一種檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及納米生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測量子點多肽數(shù)量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]量子點(QDs)作為一種新型熒光材料，具有激發(fā)光譜寬、發(fā)射光譜窄而對稱、顏色可調(diào)、抗光漂白和熒光壽命長等優(yōu)點。這些優(yōu)點彌補了傳統(tǒng)熒光探針的不足，逐漸使其在生物分析檢測方面得到了廣泛應(yīng)用。水溶性量子點可與寡聚組氨酸多肽之間進行金屬親和性驅(qū)動自組裝，即可將功能化的多肽或蛋白偶聯(lián)到QDs表面。寡聚組氨酸和QD之間的相互作用迅速而穩(wěn)定。并且，QD-寡聚組氨酸多肽偶聯(lián)可通過QDs與寡聚組氨酸多肽之間的摩爾比控制。
[0003]目前，在生物標記中應(yīng)用最廣泛的是金屬有機溶劑法合成的CdSe/ZnS量子點。通過使用含有巰基的小分子化合物對體系進行分散，可提高QDs的穩(wěn)定性。QDs表面的Zn原子和多組氨酸殘基的金屬親和協(xié)調(diào)作用，含有組氨酸殘基的多肽和蛋白質(zhì)能夠直接與QDs表面的Zn原子結(jié)合，實現(xiàn)偶聯(lián)。并且，QD-寡聚組氨酸多肽偶聯(lián)已廣泛應(yīng)用于納米生物傳感器的自組裝。例如，抗體偶聯(lián)QDs可用于抗原的檢測，QDs與多肽偶聯(lián)用于水解酶的檢測等。盡管金屬親和驅(qū)動的QDs自組裝已經(jīng)有了廣泛應(yīng)用，但對于QD-寡聚組氨酸多肽偶聯(lián)物仍缺乏詳細的色譜分析。
[0004]另一方面，毛細管電泳作為一種高分辨率、高靈敏、高通量及低樣品消耗的微分離技術(shù)，在生物分析領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。同時，通過將熒光檢測與毛細管電泳相結(jié)合，大大提高了檢測限，拓展了毛細管的應(yīng)用。本實驗通過設(shè)計一系列不同摩爾比的熒光染料標記的多肽與量子點組成生物探針，通過毛細管電泳的分析檢測，計算出相應(yīng)的峰面積之比，繪制標準曲線，從而實現(xiàn)量子點表面結(jié)合的多肽數(shù)量的檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中不能檢測量子點表面結(jié)合的多肽數(shù)量的不足，提供一種檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為，一種檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，步驟如下:
[0007](I)設(shè)計一系列不同摩爾比的熒光染料標記的多肽與量子點，所述的多肽序列包括一個組氨酸標簽序列，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，繪制峰面積比一熒光染料標記的多肽與量子點摩爾比的標準曲線；
[0008](2)在待測樣品中包括一個組氨酸標簽，用熒光染料標記，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，根據(jù)步驟(I)得到的標準曲線確定待測樣品的多肽數(shù)量。
[0009]進一步地，所述的量子點為含有Zn的量子點。
[0010]作為優(yōu)選，所述的量子點為 CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdSe/ZnSe 或者 CdTe/ZnSe。
[0011 ] 作為優(yōu)選，所述的量子點為水溶性量子點。
[0012]作為優(yōu)選，所述的熒光染料應(yīng)能與量子點發(fā)生FRET。
[0013]本發(fā)明所取得的有益效果是，本發(fā)明提供的可用于識別量子點表面多肽數(shù)量的方法，操作簡單，可重復(fù)性高，進一步拓展了量子點一多肽復(fù)合物作為納米熒光探針在生物分析領(lǐng)域的應(yīng)用。
【附圖說明】
[0014]圖1是ATTO 590-H6和QDs在毛細管內(nèi)自組裝的電泳圖(黑，565nm，QDs供體檢測通道；灰，625nm，ATTO 590 受體檢測通道)，(a) QDs, (b) 8:1 (ATT0590-H6: QDs，下同)，(c) 16:1，(d)64:l，(e)ATTO 590-H6。
[0015]圖2是S625/S565與摩爾比(ΑΤΤ0 590_H6/QDs)之間的關(guān)系圖(標準曲線)。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明將就以下實施例作進一步說明，但應(yīng)了解的是，這些實施例僅為例示說明之用，而不應(yīng)被解釋為本發(fā)明實施的限制。
[0017]實施例1
[0018]熒光毛細管檢測量子點表面多肽(dddlvprgsgp9g2h6)數(shù)量
[0019]1、脂溶性QDs經(jīng)GSH轉(zhuǎn)換為水溶性QDs
[0020]將18mg GSH, 5mg KOH，250 μ L甲醇混勻，取40 μ L混合溶液加入200 μ L脂溶性量子點中，振蕩30min。振蕩結(jié)束后，加入200 yL ImM NaOH，脂溶性量子點即轉(zhuǎn)移到水相中。取出上層量子點，加入ImL甲醇與30 μ L NaCl (30mg/mL)沉淀，溶于硼酸緩沖液(pH 7.4，1mM)中。反復(fù)沉淀兩次，最后溶于200 μ L硼緩沖液(pH 7.4，1mM)中。
[0021]2、多肽合成與標記
[0022]多肽DDDLVPRGSGP9G2Hf^ 用 Fmoc 固相合成法合成。用 HBTU/HOBt (1:1)活化Fmoc保護的氨基酸，偶聯(lián)30min ;用堿性溶劑20 %哌啶脫保護，暴露出氨基；采用HBTU和HOBt活化下一個氨基酸上的羧基，與樹脂上的氨基偶聯(lián)，形成肽鍵；重復(fù)上述步驟，反復(fù)循環(huán)添加氨基酸，直至合成完成。再用20%哌啶脫保護，暴露出氨基，用EDC/HOBt(Iil)活化ATT0-590的羧基，進行染料的標記。用切割試劑(TFA，乙二硫醇，水和TIS, 94:2.5:2.5:1，v/v)將多肽從樹脂上切割下來，然后經(jīng)過冰乙醚沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過HPLC分離純化，冷凍干燥得到最后產(chǎn)品，具有熒光標記的多肽(ΑΤΤ0 590-H6)。
[0023]3、量子點生物探針在毛細管內(nèi)偶聯(lián)與檢測
[0024]將不同摩爾比的ATTO 590-H6與QDs在毛細管內(nèi)自組裝，經(jīng)過熒光毛細管電泳分析發(fā)現(xiàn)，隨著ATTO 590-H6與QDs摩爾比的增大，F(xiàn)RET逐漸增強(圖1)。通過對不同摩爾比條件下的ATTO 590-H6受體檢測通道峰面積與QDs供體檢測通道峰面積比(S625/S565)，繪制出標準曲線(圖2)，得出標準曲線方程y = 0.04794x-0.1026。
[0025]4、檢測量子點表面多肽數(shù)量
[0026]將待檢測多肽與量子點混合，通過熒光毛細管電泳檢測，其得到的峰面積之比S625/S565為0.281，通過標準曲線方程y = 0.04794χ-0.1026得出該量子點表面結(jié)了的多肽數(shù)量為8。
[0027]實施例2
[0028]熒光毛細管檢測量子點表面多肽(DDDLVPRGSGP9G2H6)數(shù)量
[0029]I一3步驟同實施例1。
[0030]4、檢測量子點表面多肽數(shù)量
[0031]將待檢測多肽與量子點混合，通過熒光毛細管電泳檢測，其得到的峰面積之比S625/S565為2.198，通過標準曲線方程y = 0.04794χ-0.1026得出該量子點表面結(jié)了的多肽數(shù)量為48。
[0032]以上述依據(jù)本發(fā)明的理想實施例為啟示，通過上述的說明內(nèi)容，相關(guān)工作人員完全可以在不偏離本項發(fā)明技術(shù)思想的范圍內(nèi)，進行多樣的變更及修改。本項發(fā)明的技術(shù)性范圍并不局限于說明書上的內(nèi)容，必須要根據(jù)權(quán)利要求范圍來確定其技術(shù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，其特征在于，步驟如下: (1)設(shè)計一系列不同摩爾比的熒光染料標記的多肽與量子點，所述的多肽序列包括一個組氨酸標簽序列，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，繪制峰面積比一熒光染料標記的多肽與量子點摩爾比的標準曲線； (2)在待測樣品中包括一個組氨酸標簽，用熒光染料標記，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，根據(jù)步驟(I)得到的標準曲線確定待測樣品的多肽數(shù)量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，其特征在于，所述的量子點為含有Zn的量子點。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，其特征在于，所述的量子點為 CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdSe/ZnSe 或者 CdTe/ZnSe。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，其特征在于:所述的量子點為水溶性量子點。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，其特征在于:所述的熒光染料與量子點之間能發(fā)生FRET。
【專利摘要】本發(fā)明涉及納米生物技術(shù)領(lǐng)域，一種檢測量子點表面多肽數(shù)量的方法，(1)設(shè)計一系列不同摩爾比的熒光染料標記的多肽與量子點，所述的多肽序列包括一個組氨酸標簽序列，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，繪制峰面積比—熒光染料標記的多肽與量子點摩爾比的標準曲線；(2)在待測樣品中包括一個組氨酸標簽，用熒光染料標記，與量子點自組裝成量子點生物探針，通過熒光毛細管電泳檢測，測定受體檢測通道與供體檢測通道的峰值面積之比，根據(jù)步驟(1)得到的標準曲線確定待測樣品的多肽數(shù)量。本發(fā)明提供的可用于識別量子點表面多肽數(shù)量的方法，操作簡單，可重復(fù)性高。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105136761
【申請?zhí)枴緾N201510561217
【發(fā)明人】王建浩, 劉菲菲, 滕一萬, 陳瑤, 蔣鵬舉, 邱琳, 李靜燕, 李進晨, 王車禮, 楊麗, 張晨澄, 樊杰, 柳麗
【申請人】常州大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月6日