[0028] 本發(fā)明提供二種544種農(nóng)藥的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)W及一種用于檢測(cè)芽菜類(lèi)蔬菜中 544種農(nóng)藥殘留偵測(cè)技術(shù)。
[0029] 1、本發(fā)明提供的二種精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)為T(mén)0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)和Q-T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)。
[0030] 1.1 T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)內(nèi)容包括:544種農(nóng)藥的化學(xué)式，精確質(zhì)量數(shù)，保留時(shí)間W 及農(nóng)藥英文名稱(chēng)等信息。T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)中巧中化合物技術(shù)內(nèi)容示例如下：
[0031]
[0032] 1.2 Q-T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)內(nèi)容包括:544種農(nóng)藥在4個(gè)碰撞能量下的碎片離子信息 質(zhì)譜圖。Q-T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)內(nèi)容示例如圖1所示。
[0033] 2、本發(fā)明提供了一種芽菜類(lèi)蔬菜中544種農(nóng)藥LC-Q-T0F/MS偵測(cè)和確證技術(shù)方法。 偵測(cè)和確證技術(shù)方法內(nèi)容包括如下：
[0034] 2.1樣品制備
[0035] 2.1.1芽菜類(lèi)蔬菜樣品取可食部分切碎，混勻，密封，標(biāo)明標(biāo)記。
[0036] 2.1.2稱(chēng)取10旨芽菜類(lèi)蔬菜樣品（精確至0.01旨），于801^離屯、管中，加入40血1%醋 酸乙臘，用高速勻漿機(jī)1350化/min,勻漿提取Imin，加入Ig氯化鋼，4g無(wú)水硫酸儀，振蕩 5111；[]1，在420〇1'/111；[]1下離屯、5111；[]1，取上清液2〇1]1]^，在40°(3水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約11]11^，待凈 化。
[0037] 2.1.3在Ca;rbon/NH2柱中加入約2cm高無(wú)水硫酸鋼。先用4mL乙臘+甲苯（3+1，v/v) 淋洗SPE柱，并棄去流出液，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鋼的頂部時(shí)，迅速將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱 上，下接新雞屯、瓶接收。再每次用2mL乙臘+甲苯(3+1，v/v)洗涂樣液瓶Ξ次，并將洗涂液移 入S陽(yáng)柱中。在柱上連接50mL膽液器，再用25mL乙臘+甲苯(3+l，v/v)洗脫農(nóng)藥，合并于雞屯、 瓶中，并在40°C水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL。
[0038] 2.1.4將濃縮液置于氮?dú)庀麓蹈?，加?mL的乙臘+0.1 %甲酸水(2+8，v/v)混勻，經(jīng) 0.2μπι濾膜過(guò)濾后定容，得到待測(cè)樣品溶液a。
[0039] 2.2 LC-Q-T0F/MS檢測(cè)
[0040] 2.2.1液相色譜分離:待測(cè)樣品溶液a通過(guò)配有反相色譜柱(Z0RBAX SB-C18，2.1mm X 100mm，3.5μπι)的液相色譜系統(tǒng)分離;流動(dòng)相A為5mM的乙酸錠-0.1 %甲酸-水;流動(dòng)相B為 乙臘;液相色譜梯度洗脫程序?yàn)椋篛min: 1 % B，3min: 30 % B，6min: 40 % B，9min: 40 % B，15min: 60%8，19111111:90%8,23111111:90%8,23.01111111:1%8，后運(yùn)行4111111;流速為0.411117111111;柱溫： 40°。進(jìn)樣量：1化1。
[0041 ] 2.2.2質(zhì)譜檢測(cè):4旨116111 653化(：-9-1'0。/]\15在電噴霧電離正離子模式化51+);毛 細(xì)管電壓:4000V;干燥氣溫度:325°C;干燥氣流量lOL/min，銷(xiāo)流氣流速1 IL/min，銷(xiāo)流氣溫 度為325°C;霧化氣壓力40psi，錐孔電壓60V，碎裂電壓140V。全掃描質(zhì)核比范圍為50-1600m/z，并采用內(nèi)標(biāo)參比溶液對(duì)儀器質(zhì)量精度進(jìn)行實(shí)時(shí)校正。通過(guò)Agilent Mass化nter Workstation Software(version B.05.00)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集與處理。
[0042] 2.3 T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)定性偵測(cè)
[0043] 在Agilent Mass化nter定性軟件中調(diào)用已建立的T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置檢索參數(shù)保 留時(shí)間偏差為± 0.5min，精確質(zhì)量偏差為± lOppm，離子化形式選擇+H，+NH4，+Na模式;依據(jù) T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)上述采集的樣品溶液質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行定性檢索，通過(guò)軟件計(jì)算出每種化合物 檢索匹配得分值，檢索匹配得分值>70的化合物，為疑似檢出化合物。
[0044] 2.4 Q-T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)定性確證
[0045] 在化rgeted MS/MS采集模式下，輸入疑似檢出化合物的母離子，保留時(shí)間和最佳 的碰撞能量，對(duì)待測(cè)樣品溶液a再次檢測(cè)，將檢測(cè)質(zhì)譜圖與Q-T0F/MS數(shù)據(jù)庫(kù)中化合物碎片離 子的全掃描質(zhì)譜圖，在鏡像對(duì)比條件下匹配確證。其匹配得分值>70,即確認(rèn)檢出該目標(biāo)化 合物。
[0046] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)所具有的有益效果為：
[0047] 1、本發(fā)明W高分辨精確質(zhì)量數(shù)、同位素分布及同位素豐度等化合物信息為識(shí)別標(biāo) 準(zhǔn)，建立的500多種農(nóng)藥偵測(cè)和確證技術(shù)方法，徹底改變了原有W化合物標(biāo)準(zhǔn)物為參比的定 性模式，是一種不需要標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照，快速、高通量、準(zhǔn)確可靠的農(nóng)藥殘留檢測(cè)新技術(shù)；
[0048] 2、本發(fā)明在不需標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照的前提下，實(shí)現(xiàn)了500多種農(nóng)藥殘留的定性偵測(cè)和確 證，可W大大節(jié)省購(gòu)買(mǎi)標(biāo)準(zhǔn)物的成本，也更加環(huán)保、安全；
[0049] 3、本發(fā)明可在1小時(shí)內(nèi)完成500多種農(nóng)藥偵測(cè)、定性與確證，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比 較，可W提高工作效率數(shù)百倍；
[0050] 4、本發(fā)明能夠做到對(duì)芽菜類(lèi)蔬菜樣品中500多種農(nóng)藥殘留一次性提取凈化，一次 進(jìn)樣檢測(cè)，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比較，可W節(jié)省檢測(cè)成本、提高工作效率數(shù)百倍；
[0051] 5、本發(fā)明同時(shí)偵測(cè)的544種農(nóng)藥中，有327種農(nóng)藥偵測(cè)靈敏度低于10微克/千克，占 比64.1 %，基本滿(mǎn)足各國(guó)農(nóng)藥殘留ML水平篩查的要求；
[0052] 6、本發(fā)明在不需農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照的前提下，依據(jù)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)目標(biāo)化合物的 定性和確證，使80% W上農(nóng)藥確證點(diǎn)達(dá)到10個(gè)W上，全部農(nóng)藥滿(mǎn)足歐盟對(duì)化合物4個(gè)確證點(diǎn) 的要求，定性結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠；
[0053] 7、本發(fā)明可W測(cè)試的芽菜類(lèi)蔬菜樣品中農(nóng)藥包括W下物質(zhì)中的一類(lèi)或幾類(lèi):有機(jī) 憐類(lèi)農(nóng)藥，氨基甲酸醋類(lèi)農(nóng)藥，苯并咪挫類(lèi)農(nóng)藥，橫酷脈類(lèi)農(nóng)藥，煙堿類(lèi)農(nóng)藥，除蟲(chóng)菊醋類(lèi)農(nóng) 藥及其他類(lèi)型的農(nóng)藥及代謝物；
[0054] 8、本發(fā)明建立的偵測(cè)技術(shù)指標(biāo)：掃描范圍50-1600m/z ;測(cè)定的精確質(zhì)量可達(dá) 0.0 OOlm/z ;質(zhì)量精度可控制在分子質(zhì)量的lOppmW內(nèi)；掃描速度在50-600m/z范圍為每秒4 次；
[0055] 9、本發(fā)明提供的二種544種農(nóng)藥的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)W及一種用于檢測(cè)芽菜類(lèi)蔬菜 中544種農(nóng)藥殘留偵測(cè)技術(shù)已經(jīng)在7個(gè)農(nóng)藥殘留分析實(shí)驗(yàn)室得到推廣和應(yīng)用，經(jīng)過(guò)對(duì)30省市 500多個(gè)市售芽菜類(lèi)蔬菜樣品的偵測(cè)驗(yàn)證，取得了重要的殘留偵測(cè)數(shù)據(jù)。
【附圖說(shuō)明】
[0056] 圖1綠豆芽樣品全掃描模式T0F得分圖；
[0057] 圖2綠豆芽樣品中疑似農(nóng)藥二級(jí)采集方法示例圖；
[0化引圖3綠豆芽樣品中檢出農(nóng)藥二級(jí)Q-T0F/MS確證得分圖。
[0059] 圖4草頭樣品全掃描模式T0F得分圖；
[0060] 圖5草頭樣品中疑似農(nóng)藥二級(jí)采集方法示例圖；
[0061] 圖6草頭樣品中檢出農(nóng)藥二級(jí)Q-T0F/MS確證得分圖。
【具體實(shí)施方式】
[0062] 實(shí)施例1
[0063] 芽菜類(lèi)蔬菜m綠豆芽為例）中544種農(nóng)藥(見(jiàn)表1)LC-Q-T0F/MS偵測(cè)和確證技術(shù)實(shí) 施實(shí)例，包括如下步驟：
[0064] 1、樣品前處理技術(shù)的具體步驟：
[00化]1.1綠豆芽樣品取可食部分切碎，混勻，密封，標(biāo)明標(biāo)記；
[0066] 1.2稱(chēng)取lOg綠豆芽樣品（精確至0.0 lg)，于80mL離屯、管中，加入40血1 %醋酸乙臘， 用高速勻漿機(jī)1350化/min,勻漿提取Imin，加入Ig氯化鋼，4g無(wú)水硫酸儀，振蕩5min，在 420化/min下離屯、5min，取上清液20mL，在40°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約ImL，待凈化。
[0067] 1.3在Carbon/NHs柱中加入約2cm高無(wú)水硫酸鋼。先用4mL乙臘+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并棄去流出液，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鋼的頂部時(shí)，迅速將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至SPE柱中， 下接新雞屯、瓶接收。再每次用2mL乙臘+甲苯(3+1，v/v)洗涂樣液瓶Ξ次，并將洗涂液移入 SPE柱中。在柱上連接50mL膽液器，用25mL乙臘+甲苯(3+l，v/v)洗脫農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品，合 并于雞屯、瓶中，并在40°C水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL。
[0068] 1.4將濃縮液置于氮?dú)庀麓蹈?，加?mL的乙臘+水(2+8，v/v)混勻，經(jīng)0.2皿濾膜過(guò) 濾后定容，得到待測(cè)樣品溶液。
[0069] 2、LC-Q-T0F/MS 操作條件
[0070] 色譜條件:液相色譜流動(dòng)相A為5mM的乙酸錠-0.1 %甲酸-水;流動(dòng)相B為乙臘;梯度 洗脫程序?yàn)椋?min:l%B，3min:30%B，6min:40%B，9min:40%B，15min:60%B，19min:90% B，23min:90%B，23. Olmin: 1 %B，后運(yùn)行4min;流速為0.