基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，包括：制備檢測(cè)液，制備鈣黃綠素和CTMAB原溶液；按照體積比為1：2的比例混合得到檢測(cè)液；將濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中1~3h；干燥處理；將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕；使用比色試紙擦拭目標(biāo)表面；將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有熒光則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。CTMAB結(jié)合樂果的能力強(qiáng)于鈣黃綠素，附著有鈣黃綠素和CTMAB的試紙接觸樂果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能夠明顯觀察到有黃綠色熒光產(chǎn)生。本發(fā)明利用這樣的間接熒光檢測(cè)原理，通過肉眼觀察熒光即可完成判斷，快速、便捷地實(shí)現(xiàn)了樂果殘留的檢測(cè)。
【專利說明】
基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]新世紀(jì)以來，中國(guó)經(jīng)歷著翻天覆地的變化，經(jīng)濟(jì)、軍事、科技、文化教育水平都在向著世界強(qiáng)國(guó)邁進(jìn)，但近年來層出不窮的食品安全問題值得人深思。2006年的蘇丹紅事件，08年的三鹿奶粉事件，11年的“皮革奶”、瘦肉精、塑化液，15年的“僵尸肉”以及一直存在的地溝油，這些都還只是冰山一角，食品安全問題迫在眉睫。另一方面，對(duì)于安全的蔬菜水果，我們?nèi)砸獡?dān)心其農(nóng)藥種類是否規(guī)范，量是否超標(biāo)，可以說這是相對(duì)而言管理難度較大的區(qū)域。而樂果又是一種開始使用時(shí)間早，使用范圍廣的常用農(nóng)藥，其純品為白色針狀結(jié)晶;微溶于水，易溶于酒精；比水重，溶于水后呈現(xiàn)乳白色;有刺鼻的味道;在酸性條件下穩(wěn)定，堿性條件下易分解，遇明火高溫可燃，釋放出磷、硫的劇毒氧化物；易被植物吸收并傳導(dǎo)至整株植物，具有殺蟲殺螨的作用。人體接觸過量的樂果后，會(huì)抑制體內(nèi)膽堿酯酶活性，造成生理功能紊亂。
[0003]實(shí)驗(yàn)室能較為準(zhǔn)確得測(cè)得農(nóng)藥殘留的含量、種類，可讓百姓家里放一套碩大的檢測(cè)儀器并不現(xiàn)實(shí)，市面上急需一種快速、便捷的樂果殘留檢測(cè)手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，利用間接熒光檢測(cè)原理，通過試紙熒光顏色的變化，肉眼即可完成判斷，快速、便捷地實(shí)現(xiàn)樂果殘留的檢測(cè)。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，包括以下步驟:
SI:制備檢測(cè)液，包括以下子步驟:
SlOl:制備原溶液:
(I)取鈣黃綠素粉末，溶于第一溶劑中，配置成濃度不小于0.05 mol/L的鈣黃綠素溶液;鈣黃綠素(Calcein)，分子式為C30H26N2013，用于絡(luò)合指示劑熒光指示劑等領(lǐng)域;鈣黃綠素為亮黃色粉末，溶于乙醇和堿，微溶于水，其鈉鹽為橙紅色結(jié)晶，溶于水，呈黃色而有綠色熒光，不溶于無水乙醇和乙醚，熔點(diǎn)大于300°C。
[0006](2)取十六烷基三甲基溴化銨粉末，溶于第二溶劑中，配置成濃度不小于0.025moI/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液;CTMAB的分子式為C16H33(CH3)3NBr，呈白色或淺黃色結(jié)晶體至粉末狀，有刺激氣味，易溶于異丙醇，可溶于水，震蕩時(shí)產(chǎn)生大量泡沫，能與陽(yáng)離子、非離子、兩性表面活性劑有良好的配伍性。具有優(yōu)良的滲透、柔化、乳化、抗靜電、生物降解性及殺菌等性能?；瘜W(xué)穩(wěn)定性好，耐熱、耐光、耐壓、耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿。分析化學(xué)中常用的一種表面活性劑，在物質(zhì)的測(cè)定中加入CTMAB可以增加分析的準(zhǔn)確度和靈敏度。
[0007]S102:按照體積比為1:2的比例，將配置好的鈣黃綠素溶液與十六烷基三甲基溴化銨溶液混合，輕輕震蕩得到檢測(cè)液；
S2:制作比色試紙，包括以下子步驟:
S201:將濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中I?3h;
S202:取出浸泡完成后的濾紙并進(jìn)行干燥處理；
S203:濾紙完全干燥后即得比色試紙；
S3:比色檢測(cè)，包括以下子步驟:
5301:將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕；
5302:使用比色試紙擦拭待測(cè)目標(biāo)表面；
S303:將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留，反之則沒有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。
[0008]十六烷基三甲基溴化銨CTMAB既能與鈣黃綠素反應(yīng)，又能和樂果反應(yīng)，它能與鈣黃綠素絡(luò)合，混合溶液顏色從黃綠色變成橙紅色，降低其熒光強(qiáng)度，并使得熒光紅移，CTMAB結(jié)合樂果的能力強(qiáng)于鈣黃綠素，附著有鈣黃綠素和CTMAB的試紙接觸樂果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能夠明顯觀察到有黃綠色熒光產(chǎn)生。
[0009]干燥處理方法為避光自然風(fēng)干或高溫烘干或低溫干燥。
[0010]所述鈣黃綠素溶液的濃度為lmol/L，所述十六烷基三甲基溴化銨溶液的濃度為0.5mol/L。
[0011 ]所述鈣黃綠素溶液與所述十六烷基三甲基溴化銨溶液的體積比為I: 2。
[0012]所述的第一溶劑為水。
[0013]所述的第二溶劑為去離子水。
[0014]本發(fā)明的有益效果是:
I)十六烷基三甲基溴化銨CTMAB既能與鈣黃綠素反應(yīng)，又能和樂果反應(yīng)，它能與鈣黃綠素絡(luò)合，混合溶液顏色從黃綠色變成橙紅色，降低其熒光強(qiáng)度，并使得熒光紅移，CTMAB結(jié)合樂果的能力強(qiáng)于鈣黃綠素，附著有鈣黃綠素和CTMAB的試紙接觸樂果后，在暗室中用紫外光照射，肉眼能夠明顯觀察到有黃綠色熒光產(chǎn)生。利用這樣的間接熒光檢測(cè)原理，通過肉眼觀察熒光即可完成判斷，快速、便捷地實(shí)現(xiàn)了樂果殘留的檢測(cè)。
[0015]2)熒光染色法相較于其他顏色反應(yīng)法具有以下優(yōu)勢(shì):
其一，顏色法較難尋找一種合適的化學(xué)物質(zhì)?；瘜W(xué)顏色法多數(shù)為無機(jī)化合物的性質(zhì)反應(yīng)，主要包括分解反應(yīng)、化合反應(yīng)、復(fù)分解反應(yīng)以及置換反應(yīng)。想要通過顏色變化去獲得存在一種物質(zhì)的可能性需要通過上述的基本反應(yīng)方式來找尋一種顏色變化明顯、反應(yīng)精度高的物質(zhì)，這難度是很大的，而有機(jī)物的反應(yīng)方式種類更多，且更難控制其反應(yīng)進(jìn)程與反應(yīng)結(jié)果，所以，普通的顏色反應(yīng)是很難用來檢測(cè)一種物質(zhì)的殘留的。
[0016]其二，普通化學(xué)反應(yīng)的干擾性較大?；瘜W(xué)反應(yīng)主要是以離子間的反應(yīng)，基團(tuán)、官能團(tuán)之間的反應(yīng)為主的，這就導(dǎo)致了相似離子、基團(tuán)、官能團(tuán)的影響是很致命的，譬如銀離子的反應(yīng)，若使用的不是去離子水，如果水中的氯離子含量較高的話，也容易產(chǎn)生渾濁的現(xiàn)象，所以僅僅通過肉眼觀察很難準(zhǔn)確地確定被檢測(cè)到的確實(shí)是我們所想要的物質(zhì)，而使用熒光法只是利用到了物質(zhì)的物理性質(zhì)，主要反應(yīng)為吸附以及絡(luò)合，其他物質(zhì)的干擾性較低。
[0017]其三，熒光法結(jié)果明顯。一般顏色反應(yīng)在濃度極低的時(shí)候較難直接判斷，譬如，三價(jià)鐵的顏色變化，其從淺黃色變成了淡黃色，仔細(xì)觀察確實(shí)能發(fā)現(xiàn)有所變化，倘若脫離了實(shí)驗(yàn)室的主觀想法，客觀地去評(píng)價(jià)一種物質(zhì)顏色的時(shí)候，淺黃色和淡黃色就很難分辨了。而熒光法在觀察上具有天然的優(yōu)勢(shì)，有無熒光只需要在暗室中用紫外燈照射即能判斷，而且，即使化合物濃度較低使得熒光強(qiáng)度較低，也能明顯比對(duì)出有和無的差別。
[0018]綜上所述，顯然熒光法作為檢測(cè)樂果殘留的有效方法顯得頗有優(yōu)勢(shì)，無論是從方式、干擾、結(jié)果上去分析，都要優(yōu)于一般的顏色法，而且熒光法不僅能檢測(cè)樂果的存在，還能利用實(shí)驗(yàn)室的儀器，通過熒光強(qiáng)度的變化，準(zhǔn)確測(cè)得樂果的含量。
[0019]3)CTMAB對(duì)于樂果的靈敏度較高，能檢測(cè)較低的樂果濃度，其原因可能是由于在濾紙完全干燥后，鈣黃綠素與CTMAB的配合物濃度急劇升高，若完全干燥的情況下，可視為這兩者的配合物為固體，所以在加入微量樂果溶液后，兩者的濃度是極高的，當(dāng)然CTMAB的總量又是極少的，相對(duì)的，樂果的量是極大的，這使得配合物中大量的CTMAB被反應(yīng)，保留了高濃度的鈣黃綠素溶液，使得試紙的熒光特性極其明顯。
[0020]4)考慮到樂果實(shí)際的殘留會(huì)受分解、水洗等因素的影響，使得其比例小于1:1000，在實(shí)驗(yàn)室使用1:1500、1:3000的比例進(jìn)行試紙實(shí)驗(yàn)，在該比例下仍能分辨出樂果確實(shí)存在殘留。不過由于國(guó)家(GB 8978—1996)允許的樂果殘留在水中為，二級(jí):1.0mg/L三級(jí):2.0mg/L，在果蔬上(GB 5127—85)為1.0mg/kg，若使用1:1000的樂果溶液噴灑，在7天后其濃度就能達(dá)到果蔬國(guó)標(biāo)水平，廢水二級(jí)水平，所以，該試紙的檢測(cè)精度能達(dá)到實(shí)際要求。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。
[0022]樂果的一般性質(zhì):樂果的分子式為C5H12N03PS2，這意味著樂果分子含有一個(gè)硫代磷酸根，使得其中的硫容易在水中電解出硫離子，使得其能與硝酸銀反應(yīng)，生成黃色沉淀；與氯化鈀反應(yīng)，生成黃色物質(zhì)。
[0023]樂果的還原性:硫離子有較強(qiáng)的還原性，因此可以還原一些有氧化性的化學(xué)品，例如Fe3+、高錳酸鉀等。
[0024]樂果的水解性:樂果在中性條件下會(huì)水解出甲胺，與2，4_二硝基氯苯反應(yīng)，產(chǎn)生黃色沉淀。在堿性條件下，可以與亞硝酰鐵氰化鈉反應(yīng)，產(chǎn)生紅褐色沉淀。
[0025]熒光法:由于樂果本身不帶有熒光，本發(fā)明嘗試了FITC、水楊基熒光酮二聚體、二碘熒光素、鈣黃綠素等實(shí)驗(yàn)室常用熒光染劑的熒光染色法，旨在找出一種較為合理的檢測(cè)手段。
[0026]1.1普通化學(xué)法:
在試驗(yàn)初期，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)后，開始從樂果最基本的化學(xué)性質(zhì)著手，希望能從常見的有顏色變化的化學(xué)反應(yīng)中找出一種精度較高的試劑。
[0027]1.1.1直接反應(yīng)法
1.1.1.1樂果的基本化學(xué)性質(zhì)
初期，最先嘗試硝酸銀這種物質(zhì)。取市場(chǎng)上買到的百分之四十樂果乳液，以瓶標(biāo)簽上標(biāo)明的1:1000稀釋比例稀釋在水中。由于樂果微溶于水，稀釋后樂果乳液會(huì)以小液滴的形式沉在燒杯底部，故采取超聲震蕩的方法并靜置IH，把樂果乳液擴(kuò)散到整個(gè)溶液體系中，使其濃度均勻，也大大縮短了溶解的時(shí)間。取實(shí)驗(yàn)室0.5毫升lmol/L的硝酸銀溶液于小試管中，加入配好的樂果水溶液0.5毫升，輕輕震蕩，靜置lOmin。未觀察到有黃色沉淀，但是溶液變得渾濁。分析:一、由于溶液只是呈現(xiàn)出渾濁而并沒有明顯的黃色沉淀，故通過此方法并不能用肉眼明顯觀察到結(jié)果。二、由于硝酸銀是一種很貴的鹽溶液，若把它作為一種大批量使用的檢測(cè)法，不符合惠民的特點(diǎn)，成本過高。所以該方法失敗。
[0028]再者，又嘗試了氯化鈀這種化學(xué)物質(zhì)，方法同硝酸銀。靜置后，觀察到明顯的黃色沉淀，且能肉眼清晰分辨出溶液的顏色變化。故考慮進(jìn)一步以濾紙為媒介，采用濾紙比色法。但經(jīng)過查詢，發(fā)現(xiàn)鈀是一種貴金屬，在許多高新領(lǐng)域有著不可或缺的作用，而且鈀元素產(chǎn)量不高，成本很高，故不適用于批量使用。
[0029]在這之后，本發(fā)明對(duì)于新嘗試的化學(xué)方法增加了一個(gè)化學(xué)品常用且廉價(jià)的前提。
[0030]在連續(xù)幾次的失敗之后，考慮到磷酸根不穩(wěn)定，有強(qiáng)還原性的性質(zhì)，加之磷酸根的其中一個(gè)氧離子被硫離子替代的事實(shí)，聯(lián)想到了利用有顏色變化的氧化還原反應(yīng)來檢測(cè)樂果分子的方法。
[0031]1.1.1.2樂果的氧化還原反應(yīng)
I)三價(jià)鐵離子的水溶液呈現(xiàn)出黃色，其被還原后的離子顏色褪去。取氯化鐵粉末
0.1625g，溶于10毫升水中，形成0.lmol/L的氯化鐵水溶液，靜置30Min。取之前配比的0.5毫升樂果水溶液于小試管中，加入0.5毫升氯化鐵溶液，震蕩。觀察，黃色溶液并沒有明顯變化，超聲震蕩15MIN后，黃色略微褪去，但觀察并不明顯。故此方案失敗。
[0032]2)高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，且其本身帶有強(qiáng)烈的紅色，若發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生無色的二價(jià)錳離子，將會(huì)是比較容易觀察的。取實(shí)驗(yàn)室配比好的lmol/L的高錳酸鉀溶液I毫升，加入1:1000的樂果水溶液I毫升，輕輕震蕩，發(fā)現(xiàn)紅色明顯褪去，但產(chǎn)生了一股刺鼻的氣體，起初沒有在意，并且已經(jīng)開始將濾紙浸泡在高錳酸鉀溶液中準(zhǔn)備下一步實(shí)驗(yàn)，但之后經(jīng)過查找資料后發(fā)現(xiàn)，若是誤食樂果后，不能用高錳酸鉀洗胃，因?yàn)閮烧邥?huì)反應(yīng)生成一種毒性更強(qiáng)烈的物質(zhì)。故此方案有?！皽y(cè)毒”的預(yù)期，方案失敗。
[0033]1.1.2間接反應(yīng)法
在考慮到間接反應(yīng)法之前，本發(fā)明還嘗試了許多不同的化學(xué)物質(zhì)，但基本上都以精度不夠高，視覺效果不夠明顯等問題被排除。于是，就考慮到樂果水解產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)是否有較為實(shí)用的檢測(cè)法。
[0034]1.1.2.1 中性條件
樂果在酸性條件下較為穩(wěn)定，基本不發(fā)生水解，而在中性條件下，生成甲胺和2，4_ 二硝基氯苯反應(yīng)可生成黃色產(chǎn)物。取樂果水溶液30毫升，使用堿性將樂果水溶液的PH值調(diào)整至8.00左右。方法:校準(zhǔn)PH計(jì)，取樂果水溶液30毫升，將PH計(jì)的探頭深入液面，同時(shí)放入磁石并讓其在攪拌臺(tái)上工作，使用移液槍取得0.lmol/L的氫氧化鈉溶液，逐滴緩慢加入到樂果溶液中，觀察PH計(jì)的數(shù)值變化，直到穩(wěn)定在8.00左右，調(diào)節(jié)完成。
[0035]將調(diào)節(jié)好PH的樂果溶液靜置2H，取靜置后的樂果溶液2毫升，加入2毫升配比好的2，4_ 二硝基氯苯。觀察得，溶液從無色透明逐漸變成了淡黃色，但由于淡黃色并不能用肉眼明確分辨，方案失敗。
[0036]1.1.2.2 堿性條件
樂果在堿性條件下極易水解成硫代磷酸和硫醇，硫化物和亞硝酰鐵氰化鈉反應(yīng)生成洋紅色化合物。取樂果水溶液30毫升，用3.1.2.1的PH調(diào)節(jié)方法，將溶液PH調(diào)節(jié)到10.00左右，靜置20min，取靜置后的樂果溶液2毫升，加入lmol/L的亞硝酰鐵氰化鈉溶液2毫升。觀察得，由于亞硝酰鐵氰化鈉本身自帶黃綠色，加入到樂果溶液后，立刻從黃綠色變成了磚紅色，顏色變化極其明顯。觀察得，這種物質(zhì)有可能作為試紙法的染色劑，但當(dāng)準(zhǔn)備做第二次對(duì)比實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)剛配比的亞硝酰鐵氰化鈉溶液在杯壁上出現(xiàn)了藍(lán)色附著物，并且黃綠色明顯轉(zhuǎn)換為淡藍(lán)色，后通過資料得知，亞硝酰鐵氰化鈉的水溶液是一種極不穩(wěn)定的物質(zhì)，在室溫條件下就會(huì)快速分解，方案失敗。
[0037]1.2熒光法
經(jīng)過上述的多次實(shí)驗(yàn)，顏色化學(xué)品的直接反應(yīng)法似乎并達(dá)不到檢測(cè)所需要的精度。
[0038]1.2.1直接染色法
基于熒光染色法，本發(fā)明嘗試了多種熒光物質(zhì)的染色試驗(yàn)。
[0039]1.2.1水楊基熒光酮
水楊基熒光酮是一種陰離子試劑，在中性條件下具有很強(qiáng)的熒光性，其可以和許多陰性離子結(jié)合，從而降低熒光強(qiáng)度。利用這一特點(diǎn)，本發(fā)明嘗試使用其直接對(duì)樂果經(jīng)行染色，由于樂果在水中會(huì)電離出陰離子根，理論上，在染色結(jié)束后，其熒光強(qiáng)度應(yīng)該會(huì)下降。
[0040]方法:
取百分之四十樂果溶液，按照1:1000的比例稀釋，配置成50毫升的樂果水溶液待用。取實(shí)驗(yàn)室水楊基熒光酮粉末，用分析天平稱量，按照瓶上標(biāo)定的分子量，配置成0.5mol/L的溶液待用。取配置好的水楊基熒光酮2毫升于試管中，加入2毫升樂果溶液，放置在恒溫水浴加熱爐反應(yīng)，時(shí)長(zhǎng)約為2H。
[0041 ] 結(jié)果觀察:
水楊基熒光酮本身呈現(xiàn)黃綠色，加入樂果溶液后黃色變淡，將等量的酮用去離子水稀釋后，觀察得與含有樂果的溶液差距不大，故可判斷，初期兩者并未發(fā)生劇烈的化學(xué)反應(yīng)。待水浴加熱2H后，原黃綠色溶液經(jīng)對(duì)比后發(fā)現(xiàn)有略微的紅色出現(xiàn)，但不明顯，透過暗室的紫外燈，發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度減弱。
[0042]分析:
I.水楊基熒光酮確實(shí)能跟樂果發(fā)生反應(yīng)，使其熒光褪去。
[0043]2.其與樂果反應(yīng)的條件較為繁瑣，而且需要消耗的時(shí)間過長(zhǎng)。
[0044]3.通過上述實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，并不能完全斷定是樂果造成了酮的熒光減弱，也有可能是本身的分解造成熒光變化的假象。所以方案不通過。
[0045]1.2.2間接熒光檢測(cè)法
基于上述實(shí)驗(yàn)的過程思考，本發(fā)明所考慮的方法基本都是“xxxxx與樂果反應(yīng)，生成XXXXX，導(dǎo)致顏色或熒光強(qiáng)度改變”，顯然，這種思維方式在一定上局限了對(duì)尋找一種合適化學(xué)物質(zhì)的方向。面對(duì)很多未知的事物，人們經(jīng)常會(huì)選擇用面對(duì)面的方式去解決，當(dāng)然這在大部分的情況下還是成立的，但對(duì)于某些事物，某些領(lǐng)域，尋找一種中間體來解決矛盾雙方會(huì)更行之有效，比如，太空探索、深海探索、藥物實(shí)驗(yàn)、建筑模擬等。這些通過借助硬件、軟件等間接探索未知領(lǐng)域的方法，使得人類在19世紀(jì)以來進(jìn)入了前所未有的知識(shí)爆炸時(shí)代，我們可以用程序代替我們的眼睛，用機(jī)械代替我們的力量，完成許多人體所不能完成或不能實(shí)現(xiàn)的領(lǐng)域中，這種通過第三者的研究方式，開拓者我們的新世界。
[0046]受到這些新興科技探索發(fā)現(xiàn)的過程，聯(lián)想到樂果實(shí)驗(yàn)的阻礙，于是就考慮到本發(fā)明是否能用一種第三者介入的方式，把兩者的化學(xué)性質(zhì)更有效得連接起來。
[0047]探究得到，鈣黃綠素這種熒光物質(zhì)在水溶液中極其穩(wěn)定，它主要用來滴定鈣元素，也可用于測(cè)定鍶、鋇、銅、錳、鈷、鎳、鉬、鉻等。它對(duì)于某些金屬陽(yáng)離子有著強(qiáng)大的引力，而且顯然，與這些金屬離子結(jié)合后，其熒光強(qiáng)度會(huì)明顯減弱，溶液本身的黃綠色也會(huì)褪去。由于可以用于滴定，這種熒光物質(zhì)的靈敏性以及精度理論上是能達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的。
[0048]由于樂果溶液在堿性環(huán)境下不穩(wěn)定，在酸性條件下穩(wěn)定，可以得到樂果分子本身的陽(yáng)性較強(qiáng)，于是本發(fā)明經(jīng)行過將鈣黃綠素和樂果溶液直接結(jié)合的方式，但效果差強(qiáng)人意。
[0049]擺在眼前的問題有:
I)能否找到一種物質(zhì)，使得“媽黃綠素一一XXXX這種物質(zhì)一一樂果溶液”這種反應(yīng)方式產(chǎn)生明顯的結(jié)果。
[0050]2)這種物質(zhì)能與鈣黃綠素反應(yīng)，同時(shí)又能和樂果反應(yīng)。
[0051 ] 3)反應(yīng)產(chǎn)生的結(jié)果能有較高的精度和靈敏性。
[0052]帶著這三個(gè)問題，最先從能與鈣黃綠素反應(yīng)的物質(zhì)入手。
[0053]首先，那些陽(yáng)性離子得到排除，顯然，這些陽(yáng)性離子并不會(huì)與樂果發(fā)成強(qiáng)烈的化學(xué)反應(yīng)。
[0054]再者，那些與鈣黃綠素發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)變化的物質(zhì)也得到排除，因?yàn)椋绻沁@種化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致了熒光物質(zhì)的消失，若樂果仍會(huì)和其反應(yīng)，理論上不能判斷到底是樂果產(chǎn)生了結(jié)果還是這種反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生了結(jié)果。
[0055]最后，本發(fā)明從表面活性劑出發(fā)，研究是否存在一種活性劑，都可以與鈣黃綠素和樂果結(jié)合，但與樂果的結(jié)合更為緊密并且強(qiáng)烈。
[0056]【實(shí)施例1】基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，包括以下步驟:
51:制備檢測(cè)液，包括以下子步驟:
SlOl:制備原溶液:
(1)取鈣黃綠素粉末0.429克，溶于50毫升水中，配置成濃度為lmol/L的鈣黃綠素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化銨粉末0.247克，溶于50毫升去離子水中，配置成濃度為
0.5mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液；
S102:按照體積比為1:2的比例，將配置好的鈣黃綠素溶液與十六烷基三甲基溴化銨溶液混合，輕輕震蕩得到檢測(cè)液；
52:制作比色試紙，包括以下子步驟:
S201:利用濾紙的吸附性，采用直徑70mm的定性濾紙，將其裁剪成寬5mm、長(zhǎng)20mm的長(zhǎng)條，將長(zhǎng)條濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中2h;
S202:取出浸泡完成后的濾紙并進(jìn)行干燥處理，干燥處理方法為避光自然風(fēng)干；
S203:濾紙完全干燥后即得比色試紙；
S3:比色檢測(cè)，包括以下子步驟:
5301:將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕；
5302:使用比色試紙擦拭待測(cè)目標(biāo)表面；
S303:將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留，反之則沒有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。
[0057]【實(shí)施例2】基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，包括以下步驟:
51:制備檢測(cè)液，包括以下子步驟:
SlOl:制備原溶液:
(1)取鈣黃綠素粉末，溶于水中，配置成濃度為0.05mol/L的鈣黃綠素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化銨粉末，溶于去離子水中，配置成濃度為0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液；
S102:按照體積比為1:2的比例，將配置好的鈣黃綠素溶液與十六烷基三甲基溴化銨溶液混合，輕輕震蕩得到檢測(cè)液；
52:制作比色試紙，包括以下子步驟:
S201:利用濾紙的吸附性，采用直徑70mm的定性濾紙，將其裁剪成寬5mm、長(zhǎng)20mm的長(zhǎng)條，將長(zhǎng)條濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中Ih;
S202:取出浸泡完成后的濾紙并進(jìn)行干燥處理，干燥處理方法為避光高溫烘干；
S203:濾紙完全干燥后即得比色試紙；
S3:比色檢測(cè)，包括以下子步驟:
5301:將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕；
5302:使用比色試紙擦拭待測(cè)目標(biāo)表面；
S303:將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留，反之則沒有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。
[0058]【實(shí)施例3】基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，包括以下步驟:
51:制備檢測(cè)液，包括以下子步驟:
SlOl:制備原溶液:
(1)取鈣黃綠素粉末，溶于水中，配置成濃度為0.lmol/L的鈣黃綠素溶液；
(2)取十六烷基三甲基溴化銨粉末，溶于去離子水中，配置成濃度為0.lmol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液；
S102:按照體積比為1:2的比例，將配置好的鈣黃綠素溶液與十六烷基三甲基溴化銨溶液混合，輕輕震蕩得到檢測(cè)液；
52:制作比色試紙，包括以下子步驟:
S201:利用濾紙的吸附性，采用直徑70mm的定性濾紙，將其裁剪成寬5mm、長(zhǎng)20mm的長(zhǎng)條，將長(zhǎng)條濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中3h;
S202:取出浸泡完成后的濾紙并進(jìn)行干燥處理，干燥處理方法為避光低溫干燥；
S203:濾紙完全干燥后即得比色試紙；
S3:比色檢測(cè)，包括以下子步驟:
5301:將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕；
5302:使用比色試紙擦拭待測(cè)目標(biāo)表面；
S303:將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留，反之則沒有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。
[0059]實(shí)驗(yàn)室結(jié)果
間接熒光法的核心思路是:通過“一種熒光物質(zhì)一一某種中間介質(zhì)一一樂果殘留”這種方式來檢測(cè)樂果殘留的存在。配置化合物的濃度丐黃綠素(0.lmol/L)、CTMAB(0.lmol/L)、樂果洛液(I: 1000稀釋)。
[0060]實(shí)驗(yàn)為了更具合理性得探索得到的結(jié)果，旨在找出更為合理的濃度配比。
[0061 ] I)鈣黃綠素過量
取配置好的I丐黃綠素溶液Iml于5個(gè)試管中，分別加入0.lmol/L、0.05mol/L、0.025mol/L、0.0125mol/L、0.00625mol/L的CTMAB溶液lml，觀察熒光強(qiáng)度的變化，觀察得，在0.025mol/L的量級(jí)后，熒光強(qiáng)度無明顯變化，故取0.025mol/L為零界值，將0.025mol/L與0.lmol/L做比對(duì)，得到0.lmol/L的效果優(yōu)于0.025mol/L。
[0062]2) CTMAB 過量
取配置好的CTMAB溶液Iml于5個(gè)試管中，分別加入0.1mol/L、0.05mol/L、0.025mol/L、0.0125mOl/L、0.00625mOl/L的鈣黃綠素溶液lml，觀察熒光強(qiáng)度的變化，觀察得，在
0.05mol/L的量級(jí)后，熒光強(qiáng)度無明顯變化，故取0.05mol/L為零界值，將0.05mol/L與0.lmol/L做對(duì)比，得到0.lmol/L的效果優(yōu)于0.05mol/L。
[0063]因此，鈣黃綠素與CTMAB的比例大約是I比I的時(shí)候效果最好。
[0064]試紙法實(shí)驗(yàn):
將鈣黃綠素溶液與CTMAB溶液按照1:2的比例混合，取10毫升倒入有封口的小試管中，加入4張裁剪好的濾紙，命名為Al 32，43 34，避光下浸泡2!1。浸泡完成后，用鑷子輕輕取出濾紙，將其平鋪在培養(yǎng)皿上，用自然風(fēng)避免直射光風(fēng)干。約IH后，濾紙完全干燥，用移液槍移取樂果溶液5微升，分別滴入到Al，A2兩張濾紙中，再用去離子水潤(rùn)濕A3，A4兩張濾紙，暗室內(nèi)用紫外光照射，觀察得，滴有樂果的Al，A2濾紙有明顯的黃綠色熒光，而A3，A4幾乎沒有熒光產(chǎn)生。
[0065]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述構(gòu)想范圍內(nèi)，通過上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟: S1:制備檢測(cè)液，包括以下子步驟: SlOl:制備原溶液: (1)取鈣黃綠素粉末，溶于第一溶劑中，配置成濃度不小于0.05mol/L的鈣黃綠素溶液； (2)取十六烷基三甲基溴化銨粉末，溶于第二溶劑中，配置成濃度不小于0.025mol/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液； S102:按照體積比為1:2的比例，將配置好的鈣黃綠素溶液與十六烷基三甲基溴化銨溶液混合，輕輕震蕩得到檢測(cè)液； S2:制作比色試紙，包括以下子步驟: S201:將濾紙避光浸泡在檢測(cè)液中I?3h; S202:取出浸泡完成后的濾紙并進(jìn)行干燥處理； S203:濾紙完全干燥后即得比色試紙； S3:比色檢測(cè)，包括以下子步驟: 5301:將待測(cè)目標(biāo)表面潤(rùn)濕； 5302:使用比色試紙擦拭待測(cè)目標(biāo)表面； S303:將擦拭后的比色試紙置于暗室中用紫外光照射，觀察是否有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生，若有明顯的黃綠色熒光產(chǎn)生則有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留，反之則沒有過量有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于:干燥處理方法為避光自然風(fēng)干或高溫烘干或低溫干燥。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于:所述鈣黃綠素溶液的濃度為lmol/L，所述十六烷基三甲基溴化銨溶液的濃度為0.5mol/L。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于:所述鈣黃綠素溶液與所述十六烷基三甲基溴化銨溶液的體積比為1:2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于:所述的第一溶劑為水。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于試紙比色的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果殘留檢測(cè)方法，其特征在于:所述的第二溶劑為去離子水。
【文檔編號(hào)】G01N21/78GK105866117SQ201610386108
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年6月3日
【發(fā)明人】鄭庭輝, 李達(dá)
【申請(qǐng)人】四川大學(xué)