一種植物組織的石蠟切片方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物領(lǐng)域，特別涉及一種植物組織的石蠟切片方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法，主要用于觀察細(xì)胞組織 的形態(tài)，制成的裝片經(jīng)過(guò)封片后可制成永久裝片，并長(zhǎng)期保存。
[0003] 常規(guī)的石蠟切片制作程序包括固定、脫水、透明、浸蠟、包埋和切片染色等步驟，涉 及到的程序和環(huán)節(jié)繁多，周期長(zhǎng)。并且不同組織材料所用的試劑、濃度、時(shí)間各不相同，并且 制作過(guò)程中容易出現(xiàn)切片彎曲、組織破碎等問(wèn)題，造成制片失敗。
[0004] 造成制片的失敗的原因可以追溯到石蠟切片制作過(guò)程中的許多不足，包括脫水、 透明、浸蠟、包埋、切片、脫蠟及封片等等，如脫水不徹底，則會(huì)造成透明不徹底，從而使得石 蠟浸入組織不夠充分，導(dǎo)致組織變形、切片失敗等，所以整個(gè)石蠟切片制作過(guò)程需要大量的 時(shí)間摸索處理時(shí)間、試劑條件、處理方式等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有的石蠟切片方法中存在的上述問(wèn)題和蕎麥果皮材料特 點(diǎn)，提供一種新型蕎麥果皮切片方法，通過(guò)"含水式"包埋的方法可以替代常規(guī)石蠟切片的 脫水、透明、浸蠟等步驟，同時(shí)在展片時(shí)用解剖針剝?nèi)ナ炋娲撓灢襟E，大大減少了切片 過(guò)程的時(shí)間和操作。該方法切出10~16ym厚度的蕎麥果皮組織切片，組織完整、各部位 顯示清晰，明顯增強(qiáng)切片和觀察效果。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了一種植物組織的石蠟切片方法，包括如下步驟：
[0008] 步驟1 :獲得具有缺口、除去多余部位的目的植物組織；
[0009] 步驟2 :取所述目的植物組織浸泡，獲得含水率為20 %~40 %的含水植物組織；
[0010] 步驟3 :將所述含水植物組織多余水分吸干，獲得待包埋植物組織，經(jīng)包埋、切片、 展片、分蠟、染色、封片。
[0011] 本發(fā)明中所述含水率指絕對(duì)含水率（果皮中水分的質(zhì)量/果皮干重*100)。
[0012] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述植物組織為蕎麥果皮。
[0013] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟1所述缺口的切割方式為在 所述植物組織距頂部和/或底部1/4~2/5處環(huán)形橫切。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟2所述浸泡采用65~70°C的 水浸泡所述目的植物組織5~lOmin。
[0015] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟3所述包埋為將盛有60~ 65°C的石蠟的包埋底模置于0°C冰浴15~25s后將所述待包埋植物組織的缺口朝上，轉(zhuǎn)移、 浸入到盛有融化的石蠟的包埋底模，在所述包埋底模上架好包埋框，加入融化的石蠟以浸 沒(méi)包埋框底部。
[0016] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟3所述融化的石蠟為60~ 65 °C的石蠟。
[0017] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟3所述切片獲得的組織切片 的厚度為10~16 y m。
[0018] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟3所述展片是將所述組織切 片在45~50°C的水中展片；所述分蠟為將所述組織切片中待包埋植物組織四周的石蠟分 離。
[0019] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法步驟3所述染色為番紅~固綠 染色，具體為：將展片、分蠟后的組織切片置于滴有一滴番紅的凹形載玻片中染色15~ 2〇min，置于水中洗滌20~30min，每隔5min震蕩一次，直至無(wú)紅色染液從組織中滲出，然后 依次浸入50%、75%、85%的乙醇中，各2min;
[0020] 按照番紅的染色方式，對(duì)番紅染色后的組織切片進(jìn)行固綠染色，時(shí)間10s，置于無(wú) 水乙醇中l(wèi)Omin，二甲苯lOmin。
[0021] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，石蠟切片方法所述封片具體為吸取一滴二甲苯 于載玻片中央，將染色后的切片置于二甲苯中，展開(kāi)，棄去多余的二甲苯，滴加一滴中性樹(shù) 膠，用載玻片進(jìn)行封片。
[0022] 具體的，本發(fā)明提供的植物組織石蠟切片方法包括以下步驟：
[0023] (1)利用雙面刀片采用橫切的方式，橫切區(qū)域?yàn)榉N子最寬處與種臍之間部分；
[0024] (2)將（1)步驟中得到的果皮置于溫水中浸泡；
[0025] 步驟（2)中的溫水是指溫度為65~70°C的純凈水，浸泡時(shí)間至為5~lOmin;
[0026] (3)用濾紙吸干（2)中浸泡過(guò)后的果皮表面以及內(nèi)側(cè)的水分，然后快速轉(zhuǎn)移、浸入 到裝有融化的石蠟的金屬包埋底模中，然后在包埋底模上架好包埋框，再次加入適當(dāng)融化 的石蠟；在步驟（3)中所涉及到的包埋方式為，將果皮切口朝上，緩慢浸入到包埋底模中， 底模中預(yù)先裝滿60~65°C的石蠟，并在冰上放置15~25s后，再將果皮浸入其中；
[0027] (4)切片，展片，染色
[0028] 將剝?nèi)ナ灪蟮慕M織切片置于滴有一滴番紅的凹形載玻片中染色15~20min，然 后置于純凈水中洗滌20~30min，每隔5min震蕩一次，直至無(wú)紅色染液從組織中滲出，然后 依次浸入50 %、75%、85%的乙醇中，各2min，參照本方法中番紅的染色方式，對(duì)組織切片 進(jìn)行固綠染色，時(shí)間l〇s，然后置于無(wú)水乙醇中l(wèi)Omin，二甲苯lOmin;
[0029] (5)封片
[0030] 吸取一滴二甲苯于載玻片中央，將組織切片置于二甲苯中，用解剖針緩慢將其展 開(kāi)，用一次性吸管吸去多余的二甲苯，滴加中性樹(shù)膠，用載玻片進(jìn)行封片。
[0031] 本發(fā)明與常規(guī)石蠟切片方法過(guò)程對(duì)比，見(jiàn)表1。
[0032]表1本發(fā)明提供的石蠟切片方法與常規(guī)石蠟切片方法過(guò)程對(duì)比
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種植物組織的石蠟切片方法，其特征在于，包括如下步驟： 步驟1:獲得具有缺口、除去多余部位的目的植物組織； 步驟2 :取所述目的植物組織浸泡，獲得含水率為20 %~40 %的含水植物組織； 步驟3 :將所述含水植物組織多余水分吸干，獲得待包埋植物組織，經(jīng)包埋、切片、展 片、分蠟、染色、封片。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石蠟切片方法，其特征在于，所述植物組織為蕎麥果皮。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟1所述缺口的切割方式 為在所述植物組織距頂部和/或底部1/4~2/5處環(huán)形橫切。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟2所述浸泡采用 65~70°C的水浸泡所述目的植物組織5~lOmin。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟3所述包埋為將 盛有60~65°C的石蠟的包埋底模置于0°C冰浴15~25s后將所述待包埋植物組織的缺口 朝上，轉(zhuǎn)移、浸入到盛有融化的石蠟的包埋底模，在所述包埋底模上架好包埋框，加入融化 的石蠟以浸沒(méi)包埋框底部。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟3所述融化的石蠟為60~ 65 °C的石蠟。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟3所述切片獲得 的組織切片的厚度為10~16 ym。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟3所述展片是將 所述組織切片在45~50°C的水中展片；所述分蠟為將所述組織切片中待包埋植物組織四 周的石蠟分離。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，步驟3所述染色為 番紅~固綠染色，具體為：將展片、分蠟后的組織切片置于滴有一滴番紅的凹形載玻片中染 色15~20min，置于水中洗絳20~30min，每隔5min震蕩一次，直至無(wú)紅色染液從組織中 滲出，然后依次浸入50 %、75 %、85 %的乙醇中，各2min ; 按照番紅的染色方式，對(duì)番紅染色后的組織切片進(jìn)行固綠染色，時(shí)間l〇s，置于無(wú)水乙 醇中 lOmin，二甲苯 lOmin。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的石蠟切片方法，其特征在于，所述封片具體為吸 取一滴二甲苯于載玻片中央，將染色后的切片置于二甲苯中，展開(kāi)，棄去多余的二甲苯，滴 加一滴中性樹(shù)膠，用載玻片進(jìn)行封片。
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物領(lǐng)域，特別涉及一種植物組織的石蠟切片方法。本方法中采用蕎麥果皮經(jīng)過(guò)溫水浸泡后，果皮組織中含有20％～40％水分，然后采用石蠟包裹含水的組織的“含水式”包埋法，通過(guò)“含水式”包埋的方法可以替代常規(guī)石蠟切片的脫水、透明、浸蠟等步驟，同時(shí)在展片時(shí)用解剖針剝?nèi)ナ炋娲撓灢襟E，大大減少了切片過(guò)程的時(shí)間和操作。該方法切出10～16μm厚度的蕎麥果皮組織切片，組織完整、各部位顯示清晰，明顯增強(qiáng)切片和觀察效果。
【IPC分類】G01N1-28, G01N1-30
【公開(kāi)號(hào)】CN104849110
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510156195
【發(fā)明人】趙鋼, 向達(dá)兵, 宋超, 萬(wàn)燕, 譚茂玲, 晏林, 宋月, 周鑫
【申請(qǐng)人】成都大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年4月3日