μ m)
[0060] 試劑；己酸己醋（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；水為超純水。
[0061] 對照品；丹皮酪（中國藥品生物制品檢定所，批號：110708-200506,含量測定用）； α-香附麗（中國食品藥品檢定研究院，批號：110748-201111,含量測定用）；和厚樸酪（中 國食品藥品檢定研究院，批號；110730-201011，含量測定化按98. 4%純度計(jì)）
[006引樣品；坤靈丸（天津天±力（迂寧）巧喊有限責(zé)任公司），共11化具體批號見表 3，均經(jīng)質(zhì)檢中必檢驗(yàn)合格。
[006引表3樣品信息表
[0064]
[0065] 2氣相色譜條件的選擇
[0066] 2. 1色譜柱的選擇
[0067] 因坤靈丸包括糖衣丸和薄膜衣丸兩種規(guī)格，且糖衣丸糖衣劑增重比例較大（約 40% )，故方法考察時(shí)首先采用素丸（批號：20130209)樣品進(jìn)行，待條件基本確定后再針對 糖衣丸和薄膜衣丸進(jìn)行方法學(xué)考察。
[0068] 參照相關(guān)文獻(xiàn)，考察不同極性毛細(xì)管柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果3種不同極性毛細(xì)管柱分 離得到的色譜峰個(gè)數(shù)及峰形基本一致，（見圖1~3)，但其中色譜柱②的色譜峰峰形較好， 故使用色譜柱②進(jìn)行程序升溫條件的考察。
[0069] 2. 2程序升溫條件的選擇
[0070] 使用色譜柱②對程序升溫條件進(jìn)行考察調(diào)整，在保證出峰完全的情況下，盡可能 縮短分析時(shí)長。結(jié)果在調(diào)整了 30余次程序升溫條件后，確定在此程序升溫條件（見表2-1) 下，共分離出約11個(gè)色譜峰，分析時(shí)間總長為55min，見圖4。
[0071] 表2-1程序升溫表
[0072]
[0073] 3氣相色譜條件的確定
[0074] 綜上分析，最終確定坤靈丸氣相指紋圖譜色譜條件如下：
[00巧]色譜柱；固定相W 14%氯丙基-苯基86%二甲基聚娃氧焼為填料，Agilent DB-1701(30mX0. 25mmX0. 25um)。柱溫；程序升溫條件見表1 ;進(jìn)樣口溫度；18(TC ;檢測 器；FID ;溫度；25(TC ;載氣；氮?dú)猓环至鬟M(jìn)樣；分流比；1 : 1進(jìn)樣量；1 μ L。
[0076] 表1程序升溫表
[0077]
[0078]
[0079] 4供試品處理方法的選擇
[0080] 4. 1首先采用糖衣丸進(jìn)行提取溶劑的選擇：
[0081] ①取糖衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取7g (與素丸折算），加己酸己醋25mU超聲處 理30min，離必取上清液，濃縮至干，殘?jiān)蛹核峒捍讖?fù)溶并定容至5ml，搖勻，過0. 45 μ m微 孔濾膜，即得。
[0082] ②取糖衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取7g (與素丸折算），加環(huán)己焼25mU超聲處理 30min，離必取上清液，濃縮至干，殘?jiān)迎h(huán)己焼復(fù)溶并定容至5ml，搖勻，過0. 45 μ m微孔濾 膜，即得。
[0083] ⑨取糖衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取7g，加水25血，超聲處理30min，加環(huán)己焼萃 取2次，每次20ml，合并萃取液回收至干，殘?jiān)迎h(huán)己焼復(fù)溶，并定容至5ml容量瓶中，搖勻， 過0.45 μ m微孔濾膜，即得。
[0084] ④取糖衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取7g，加水25血，超聲處理30min，加己酸己醋 萃取2次，每次20ml，合并萃取液回收至干，殘?jiān)蛹核峒捍讖?fù)溶，并定容至5ml容量瓶中， 搖勻，過0. 45 μ m微孔濾膜，即得。
[0085] 結(jié)果見圖5~圖8,由圖可W看出，采用供試品處理方法④即水提己酸己醋萃取得 到的色譜圖信息最多，故確定采用供試品處理方法④，繼續(xù)考察。
[0086] 4. 2根據(jù)上述考察結(jié)果，采用糖衣丸進(jìn)行提取方式的選擇，即供試品處理方法⑤ 取糖衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取7g，加水25mL，加熱回流30min，加己酸己醋萃取2次， 每次20ml，合并萃取液回收至干，殘?jiān)蛹核峒捍讖?fù)溶，并定容至5ml容量瓶中，搖勻，過 0.45 μ m微孔濾膜，即得。
[0087] 結(jié)果見圖9,由圖可W看出，除保留時(shí)間在lOmin之前的3個(gè)色譜峰明顯變大外，其 余色譜峰均明顯變小，故考慮氣相指紋圖譜信息的整體性及供試品操作的簡便性，選擇供 試品處理方法④。
[0088] 4. 3采用上述供試品處理方法④，進(jìn)行糖衣丸方法學(xué)考察過程中，出現(xiàn)氣相進(jìn)樣針 彎折的現(xiàn)象，仔細(xì)觀察發(fā)現(xiàn)是氣相進(jìn)樣針針芯及針筒部分抽動(dòng)極為粘澀造成的，分析可能 原因?yàn)樘且峦璋聞┯昧枯^大（約占整丸的40% )，且包括藏糖，再加上樣品為水提己酸己 醋萃取，在樣品中則很有可能引入少量的水溶性成分，如藏糖等，使得進(jìn)樣后采用僅己酸己 醋洗針不夠徹底，造成進(jìn)樣針進(jìn)樣次數(shù)較多之后出現(xiàn)一定的粘澀現(xiàn)象。
[0089] 考慮上述原因后，則決定將糖衣丸去除糖衣后重新進(jìn)行供試品處理方法考察，且 在儀器靈敏度允許條件下盡可能降低樣品濃度。
[0090] ⑧取糖衣丸適量，除去糖衣，研成細(xì)粉，精密稱取4g，加水25mU超聲處理30min， 加己酸己醋萃取2次，每次20ml，合并萃取液回收至干，殘?jiān)蛹核峒捍讖?fù)溶，并定容至5ml 容量瓶中，搖勻，過0. 45 μ m微孔濾膜，即得。
[0091] ⑦取糖衣丸適量，除去糖衣，研成細(xì)粉，精密稱取Ig，加水25血，超聲處理30min， 加己酸己醋萃取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并萃取液至化ml容量瓶中，搖勻，過 0. 22 μ m微孔濾膜，即得。
[0092] ⑨取薄膜衣丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取Ig，加水25血，超聲處理30min，加己酸己 醋萃取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并萃取液至25ml容量瓶中，搖勻，過0. 22 μ m微 孔濾膜，即得。
[0093] 結(jié)果供試品處理方法⑧得到的樣品在多次進(jìn)樣后，仍出現(xiàn)了進(jìn)樣針粘澀的現(xiàn)象， 故舍棄。
[0094] 供試品處理方法⑦、⑨因樣品濃度較低，故在樣品進(jìn)樣后進(jìn)樣針較為順滑，未出現(xiàn) 粘澀現(xiàn)象，初步確定采用該方法，進(jìn)行方法學(xué)考察。供試品處理方法⑦、⑨的典型色譜圖見 圖 10,圖，11。
[0095] 5供試品處理方法的確定
[0096] 取坤靈丸適量，糖衣丸除去糖衣，研成細(xì)粉，精密稱取l.Og，加水25111以超聲處理 30min，加己酸己醋萃取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并萃取液至25ml容量瓶中，搖 勻，過0.22 μ m微孔濾膜，即得。
[0097] 6化學(xué)成分定性分析及參照峰的選擇
[0098] 為進(jìn)一步明確坤靈丸中所含成分，采用對照品保留時(shí)間對比及GC-MS定性法考 察坤靈丸中可能含有的化學(xué)成分。通過對比樣品與對照品之間的保留時(shí)間及GC-MS中 NIST8. 0譜庫對比，在該色譜條件下，在樣品中可W定位的化學(xué)成分有丹皮酪、α -香附麗， 色譜圖中丹皮酪的含量最高，且為產(chǎn)品中含量測定項(xiàng)的指標(biāo)成分，故選擇丹皮酪為參照峰。 詳見圖12,圖13。
[0099] 丹皮酪對照品溶液的制備；取丹皮酪對照品適量，精密稱定，加己酸己醋制成每 1血含對丹皮酪約12. 55 μ g的溶液，即得。
[0100] 7坤靈丸氣相指紋圖譜試驗(yàn)的方法學(xué)驗(yàn)證
[0101] 7.1重復(fù)性試驗(yàn)
[010引取同一批坤靈丸（薄膜衣丸批號：20130102 ;糖衣丸批號：20130101)，按"5"項(xiàng)下 操作，平行制備6份供試品，采用"3"項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)行分析。
[0103] W丹皮酪的保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算其它各共有指紋峰的相對保留時(shí)間 巧.Rt)及相對峰面積化A)的比值。結(jié)果見表7-1~表7-2。結(jié)果重復(fù)性良好。
[0104] 表7-1薄膜衣丸重復(fù)性相對保留時(shí)間、相對峰面積數(shù)據(jù)表
[0105]
[0106] 表7-2糖衣丸重復(fù)性相對保留時(shí)間、相對峰面積數(shù)據(jù)表
[0107]
[01 ο引 7. 2精密度試驗(yàn)
[0109] 取同一批坤靈丸（薄膜衣丸批號：20130102 ;糖衣丸批號：20130101)，按"5"項(xiàng)下 操作，制備1份供試品連續(xù)進(jìn)樣6次，采用"3"項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)行分析。
[0110] W丹皮酪的保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算其它各共有指紋峰的相對保留時(shí)間 巧.Rt)及相對峰面積化A)的比值。結(jié)果見表7-3~表7-4。結(jié)果除4號峰因未達(dá)到基線 分離相對峰面積精密度> 5%外，其余各峰相對保留時(shí)間及相對峰面積均精密度良好。
[0111] 表7-3薄膜衣丸精密度相對保留時(shí)間、相對峰面積數(shù)據(jù)表
[0112]
[0113] 表7-4糖衣丸精密度相對保留時(shí)間、相對峰面積數(shù)據(jù)表
[0114]
[0115] 7. 3穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0116] 取同一批坤靈丸（薄膜衣丸批號：20130102 ;糖衣丸批號：20130101),按"5"項(xiàng)下 操作，制備1份供試品于0、2、4、6、8、10、12、14、17、20、2他分別進(jìn)樣，采用"3"項(xiàng)下色譜條 件，進(jìn)行分析。
[0117] W丹皮酪的保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算其它各共有指紋峰的相對保留時(shí)間 巧.Rt)及相對峰面積化A)的比值。結(jié)果見表7-5~表7-6。結(jié)果各峰相對保留時(shí)間及相 對峰面積1?50均<5%外，表明2他內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。<