一種采用高效液相色譜法檢測(cè)藥用輔料胭脂紅含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥品檢驗(yàn)領(lǐng)域，涉及藥用輔料的分析測(cè)定方法獸醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域。具體 涉及胭脂紅含量的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，有關(guān)藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已得到了較大的完善，而有關(guān)藥用輔料的質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)還多數(shù)停留相對(duì)落后的層次上。由于藥用輔料質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)系到藥物制劑在體 內(nèi)的安全性和有效性，藥用輔料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究與提高迫在眉睫。胭脂紅是常用的 人工合成色素之一，在藥學(xué)領(lǐng)域主要用作膠囊殼的著色劑等，收載于中國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY 0145-93。該標(biāo)準(zhǔn)中采用三氯化鈦滴定法測(cè)定含量，操作繁瑣費(fèi)時(shí)，測(cè)定結(jié)果誤差較大。本 試驗(yàn)在參考相關(guān)文獻(xiàn)（1~3)的基礎(chǔ)上，對(duì)其含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，建立了藥用輔料胭 脂紅的高效液相含量測(cè)定方法。
[0003] 目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)胭脂紅的研究主要集中在其作為飼料著色劑方面，而對(duì)于胭脂紅 檢測(cè)方法方面的研究甚少，主要有分光光度計(jì)法、薄層色譜法以及高效液相色譜法等。但這 些方法操作過(guò)程較繁瑣，不適合對(duì)大批量樣品進(jìn)行檢測(cè)。亟需建立一種準(zhǔn)確、高效、安全的 高效液相色譜法（HPLC法），用于檢測(cè)藥用輔料胭脂紅殘留，為保障藥品安全提供技術(shù)支 持。因此，研究通過(guò)對(duì)待測(cè)樣品的前處理和色譜條件的篩選、優(yōu)化，旨在建立胭脂紅殘留的 HPLC法檢測(cè)技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 高效液相色譜是利用高壓輸液泵驅(qū)使流動(dòng)相通過(guò)裝填固定相的色譜柱，由于混合 物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上有差異，與固定相發(fā)生作用的大小也有差異，因此在同一推動(dòng) 力的作用下，不同組分在固定相中的滯留時(shí)間不同，從而按照先后順序從固定相中流出，達(dá) 到對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的效果，并進(jìn)行定量分析和定性分析的方法。
[0005] 本發(fā)明包括以下步驟： (1)樣品預(yù)處理 精密吸取胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液lmL至10mL容量瓶中，加水制成每lmL含50 μ g的溶液即 得對(duì)照品溶液。取本品約〇. lg，精密稱(chēng)定，置l〇〇mL容量瓶中，加水適量溶解，并稀釋至刻 度，搖勻，精密量取lmL置20mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以0. 45 μ m微孔濾膜過(guò) 濾，即得供試溶液。
[0006] (2)用高效液相色譜儀（型號(hào)為Waters 2695)，紫外檢測(cè)器（型號(hào)為Waters 2487 )和 Agilent Zorbax SB_C18 (250mm X 4. 6mm，5ym)色譜柱作為試驗(yàn)儀器檢測(cè)，記 錄色譜圖，內(nèi)標(biāo)峰高（Hi)與胭脂紅峰高（Hs)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算濃度。
[0007] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的胭脂紅含量的測(cè)定方法，其特征在于該方法是Agilent 2〇1^&1313-(]18(25〇111111\4.6111111，5以111)為色譜柱，波長(zhǎng)為 33311111，流速為1.〇1111^/111；[11，流 動(dòng)相為甲醇-0· 02mol*L 1乙酸銨溶液（30 : 70)，柱溫為35°C，進(jìn)樣量為50yL。
[0008] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的加麗素紅含量的測(cè)定方法，其特征在于該方法是Symmetry C18 5ym，3.9X150mm為色譜柱，波長(zhǎng)為475nm,流速為l.OmL /min,流動(dòng)相為甲醇：水 =95 : 5,柱溫為30°C，進(jìn)樣量為50yL。
[0009] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明應(yīng)用高效液相色譜法檢測(cè)藥用輔料胭脂紅含量具有 較好的準(zhǔn)確度與精密度。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面將詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】： 1.儀器與試劑： 儀器： Waters 2695高效液相色譜儀（帶DAD檢測(cè)器） 試劑： 食用合成色素胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液（〇.500mg*mL 1，批號(hào)：GBW( E) 100004a 09001，由計(jì) 量科學(xué)研究院提供）；胭脂紅（批號(hào)：20100901，20100902,20100903,由某生產(chǎn)企業(yè)提供）； 甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。
[0011] 2.方法與結(jié)果 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 米用 A Agilent Zorbax SB_C18 (250mm X 4. 6mm，5ym)為色譜柱，波長(zhǎng)為 333nm，流 速為l.OmL /min，流動(dòng)相為甲醇-0. 02mol *L 1乙酸銨溶液（30 : 70)，柱溫為35°C，進(jìn) 樣量為50 μ L，理論板數(shù)以胭脂紅峰計(jì)應(yīng)不低于4000。在此色譜條件下，精密吸取空白溶 劑、對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀。
[0012] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密吸取胭脂紅對(duì)照品溶液（50^·ιΛ _1 ) 1、5、10、15、20^，注入 高效液相色譜儀，測(cè)定，得峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μ g)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y = 3536. 9X + 21.753, r = 0.9999 ( η =5)。結(jié)果表明，胭月旨 紅在0.050~1.000 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0013] 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μ L，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣6次，胭脂紅峰面積積分值的 RSD為0.9%( η = 6)。結(jié)果表明：儀器精密度良好。
[0014] 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、1、5、10、15、20、2處進(jìn)行測(cè)定其峰面積，其1?0為1.1%( η = 6)。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0015] 重復(fù)性試驗(yàn) 取胭脂紅樣品，按上述供試品溶液的配制方法制備6份樣品，在上述色譜條件下進(jìn)樣 測(cè)定，平均含量為93. 12%，RSD為0. 8%( η = 6)。結(jié)果表明：該方法重復(fù)性好。
[0016] 回收率試驗(yàn) 取已知含量（93. 12%)的胭脂紅樣品約0. 05g共6份，精密稱(chēng)定，置于100mL容量 瓶中，加水適量溶解后定容至刻度，搖勻。精密量取lmL置10mL容量瓶中，分別精密加入 100 μ g · mL _ 1胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液（精密吸取胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL至25mL容量瓶中，加水 制成每lmL含100 μ g的溶液）5mL，加水定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液，按色譜條件測(cè) 定胭脂紅含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99. 0%，RSD為1. 6%( η = 6)。
[0017] 樣品含量測(cè)定 取樣品3批，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定并計(jì)算，見(jiàn)表1。
[0018]表 1
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 胭脂紅含量的測(cè)定方法，其特征在于將待測(cè)樣品預(yù)處理后，用高效液相色譜檢測(cè)，包 括以下步驟： 樣品預(yù)處理 (1)精密吸取胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液lmL至10mL容量瓶中，加水制成每lmL含50 μ g的溶液 即得對(duì)照品溶液；取本品約〇. lg，精密稱(chēng)定，置l〇〇mL容量瓶中，加水適量溶解，并稀釋至 刻度，搖勻，精密量取lmL置20mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以0. 45 μ m微孔濾膜過(guò) 濾，即得供試溶液； (2)用高效液相色譜儀（型號(hào)為Waters 2695)，紫外檢測(cè)器（型號(hào)為Waters 2487 )和Agilent Zorbax SB_Cls (250mm X 4. 6mm，5ym)色譜柱作為試驗(yàn)儀器檢測(cè)，記錄色 譜圖，內(nèi)標(biāo)峰高（Hi)與胭脂紅峰高（Hs)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算濃度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的胭脂紅含量的測(cè)定方法，其特征在于該方法是Agilent 2〇1^&1313-(]18(25〇111111\4.6111111，5以111)為色譜柱，波長(zhǎng)為 33311111，流速為1.〇1111^/111；[11，流 動(dòng)相為甲醇-〇· 〇2mol*L 1乙酸銨溶液（30 : 70)，柱溫為35°C，進(jìn)樣量為50yL。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于藥品檢驗(yàn)領(lǐng)域，涉及藥用輔料的分析測(cè)定方法。具體涉及胭脂紅含量的測(cè)定方法。該方法是采用采用AgilentZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以甲醇-0.02mol·L-1乙酸銨溶液(30∶70)為流動(dòng)相；流速為1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為333nm；柱溫為35℃。對(duì)樣品進(jìn)行5個(gè)添加劑量水平的回收率試驗(yàn)，回收率為95.3%～99.5%，平均回收率為99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.6%。回收率大于80%，胭脂紅線性范圍為0.050～1.000μg，r=0.9999，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可作為藥用輔料胭脂紅的質(zhì)量控制方法。
【IPC分類(lèi)】G01N30/02, G01N30/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105572240
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410618435
【發(fā)明人】杜霞, 洪霞, 張淑雅
【申請(qǐng)人】鎮(zhèn)江先創(chuàng)生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2014年11月6日