xì)，取約5g，精密稱 定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流5小時(shí)，濾過(guò)，濾液加活性炭0. 3g，振搖，放 置5分鐘，濾過(guò)，用三氯甲烷10ml，分次洗滌濾器及濾渣，合并濾液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量 使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0021] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供