一種粘液細(xì)胞的快速染色方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞染色領(lǐng)域，具體涉及一種粘液細(xì)胞的快速染色方法。
【背景技術(shù)】
[0002]對(duì)細(xì)胞或細(xì)菌進(jìn)行涂片染色制片是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和生物學(xué)研宄的重要環(huán)節(jié)，目前有三種方法對(duì)細(xì)胞或細(xì)菌進(jìn)行涂片、染色、制片:一是傳統(tǒng)的人工操作涂片、染色、制片；另一種是利用儀器設(shè)備自動(dòng)涂片，然后再采取傳統(tǒng)的人工操作染色、制片；第三種是利用儀器設(shè)備自動(dòng)制片。第一種方法人工操作涂片、染色、制片，其儀器設(shè)備需要少、投資小，但存在以下缺陷:1、涂片厚薄依賴操作人員的工作經(jīng)驗(yàn)，難以控制。2、在用于細(xì)胞學(xué)制片時(shí)，標(biāo)本中的雜質(zhì)如血液、黏液、細(xì)菌、壞死退化細(xì)胞等無法除去。3、憑操作人員的經(jīng)驗(yàn)滴加染色液，隨意性較大，不能定量，染色效果的重復(fù)性差。4、染色時(shí)間、溫度只能粗略估計(jì)，不能確保染色效果。第二種方法利用儀器設(shè)備自動(dòng)涂片，然后再采取傳統(tǒng)的人工操作染色制片的工作過程是:利用負(fù)壓將收集并經(jīng)過處理后的標(biāo)本吸入到安裝有過濾膜的過濾裝置中，標(biāo)本中的液體部分通過過濾膜排除掉，有形成份分布于過濾膜上，然后利用設(shè)備將過濾膜上的有形成份，也就是細(xì)胞轉(zhuǎn)移到玻片上，這樣就完成了自動(dòng)涂片，之后利用人工操作的方法進(jìn)行染色和制片。其缺點(diǎn)是:1、只適用于細(xì)胞制片，不能用于細(xì)菌制片。原因是細(xì)菌太小，在通過過濾膜收集后無法將其轉(zhuǎn)移玻片上；2、在將過濾膜上收集到的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到玻片上時(shí)有一個(gè)擠壓的過程，容易造成細(xì)胞破裂或變形，影響制片效果；3、憑操作人員的經(jīng)驗(yàn)滴加染色液，隨意性較大，不能定量，染色效果的重復(fù)性差。4、染色時(shí)間、溫度只能粗略估計(jì)，不能確保染色效果。第三種方法利用儀器設(shè)備自動(dòng)制片。具有細(xì)胞學(xué)自動(dòng)涂片、染色功能的儀器設(shè)備目前只有美國(guó)能生產(chǎn)，其機(jī)型有Auto-Cyte PREP儀器等，其工作原理為:將標(biāo)本進(jìn)行梯度分離，離心濃集細(xì)胞標(biāo)本，將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到安裝有玻片的特殊裝置中，由細(xì)胞自然沉降到玻片上，利用玻片上的黏附涂層將細(xì)胞固定，然后自動(dòng)染色完成制片過程。利用該設(shè)備制片效果良好，但不能自動(dòng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋處理等；制片的細(xì)胞厚度不能控制；功能少，只能完成巴氏染色一種染色方法；操作復(fù)雜，設(shè)備昂貴，一套上述設(shè)備國(guó)內(nèi)報(bào)價(jià)在百萬元以上，消耗品價(jià)格貴，使用費(fèi)用高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種粘液細(xì)胞的快速染色方法。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0005]一種粘液細(xì)胞的快速染色方法，包括如下步驟:
[0006]步驟1、將組織切片放入染色架依次置于100% 二甲苯1、100% 二甲苯II中各8min ；
[0007]步驟2、將組織切片按濃度為100%二甲苯I 5min、濃度為100%二甲苯II 5min濃度為95%的酒精5min、濃度為85%的酒精5min、濃度為75%的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水后，置于自來水中流水沖洗5min ；
[0008]步驟3、取2張切片用蒸餾水滴洗組織切片3次，甩干；
[0009]步驟4、用滴管取濃度為1%、PH為2.5的I %阿利新藍(lán)染液滴染步驟3所得的兩個(gè)組織切片，染色5min。
[0010]步驟5、將步驟4所得的組織切片用慢速流水沖洗2min后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干；
[0011]步驟6、用滴管取濃度為0.5%的I %高碘酸溶液滴染步驟5所得組織切片，氧化2min ；
[0012]步驟7、將步驟6所得的組織切片用慢速流水沖洗Imin后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干；
[0013]步驟8、用滴管取0.5%雪夫試劑滴染組織切片，染色5min ；
[0014]步驟9、甩掉切片上多余雪夫試劑，將切片放入染色架置于燒杯中，滴水返紅9-llmin，通過顯微鏡觀察上色效果，若效果不佳，繼續(xù)進(jìn)行返紅，直至上色；(注:燒杯中先加少量自來水淹沒組織，滴水返紅時(shí)盡量避免液體流出燒杯，使組織處于返紅水環(huán)境中，返紅效果才好，返紅后可不沖洗，直接脫水)。
[0015]步驟10、按濃度為75%的酒精10s、濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對(duì)組織切片進(jìn)行脫水，放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)；
[0016]步驟11、將烘干后的組織切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，進(jìn)行透明處理后，采用中性樹脂封片。
[0017]優(yōu)選的，所述的阿利新藍(lán)染液由阿利新藍(lán)lg，加3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
[0018]本發(fā)明的有益效果是:
[0019]染色效果好，上色所需時(shí)間短。
【具體實(shí)施方式】
[0020]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0021]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種粘液細(xì)胞的快速染色方法，包括如下步驟:
[0022]步驟1、將組織切片放入染色架依次置于100% 二甲苯1、100% 二甲苯II中各8min ；
[0023]步驟2、將組織切片按濃度為100%二甲苯I 5min、濃度為100%二甲苯II 5min濃度為95%的酒精5min、濃度為85%的酒精5min、濃度為75%的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水后，置于自來水中流水沖洗5min ；
[0024]步驟3、取2張切片用蒸餾水滴洗組織切片3次，甩干；
[0025]步驟4、用滴管取濃度為I %、PH為2.5的I %阿利新藍(lán)染液滴染步驟3所得的兩個(gè)組織切片，染色5min。
[0026]步驟5、將步驟4所得的組織切片用慢速流水沖洗2min后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干；
[0027]步驟6、用滴管取濃度為0.5%的I %高碘酸溶液滴染步驟5所得組織切片，氧化2min ；
[0028]步驟7、將步驟6所得的組織切片用慢速流水沖洗Imin后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干；
[0029]步驟8、用滴管取0.5%雪夫試劑滴染組織切片，染色5min ；
[0030]步驟9、甩掉切片上多余雪夫試劑，將切片放入染色架置于燒杯中，滴水返紅9-llmin，通過顯微鏡觀察上色效果，若效果不佳，繼續(xù)進(jìn)行返紅，直至上色；(注:燒杯中先加少量自來水淹沒組織，滴水返紅時(shí)盡量避免液體流出燒杯，使組織處于返紅水環(huán)境中，返紅效果才好，返紅后可不沖洗，直接脫水)。
[0031]步驟10、按濃度為75%的酒精10s、濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對(duì)組織切片進(jìn)行脫水，放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)；
[0032]步驟11、將烘干后的組織切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，進(jìn)行透明處理后，采用中性樹脂封片。
[0033]所述的阿利新藍(lán)染液由阿利新藍(lán)lg，加3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
[0034]經(jīng)檢測(cè)，AB-PAS染杯狀細(xì)胞結(jié)果分成4種類型:
[0035]I型呈紅色，AB陰性，PAS陽性，含中性粘多糖。
[0036]II型呈藍(lán)色，AB陽性，PAS陰性，含酸性粘多糖。
[0037]III型呈紫紅色，AB與PAS均為陽性，主要含有PAS陽性的中性粘多糖，同時(shí)含有少量AB陽性的酸性粘多糖。
[0038]IV型呈藍(lán)紫色，AB與PAS均為陽性，主要含有AB陽性的酸性粘多糖，同時(shí)含有少量PAS陽性的中性粘多糖。
[0039]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種粘液細(xì)胞的快速染色方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1、將組織切片放入染色架依次置于100%二甲苯1、100%二甲苯II中各8min ；步驟2、將組織切片按濃度為100%二甲苯I 5min、濃度為100%二甲苯II 5min濃度為95%的酒精5min、濃度為85%的酒精5min、濃度為75%的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水后，置于自來水中流水沖洗5min ； 步驟3、取2張切片用蒸餾水滴洗組織切片3次，甩干； 步驟4、用滴管取濃度為1%、PH為2.5的I %阿利新藍(lán)染液滴染步驟3所得的兩個(gè)組織切片，染色5min。 步驟5、將步驟4所得的組織切片用慢速流水沖洗2min后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干； 步驟6、用滴管取濃度為0.5 %的I %高碘酸溶液滴染步驟5所得組織切片，氧化2min ；步驟7、將步驟6所得的組織切片用慢速流水沖洗Imin后，用蒸餾水滴洗組織3次，用洗耳球?qū)⒔M織周圍水分吹干； 步驟8、用滴管取0.5%雪夫試劑滴染組織切片，染色5min ； 步驟9、甩掉切片上多余雪夫試劑，將切片放入染色架置于燒杯中，滴水返紅9-llmin，通過顯微鏡觀察上色效果，若效果不佳，繼續(xù)進(jìn)行返紅，直至上色； 步驟10、按濃度為75%的酒精10s、濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對(duì)組織切片進(jìn)行脫水，放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)； 步驟11、將烘干后的組織切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，進(jìn)行透明處理后，采用中性樹脂封片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粘液細(xì)胞的快速染色方法，其特征在于，所述的阿利新藍(lán)染液由阿利新藍(lán)Ig^P 3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種粘液細(xì)胞的快速染色方法，包括如下步驟：將組織切片放入染色架依次置于100％二甲苯I、100％二甲苯II中各8min；將組織切片按100％二甲苯I5min、100％二甲苯II5min95％的酒精5min、85％的酒精5min、75％的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水后，沖洗；取2張切片用蒸餾水滴洗組織切片3次，甩干；用滴管取1-2滴1％阿利新藍(lán)染液滴染組織切片后，沖洗，用蒸餾水滴洗組織3次；再用滴管取1-2滴1％高碘酸溶液滴染后，沖洗，用蒸餾水滴洗組織3次；再用滴管取1-2滴0.5％雪夫試劑滴染組織切片，甩掉切片上多余雪夫試劑，將切片放入染色架置于燒杯中，滴水返紅，脫水烘干后，進(jìn)行透明處理后，采用中性樹脂封片。
【IPC分類】G01N1-30
【公開號(hào)】CN104849126
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510275278
【發(fā)明人】何敏, 梁曉霞, 汪開毓, 方靜, 陳正禮, 耿毅, 彭西, 唐麗, 潘康成, 賴為民
【申請(qǐng)人】四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月20日