一種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法，簡(jiǎn)稱(chēng)酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。其基本原理是:①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
[0003]ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體、②酶標(biāo)記的抗原或抗體及③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)具備的條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。
[0004]目前大多數(shù)的酶聯(lián)免疫法使用的實(shí)驗(yàn)耗材也就是固相載體是酶標(biāo)板，使用方式也分為包被、封閉及洗板，在進(jìn)行酶聯(lián)免疫法實(shí)驗(yàn)時(shí)都會(huì)遇到洗板，甩板等必要的流程。雖然現(xiàn)在已經(jīng)有了很多自動(dòng)的洗板機(jī)與甩板機(jī)，但是這種洗板方式有著無(wú)法彌補(bǔ)的缺點(diǎn)，首先是操作繁瑣，流程多，其次，由于酶標(biāo)板是一種檢測(cè)容器，因此在設(shè)計(jì)上多是平底設(shè)計(jì)，液體在酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行洗滌和排干的時(shí)候都會(huì)遇到液體由于張力而殘留在底部的情況，這種只能靠增加洗板甩板的循環(huán)次數(shù)、增加浸泡時(shí)間、增加沖洗壓力和沖洗時(shí)間來(lái)進(jìn)行彌補(bǔ)，洗板和甩板都很難完全清洗和甩干凈，這樣不僅耗時(shí)耗力還極有可能造成實(shí)驗(yàn)的不準(zhǔn)確。但是由于實(shí)驗(yàn)需要借助于酶標(biāo)儀來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因此無(wú)法脫離酶標(biāo)板。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提出一種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法。
[0006]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題是采取以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，包括步驟如下:
[0008](I)對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行表面處理:對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行輻照滅菌；
[0009](2)吸頭清洗:用移液器插取待包被的吸頭，先用洗液清洗三次；
[0010](3)吸頭包被:使用待包被吸頭的移液器吸取待包被的物質(zhì)；
[0011](4)包被后清洗:當(dāng)吸頭包被時(shí)間到了之后排空包被液體，然后用洗液清洗三次，再排空；
[0012](5)加入封閉液:使用包被并清洗了吸頭的移液器吸取封閉液，封閉液的量為吸頭標(biāo)稱(chēng)容積；
[0013](6)加入封閉液后清洗:當(dāng)封閉液到時(shí)間后排空封閉液液體，然后用洗液清洗三次，再排空，包被完畢；
[0014](7)包被后進(jìn)行酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn):
[0015]①將等體積的樣本和一抗進(jìn)行混合后用移液器插上吸頭吸??；
[0016]②將已經(jīng)吸入混合液的移液器連帶吸頭放入37°C溫浴箱中恒溫I個(gè)小時(shí)；
[0017]③時(shí)間到達(dá)后將液體打出，并用洗液清洗吸頭三次，最后打出洗液；
[0018]④吸取二抗溶液，并放入37°C溫浴箱中溫浴40分鐘；
[0019]⑤時(shí)間到達(dá)后打出二抗液體，并用洗液清洗吸頭三次，最后打出洗液；
[0020]⑥吸入顯色底物溶液，放入37°C溫浴箱中恒溫20分鐘；
[0021]⑦將顯色底物溶液加入酶標(biāo)板，再換吸頭加入終止液，后讀數(shù)。
[0022]而且，所述步驟(I)中的進(jìn)行輻照滅菌的具體輻照計(jì)量為15kgr。
[0023]而且，所述步驟(2)中的洗液清洗，具體是用待包被的吸頭全量程檔位吸取洗液并排出。
[0024]而且，所述步驟(3)中吸取待包被物質(zhì)的量小于吸頭標(biāo)稱(chēng)容積的三分之二。
[0025]而且，所述步驟(I)中待包被的吸頭為圓錐形吸頭。
[0026]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:
[0027]1、本發(fā)明在吸頭上進(jìn)行包被，改變了在酶標(biāo)板上包被的習(xí)慣，由于酶標(biāo)板通常都是96孔板，即使有拆卸功能也不能做到非常靈活，但是如果在吸頭上進(jìn)行包被就可以脫離酶標(biāo)板的限制，做到最靈活的使用。
[0028]2、本發(fā)明中的吸頭屬于圓錐形設(shè)計(jì)，而這種吸頭設(shè)計(jì)的目的就是可以吸取液體之后能夠順利排干凈，無(wú)殘留液死角。無(wú)論是清洗還是排干都沒(méi)有任何阻礙，而且吸頭可以利用移液器的強(qiáng)排功能進(jìn)行液體排干，非常方便。
[0029]3、本發(fā)明使用方便，吸取液體的同時(shí)可以進(jìn)行抗原與抗體的結(jié)合，對(duì)于操作來(lái)講更加節(jié)省時(shí)間，提尚效率。
【具體實(shí)施方式】
[0030]以下對(duì)本發(fā)明實(shí)施做進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0031]—種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，包括步驟如下:
[0032](I)對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行表面處理:對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行輻照滅菌，輻照計(jì)量為15kgr，而且，待包被的吸頭為圓錐形吸頭；
[0033](2)吸頭清洗:用移液器插取待包被的吸頭，先用洗液清洗三次，也就是用該吸頭的全量程檔位吸取洗液并排出；
[0034](3)吸頭包被:使用帶此吸頭的移液器吸取待包被的物質(zhì)，但是包被量必須小于吸頭標(biāo)稱(chēng)容積的三分之二 ；
[0035](4)包被后清洗:當(dāng)吸頭包被時(shí)間到了之后排空包被液體，然后用洗液洗3次，再排空；
[0036](5)加入封閉液:封閉液的量為吸頭標(biāo)稱(chēng)容積；
[0037](6)加入封閉液后清洗:當(dāng)封閉液到時(shí)間后排空封閉液液體，然后用洗液洗3次，再排空，包被完畢；
[0038](7)包被后進(jìn)行酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn):
[0039]①用預(yù)先配置好的洗液洗包被吸頭3次，具體方法為吸拍洗液3次，最后打出洗液；
[0040]②將等體積的樣本和一抗進(jìn)行混合后用移液器插上吸頭吸取10ul;
[0041]③將已經(jīng)吸入10ul混合液的移液器連帶吸頭放入37°C溫浴箱中恒溫I個(gè)小時(shí)；
[0042]④時(shí)間到達(dá)后將液體打出，并用洗液洗吸頭3次，最后打出洗液；
[0043]⑤吸取二抗10ul，并放入37°C溫浴箱中溫浴40分鐘；
[0044]⑥時(shí)間到達(dá)后打出二抗，并用洗液洗吸頭3次，最后打出洗液；
[0045]⑦吸入10ul顯色底物，放入37°C溫浴箱中恒溫20分鐘；
[0046]⑧將10ul顯色底物加入酶標(biāo)板，再換吸頭加入50ul終止液，后讀數(shù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，其特征在于包括步驟如下: (1)對(duì)待包被的吸頭進(jìn)行表面處理:對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行輻照滅菌； (2)吸頭清洗:用移液器插取待包被的吸頭，先用洗液清洗三次； (3)吸頭包被:使用待包被吸頭的移液器吸取待包被的物質(zhì)； (4)包被后清洗:當(dāng)吸頭包被時(shí)間到了之后排空包被液體，然后用洗液清洗三次，再排空； (5)加入封閉液:使用包被并清洗了吸頭的移液器吸取封閉液，封閉液的量為吸頭標(biāo)稱(chēng)容積； (6)加入封閉液后清洗:當(dāng)封閉液到時(shí)間后排空封閉液液體，然后用洗液清洗三次，再排空，包被完畢； (7)包被后進(jìn)行酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn): ①將等體積的樣本和一抗進(jìn)行混合后用移液器插上吸頭吸??； ②將已經(jīng)吸入混合液的移液器連帶吸頭放入37°C溫浴箱中恒溫I個(gè)小時(shí)； ③時(shí)間到達(dá)后將液體打出，并用洗液清洗吸頭三次，最后打出洗液； ④吸取二抗溶液，并放入37°C溫浴箱中溫浴40分鐘； ⑤時(shí)間到達(dá)后打出二抗液體，并用洗液清洗吸頭三次，最后打出洗液； ⑥吸入顯色底物溶液，放入370C溫浴箱中恒溫20分鐘； ⑦將顯色底物溶液加入酶標(biāo)板，再換吸頭加入終止液，后讀數(shù)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，其特征在于:所述步驟(I)中的進(jìn)行福照滅菌的具體福照計(jì)量為15kgr。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，其特征在于:所述步驟(2)中的洗液清洗，具體是用待包被的吸頭全量程檔位吸取洗液并排出。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，其特征在于:所述步驟(3)中吸取待包被物質(zhì)的量小于吸頭標(biāo)稱(chēng)容積的三分之二。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，其特征在于:所述步驟(I)中待包被的吸頭為圓錐形吸頭。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種利用吸頭包被進(jìn)行酶聯(lián)免疫反應(yīng)的方法，包括步驟：(1)對(duì)要包被的吸頭進(jìn)行表面處理：(2)吸頭清洗：用移液器插取待包被的吸頭，先用洗液清洗三次；(3)吸頭包被：(4)包被后清洗：(5)加入封閉液：(6)加入封閉液后清洗：(7)包被后進(jìn)行酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)：本發(fā)明在吸頭上進(jìn)行包被，改變了在酶標(biāo)板上包被的習(xí)慣，脫離酶標(biāo)板的限制，做到最靈活的使用，利用移液器的強(qiáng)排功能進(jìn)行液體排干，非常方便，吸取液體的同時(shí)進(jìn)行抗原與抗體的結(jié)合，對(duì)于操作來(lái)講更加節(jié)省時(shí)間，提高效率。
【IPC分類(lèi)】G01N33/535
【公開(kāi)號(hào)】CN105572339
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610016155
【發(fā)明人】黃炎彬, 張鵬遠(yuǎn), 王興, 李世林
【申請(qǐng)人】天津喜諾生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2016年1月12日