一種器官組織的快速染色方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及器官組織染色領(lǐng)域，具體涉及一種器官組織的快速染色方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，植物制片前需要進(jìn)行前處理，將植物材料進(jìn)行切成便于觀察的薄片才行，有兩種方法進(jìn)行:一種為徒手切片法、另一種為石蠟切片法。徒手切片是用手持雙面刀片或剃刀，將新鮮材料或預(yù)先固定好的材料(切前水洗)切成薄片，不經(jīng)染色或經(jīng)簡單染色后，用水封片作臨時裝片觀察。徒手切片法的優(yōu)點是不需要復(fù)雜的設(shè)備，方法簡便，制片迅速，而且能觀察到植物組織的自然色澤和活體結(jié)構(gòu)，常用于研宄植物解剖結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組織化學(xué)成分，植物資源鑒定等。同時，它具有利于臨時觀察、能夠較快的得到結(jié)果的優(yōu)點。缺點是對于體積過小、太軟、太硬的材料則難于切片，而且不能制成連續(xù)切片。
[0003]切片法是最常用的一種制片法。其制作過程是:取材一固定一沖洗一脫水一透明—浸錯一包埋一切片一貼片一烤片一脫錯一復(fù)水一染色一脫水一透明一封臧。石錯制片是一個連續(xù)的操作過程，往往要連續(xù)幾天才能完成，容易與其它工作發(fā)生沖突，也會因前后順序顛倒或超過了規(guī)定的時間，給科研工作帶來不小的損失。制片的各個步驟都是互相關(guān)聯(lián)的，如脫水不徹底就會影響到透明的程度，以至影響蠟塊的質(zhì)量，同時還存在染色效果差、穩(wěn)定性差，速度慢的缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種器官組織的快速染色方法，染色效果好，染色所需的時間短，且穩(wěn)定性高。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]一種器官組織的快速染色方法，包括如下步驟:
[0007]S1、脫蠟:將組織切片放入染色架依次置于100%二甲苯I和100%二甲苯II中各8min ；
[0008]S2、復(fù)水:將組織切片按濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%二甲苯II5min、濃度為95 %的酒精5min、濃度為85 %的酒精5min、濃度為75 %的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水，將復(fù)水后的切片置于自來水中流水沖洗5min ；
[0009]S3、將步驟S2所得的組織切片置于0.2%蘇木素染液中染色12分鐘，流水沖洗組織切片至組織顏色透亮、切片干凈；
[0010]S4、將步驟S3所得的組織切片置于I %鹽酸酒精中分化5s，快速拿起，放入燒杯中，流水水洗3min ；
[0011]S5、將分化后的組織切片置于I %氨水中藍(lán)化5s，快速拿起，流水水洗3min ；
[0012]S6、將藍(lán)化后的組織切片放入I %伊紅染液中染色3min后，放入盛有自來水的燒杯中，輕微震蕩，洗去切片上多余伊紅染液；
[0013]S7、脫水:按濃度為75%的酒精1s濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對組織切片進(jìn)行脫水，脫水完后將切片放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)；
[0014]S8、透明、封片:將烘干的切片依次置于100%二甲苯1、100%二甲苯II各8min，進(jìn)行透明處理后，進(jìn)行中性樹脂封片。
[0015]本發(fā)明的染色結(jié)果為肉眼觀察組織切片呈紫紅色，光鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色。
[0016]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0017]染色效果好，染色所需的時間短，且穩(wěn)定性高。
【具體實施方式】
[0018]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0019]本發(fā)明實施例提供了一種器官組織的快速染色方法，包括如下步驟:
[0020]S1、脫蠟:將組織切片放入染色架依次置于100%二甲苯I和100%二甲苯II中各8min ；
[0021]S2、復(fù)水:將組織切片按濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%二甲苯II5min、濃度為95 %的酒精5min、濃度為85 %的酒精5min、濃度為75 %的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水，將復(fù)水后的切片置于自來水中流水沖洗5min ；
[0022]S3、將步驟S2所得的組織切片置于0.2%蘇木素染液中染色12分鐘，流水沖洗組織切片至組織顏色透亮、切片干凈；
[0023]S4、將步驟S3所得的組織切片置于I %鹽酸酒精中分化5s，快速拿起，放入燒杯中，流水水洗3min ；
[0024]S5、將分化后的組織切片置于I %氨水中藍(lán)化5s，快速拿起，流水水洗3min ；
[0025]S6、將藍(lán)化后的組織切片放入I %伊紅染液中染色3min后，放入盛有自來水的燒杯中，輕微震蕩，洗去切片上多余伊紅染液；
[0026]S7、脫水:按濃度為75%的酒精1s濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對組織切片進(jìn)行脫水，脫水完后將切片放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)；
[0027]S8、透明、封片:將烘干的切片依次置于100%二甲苯1、100%二甲苯II各8min，進(jìn)行透明處理后，進(jìn)行中性樹脂封片。其染色效果更穩(wěn)定。
[0028]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種器官組織的快速染色方法，其特征在于，包括如下步驟: S1、脫蠟:將組織切片放入染色架依次置于100%二甲苯I和100% 二甲苯II中各.8min ； S2、復(fù)水:將組織切片按濃度為100%的二甲苯I5min、濃度為100%二甲苯II 5min、濃度為95%的酒精5min、濃度為85%的酒精5min、濃度為75%的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水，將復(fù)水后的切片置于自來水中流水沖洗5min ； S3、將步驟S2所得的組織切片置于0.2%蘇木素染液中染色12分鐘，流水沖洗組織切片至組織顏色透亮、切片干凈； S4、將步驟S3所得的組織切片置于I%鹽酸酒精中分化5s，快速拿起，放入燒杯中，流水水洗3min ； S5、將分化后的組織切片置于I%氨水中藍(lán)化5s，快速拿起，流水水洗3min ； S6、將藍(lán)化后的組織切片放入1%伊紅染液中染色3min后，放入盛有自來水的燒杯中，輕微震蕩，洗去切片上多余伊紅染液； S7、脫水:按濃度為75%的酒精1s濃度為85%的酒精30s、濃度為95%的酒精2min、濃度為100%的二甲苯I 5min、濃度為100%的二甲苯II 5min的梯度對組織切片進(jìn)行脫水，脫水完后將切片放入烘箱5min，加速酒精揮發(fā)； S8、透明、封片:將烘干的切片依次置于100%二甲苯1、100%二甲苯II各8min，進(jìn)行透明處理后，進(jìn)行中性樹脂封片。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種器官組織的快速染色方法，包括如下步驟：將組織切片放入染色架依次置于100％二甲苯I和100％二甲苯II中各8min；取出后按100％二甲苯I 5min、100％二甲苯II 5min、95％的酒精5min、85％的酒精5min、75％的酒精5min的梯度進(jìn)行復(fù)水后，用自來水中流水沖洗，置于0.2％蘇木素染液中染色后，流水沖洗；置于1％鹽酸酒精中分化，快速拿起，放入燒杯中，流水水洗；將分化后的組織切片置于1％氨水中藍(lán)化，快速拿起，流水水洗；將藍(lán)化后的組織切片放入1％伊紅染液中染色后，放入盛有自來水的燒杯中，輕微震蕩，洗去切片上多余伊紅染液；脫水、透明處理后，進(jìn)行中性樹脂封片。本發(fā)明染色效果好，染色所需的時間短，且穩(wěn)定性高。
【IPC分類】G01N1/30
【公開號】CN104897453
【申請?zhí)枴緾N201510296929
【發(fā)明人】何敏, 梁曉霞, 劉寧
【申請人】四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年5月27日