一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 某些中藥注射劑，由于含有溶血成分（皂苷）或物理、化學(xué)及生物等方面的原因， 在直接注入血管后可產(chǎn)生溶血作用，也有些注射劑中因含有雜質(zhì)等成分，注入局部會引起 脹痛，注入血管后可產(chǎn)生血細(xì)胞凝聚，引起血液循環(huán)功能障礙等不良反應(yīng)，因此，凡是注 射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應(yīng)的其他藥物制劑均應(yīng)進(jìn)行溶血性試驗。溶 血性試驗將考察受試藥物是否具有溶血和紅細(xì)胞凝聚等不良反應(yīng)。
[0003] 中草藥注射劑溶血作用測定方法，多年來一直用常規(guī)的試管法觀察其溶血現(xiàn)象， 也有用溶血指數(shù)法測定溶血作用的，但不能精確地檢測中草藥注射劑的溶血作用。秦百宣 探討出以紅細(xì)胞計數(shù)測定中草藥溶血值的新方法，周燕文采用全自動血球分析儀計數(shù)紅細(xì) 胞，它們雖能夠精確測定任何濃度下溶解紅細(xì)胞的具體數(shù)值，對臨床安全用藥具有重要的 意義，但操作工序較為繁瑣。在常規(guī)體外試管法基礎(chǔ)上，劉萍等根據(jù)紅細(xì)胞破裂釋放出來的 血紅素在可見光波長段具有最大吸收的原理，采用分光光度法測定供試藥物的溶血程度， 以作為判斷中藥注射劑的臨床應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，但該方法采用的標(biāo)準(zhǔn)只局限于本次試驗，具有相 對性，并且一次只能適用于一種藥物溶血性測試。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法，能夠同時用于多種注射劑溶 血性檢測。
[0005] 本發(fā)明提供一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法，步驟如下：（1)用常規(guī)試管法 測定供試藥品溶血性，從而確定供試藥品含量的臨界值A(chǔ)，即出現(xiàn)溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝 集反應(yīng)與否時的供試藥品含量；其中常規(guī)試管法步驟如下：將供試藥品、2%紅細(xì)胞混懸液 和生理鹽水混合得到混合液，反應(yīng)一段時間后，肉眼觀察是否出現(xiàn)溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝 集反應(yīng)；固定混合液總體積B和2%紅細(xì)胞混懸液體積C，調(diào)整供試藥品和生理鹽水的體積 進(jìn)行反應(yīng)，來確定供試藥品含量的臨界值； (2) 標(biāo)準(zhǔn)液的制備：分別以2%紅細(xì)胞混懸液體積C的5%、20%作為溶質(zhì)，以蒸餾水作為 溶劑，配制總體積為B的標(biāo)準(zhǔn)液；將其分別稱為5%標(biāo)準(zhǔn)液和20%標(biāo)準(zhǔn)液； (3) 標(biāo)準(zhǔn)液中血紅蛋白含量OD545nm值的測定； (4) 以供試藥品含量臨界值A(chǔ)、生理鹽水和2%紅細(xì)胞混懸液體積C配制總體積為B的 混合液，并測定混合液的〇D545nJl; (5) 結(jié)果判定：如果供試藥品混合液的OD值小于20%標(biāo)準(zhǔn)液的OD值，則供試藥品可用 于肌肉注射；如果供試藥品混合液的OD值小于5%標(biāo)準(zhǔn)液的OD值，則供試藥品可用于靜脈 注射。
[0006] 優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)液還包括以2%紅細(xì)胞體積C的0%-4%或6%-19%中任一濃度作 為溶質(zhì)配制的溶液。
[0007] 優(yōu)選地，步驟（4)中是將混合液混合均勻后置37°C恒溫恒濕箱中反應(yīng)，之后吸取 上清液于比色皿中，進(jìn)行測定的。
[0008] 本發(fā)明的方法是在中藥注射劑溶血性常規(guī)試管檢測方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合中華人民 共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/-142332-93之規(guī)定，利用分光光度計測定試管中紅細(xì)胞溶解產(chǎn)生的血 紅蛋白含量OD值，通過比較供試藥品所在試管溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)參考管溶液的OD值，以確 定供試藥品是否符合要求。本發(fā)明用測得的OD值替代了常規(guī)方法中眼觀結(jié)果，準(zhǔn)確度高， 能夠定量檢測，并且可以同時進(jìn)行多種不同供試藥品溶血性的檢測。為中藥注射劑研宄與 開發(fā)提供了一種快捷、客觀、準(zhǔn)確判定能否用于臨床靜脈注射、肌肉注射的新方法。
【具體實施方式】
[0009] 以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0010] 實施例1 1、材料需求： 器材：三角瓶、試管架，試管，分光光度計，比色杯，移液器，恒溫恒濕箱； 試劑：蒸餾水，0. 9%生理鹽水，2%紅細(xì)胞懸液； 其它：供試藥品，玻璃珠。
[0011] 2、具體實施方法 (1)2% (v/v)紅細(xì)胞混懸液制備：取受試動物或人新鮮血液(約20ml)，加入裝有玻璃 的三角燒瓶中，振搖5-10min分鐘或用玻璃棒攪拌，除去纖維蛋白原，加0. 9%氯化鈉溶液約 10倍量，1000-1500轉(zhuǎn)/min，離心洗滌2-3次，至上清液呈澄清為止。然后用生理鹽水將所 得紅細(xì)胞配成2 %紅細(xì)胞混懸液。備用。
[0012] (2 )進(jìn)行現(xiàn)有常規(guī)試管法： 取試管7支，編號并置于試管架上，按表1所述加入各溶液。
[0013] 表 1
[0014] 結(jié)果判定：1小時后，通過眼睛觀察，第3管或第3管以前的各管出現(xiàn)溶血、部分溶 血或出現(xiàn)凝集反應(yīng)的供試藥品，不宜做靜脈注射或肌肉注射。
[0015] (3 )定量評估藥物溶血性指標(biāo)： 在上述常規(guī)試管法中第3號試管紅細(xì)胞溶血度或溶血情況是確定供試樣品是否用于 靜脈或肌肉注射的關(guān)鍵點。因此，以第3管藥物樣品量（0. 300ml)作為測試品用量。
[0016] 依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/-142332-93中"溶血度小于5%時，藥品可用于 靜脈注射，溶血度小于20%時，可用于肌肉注射"的規(guī)定，由于上述方法中2%的紅細(xì)胞懸液 總用量為2. 50ml，按照該總量的0%、3%、5%、10%、15%、20%設(shè)立不同紅細(xì)胞懸液量梯度。
[0017] 具體試驗方法為：取干凈試管9支，按表2排列并編號，1-6管為實驗通用管，7-9 為供試藥品管（3個重復(fù)管，藥物樣品量0. 300ml)，依次分別加入表2中所述各種物質(zhì)，混 合，搖勻，置37°C恒濕恒溫箱中，1小時后，輕輕吸取上清液于比色皿中，在545nm波長下進(jìn) 行比色，測定各管OD值。則各OD值分別為2%的紅細(xì)胞懸液在0%、3%、5%、10%、15%、20%溶 血度時的血紅蛋白含量OD值。
[0018] 表 2
[0019] 結(jié)果判定： 按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/-142332-93,將供試藥品管所測的OD值與第3管、第6管對應(yīng)的OD值（OD3、OD6)直接比較，如果OD樣s <0D6則供試藥品可用于肌肉注射，OD樣s <OD3則供試藥品 可用于靜脈注射。
[0020] 以上結(jié)果判定是基于藥物對紅細(xì)胞不凝集的情況下，如果發(fā)生凝集，則直接按相 關(guān)藥物對紅細(xì)胞影響的規(guī)定作出結(jié)論定性。
[0021] 最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法，其特征在于：步驟如下：（1)用常規(guī)試管法 測定供試藥品溶血性，從而確定供試藥品含量的臨界值A(chǔ)，即出現(xiàn)溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝 集反應(yīng)與否時的供試藥品含量；其中常規(guī)試管法步驟如下：將供試藥品、2%紅細(xì)胞混懸液 和生理鹽水混合得到混合液，反應(yīng)一段時間后，肉眼觀察是否出現(xiàn)溶血、部分溶血或出現(xiàn)凝 集反應(yīng)；固定混合液總體積B和2%紅細(xì)胞混懸液體積C，調(diào)整供試藥品和生理鹽水的體積 進(jìn)行反應(yīng)，來確定供試藥品含量的臨界值； (2) 標(biāo)準(zhǔn)液的制備：分別以2%紅細(xì)胞混懸液體積C的5%、20%作為溶質(zhì)，以蒸餾水作為 溶劑，配制總體積為B的標(biāo)準(zhǔn)液；將其分別稱為5%標(biāo)準(zhǔn)液和20%標(biāo)準(zhǔn)液； (3) 標(biāo)準(zhǔn)液中血紅蛋白含量OD545nm值的測定； (4) 以供試藥品含量臨界值A(chǔ)、生理鹽水和2%紅細(xì)胞混懸液體積C配制總體積為B的 混合液，并測定混合液的OD545nJl; (5) 結(jié)果判定：如果供試藥品混合液的OD值小于20%標(biāo)準(zhǔn)液的OD值，則供試藥品可用 于肌肉注射；如果供試藥品混合液的OD值小于5%標(biāo)準(zhǔn)液的OD值，則供試藥品可用于靜脈 注射。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)液還包括以2%紅細(xì)胞體積C的 0%-4%或6%-19%中任一濃度作為溶質(zhì)配制的溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（4)中是將混合液混合均勻后置 37°C恒溫恒濕箱中反應(yīng)，之后吸取上清液于比色皿中，進(jìn)行測定的。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種定量評估藥物溶血性指標(biāo)的方法，步驟如下：（1）用常規(guī)試管法測定供試藥品溶血性，從而確定供試藥品含量的臨界值A(chǔ)；（2）標(biāo)準(zhǔn)液的制備：分別以2%紅細(xì)胞混懸液體積C的5%、20%作為溶質(zhì)，以蒸餾水作為溶劑，配制總體積為B的標(biāo)準(zhǔn)液；將其分別稱為5%標(biāo)準(zhǔn)液和20%標(biāo)準(zhǔn)液；（3）測定標(biāo)準(zhǔn)液中血紅蛋白含量OD545nm值；（4）以供試藥品含量臨界值A(chǔ)、生理鹽水和2%紅細(xì)胞混懸液體積C配制總體積為B的混合液，并測定混合液的OD545nm值；（5）結(jié)果判定。本發(fā)明的方法替代了常規(guī)方法中眼觀結(jié)果，準(zhǔn)確度高，能夠定量檢測，并且可以同時進(jìn)行多種不同供試藥品溶血性的檢測。
【IPC分類】G01N21/31
【公開號】CN104897589
【申請?zhí)枴緾N201510295237
【發(fā)明人】程富勝, 張繼瑜, 張霞, 周緒正, 李冰, 魏小娟, 牛建榮, 劉宇, 王娟娟
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年6月2日