一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃芪是一種常見的中藥材，黃芪中的總黃酮含量相對于其他藥材比較高，因此黃 芪對治療糖尿病有著很好的療效，通過黃芪得到總黃酮有很多方法，有水煮法、發(fā)酵、有機 提取等方法，采用發(fā)酵和有機提取方法能獲得高產(chǎn)量的總黃酮，對于黃芪發(fā)酵過程中總黃 酮的含量的測定，目前現(xiàn)有的方法過于復(fù)雜，操作過于繁瑣，而且測定含量精度不高，誤差 相對較大，檢測不穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法，以解決上 述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案： 一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法，具體操作步驟如下： (1) 對照品洛液的制備 精密稱取蘆丁對照品13.OOOmg于25mL容量瓶中，加體積分數(shù)為70%的乙醇，水浴加熱 使溶解，放冷，再用體積分數(shù)為70%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，配置成0. 52mg·g1的對照品 溶液； (2) 待測樣品溶液的制備 取待測樣品lg與圓底燒瓶中，加10倍量體積分數(shù)為95%的乙醇，浸泡過夜，在索氏提 取器中連續(xù)回流提取2h，冷卻，過濾，收集濾液，定容于100mL容量瓶中，備用； (3) 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述蘆丁標準液〇、〇. 05、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1.0mL于10mL比色管中，各加 0. 5mL的5%NaN02溶液，搖勻放置6min，再加入30. 5mL的10%A1 (N0) 3，搖勻放置6min，再加 入4mL的lmol·L1的NaOH溶液，最后溶液用體積分數(shù)為70%的乙醇溶液定容，搖勻放置 15min;在510nm波長處，以第一管溶液作為空白，測得不同濃度下吸光度值，以吸光度值為 縱坐標，濃度為橫坐標進行回歸，繪制標準曲線； (4) 樣品中總黃酮含量的測定及計算 精密吸取樣品5.OmL分別于25mL容量瓶中，加蒸餾水至6mL，按標準曲線制作方法進行 測定，記錄各樣品吸光度，通過公式X= (CXLX25) (IXm)計算總黃酮含量，式中X-樣品 中總黃酮含量，V。-樣品待測液總體積，V樣品提取液測定吸取體積，C-從標準曲線查得待 測液中蘆丁濃度，m-樣品待測液折合原始生藥量。
[0005]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明檢測方法操作簡單方便，具有精密 度準確、重復(fù)性好、檢測穩(wěn)定以及回收率高的優(yōu)點，能精確檢測出黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中總黃酮 的含量。
【具體實施方式】
[0006] 下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的 實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都 屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0007] -種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法，具體操作步驟如下： (1) 對照品洛液的制備 精密稱取蘆丁對照品13.OOOmg至于25mL容量瓶中，加70%乙醇適量，水浴加熱使溶 解，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勾，配置成0. 52mg·g1的對照品溶液； (2) 待測樣品溶液的制備 取待測樣品lg與圓底燒瓶中，加10倍量95%乙醇，浸泡過夜，在索氏提取器中連續(xù)回 流提取2h，冷卻，過濾，收集濾液，定容于100mL容量瓶中，備用； (3) 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述蘆丁標準液〇、〇. 05、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1.OmL于10mL比色管中，加0. 5mL的5%NaN02溶液，搖勻放置6min，再加入30. 5mL的10%A1 (NO) 3，搖勻放置6min，再加4mL的 lmol·L1的NaOH，溶液用70%乙醇溶液定容，搖勻放置15min;在510nm波長處，以第一管 溶液作為空白，測得不同濃度下吸光度值，以吸光度值為縱坐標，濃度為橫坐標進行回歸， 繪制標準曲線，如表1所示，結(jié)果表明，蘆丁對照品在〇. 026~0. 52mg·mL1濃度范圍內(nèi) 呈良好的線性關(guān)系，其標準曲線方程為Y=ll. 467X+0. 0096,r=0. 9992 ; ① 精密度實驗 取上述供試品溶液，參照上述標準曲線方法，在510nm測定吸光度，連續(xù)測定6次，RSD為2. 14% (n=6)，結(jié)果見表1，結(jié)果表明本法精密度良好； 表1精密度試驗測定結(jié)果 ② 重復(fù)性考察
取同一批待測樣品，按待測樣品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液，分別精密測 定吸光度，計算得總黃酮的平均含量為5. 315%，RSD為0. 58%，結(jié)果見表2,表明本方法重 復(fù)性良好； 表2重復(fù)性試驗測定結(jié)果
③ 穩(wěn)定性試驗 取對照品及待測樣品溶液于室溫分別放置0、5、10、20、30mim后，測定吸光度RSD分別 為1. 09%和0. 89%，結(jié)果見表3,表明對照品及供試溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定； 表3穩(wěn)定性實驗測定結(jié)果

④加樣回收率試驗 精密稱取已知黃芪總黃酮含量的藥材6份，每份lg，按步驟（2)操作制成待測樣品溶 液，加蒸餾水定容至2mL，分成2組，每組3份，分別精密添加0. 5mg·mL1的蘆丁對照品 0. 83mL，1. 04mL，1. 25mL，按步驟（3)測定，并計算回收率；試驗結(jié)果見表4,表明本法具有良 好的回收率； 加樣回收率試驗測定結(jié)果（n=6)
(4)樣品中總黃酮含量的測定及計算 精密吸取樣品5.OmL分別于25mL容量瓶中，加蒸餾水至6mL，按標準曲線制作方法進行 測定，記錄各樣品吸光度，通過公式XMCXLXSSVMXm)計算總黃酮含量，式中X-樣品 中總黃酮含量，V。-樣品待測液總體積，V樣品提取液測定吸取體積，C-從標準曲線查得待 測液中蘆丁濃度，m-樣品待測液折合原始生藥量。
[0008] 對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在 不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論 從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有 變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法，其特征在于，具體操作步驟如下： (1) 對照品洛液的制備 精密稱取蘆丁對照品12. 990~13.OlOmg于25mL容量瓶中，加體積分數(shù)為70%的乙醇， 水浴加熱使溶解，放冷，再用體積分數(shù)為70%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，配置成0. 52mg·g1 的對照品洛液； (2) 待測樣品溶液的制備 取待測樣品〇. 99~1.Olg與圓底燒瓶中，加9~11倍量體積分數(shù)為95%的乙醇，浸泡 過夜，在索氏提取器中連續(xù)回流提取2h，冷卻，過濾，收集濾液，定容于100mL容量瓶中，備 用； (3) 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述蘆丁標準液〇、〇. 05、0. 1、0. 2、0. 4、0.8、1.0mL于10mL比色管中，各加 0. 45 ~0. 55mL的 5%NaN02溶液，搖勻放置 5 ~7min，再加入 30. 0 ~31.OmL的 10%A1 (NO) 3， 搖勻放置5~7min，再加入3. 5~4. 5mL的lmol·L1的NaOH溶液，最后溶液用體積分數(shù) 為70%的乙醇溶液定容，搖勻放置12~18min;在510nm波長處，以第一管溶液作為空白， 測得不同濃度下吸光度值，以吸光度值為縱坐標，濃度為橫坐標進行回歸，繪制標準曲線； (4) 樣品中總黃酮含量的測定及計算 精密吸取樣品4. 5~5. 5.OmL分別于25mL容量瓶中，加蒸餾水至5.OmL，按標準曲線制 作方法進行測定，記錄各樣品吸光度，通過公式X= (CXLX25) (IXm)計算總黃酮含量， 式中X-樣品中總黃酮含量，V。-樣品待測液總體積，Vf樣品提取液測定吸取體積，C-從標 準曲線查得待測液中蘆丁濃度，m-樣品待測液折合原始生藥量。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治糖尿量低下的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物檢測方法，先進行對照品溶液的制備，然后制備待測樣品溶液備用，在510nm波長下測定不同濃度下的吸光度值，以吸光度值為縱坐標，濃度為橫坐標進行回歸，繪制標準曲線，最后測定及計算樣品中總黃酮含量。本發(fā)明檢測方法操作簡單方便，具有精密度準確、重復(fù)性好、檢測穩(wěn)定以及回收率高的優(yōu)點，能精確檢測出黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中總黃酮的含量。
【IPC分類】G01N21/31
【公開號】CN105388118
【申請?zhí)枴緾N201510679333
【發(fā)明人】劉必旺, 梁慧珍, 趙換, 郭宏鵬, 李剛, 張惠忠, 李欽青, 柴金苗, 王永輝, 薛慧清, 郭蕾, 馮前進, 冀來喜, 張俊龍, 周然
【申請人】山西中醫(yī)學(xué)院
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年10月20日