一種長效腫瘤組織滲液樣本保存液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種樣本保存液，具體地說是一種長效腫瘤組織滲液樣本保存液。
【背景技術】
[0002] 炎癥是腫瘤的第七大特征。腫瘤基因的活化會導致炎癥分子的產生及炎癥細胞的 聚集。一組細胞因子蛋白，包括IL-1，IL-6，TNF和RANKL等炎癥因子對下游的關鍵轉錄 因子NF-kappaB活化并且促進炎癥。腫瘤組織血管內的液體和腫瘤細胞成分通過血管壁進 入組織間質、體腔、粘膜表面和體表的過程稱為腫瘤性滲出。所滲出的液體和細胞總稱為腫 瘤性滲出物或滲出液。以血管反應為中心的腫瘤性滲出病變是腫瘤性炎癥最具特征性的變 化，炎性滲出物內含有較高的蛋白質和較多的細胞成分以及他們的崩解產物。此過程中血 管反應主要表現為血流動力學改變(炎性充血)、血管通透性增加(炎性滲出）、液體滲出和 細胞滲出（炎性浸潤)。由于腫瘤組織周圍炎性浸潤，腫瘤性滲出組織滲液中可能含有腫瘤 組織細胞原血紅素，它是在組織細胞惡變過程中產生一種因果性生物標志因子，而組織滲 液中是否含有腫瘤組織細胞原血紅素對組織是否惡變的鑒定具有重要意義。檢測腫瘤組織 細胞原血紅素是篩查惡性腫瘤的一種新方法。腫瘤組織滲液可以作為直接生物學介質來檢 測腫瘤組織細胞原血紅素的存在。
[0003] 在腫瘤組織滲液采集和檢測分析過程中，存有以下難點：（1)由于炎性反應，組織 滲液中含有蛋白質、糖、甘油三脂、膽固醇和纖維蛋白原破壞放出的凝血活酶和大量脫落細 胞，這些物質可能對腫瘤組織細胞原血紅素的檢測形成干擾。假若組織滲液樣本渾濁較重， 或所含上述物質過多，致樣本的吸光度高低不一，使自動化分析檢測無法進行，或檢測結果 失準。（2)腫瘤組織滲液采樣之后、送驗之前，樣本需要在保存液內保存一段時間。有時，為 了動態(tài)監(jiān)測和復查需要，同一樣本還需要保存較長的時間。（3)腫瘤組織細胞原血紅素是檢 測的目的物，它是一種酶樣物質，很不穩(wěn)定。為解決以上三個問題，需要一種為腫瘤組織滲 液樣本提供穩(wěn)定的環(huán)境，防止?jié)B液內有形物質凝固和沉淀，清除樣本中的粘液以降低黏度 并具有防腐功效，且使樣本的吸光度處于可控狀態(tài)，提高分析檢測的精準度和可靠性的預 處理技術。研制能滿足以上需求的保存液是亟待解決的問題。經檢索，目前尚無腫瘤組織 滲液樣本保存液，致使腫瘤組織滲液無法保存，腫瘤組織細胞原血紅素檢測無法進行。本發(fā) 明提供了一種能滿足腫瘤組織細胞原血紅素分析檢測的樣本長效腫瘤組織滲液保存液。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種在腫瘤組織細胞原血紅素檢測過程中使用的長效腫 瘤組織滲液樣本保存液。本發(fā)明制備的長效腫瘤組織滲液樣本保存液，能在90天內為腫瘤 組織滲液樣本提供穩(wěn)定的環(huán)境，防止?jié)B液內有形物質凝固和沉淀，并具有清除樣本中的粘 液降低黏度和防腐作用，使樣本的吸光度處于可控狀態(tài)，保證腫瘤細胞原血紅素檢測的準 確性。
[0005] 本發(fā)明采用以下技術方案： 一種長效腫瘤組織滲液樣本保存液，其特征在于，它是由3. 69~3. 76g/L乙二胺四乙酸 二鈉、38~42mg/L異丁醇、9. 5~10. 5ml/L甲醛和0? lmol/L~lmol/L磷酸鹽緩沖液組成；所述 磷酸鹽緩沖液的pH值為6. 2~7. 8。
[0006] 優(yōu)選的，所述的長效腫瘤組織滲液樣本保存液是由3. 72g/L的乙二胺四乙酸二 鈉、40mg/L的異丁醇、10ml/L的甲醛和0? 5mol/L pH值為7. 4磷酸鹽緩沖液組成。
[0007] 本發(fā)明長效腫瘤組織滲液樣本保存液的使用方法如下：選用適宜的采樣器，在檢 測部位輕輕擦拭，獲取局部的組織滲液。采液量為〇.5~lml，一般以采樣拭子全部濕潤為度。 采樣后把拭子插入保存液2ml中輕輕攪動，使拭子上獲取的組織滲液與本發(fā)明之樣本保存 液混勻，制得樣本液常溫保存、送驗。
[0008] 本發(fā)明長效腫瘤組織滲液樣本保存液的機理和有益效果如下：磷酸鹽緩沖液體 系，提供穩(wěn)定的酸堿環(huán)境。乙二胺四乙酸二鈉是一種穩(wěn)定劑，增加樣本內的腫瘤組織細胞 原血紅素的穩(wěn)定性；它還具有抗凝和防止有形物質沉淀的功能；同時它還是一種絡合劑， 減少樣本中可能存在的金屬離子的干擾。異丁醇是一種有機助溶劑，還具有消除粘液降低 樣本液黏度的作用，又有助于溶解和萃取樣本內的有機物，減少樣本中可能存在的蛋白質、 糖、甘油三脂、膽固醇和纖維蛋白原等物質的干擾。甲醛具有防腐功能。本發(fā)明的配伍合理， 制備方法簡單實用，制備的產品能在常溫下妥善保存腫瘤組織滲液樣本90天，防止?jié)B液內 有形物質凝固和沉淀，并具有清除樣本中的粘液降低黏度和防腐作用，有效地保護檢測目 的物一一腫瘤組織細胞原血紅素的穩(wěn)定性，剔除干擾因素，保證檢測的精準度。
【具體實施方式】
[0009] 下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明。
[0010] 實施例1 腫瘤組織滲液樣本保存液配方：3. 69g/L乙二胺四乙酸二鈉、38mg/L異丁醇、9. 5ml/L 甲醛和0. lmol/L pH值為7. 8的磷酸鹽緩沖液組成。
[0011] 上述樣本保存液的制備方法： (1) 配制0? lmol/L pH值為7. 8的磷酸鹽緩沖液1L ; (2) 將乙二胺四乙酸二鈉3. 69g加入到上述磷酸鹽緩沖液中，在60±3°C水浴中加熱溶 解； (3) 將異丁醇38mg加入步驟（2)制得的溶液中，充分攪拌使之完全溶解； (4) 將甲醛9. 5ml加入步驟（3)制得的溶液中，攪拌使之混勻。
[0012] 實施例2 腫瘤組織滲液樣本保存液配方：3. 72g/L的乙二胺四乙酸二鈉、40mg/L的異丁醇、 10ml/L的甲醛和0. 2mol/L pH值為7. 4磷酸鹽緩沖液。
[0013] 上述樣本保存液的制備方法： (1) 配制0? 2mol/L pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液； (2) 將乙二胺四乙酸二鈉3. 72g加入到上述磷酸鹽緩沖液中，在60±3°C水浴中加熱溶 解； (3) 將異丁醇40mg加入步驟（2)制得的溶液中，充分攪拌使之完全溶解； (4) 將甲醛10ml加入步驟（3)制得的溶液中，攪拌使之混勻。
[0014] 實施例3 腫瘤組織滲液樣本保存液配方：3. 76g/L乙二胺四乙酸二鈉、42mg/L異丁醇、10. 5ml/ L甲醛和lmol/L pH值為6. 2的磷酸鹽緩沖液組成。
[0015] 上述樣本保存液的制備方法： (1) 配制lmol/L pH值為6. 2的磷酸鹽緩沖液； (2) 將乙二胺四乙酸二鈉3. 76g加入到上述磷酸鹽緩沖液中，在60±3°C水浴中加熱溶 解； (3) 將異丁醇42mg加入步驟（2)制得的溶液中，充分攪拌使之完全溶解； (4) 將甲醛10. 5ml加入步驟（3)制得的溶液中，攪拌使之混勻。
[0016] 實施例4 有效性實驗 1、試驗方法 (1)試驗設備：全自動腫瘤組織細胞原血紅素檢測分析儀。
[0017] (2)檢測試劑：組織滲液腫瘤組織細胞原血紅素定量檢測試劑。
[0018] (3)檢測樣本液：腫瘤組織滲液樣本0. 5ml加入實施例2制備的腫瘤組織滲液樣 本保存液2ml內混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?br>[0019] (4)檢測方法：制得樣本液后，立即（0天）測定樣本液內腫瘤細胞原血紅素含量， 此后每隔15天對同一樣本液檢測1次，至第90天。
[0020] (5)操作模式：在比色管中加入待檢樣本液200 y L，再加入組織滲液腫瘤組織細 胞原血紅素定量檢測試劑200 y L，37°C溫育使試劑與樣本充分反應。在反應144秒的時間 點上，以光電比色法讀取該樣本與試劑反應后顯色液的吸光度，以此吸光度值通過儀器設 定的標準曲線讀取相對應的腫瘤組織細胞原血紅素的含量（yg /L)。
[0021] (6)統計學處理：采用方差試驗對檢測結果進行差異性比較。
[0022] 2、試驗動物樣本液的制作： (1)誘發(fā)性鼻咽癌小白鼠動物模型的建立：取120 g左右大白鼠，乙醚麻醉后，用磨平 針尖的8號針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達鼻咽腔；經注射器灌注用1%吐溫-80新配的 33. 3%二乙基亞硝胺（DEN)混懸液0.0 2 ml (含DEN 6. 7 mg)。每周1次，共15次。病理 學檢查證實誘發(fā)鼻咽癌成功。
[0023] (2)取鼻咽癌誘發(fā)成功的小白鼠3只處死，分別用取樣拭子在 試驗小白鼠鼻咽部沾取組織滲液，每鼠〇. 5ml。將帶有滲液的拭子在實施例2制得的腫 瘤組織滲液樣本保存液2ml內攪動混勻，制得試驗動物腫瘤組織滲液樣本液3份常溫保存 備用。
[0024] 3、臨床檢測樣本液的制作 樣本液1 :病理學檢查診斷為宮頸浸潤性鱗狀細胞癌。持宮頸滲液采樣器經陰道徐徐 插入至宮頸部位，按右上、右下、左下、左上、宮頸管口循序擦拭，獲取組織滲液0.5ml，與實 施例2所得樣本保存液2ml混勻，常溫保存?zhèn)溆?。樣本?:病理學檢查診斷為結節(jié)型鼻咽 癌。持鼻咽部取樣器由鼻腔置入，沿下鼻道直達鼻咽，左、右各旋轉180度，再按順序在鼻咽 后壁、咽鼓管咽口、咽鼓管園枕和咽隱管處擦拭獲取組織滲液0. 5ml，與實施例2所得樣本 保存液2ml混勻，常溫保存?zhèn)溆?。樣本?:病理學檢查診斷為小細胞肺癌。請受檢者在樣 本瓶內留取痰液，取其0. 5ml與實施例2所得樣本保存液2ml混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?br>[0025] 樣本液4 :病理學檢查診斷為陰莖鱗狀上皮癌。執(zhí)采樣器在陰莖冠狀溝增生潰瘍 處輕輕擦拭，獲取組織滲液0. 5ml，與實施例2所得樣本保存液2ml混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?4、試驗結果：見表1和表2。
【主權項】
1. 一種長效腫瘤組織滲液樣本保存液，其特征在于，它是由3. 69~3. 76g/L乙二胺四乙 酸二鈉、38~42mg/L異丁醇、9. 5~10. 5ml/L甲醛和0? lmol/L~lmol/L磷酸鹽緩沖液組成；所 述磷酸鹽緩沖液的pH值為6. 2~7. 8。
2. 根據權利要求1所述的長效腫瘤組織滲液樣本保存液，其特征在于，它是由3. 72g/L 的乙二胺四乙酸二鈉、40mg/L的異丁醇、10ml/L的甲醛和0. 5mol/L pH值為7. 4磷酸鹽緩 沖液組成。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種長效腫瘤組織滲液樣本保存液，該樣本保存液是由3.69~3.76g/L乙二胺四乙酸二鈉、38~42mg/L異丁醇、9.5~10.5ml/L甲醛和0.1mol/L~1mol/L磷酸鹽緩沖液組成。本發(fā)明制備的長效腫瘤組織滲液樣本保存液，能在90天內為腫瘤組織滲液樣本提供穩(wěn)定的環(huán)境，防止?jié)B液內有形物質凝固和沉淀，并具有清除樣本中的粘液降低黏度和防腐作用，使樣本的吸光度處于可控狀態(tài)，保證腫瘤細胞原血紅素檢測的準確性。
【IPC分類】G01N1-28
【公開號】CN104849122
【申請?zhí)枴緾N201510295106
【發(fā)明人】蔣春亮
【申請人】蔣春亮
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年6月2日