高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及有機物分析領域，尤其涉及高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法。
【背景技術】
[0002]高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、栗、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓栗打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
[0003]通常，樣品中含有一些對分析者來說不感興趣的東西。鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)是一些可能在使用時與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。這些物質(zhì)有比分析者的目標物或少或大的保留值。那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來說在空體積時就被沖出色譜柱。這些非目標產(chǎn)物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰，氣泡，基線上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會積累在柱頭。這些行為通常只有通過平行實驗才能發(fā)現(xiàn)。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現(xiàn)為寬峰，基線擾動，或者基線漂移。有時候這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使他們開始形成新的固定相。分析物能與這些雜質(zhì)作用形成一定的分離機理。保留時間會波動，拖尾會出現(xiàn)。如果足夠的污染產(chǎn)生，柱子的反壓能超過栗所能承受的最大壓力，使柱子無法工作以及在堵塞處產(chǎn)生空體積。這時，我們就要對色譜柱進行再生。而現(xiàn)有的反相填料柱再生方法一般是通過水一甲醇一異丙醇一二氯甲烷一異丙醇一甲醇一水進行清洗，操作繁瑣，沖洗用料量大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術問題是現(xiàn)有的高效液相色譜儀中反相填料柱再生方法效果差，無專門的再生方法，為此提供一種高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法。
[0005]本發(fā)明的技術方案是:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在4-6L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min ； (3)、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6-9 L/min; (4)、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10 L/min。
[0006]本發(fā)明的有益效果是采用HPLC級水-甲醇-氯仿-甲醇流速逐漸提高、與反相填料柱相比的體積倍數(shù)逐漸降低的方法來再生反相填料柱，再生效果好，縮短了再生流程，反相色譜柱中水分含量少。
【具體實施方式】
[0007]下面結合實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0008]實施例1:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉反相填料柱，用40倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在4L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5L/min; (3)、用28倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6L/min； (4)、用20倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7 L/min。
[0009]實施例2:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉反相填料柱，用42倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在5L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用36倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在7L/min; (3)、用29倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在7 L/min; (4)、用24倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在8 L/min。
[0010]實施例3:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉反相填料柱，用44倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在6L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在8L/min; (3)、用30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在9 L/min; (4)、用28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在10 L/min。
[0011]本發(fā)明可以有效去除反相填料柱中的水分，保證固定相的水分含量變化較小，從而保持水分條件的一致性。
【主權項】
1.高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，其特征是它包括以下步驟:(1)、倒轉反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在4-6L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min; (3)、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6_9 L/min ；(4)、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10 L/min。
【專利摘要】本發(fā)明公開了高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟：（1）、倒轉反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級水反沖反相填料柱，HPLC級水流速控制在4-6L/min，沖洗時進4等分的200uL的二甲壓砜；（2）、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min；（3）、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6-9？L/min；（4）、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10？L/min。采用HPLC級水-甲醇-氯仿-甲醇流速逐漸提高、與反相填料柱相比的體積倍數(shù)逐漸降低的方法來再生反相填料柱，再生效果好，反相色譜柱中水分含量少。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105424839
【申請?zhí)枴緾N201510929869
【發(fā)明人】袁泳
【申請人】袁泳
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月15日