一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種前白蛋白檢測(cè)試劑，還涉 及使用此檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 前白蛋白，又被稱為轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白，由肝細(xì)胞合成。它是由4個(gè)相同亞基組成的 四聚體，分子量為55. OkD，含糖量0. 5%，含色氨酸3. 15%。前白蛋白具有重要的生物學(xué)活性。 它與甲狀腺素結(jié)合球蛋白以及白蛋白協(xié)同參與甲狀腺素的運(yùn)轉(zhuǎn)。它在甲狀腺激素運(yùn)轉(zhuǎn)過程 中的作用僅次于甲狀腺素結(jié)合球蛋白（TBG)。TBG負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)甲狀腺激素總量的70%-75%，前 白蛋白則轉(zhuǎn)運(yùn)15%-20%，白蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的更少些。在正常生理狀態(tài)下，甲狀腺素幾乎全部通過 與這三種蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)到達(dá)靶細(xì)胞。
[0003] 前白蛋白另一重要功能是協(xié)助視黃醇結(jié)合蛋白（RBP)轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇。當(dāng)機(jī)體需要維 生素 A時(shí)，貯存在肝臟中的視黃醇酯被水解，游離的視黃醇與RBP結(jié)合，被分泌到血液循環(huán) 中，再與PA結(jié)合，所形成的視黃醇-RBP-PA大分子結(jié)合物，通過循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)到有特異性RBP受 體結(jié)合部位的靶組織中。一旦進(jìn)入靶細(xì)胞，視黃醇-RBP-PA結(jié)合物即分離。
[0004] 血清前白蛋白能敏感反映肝臟蛋白質(zhì)代謝情況，它比白蛋白更能早期反應(yīng)肝細(xì)胞 損害，它的血清濃度明顯受營(yíng)養(yǎng)狀況及肝功能改變的影響，有30%患者白蛋白正常而前白 蛋白降低，多數(shù)肝病患者前白蛋白均降低50%以上，所以前白蛋白被認(rèn)為是判斷早期肝臟 損害的靈敏指標(biāo)。此外，在預(yù)測(cè)晚期癌癥患者生存時(shí)間方面，前白蛋白也是一項(xiàng)有價(jià)值的指 標(biāo)。
[0005] 前白蛋白的檢測(cè)方法主要有電泳法、單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法，免疫電泳法，免疫比濁法。 其中，電泳法所測(cè)得的血清白蛋白并非真值；單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法和免疫電泳法雖然特異性高， 但這兩種方法操作較為繁瑣，所需要的時(shí)間都較長(zhǎng)，過度浪費(fèi)資源；免疫比濁法是近年來應(yīng) 用最多，最有價(jià)值的檢測(cè)方法。免疫比濁法以其測(cè)定原理，可分為散射比濁法和透射比濁法 兩類。散射比濁法是利用溶液中抗原抗體反應(yīng)所形成的復(fù)合物顆粒被一定波長(zhǎng)的光照射 時(shí)，發(fā)生散射，通過檢測(cè)散射光強(qiáng)度，計(jì)算出樣品中前白蛋白的量。透射比濁法則是基于抗 原抗體復(fù)合物顆粒形成后，使透射光減少，根據(jù)吸光度值推算前白蛋白量。前白蛋白免疫 比濁法檢測(cè)試劑盒原理是基于前白蛋白與前白蛋白抗體之間的反應(yīng)。先將樣本與緩沖液孵 育，然后加入前白蛋白抗體試劑，在340nm波長(zhǎng)下讀取混合液的吸光度，與樣本中前白蛋白 的濃度成正比。免疫比濁法具有投資成本低，簡(jiǎn)單易操作，測(cè)試速快，精密度重復(fù)性好等優(yōu) 點(diǎn)，逐漸被廣泛應(yīng)用于臨床體液中蛋白質(zhì)含量檢測(cè)的領(lǐng)域。但是普通的前白蛋白免疫比濁 法存在靈敏度低，準(zhǔn)確度低的問題，限制了進(jìn)一步的該技術(shù)的推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)以上存在的問題，本發(fā)明提供一種檢驗(yàn)前白蛋白的試劑以及使用該試劑檢測(cè) 前白蛋白含量的方法。該試劑盒采用免疫比濁法，可以有效檢測(cè)血清中前白蛋白含量，并且 準(zhǔn)確度高，靈敏度較好。
[0007] 本發(fā)明一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，包括試劑Rl和試劑R2， 所述試劑Rl和R2的組成如下： 試劑Rl含有： 緩沖液 200mmol/L 聚乙二醇-6000 10 mmol/L 防腐劑 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 試劑R2含有： 緩沖液 200mmol/L 防腐劑 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 吐溫-20 1-5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 抗人前白蛋白抗體 30 mmol/L。
[0008] 所述的前白蛋白檢測(cè)試劑盒，試劑Rl中緩沖液為25°C，pH為7. 6的Tris-Hcl緩 沖液。
[0009] 所述的前白蛋白檢測(cè)試劑盒，試劑R2中緩沖液為25°C，pH為7. 6的Tris-Hcl緩 沖液。
[0010] 所述的前白蛋白檢測(cè)試劑盒，所述防腐劑為慶大霉素。
[0011] 所述前白蛋白檢測(cè)試劑來檢測(cè)前白蛋白的檢測(cè)方法，使用全自動(dòng)生化分析儀利用 終點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)主波長(zhǎng)為340nm。
[0012] 所述的前白蛋白檢測(cè)試劑盒，其特征在于采用新型表面活性劑是吐溫-20。
[0013] 所述的檢測(cè)方法，Rl試劑和R2試劑的比例為3:1。
[0014] 本發(fā)明的有益效果： 1) 添加穩(wěn)定劑牛血清白蛋白，大大增強(qiáng)了試劑的穩(wěn)定性； 2) 采用新的防腐劑慶大霉素，有效解決了牛血清白蛋白容易滋長(zhǎng)微生物的問題，并且 大大減弱了化學(xué)防腐劑對(duì)于穩(wěn)定劑牛血清白蛋白穩(wěn)定性影響； 3) 采用新型表面活性劑吐溫-20,不僅顯著改善測(cè)定的性能，而且增強(qiáng)了試劑的穩(wěn)定 性和抗干擾能力。
【附圖說明】
[0015] 圖1為實(shí)施例2準(zhǔn)確度驗(yàn)證檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性。
[0016] 圖2為實(shí)施例2穩(wěn)定性驗(yàn)證檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。
[0018] 實(shí)施例1 一種前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，它包括試劑Rl、試劑R2， 1) 其試劑Rl的組成為： 緩沖液 200mmol/L 聚乙二醇-6000 10 mmol/L 防腐劑 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 2) 其試劑R2的組成為： Tris-Hcl 緩沖液 200mmol/L 防腐劑疊氮鈉 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 吐溫-20 1-5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 抗人前白蛋白抗體 30 mmol/L 3) 本實(shí)施例試劑的使用方法： 本實(shí)施例描述的前白蛋白檢測(cè)試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化分析 儀，如日立7180全自動(dòng)分析儀等，利用終點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定。將Rl和R2按照3:1的比例放置 到對(duì)應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對(duì)應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如表1。
[0019] 表1實(shí)施例1試劑檢測(cè)方法
計(jì)算：前白蛋白含量（以111〇1/1)=(八厶測(cè)定+六厶標(biāo)準(zhǔn)）\(：標(biāo)準(zhǔn)。
[0020] 實(shí)施例2 相關(guān)性實(shí)驗(yàn) 將實(shí)施例1的試劑盒作為實(shí)驗(yàn)組，市場(chǎng)上獲得認(rèn)可的一種準(zhǔn)確度優(yōu)異的前白蛋白試劑 盒作為對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，對(duì)20個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如表2所示，并獲得了兩種試 劑的相關(guān)性曲線（如圖1所示)。通過檢測(cè)結(jié)果顯示，兩種試劑盒與市場(chǎng)優(yōu)異的試劑盒有很 大的相關(guān)性。
[0021] 表2實(shí)施例1試劑與市場(chǎng)常見并得到認(rèn)可的前白蛋白測(cè)定試劑盒對(duì)比檢測(cè)結(jié)果 CN 105137090 A h/l 4/4 貝
ο
[0022] 實(shí)施例3 試劑的穩(wěn)定性對(duì)比試驗(yàn) 對(duì)實(shí)施例1中的試劑，均勻分裝13組，每組的試劑量為Rl為20mL，R2為5mL ;并且取 13組市場(chǎng)常見的國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的某公司的前白蛋白試劑盒作對(duì)照。放置到 2-8°C冰箱中，每月的同一天取出一組試劑檢測(cè)樣品。檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，實(shí)施例1試劑 在2-8°C儲(chǔ)存條件下比市場(chǎng)常見的前白蛋白測(cè)定試劑盒更加穩(wěn)定。
[0023] 綜上分析，本發(fā)明提供的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，在試劑R2中通過加入 一定量的牛血清白蛋白，以及將防腐劑替換成慶大霉素能夠有效的提高試劑盒的穩(wěn)定性， 試劑的準(zhǔn)確度。因此，本發(fā)明提供的前白蛋白免疫比濁法試劑盒有利于在市場(chǎng)中進(jìn)一步推 廣使用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括試劑Rl和試劑 R2,所述試劑Rl和試劑R2組成如下： 1) 試劑Rl的組成為： Tris-Hcl 緩沖液 200mmol/L 聚乙二醇-6000 10 mmol/L 防腐劑慶大霉素 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 2) 試劑R2的組成為： Tris-Hcl 緩沖液 200mmol/L 防腐劑慶大霉素 6 mmol/L 乙二胺四乙酸 5 mmol/L 牛血清白蛋白 5 mmol/L 抗人前白蛋白抗體 30 mmol/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，其特征在 于所述防腐劑為慶大霉素。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，其特征在 于穩(wěn)定劑使用牛血清白蛋白。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，其特征在 于采用新型表面活性劑是吐溫-20。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種準(zhǔn)確度高的前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，其特征在 于Rl試劑和R2試劑的體積比例為3:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種前白蛋白免疫比濁法檢測(cè)試劑盒，屬于臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒包括試劑R1、試劑R2。試劑R1中含有Tris-Hcl緩沖液，聚乙二醇-6000，防腐劑慶大霉素，乙二胺四乙酸，牛血清白蛋白；試劑R2中含有Tris-Hcl緩沖液，防腐劑慶大霉素，乙二胺四乙酸，牛血清白蛋白，抗人前白蛋白抗體。通過在試劑R1、試劑R2中加入防腐劑慶大霉素，穩(wěn)定劑牛血清白蛋白，有效的提高了試劑盒的穩(wěn)定性，并采用新型表面活性劑吐溫-20，不僅顯著改善測(cè)定的性能，而且增強(qiáng)了試劑的穩(wěn)定性和抗干擾能力，試劑的準(zhǔn)確度高，有利于在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣使用。
【IPC分類】G01N33/68
【公開號(hào)】CN105137090
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510638197
【發(fā)明人】甘宜梧, 劉慧 , 王春艷, 譚柏清
【申請(qǐng)人】山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年9月30日