測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法
【專利摘要】一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法。近年來關(guān)于昆蟲毒理學方面的研究受到較大重視。搖蚊幼蟲為完全變態(tài)類昆蟲，是一種分布廣泛且種類數(shù)量眾多的底棲動物。一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其組成包括：試驗材料和試驗方法，以及數(shù)據(jù)處理方法，所述的試驗材料采用紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗材料中試驗用水使用蒸餾水，試驗水溫為21.0±0.5℃，pH為7.0±0.5，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2，配置濃度有六個處理組，分別是0 mg/L、1.6 mg/L、2.4 mg/L、3.6 mg/L、5.4 mg/L、8.1mg/L。本發(fā)明應(yīng)用于昆蟲毒理實驗領(lǐng)域。
【專利說明】
測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法
[0001 ] 技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法。以紅裸須搖蚊幼蟲為實驗材料，得出CAT、P0D和SOD這三種生物指標在汞暴露下的變化規(guī)律，目的是探究汞對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化系統(tǒng)的效應(yīng)，同時用以評估紅裸須搖蚊幼蟲對汞脅迫的敏感性，本方法也將為紅裸須搖蚊幼蟲重金屬污染的生物監(jiān)測提供理論依據(jù)。
[0002]【背景技術(shù)】:
近年來關(guān)于昆蟲毒理學方面的研究受到較大重視。搖蚊幼蟲為完全變態(tài)類昆蟲，是一種分布廣泛且種類數(shù)量眾多的底棲動物，具有解毒能力低、對污染物的暴露敏感、生活周期短等特性，且在實驗室內(nèi)易飼養(yǎng)，是水體質(zhì)量監(jiān)測中的重要指示生物。在加強在水生態(tài)毒理學中應(yīng)用研究中，搖蚊幼蟲被廣泛應(yīng)用于毒性測試?；趽u蚊幼蟲對水體中重金屬的敏感性，開展了重金屬對搖蚊幼蟲的急性和慢性毒性實驗。相關(guān)的研究有Cu2+、Cd2+對紅裸須搖蚊(Propsi locerus akamusi)幼蟲和羽搖蚊(Chironomus pIumosus)幼蟲的急性毒性效應(yīng)及對過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)活性的影響等。Hg2+是存在于水環(huán)境中極具毒性的重金屬，其毒性涉及到氧化應(yīng)激，即Hg2+可誘導自由基的形成并改變了細胞的抗氧化能力，并且暴露于含有Cd和Cu的沉積物，對伸展搖蚊(Chironomus tentans)幼蟲具有致畸作用。
[0003]關(guān)于生物體內(nèi)重要解毒酶，我國近年來也開展了一些工作，研究的污染物涉及重金屬、有機物污染物和工業(yè)廢水，基于這些特性，搖蚊幼蟲作為水生態(tài)系統(tǒng)食物鏈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其體內(nèi)抗氧化酶的活性或表達量與重金屬Hg濃度之間的效應(yīng)關(guān)系，可作為監(jiān)測環(huán)境污染的一項靈敏指標?？寡趸赶当挥米髦甘经h(huán)境污染的早期預(yù)警，從而成為分子毒理學生物標志物研究的熱點之一。然而，搖蚊幼蟲在Hg2+的脅迫下，生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，如CAT、P0D和SOD的活性如何，還需要進行科學驗證。
[0004]紅裸須搖蚊是搖蚊中的優(yōu)勢種，廣泛地分布于我國的淡水環(huán)境中，在水生態(tài)系統(tǒng)食物鏈中占有重要的地位。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是提供一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法。
[0006]上述的目的通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn):
一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其組成包括:試驗材料和試驗方法，以及數(shù)據(jù)處理方法，所述的試驗材料采用紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗材料中試驗用水使用蒸餾水，試驗水溫為21.0 ± 0.5 °C，pH為7.0 ± 0.5，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2,配置濃度有六個處理組，分別是O mg/L、1.6 mg/L,2.4 mg/L,3.6 mg/L,5.4 mg/L、8.lmg/L。
[0007]所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的試驗方法是凈水染毒法，所述的六個處理組每組設(shè)置三個平行樣，容器是500ml燒杯，所述的試驗方法中每個燒杯中放50個生理狀態(tài)相似的紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗方法中每個燒杯中的紅裸須搖蚊幼蟲在Hg2+浸泡處理6小時、24小時、48小時、72小時后，分別取活性較好的搖蚊幼蟲，置于-20 °C冰箱保存，用作蛋白質(zhì)，CAT、POD和SOD這三種抗氧化酶含量的測定。
[0008]所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的數(shù)據(jù)處理方法使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，數(shù)據(jù)用平均值±標準偏差表示，在同一時間段不同濃度下Hg2+對酶活性的影響用SPSS軟件的單因素方差分析進行多重比較。
[0009]所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2純度99.5%。
[0010]本發(fā)明的有益效果:
1.本發(fā)明用于測定汞離子對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性影響的方法，試驗方法簡單高效，根據(jù)試驗得出的CAT、P0D和SOD這三種生物抗氧化酶活性的變化規(guī)律，探究自然水體中重金屬汞離子的污染程度。對自然環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測有較好的服務(wù)價值，產(chǎn)生間接的經(jīng)濟價值。
[0011]本發(fā)明方法簡單有效，便于人工操作，具有良好的穩(wěn)定性，可以根據(jù)CAT、P0D和SOD這三種生物抗氧化酶活性的變化規(guī)律，探究自然水體中重金屬汞離子的污染程度。
[0012]本發(fā)明方法的試驗過程在實驗室條件下進行，對自然環(huán)境無污染，同時對自然環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測有較好的服務(wù)價值，產(chǎn)生間接的經(jīng)濟價值。
[0013]【具體實施方式】:
實施例1:
一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其組成包括:試驗材料和試驗方法，以及數(shù)據(jù)處理方法，其特征是:所述的試驗材料采用紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗材料中試驗用水使用蒸餾水，試驗水溫為21.0 ± 0.5 °C，pH為7.0 ± 0.5，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2，配置濃度有六個處理組，分別是O mg/L、1.6 mg/L、2.4 mg/L、3.6 mg/L、5.4 mg/L、8.lmg/L。
[0014]實施例2:
根據(jù)實施例1所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的試驗方法是凈水染毒法，所述的六個處理組每組設(shè)置三個平行樣，容器是500ml燒杯，所述的試驗方法中每個燒杯中放50個生理狀態(tài)相似的紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗方法中每個燒杯中的紅裸須搖蚊幼蟲在Hg2+浸泡處理6小時、24小時、48小時、72小時后，分別取活性較好的搖蚊幼蟲，置于_20°C冰箱保存，用作蛋白質(zhì)，CAT、P0D和SOD這三種抗氧化酶含量的測定。
[0015]實施例3:
根據(jù)實施例1或2所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的數(shù)據(jù)處理方法使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，數(shù)據(jù)用平均值±標準偏差表示，在同一時間段不同濃度下Hg2+對酶活性的影響用SPSS軟件的單因素方差分析進行多重比較。
[0016]實施例4:
根據(jù)實施例1或2或3所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2純度99.5%。
[0017]實施例5:
根據(jù)實施例1或2或3或4所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2純度99.5%。
[0018]實施例6:
數(shù)據(jù)用平均值土標準偏差(Mean土SD)表示，在同一時間段不同濃度下Hg2+對酶活性的影響用SPSS軟件的單因素方差分析(One-way AN0VA)進行多重比較，數(shù)據(jù)用平均值土標準偏差(Mean 土 SD)表示。
【主權(quán)項】
1.一種測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其組成包括:試驗材料和試驗方法，以及數(shù)據(jù)處理方法，其特征是:所述的試驗材料采用紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗材料中試驗用水使用蒸餾水，試驗水溫為21.0 ± 0.5 °C，pH為7.0 ± 0.5，所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2，配置濃度有六個處理組，分別是O mg/L、1.6 mg/L、2.4 mg/L、.3.6 mg/L、5.4 mg/L、8.lmg/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其特征是:所述的試驗方法是凈水染毒法，所述的六個處理組每組設(shè)置三個平行樣，容器是500ml燒杯，所述的試驗方法中每個燒杯中放50個生理狀態(tài)相似的紅裸須搖蚊幼蟲，所述的試驗方法中每個燒杯中的紅裸須搖蚊幼蟲在Hg2+浸泡處理6小時、24小時、48小時、72小時后，分別取活性較好的搖蚊幼蟲，置于-20°C冰箱保存，用作蛋白質(zhì)，CAT、POD和SOD這三種抗氧化酶含量的測定。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其特征是:所述的數(shù)據(jù)處理方法使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，數(shù)據(jù)用平均值土標準偏差表示，在同一時間段不同濃度下Hg2+對酶活性的影響用SPSS軟件的單因素方差分析進行多重比較。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的測定Hg2+濃度對紅裸須搖蚊幼蟲抗氧化酶活性的方法，其特征是:所述的試驗材料中使用的Hg2+用分析純HgCl2純度99.5%。
【文檔編號】G01N33/50GK105842436SQ201610187785
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月29日
【發(fā)明人】劉曼紅, 陳菲, 蔡艷, 謝鵬, 耿飛飛, 孟瑤, 聶英男
【申請人】東北林業(yè)大學