馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明馬蹄蕨藥材質(zhì)量控制技術領域，尤其涉及一種馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫 外分光光度測定法。
【背景技術】
[0002] 馬蹄蕨，觀音座蓮科植物福建蓮座蕨(Angiopteris fokiensis Hieron.)，作為廣 西的民族特色藥材，既屬于壯藥又屬于瑤藥，壯藥名為Maenzdaezma，瑤藥名為麻蹄涯。其通 常以根莖人藥，在廣西主要分布于金秀、恭城、馬山等地，具有消炎止痛、清熱解毒、利濕、涼 血止血等功效;主治腸炎、痢疾、胃痛、胃十二指腸潰瘍、肺結核咯血、腎炎水腫、功能性子宮 出血、風濕性關節(jié)炎、淋巴結結核、淋巴結炎、跌打損傷、癰瘡腫毒、槍炮傷、毒蛇毒蟲咬傷。 長久以來，在廣西的壯族、瑤族聚集地，馬蹄蕨是當?shù)鼐用竦某Ｓ盟幉闹?。由于壯、瑤人?長期生活在山區(qū)，跌打損傷和蟲蛇咬傷經(jīng)常發(fā)生，馬蹄蕨即被作為常用藥材，常備家中。近 些年來，在當?shù)氐拿褡逄厣t(yī)院中，也被醫(yī)生常用于各類患者，有著較好的藥用價值。
[0003] 馬蹄蕨作為常用民族藥材先后被收入《中國現(xiàn)代瑤藥》和《壯藥質(zhì)量標準》（第三 冊），然而標準中也僅有簡單的理化鑒別。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種靈敏度高、操作簡便、結果準確的馬蹄蕨藥 材中多糖含量的紫外分光光度測定法，以確保藥材質(zhì)量，保障其臨床用藥的安全、有效、穩(wěn) 定。
[0005] 為解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案：馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外 分光光度測定法，以無水葡萄糖為對照，使用紫外分光光度計測定馬蹄蕨多糖提取物中多 糖的含量。
[0006] 8.無水葡萄糖的濃度為5-500mg/L，馬蹄蕨多糖提取物的濃度為10-200μg/ml。
[0007] 上述馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，包括以下步驟：
[0008] A、將無水葡萄糖對照品用蒸餾水配制成濃度為5-500mg/L的對照品溶液；
[0009] B、將蒽酮溶解于濃硫酸溶液中，配制成l_3g/L的蒽酮-硫酸試劑；
[0010] C、將對照品溶液與蒽酮-硫酸試劑反應，放入紫外分光光度計進行檢測，檢測波長 為620nm，所得吸光度繪制標準曲線，并按照標準曲線根據(jù)比爾朗伯定律得出回歸曲線方 程；
[0011] D、將馬蹄蕨多糖提取物樣品按對照品溶液方法制備，并進行吸光度測定，根據(jù)回 歸曲線方程計算樣品中多糖的含量。
[0012] 步驟A按以下操作進行：精密稱取無水葡萄糖對照品100mg，置于100mL容量瓶中， 加水適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度， 即得0. lg/L的葡萄糖對照品溶液。
[0013] 步驟B按以下操作進行：準確稱取0.2g蒽酮，溶解于100mL濃硫酸溶液中，配制成 0.2 %蒽酮-硫酸試劑。
[0014] 步驟C按以下操作進行:精密量取0. lg/L的葡萄糖對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.6、0.8ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加蒸餾水至1.0ml，搖勾，分別加入0.2%蒽 酮-硫酸試劑4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分 鐘，取出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，以蒸餾水為空白，照紫外-可見分光光度法，在 620mn波長處測定吸光度；以吸光度值為縱坐標，葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
[0015] 步驟D按以下操作進行:將馬蹄蕨多糖提取物加蒸餾水溶解，配置成濃度為50yg/ ml，精密吸取lml，加入0.2%蒽酮-硫酸試劑4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起 浸于沸水浴中，水浴煮沸10分鐘，取出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，依法測定吸光度 值，根據(jù)標準曲線計算樣品中多糖含量。
[0016] 針對目前馬蹄蕨藥材質(zhì)量控制中缺乏含量測定的問題，發(fā)明人在前期對該藥材化 學成分的研究中發(fā)現(xiàn)，馬蹄蕨中含有大量多糖類成分，并對其多糖含量進行定量研究，據(jù)此 建立了一種馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，以無水葡萄糖為對照，使用紫 外分光光度計測定馬蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本發(fā)明完善了馬蹄蕨藥材的質(zhì)量檢測 標準，為馬蹄蕨藥材質(zhì)量標準的建立奠定了基礎；而且，該法靈敏度高、操作簡便、結果準 確;推廣和應用本發(fā)明，可以確保馬蹄蕨藥材質(zhì)量，保障其臨床用藥的安全、有效、穩(wěn)定。
【附圖說明】
[0017] 圖1是無水葡萄糖標準品的紫外吸收曲線圖。
[0018] 圖2是應用本發(fā)明根據(jù)吸光度繪制的葡萄糖標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0019] 馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法的研究
[0020] 1.測定原理
[0021] 采用蒽酮-硫酸法進行馬蹄蕨多糖含量的測定。因為糖類遇濃硫酸脫水生成糖醛 或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生顏色物質(zhì)，反應后溶液呈藍綠色，并于620nm處有最大 吸收，顯色與多糖含量呈線性關系。
[0022] 2.研究過程
[0023] 2.1馬蹄蕨多糖提取物的制備
[0024] A將lkg馬蹄蕨藥材粉碎成粗粉，加60 %乙醇8L加熱回流2次，每次2小時，過濾，棄 濾液，收集藥渣，除去脂溶性成分。
[0025] B藥渣加0.3mol/L稀鹽酸8L加熱回流提取2次，每次2小時，過濾，棄藥渣，收集濾液 并濃縮，得膏150g。
[0026] C濃縮液加乙醇使乙醇濃度達到80 %，靜置過夜，過濾，收集沉淀，加水溶解沉淀， 過濾，濾液濃縮成膏，經(jīng)真空冷凍干燥即得馬蹄蕨多糖提取物。
[0027] 2.2馬蹄蕨多糖提取物中多糖含量測定
[0028]將馬蹄蕨多糖提取物做為待測樣品進行分析，使用紫外分光光度計（島津UV-2550 型可見-紫外分光光度計）用400-800nm的波長范圍對葡萄糖標準品溶液進行掃描（圖1)，得 出紫外吸收曲線，其最大吸收波長為Xm ax = 620nm，因此選用波長為620nm進行測定。按照《中 國藥典》2015四部通則0401紫外-可見分光光度法進行：
[0029] A對照品溶液的制備
[0030] 精密稱取無水葡萄糖對照品（105°C干燥至恒重）100mg，置于100mL容量瓶中，加水 適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻；精密吸取10mL置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得 〇. lg/L的葡萄糖對照品溶液。
[0031] B蒽酮-硫酸試劑的制備
[0032] 準確稱取0.2g蒽酮，溶解于1 OOmL濃硫酸溶液中，配制成0.2% (2g/L)蒽酮-硫酸試 劑，當日配制使用。
[0033] C標準曲線的制備
[0034] 精密量取0 · 1 g/L的葡萄糖對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml，分別置 i〇ml具塞刻度試管中，各加蒸餾水至丨.〇ml，搖勻，分別加入〇. 2%蒽酮-硫酸試劑4ml，迅速 浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分鐘，取出，用自來水冷卻， 室溫放置10分鐘，以蒸餾水為空白，照紫外-可見分光光度法(2015版中國藥典），在620mn波 長處測定吸光度；以吸光度值(A)為縱坐標，葡萄糖濃度(C)為橫坐標，繪制標準曲線（圖2)。 所得回歸方程為￥ = 0.0532乂+0.0193(1? = 0.99906)。結果表明，標準品在0-16.0(^/1111范圍 內(nèi)成良好的線性關系。
[0035]表1葡萄糖標準曲線
[0036]
[0037] D測定法
[0038]將馬蹄蕨多糖提取物加蒸餾水溶解，配制成濃度為50μg/ml左右，精密吸取lml，加 入0.2%蒽酮-硫酸試劑4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴 煮沸10分鐘，取出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，依法測定吸光度值，根據(jù)標準曲線計算 樣品中多糖含量。結果見表2。
[0039]表 2
[0041 ] 實施例1
[0042] 參照上述測定法，但使用0.1%的蒽酮-硫酸試劑進行反應并測定，得到馬蹄蕨多 糖提取物中多糖的含量，結果見表3。
[0043] 表 3
[0045] 實施例2
[0046] 參照上述測定法，但使用0.3%的蒽酮-硫酸試劑進行反應并測定，得到馬蹄蕨多 糖提取物中多糖的含量，結果見表4。
[0047] 表 4
【主權項】
1. 一種馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于以無水葡萄糖為對 照，使用紫外分光光度計測定馬蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。2. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于： 所述無水葡萄糖的濃度為5_500mg/L，所述馬蹄蕨多糖提取物的濃度為10-200μg/ml。3. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于 包括以下步驟： A、 將無水葡萄糖對照品用蒸餾水配制成濃度為5-500mg/L的對照品溶液； B、 將蒽酮溶解于濃硫酸溶液中，配制成l_3g/L的蒽酮-硫酸試劑； C、 將對照品溶液與蒽酮-硫酸試劑反應，放入紫外分光光度計進行檢測，檢測波長為 620nm，所得吸光度繪制標準曲線，并按照標準曲線根據(jù)比爾朗伯定律得出回歸曲線方程； D、 將馬蹄蕨多糖提取物樣品按對照品溶液方法制備，并進行吸光度測定，根據(jù)回歸曲 線方程計算樣品中多糖的含量。4. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于 步驟A按以下操作進行:精密稱取無水葡萄糖對照品lOOmg，置于lOOmL容量瓶中，加水適量 使溶解，稀釋至刻度，搖勻;精密吸取l〇mL置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得O.lg/ L的葡萄糖對照品溶液。5. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于 步驟B按以下操作進行:準確稱取0.2g蒽酮，溶解于lOOmL濃硫酸溶液中，配制成0.2%蒽酮-硫酸試劑。6. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于 步驟C按以下操作進行:精密量取0. lg/L的葡萄糖對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、 0.8ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加蒸餾水至1.0ml，搖勻，分別加入0.2 %蒽酮-硫酸 試劑4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分鐘，取出， 用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，以蒸餾水為空白，照紫外-可見分光光度法，在620mn波長 處測定吸光度；以吸光度值為縱坐標，葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線。7. 根據(jù)權利要求1所述的馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，其特征在于 步驟D按以下操作進行:精密吸取濃度為50μg/ml的馬蹄蕨多糖提取物lml，加入0.2%蒽酮-硫酸試劑4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分鐘，取 出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，依法測定吸光度值，根據(jù)標準曲線計算樣品中多糖含 量。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種馬蹄蕨藥材中多糖含量的紫外分光光度測定法，以無水葡萄糖為對照，使用紫外分光光度計測定馬蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本發(fā)明完善了馬蹄蕨藥材的質(zhì)量檢測標準，為馬蹄蕨藥材質(zhì)量標準的建立奠定了基礎；而且，該法靈敏度高、操作簡便、結果準確；推廣和應用本發(fā)明，可以確保馬蹄蕨藥材質(zhì)量，保障其臨床用藥的安全、有效、穩(wěn)定。
【IPC分類】G01N21/33
【公開號】CN105606556
【申請?zhí)枴緾N201610058138
【發(fā)明人】張赟赟, 楊海船, 李燕婧, 李嘉, 姜平川
【申請人】廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年1月28日