一種基于酶催化反應(yīng)測(cè)定過氧化氫的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及過氧化氨的測(cè)定方法，特別是基于酶催化反應(yīng)測(cè)定過氧化氨的共振散 射光譜法。
【背景技術(shù)】
[0002] 過氧化氨是一種強(qiáng)氧化劑，可用做消毒劑、漂白劑、殺菌劑、脫氧劑等，廣泛用于食 品、紡織、造紙、醫(yī)藥、化工、環(huán)保、電子等領(lǐng)域。過氧化氨與人類健康密切相關(guān)，長(zhǎng)期接觸過 氧化氨會(huì)出現(xiàn)呼吸道及皮膚刺激等癥狀，空氣中過氧化氨含量不得超過1. 4mg/m3。另一方 面，過氧化氨是酸雨形成的主要原因之一。因此，過氧化氨的測(cè)定在環(huán)境、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物 科學(xué)等領(lǐng)域都具有十分重要的意義。目前測(cè)定&〇2的方法主要有分光光度法、巧光法、色譜 法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)法、共振散射光譜法和滴定法等。共振散射光譜法因具有簡(jiǎn)便快速、 靈敏度高、檢出限低等特點(diǎn)，近年來已用于痕量分析。而將酶催化反應(yīng)與共振散射光譜法相 結(jié)合可進(jìn)一步提高方法的靈敏度。牛血紅蛋白（化）具有過氧化物模擬酶的性質(zhì)，它可催化 &〇2氧化過量r生成13^，V會(huì)阻礙納米銀之間的聚集，使體系的共振散射強(qiáng)度降低，根據(jù)反 應(yīng)前后納米銀聚集狀態(tài)改變而引起體系共振散射強(qiáng)度的變化可建立定量測(cè)定化的方法， 此方法目前尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種基于酶催化反應(yīng)測(cè)定過氧化氨的共振散射光譜法。
[0004] 具體步驟為； 在12支10血比色管中都加入0. 0~2. 0血pH=4. 2克拉克-魯布斯（Clark-Lubs，C-L) 緩沖溶液、0. 1~1. 5mL0. 05mol/L艦化鐘化1)溶液和0. 0~1. 2mL2.OX1〇-6mol/L牛 血紅蛋白化b)溶液，然后在12支比色管中分別加入0. 0、0. 005、0. 01、0. 05、0. 1、0. 5、1.0、 1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5mL6. 40Xl(T5mol/L過氧化氨溶液，于室溫下放置20分鐘后，再在每 支比色管中都加入0. 1~0. 7血2. 38Xl〇-4mol/L納米銀即AgNPs溶液，用二次蒸饋水稀 釋至刻度，搖勻，繼續(xù)反應(yīng)10分鐘后，用1cm石英比色皿于巧光分光光度計(jì)上WAex=入em 的方式掃描共振散射光譜。在430nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定加有過氧化氨溶液的共振散射強(qiáng)度 143。?和不加過氧化氨的試劑空白溶液的共振散射強(qiáng)度I。，計(jì)算共振散射強(qiáng)度的差值A(chǔ)143。? =1廠I43。?，其共振散射強(qiáng)度的差值A(chǔ)I43。?與過氧化氨濃度C在3. 20X1(T8~2. 24X1(T5 mol/L范圍內(nèi)成線性關(guān)系，線性回歸方程為A1=2. 992X107c+37. 82,相關(guān)系數(shù)0. 9971，檢出 限2.20X1(T8mol/L;另取池塘水或新鮮雨水過濾，取2mL濾液同法測(cè)定共振散射強(qiáng)度值， 計(jì)算出池塘水或新鮮雨水中過氧化氨的含量。
[0005] 本發(fā)明測(cè)定方法選擇性好、靈敏度高。
【附圖說明】
[0006] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例空白與9. 6Xl(T6mol/L過氧化氨的共振散射光譜圖； 圖中標(biāo)記；a;空白；b;pH4. 2C-L緩沖液-0. 005mol/LKI- 4.oxl〇-7mol/L冊(cè)" 9. 6Xl〇-emol/LH2〇2_AgNPs。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 實(shí)施例： 于12支10血比色管中都加入1.0血抑=4.2克拉克-魯布斯（Clark-Lubs，C-L)緩沖溶液、1. 0血0. 05mol/L艦化鐘化I)溶液和0. 5血2.OXl〇-e mol/L牛血紅蛋白化b) 溶液，然后在 12 支比色管中分別加入 0. 0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、 3. 0、3.5mL 6.40Xl(T5m〇l/L過氧化氨溶液，于室溫下放置20分鐘后，再在每支比色管中都 加入0.5mL 2.38Xl(T4mol/L納米銀即AgNPs溶液，用二次蒸饋水稀釋至刻度，搖勻，繼續(xù) 反應(yīng)10分鐘后，用1cm石英比色皿于巧光分光光度計(jì)上W Aex=Aem的方式掃描共振散射 光譜。在430nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定加有過氧化氨溶液的共振散射強(qiáng)度l43。?和不加過氧化氨的 試劑空白溶液的共振散射強(qiáng)度I。，計(jì)算共振散射強(qiáng)度的差值=1。-143。"，其共振散射 強(qiáng)度的差值A(chǔ)I43。""與過氧化氨濃度C在3. 20X1(T8~2.24X1(T5mol/L范圍內(nèi)成線性關(guān) 系，線性回歸方程為A 1=2. 992X 107c+37. 82,相關(guān)系數(shù)0. 9971，檢出限2. 20X l〇-s mol/L ; 另取池塘水和新鮮雨水過濾，取2 mL濾液同法測(cè)定共振散射強(qiáng)度值，代入上述回歸方程， 分別計(jì)算出池塘水和新鮮雨水中過氧化氨的含量。同時(shí)做了加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。
[0008] 表1;水樣分析結(jié)果（n=5)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定過氧化氫的方法，其特征在于具體步驟為： 在12支IOmL比色管中都加入0.0 ~2. OmL pH=4. 2克拉克-魯布斯緩沖溶液、0. 1~ I. 5mL 0. 05mol/L碘化鉀溶液和0. 0~I. 2mL 2. OX KT6 mol/L牛血紅蛋白溶液，然后在 12 支比色管中分別加入 0? 0、0? 005、0. 01、0. 05、0. 1、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5mL 6. 40Xl(T5m〇l/L過氧化氫溶液，于室溫下放置20分鐘后，再在每支比色管中都加入0. 1~ 0. 7mL 2. 38 X l(T4m〇l/L納米銀即AgNPs溶液，用二次蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，繼續(xù)反應(yīng)10 分鐘后，用Icm石英比色皿于熒光分光光度計(jì)上以X ex= Xem的方式掃描共振散射光譜；在 430nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定加有過氧化氫溶液的共振散射強(qiáng)度I43tlnm和不加過氧化氫的試劑空 白溶液的共振散射強(qiáng)度I tl，計(jì)算共振散射強(qiáng)度的差值A(chǔ)I43tol =Ici-I43cimi，其共振散射強(qiáng)度的 差值A(chǔ) I43Clnm與過氧化氫濃度C在3. 20 X 10 _8~2. 24X 10 _5m〇l/L范圍內(nèi)成線性關(guān)系，線性 回歸方程為A 1=2. 992X 107c+37. 82,相關(guān)系數(shù)0. 9971，檢出限2. 20XKT8 mol/L ;另取池 塘水或新鮮雨水過濾，取2 mL濾液同法測(cè)定共振散射強(qiáng)度值，計(jì)算出池塘水或新鮮雨水中 過氧化氫的含量。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于酶催化反應(yīng)測(cè)定過氧化氫的方法。在12支10mL比色管中都加入0.0～2.0mL pH=4.2克拉克-魯布斯緩沖液、0.1～1.5mL 0.05mol/L碘化鉀和0.0～1.2mL 2.0×10-6 mol/L牛血紅蛋白，然后依次加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10-5mol/L H2O2溶液，反應(yīng)20分鐘后，再在每支管中加入0.1～0.7mL 2.38×10-4mol/L納米銀，用二次蒸餾水定容，繼續(xù)反應(yīng)10分鐘后，用1cm石英比色皿，以λex=λem的方式掃描共振散射光譜；在430nm處分別測(cè)定加有H2O2溶液的散射強(qiáng)度I430nm和不加H2O2的試劑空白的散射強(qiáng)度I0，計(jì)算差值ΔI430nm=I0-I430nm。另取池塘水或新鮮雨水過濾，同法測(cè)定其散射強(qiáng)度值，計(jì)算出池塘水或新鮮雨水中H2O2的含量。本發(fā)明測(cè)定方法選擇性好、靈敏度高。
【IPC分類】G01N21-64
【公開號(hào)】CN104880443
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510259671
【發(fā)明人】唐寧莉, 陳永寧, 張容琿, 單雅琦, 單展, 覃溫露
【申請(qǐng)人】桂林理工大學(xué)
【公開日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年5月21日