一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種高效液相分析檢測(cè)方法，具體涉及一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基 吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，即首先將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行柱前衍生，與Boc酸酐 反應(yīng)，得到具有紫外吸收的衍生物，再通過高效液相色譜法，利用Phenomenex C18 Gimini 色譜柱，紫外檢測(cè)器，高效液相色譜儀進(jìn)行分析。
【背景技術(shù)】
[0002] 1、3_氨基吡咯烷及其各類衍生物是重要的精細(xì)化工中間體，廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥、醫(yī) 藥、精細(xì)化學(xué)品等合成，具有良好的市場(chǎng)前景。3-氨基吡咯烷的二鹽酸鹽和乙?；锸呛铣?托氟沙星和其它喹諾酮類抗菌藥的關(guān)鍵中間體。目前，國(guó)內(nèi)3-氨基吡咯烷主要用于制藥方 面。通過3-氨基吡咯烷可以合成具有殺菌作用的諾氟沙星、克林沙星、AB-T719等喹諾酮類 抗菌藥；而具有光學(xué)活性的3-氨基吡咯烷乙?；苌锸寝r(nóng)業(yè)化學(xué)品和藥物活性物質(zhì)（例 如乙烯基吡咯烷酮-頭飽菌素衍生物)的重要中間體。因此開發(fā)3-氨基吡咯烷以及其它的 一些衍生物快捷方便的純度檢測(cè)分析方法是很有必要的。
[0003] 目前未見關(guān)于3-氨基吡咯烷鹽酸鹽的分析方法的文獻(xiàn)報(bào)道，鑒于其在精細(xì)化工 應(yīng)用中的重要性以及廣泛性，開發(fā)一種簡(jiǎn)單高效的分析檢測(cè)方法是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是為了開發(fā)出一種3-氨基吡咯烷鹽酸鹽分析檢測(cè)的方法。3-氨基吡 咯烷鹽酸鹽本身不具有紫外吸收，直接對(duì)其進(jìn)行純度檢測(cè)較為麻煩且不準(zhǔn)確。經(jīng)過我們的 不斷研究，發(fā)現(xiàn)采取柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)的方法，得到Boc-3-氨基吡咯烷，具有紫外 吸收，能夠利用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。使用簡(jiǎn)單的高效液相色譜儀以及常見的分析試劑就 能夠?qū)χ把苌蟮臉悠愤M(jìn)行分析。該分析方法具有操作簡(jiǎn)單，試劑方便易獲得，實(shí)驗(yàn)過程 中不易帶入雜質(zhì)，檢測(cè)過程快速且靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案 一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，具體包括如下步驟： (1 )、將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽樣品進(jìn)行柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)，得到具有紫外吸收 的Boc-3-氨基吡咯烷； 所述的3-氨基吡咯烷鹽酸鹽柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)，即將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽、 甲醇、三乙胺和Boc酸酐放入三口燒瓶中，室溫下反應(yīng)8h后旋干，即得Boc-3-氨基吡咯烷； 上述3-氨基吡咯烷鹽酸鹽、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩爾比計(jì)算，即3-氨 基吡咯烷鹽酸鹽：甲醇：三乙胺：Boc酸酐為1:4:3:1. 2 ; (2)、將步驟（1)所得的Boc-3-氨基吡咯烷鹽酸鹽用水相和有機(jī)相混合成的溶液稀釋 成濃度為〇. 4-0. 6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷鹽酸鹽溶液；所述的水相為pH為2-3的磷酸 二氫鉀水溶液； (3)、使用高效液相色譜儀，對(duì)上述所得濃度為0.4-0.61^/1^的此(3-3-氨基吡咯烷溶 液進(jìn)行高效液相分析，根據(jù)所得的高效液相色譜圖的峰面積利用面積歸一法計(jì)算3-氨基 吡咯烷鹽酸鹽的純度； 色譜分析所用的色譜柱為Phenomenex C18 Gimini色譜柱，進(jìn)樣量為10 μ L，控制流速 為0. 8-lmL/min，檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，色譜柱柱溫為25°C，以水相與有 機(jī)相組成的反向流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行洗脫； 所述的水相與有機(jī)相所組成的反相流動(dòng)相系統(tǒng)由水和甲醇按體積百分比計(jì)算，即水： 甲醇為20-25% :75-80%組成的混合溶液。
[0006] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果 本發(fā)明的一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，采用了柱前衍 生與高效液相色譜相結(jié)合的技術(shù)方案。通過柱前衍生，使得3-氨基吡咯烷鹽酸鹽具有紫外 吸收，因此能夠利用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)研究便捷性，實(shí)驗(yàn)成本控制，實(shí)驗(yàn)時(shí)間控 制等方面有很好的的技術(shù)效果。同現(xiàn)有的氣相分析方法相比較，在實(shí)驗(yàn)的研究便捷性上，樣 品處理更加簡(jiǎn)單；在成本控制上，更加節(jié)省能源，實(shí)驗(yàn)材料也相對(duì)便宜；在時(shí)間控制上更加 快速，氣相分析方法一般需要60min左右，而本發(fā)明的分析時(shí)間僅需lOmin，能夠準(zhǔn)確檢測(cè) 出3-氨基吡咯烷鹽酸鹽物質(zhì)含量以及雜質(zhì)含量，對(duì) 樣品提純跟蹤檢測(cè)提供了一種非常便捷直觀的檢測(cè)方法。
【附圖說明】
[0007] 圖1、標(biāo)準(zhǔn)的Boc-3氨基吡咯烷在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm處所得的液相色譜圖； 圖2、3、4、5、6分別為實(shí)施例1中對(duì)Boc-3-氨基吡咯烷溶液分別在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm、 220nm、239nm、254nm、260nm所得的液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的闡述，但本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施 例。
[0009] 本發(fā)明實(shí)施例中所用的高效液相色譜儀為DIONEX UltiMate 3000 Pump， UltiMate 3000 Autosampler? UltiMate 3000 Column Compartment? UltiMate 3000 Photodiode Array Detector。
[0010] 標(biāo)準(zhǔn)的Boc-3氨基吡咯烷在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm處所得的液相色譜圖如圖I所示， 色譜分析條件如下： 所用色譜柱為Phenomenex C18 Gimini柱，進(jìn)樣量為10 μ L，控制流速為0.8-lmL/min， 在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，色譜柱柱溫為25°C，以水相與有機(jī)相組成的反向流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行洗 脫； 所述的水相與有機(jī)相所組成的反相流動(dòng)相系統(tǒng)由水和甲醇按體積百分比計(jì)算，即水： 甲醇為25% :75%組成的混合液。
[0011] 實(shí)施例1 一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，具體包括如下步驟： (1 )、將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽樣品進(jìn)行柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)，得到具有紫外吸收 的Boc-3-氨基吡咯烷； 所述的3-氨基吡咯烷鹽酸鹽柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)步驟如下： 將鐵架臺(tái)放在桌子上，磁力攪拌器放在鐵架臺(tái)上，將50mL的單口瓶放在磁力攪拌 器上，內(nèi)置一個(gè)磁子，然后將3-氨基吡咯鹽酸鹽（1.59g，10mm〇l)放入其中，再加入甲醇 (10mL，40mmol)攪拌至溶清，然后加入三乙胺（3. 04g，30mmol)，室溫?cái)嚢?5min，隨即滴 加 Boc酸酐（2. 62g，12mmol)，室溫下進(jìn)行反應(yīng)8h，所得的反應(yīng)液在溫度為40-45°C，壓力 為-0. 09MPa條件下進(jìn)行減壓蒸餾，來除去未反應(yīng)完的甲醇，即得Boc-3-氨基吡咯烷，其反 應(yīng)過程方程式如下所示：
上述3-氨基吡咯烷鹽酸鹽、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩爾比計(jì)算，即3-氨 基吡咯烷鹽酸鹽：甲醇：三乙胺：Boc酸酐為1:4:3:1. 2 ; (2) 、將步驟（1)所得的Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀釋成濃度為0.6mg/mL的 Boc-3-氨基吡咯烷溶液； 所述的水相是把I. 〇2g磷酸二氫鉀溶解于500mL水中得到磷酸二氫鉀水溶液，用磷酸 調(diào)節(jié)pH為2-3 ; (3) 、使用高效液相色譜儀，對(duì)上述所得的Boc-3-氨基吡咯烷溶液進(jìn)行高效液相分析， 色譜分析所用色譜柱為Phenomenex C18 Gimini柱，進(jìn)樣量為10 μ L，控制流速為0. 8-lmL/min，分別在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm、 220nm、239nm、254nm、260nm，色譜柱柱溫為25°C，以水相與有機(jī)相組成的反向流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn) 行洗脫，在檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm、220nm、239nm、254nm、260nm所對(duì)應(yīng)的色譜圖分別如圖2、圖3、 圖4、圖5和圖6所示，從上述五個(gè)附圖中可以看出210nm波長(zhǎng)下吸收峰最高，且主峰與雜質(zhì) 峰能夠達(dá)到基線分離； 根據(jù)圖1中的標(biāo)準(zhǔn)的Boc-3氨基吡咯烷的液相色譜圖和上述Boc-3-氨基吡咯烷溶液 在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè)所得的吸收峰的峰面積，利用面積歸一法計(jì)算3-氨基吡咯烷鹽酸鹽的 純度，能夠準(zhǔn)確得到3-氨基吡咯烷鹽酸鹽的含量百分比及其雜質(zhì)百分比，其結(jié)果為3-氨基 吡咯烷鹽酸鹽純度為99. 86%，雜質(zhì)分別為0. 06%和0. 08%。
[0012] 所述的水相與有機(jī)相所組成的反相流動(dòng)相系統(tǒng)由水和甲醇按體積百分比計(jì)算，即 水：甲醇為25% :75%組成的混合液。
[0013] 以上所述僅是本發(fā)明的實(shí)施方式的舉例，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本 發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，其特征在于步驟如下： (1 )、將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽樣品進(jìn)行柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)，得到具有紫外吸收 的Boc-3-氨基吡咯烷； (2)、將步驟（1)所得的Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀釋成濃度為0. 4 -0. 6mg/mL的 Boc-3-氨基吡咯烷溶液； 所述的水相為pH為2-3的磷酸二氫鉀水溶液； (3) 、使用高效液相色譜儀，對(duì)上述所得的濃度為0. 4-0. 6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷 溶液進(jìn)行高效液相分析，根據(jù)所得的高效液相色譜圖的峰面積利用面積歸一法計(jì)算3-氨 基吡咯烷鹽酸鹽的純度； 色譜分析所用的色譜柱為PhenomenexC18Gimini色譜柱，進(jìn)樣量為IOyL，控制流速 為0. 8-lmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，色譜柱柱溫為25°C，以水相與有機(jī)相組成的反向流動(dòng) 相系統(tǒng)進(jìn)行洗脫； 所述的水相與有機(jī)相所組成的反相流動(dòng)相系統(tǒng)由水和甲醇按體積百分比計(jì)算，即水： 甲醇為20-25% :75-80%組成的混合溶液。2. 如權(quán)利要求1所述的一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，其 特征在于步驟（1)中所述的3-氨基吡咯烷鹽酸鹽柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)，即將3-氨基 吡咯烷鹽酸鹽、甲醇、三乙胺和Boc酸酐放入三口燒瓶中，室溫下反應(yīng)8h后旋干， 即得Boc-3-氨基吡略燒； 上述3-氨基吡咯烷鹽酸鹽、甲醇、三乙胺和Boc酸酐的用量，按照摩爾比計(jì)算，即3-氨 基吡咯烷鹽酸鹽：甲醇：三乙胺：Boc酸酐為1:4:3:1. 2。3. 如權(quán)利要求1或2所述的一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的 方法，其特征在于所用的高效液相色譜儀為：DIONEXUltiMate3000Pump，UltiMate3000 Autosampler，UltiMate3000ColumnCompartment，UltiMate3000PhotodiodeArray Detector。4. 如權(quán)利要求I或2所述的一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方 法，其特征在于使用的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種利用柱前衍生對(duì)3-氨基吡咯烷鹽酸鹽進(jìn)行分析的方法，即首先將3-氨基吡咯烷鹽酸鹽樣品進(jìn)行柱前衍生，與Boc酸酐反應(yīng)得到具有紫外吸收的Boc-3-氨基吡咯烷；然后將Boc-3-氨基吡咯烷用水相稀釋成濃度為0.4-0.6mg/mL的Boc-3-氨基吡咯烷溶液，使用高效液相色譜儀對(duì)其進(jìn)行高效液相分析，用Phenomenex？C18？Gimini色譜柱為色譜柱，進(jìn)樣量10μL，流速0.8-1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，色譜柱溫25℃，以反向流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，利用面積歸一法計(jì)算得到3-氨基吡咯玩鹽酸鹽的純度。該分析方法時(shí)間較短、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、分析所用成本低，分析方法方便可行。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號(hào)】CN105181861
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510203620
【發(fā)明人】潘仙華, 陳思羽, 張瑞敏, 于一文, 王亞萍, 史堯, 劉烽
【申請(qǐng)人】上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年4月24日