一種采用hplc分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，以瑪咖酰胺為檢測(cè)目標(biāo)，定量測(cè)定瑪咖中九種瑪咖酰胺的含量?，斂０房梢宰饔糜谌梭w下丘腦?垂體?腺體這一“荷爾蒙平衡分泌系統(tǒng)”，促使人體荷爾蒙分泌的動(dòng)態(tài)平衡，從而改善人體內(nèi)環(huán)境，讓人體趨于健康狀態(tài)。因此對(duì)瑪咖中瑪咖酰胺的含量測(cè)定尤為重要，本發(fā)明采用HPLC方法進(jìn)行檢測(cè)，方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果可靠?？勺鳛楝斂е鞋斂０泛康臋z測(cè)新方法推廣應(yīng)用，也可鑒定瑪咖原料及產(chǎn)品質(zhì)量的依據(jù)。
【專利說(shuō)明】
一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，屬于天然植物活 性分子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]瑪咖，又作瑪卡(Maca、Lepidium meyemii Walp)，屬十字花科（Cruciferae)獨(dú)行 菜屬形似蘿卜的塊根類(lèi)一年生或兩年生草本植物，原產(chǎn)于秘魯中部海拔3500~4500米的南 美安第斯山區(qū)，屬純天然植物。隨著科學(xué)研究的不斷深入，研究者發(fā)現(xiàn)瑪咖不僅具有提高生 育能力的作用，還具有抗疲勞、緩解更年期綜合癥狀、抗前列腺增生、抗氧化、延緩衰老及抗 癌等重要功效。2011年我們批準(zhǔn)瑪咖粉為新資源食品?，斂е泻鞋斂０贰斂?、芥子 油苷等保健功效活性成分，是一種能給人體提供全面營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的純天然食品資源。新鮮瑪 咖含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、纖維素及人體非常豐富的氨基酸等，瑪咖具有抗疲勞、抗 衰老、增強(qiáng)免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、改善性功能、提高生育能力、改善睡眠、提高生活質(zhì)量 等功效，近年來(lái)，以瑪咖為原料生產(chǎn)的食品、保健酒、瑪咖膠囊等產(chǎn)品風(fēng)靡世界，成為全球暢 銷(xiāo)保健品之一。
[0003] 由于瑪咖價(jià)格昂貴，一些不法分子利用與瑪咖相似的其他低價(jià)材料冒充瑪咖。更 有不法分子在瑪咖粉中加入一定比例的玉米粉或土豆粉以攫取非法利益。這些偽品的出現(xiàn) 極大地傷害了消費(fèi)者的權(quán)益。雖然有專利報(bào)道使用ITS序列可以鑒別瑪咖，但無(wú)法知道瑪咖 中的瑪咖酰胺等活性分子有多少種類(lèi)、含量有多少等問(wèn)題。（中國(guó)專利"一種鑒別正品瑪咖、 偽品瑪咖及摻雜瑪咖的ITS序列及方法"CN 102952878B)。
[0004] 美國(guó)華裔植物學(xué)家Zheng B.L發(fā)現(xiàn)瑪咖中特有的兩種獨(dú)一無(wú)二的活性物質(zhì)瑪咖酰 胺和瑪咖稀，其中瑪咖酰胺主要成分有:N_芐基十六碳酰胺、N-芐基-9Z-十八碳稀酰胺、N-芐基_(9Z、12Z)_十八碳二烯酰胺、N-芐基_(9Z、12Z、15Z)_十八碳三烯酰胺、N-芐基十八烷 酰胺，及N-芐基辛酰胺、N-芐基-16-羥基-9-氧化-10E、12E、14E-辛葵三烯酰胺、N-芐基-16-羥基-9,16-二氧-10E、12E、14E-辛葵三烯酰胺等17個(gè)同系物，瑪咖酰胺在瑪咖提取物中含 量為0.2-0.4%左右。用HPLC對(duì)瑪咖酰胺進(jìn)行定量分析，通過(guò)LC-MS指紋詳圖分析鑒定瑪咖 中瑪咖酰胺活性分子的種類(lèi)。目前本發(fā)明可以測(cè)定九種瑪咖酰胺含量，以檢定結(jié)果為依據(jù)， 計(jì)算推薦瑪咖產(chǎn)品使用劑量，達(dá)到科學(xué)服用瑪咖的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 目的：為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，針對(duì)目前市場(chǎng)上瑪咖產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，無(wú)法測(cè)定 瑪咖中瑪咖酰胺活性分子的含量及瑪咖酰胺的種類(lèi)，無(wú)法鑒別瑪咖產(chǎn)品的優(yōu)劣等技術(shù)缺 陷，本發(fā)明提供一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法。
[0006] 技術(shù)方案:為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0007] 一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，HPLC的色譜分析條件如下： [0008] 1)色譜柱采用反相C18色譜柱；
[0009] 2)流動(dòng)相組成為：乙腈-水-酸，流動(dòng)相中各成分的體積比為：乙腈與水比例為4~ 10:1，酸的比例為水相的0.05-1 %。
[0010] 3)酸包括但不限于甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸。酸優(yōu)選為甲酸、 冰乙酸、三氟乙酸。
[0011] 4)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210-254nm;最佳波長(zhǎng)為210nm;
[0012] 5)色譜柱溫度為：15~35°C;優(yōu)選色譜柱溫度為20~25°C。
[0013] 通過(guò)中心復(fù)合設(shè)計(jì)的方法，優(yōu)化色譜分析條件，可以明顯提高各色譜峰分離效果， 縮短分析時(shí)間，色譜分析圖譜重現(xiàn)性好;得出最佳色譜條件。
[0014] 6)瑪咖酰胺對(duì)照品
[0015] 選擇瑪咖中主要九種瑪咖酰胺進(jìn)行檢測(cè)，為1-9號(hào)瑪咖酰胺，分別為（1)間甲氧基 芐基亞麻酰胺1，（2)芐基亞麻酰胺2，（3)間甲氧基芐基亞油酰胺3，（4)芐基亞油酰胺4,（5) 間甲氧基芐基十六烷油酰胺5,（6)芐基十六烷酰胺6,（7)芐基油麻酰胺7,（8)芐基十八烷酰 胺8,（9)芐基十七烷酰胺9;
[0016] 其化學(xué)結(jié)構(gòu)式及名稱如下所示：

[0019] 瑪咖酰胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式
[0020] 注：上述九種瑪咖酰胺對(duì)照品來(lái)自江蘇慧博生物科技有限公司，樣品純度在95% 以上。該對(duì)照品結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在-20°C可常年保存，配置成標(biāo)準(zhǔn)溶液后-20°C密閉保存也可保存 3-6個(gè)月。
[0021] 7)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0022] 取瑪咖酰胺對(duì)照品（1)、（3)、（6)、（7)、（8)、（9)各4mg，瑪咖酰胺對(duì)照品（2)、（4)和 (5)各10mg，使用乙腈溶解并定容于100mL容量瓶中，為九種瑪咖酰胺混標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)使用液。分 別取標(biāo)準(zhǔn)使用液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.01^，加0.9、0.8、0.6、0.4、0.2和011^乙腈配置成 標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度用于HPLC檢測(cè);進(jìn)樣量為1 Ομ 1;
[0023] 8)供試品溶液
[0024] 瑪咖樣品經(jīng)粉粹，過(guò)60目篩(粒徑< 0.21mm)，準(zhǔn)確稱取lg瑪咖粉(準(zhǔn)準(zhǔn)至1 .OOOOg ±0.0010g)于100-150ml圓底燒瓶中，加入40-60ml石油醚后加入冷凝管，置于超聲清洗機(jī) 中，40-50°C，超聲提取30-90min;超聲完成后搖勻，將提取液和瑪咖渣一同倒入50-100ml離 心管中，5000rpm離心10-20min;將上清液倒入100ml圓底燒瓶中，旋蒸干后加入4-6ml乙腈， 充分搖勻溶解提取物后吸取至5ml容量瓶或10ml容量瓶，再加0.8-1.5ml乙腈至圓底燒瓶搖 勻后吸取至上述容量瓶，取適量乙腈定容至5ml或10ml，經(jīng)0.22μπι微孔濾膜過(guò)濾后，用于 HPLC檢測(cè)；
[0025] 9)結(jié)果計(jì)算
[0026]試樣中九種瑪咖酰胺的含量分別按式(1)進(jìn)行計(jì)算：
[0028]瑪咖酰胺總含量按式(2)進(jìn)行計(jì)算：
[0029] χ^=Σχ?..........................................................(2)
[0030] 式中：
[0031] xi--試樣中瑪咖酰胺的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);
[0032] nu標(biāo)--瑪咖酰胺對(duì)照品的質(zhì)量，單位為_(kāi)克(mg);
[0033] Pi標(biāo)--瑪咖酰胺對(duì)照品的含量；
[0034] mi--試樣質(zhì)量，單位為克(g);
[0035] Ai標(biāo)一一瑪咖酰胺對(duì)照品的峰面積平均值；
[0036] A,一一試樣瑪咖酰胺試樣的峰面積平均值；
[0037] X總--試樣中瑪咖酰胺含量為9種酰胺含量總和。
[0038]作為優(yōu)選方案，所述酸為甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸中的一種 或幾種。更優(yōu)選，酸為甲酸、冰乙酸、三氟乙酸中的一種或幾種。
[0039]作為優(yōu)選方案，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。
[0040] 作為優(yōu)選方案，色譜柱溫度為20~25 °C。
[0041] 有益效果:本發(fā)明提供的一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，用 HPLC對(duì)瑪咖酰胺進(jìn)行定量分析，通過(guò)LC-MS指紋詳圖分析鑒定瑪咖中瑪咖酰胺活性分子的 種類(lèi)。以本發(fā)明優(yōu)化得到的色譜分析條件，在等度洗脫的條件下，30min內(nèi)就可以同時(shí)分離 分析10個(gè)以上的色譜峰，通過(guò)化合物對(duì)照品確認(rèn)了其中的1-9號(hào)峰，分別是（1)、（2)、（3)、 (4)、（5)、（6)、（7)、（8)、（9);目前本發(fā)明可以測(cè)定九種瑪咖酰胺含量，以檢定結(jié)果為依據(jù)， 計(jì)算推薦瑪咖產(chǎn)品使用劑量，達(dá)到科學(xué)服用瑪咖的目的。與從前的方法相比，不但解決了瑪 咖中瑪咖酰胺較難分離的問(wèn)題，并且解決了瑪咖中瑪咖酰胺的定量測(cè)定，因?yàn)椴捎昧说忍?度洗脫的方法，重現(xiàn)性良好。
【附圖說(shuō)明】
[0042]圖1是瑪咖樣品的HPLC圖譜；
[0043]圖2是瑪咖酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜；
【具體實(shí)施方式】
[0044] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。下述各實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明， 對(duì)本發(fā)明沒(méi)有限定。
[0045] 實(shí)施例1
[0046]采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的方法：
[0047] 1.儀器與材料
[0048]安捷倫1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），UV檢測(cè)器，色譜柱0DS (4.6 X 250πιπι，5μπι)(美國(guó)安捷倫公司）。色譜乙腈，色譜甲酸，雙蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制）。
[0049] 2.色譜條件
[0050] 色譜柱:0DS(4.6X250mm，5ym)(美國(guó)安捷倫公司）；
[0051]流動(dòng)相:等度洗脫，乙腈:水為90:10,其中水相含0.2%的甲酸;流速為lmL.min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為21 Onm;進(jìn)樣體積為1 OyL。柱溫2 5 °C。
[0052]標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 [0053] 3.對(duì)照樣的配制
[0054] 取瑪咖酰胺對(duì)照品（1)、（3)、（6)、（7)、（8)、（9)各4mg，瑪咖酰胺對(duì)照品（2)、（4)和 (5)各10mg，使用乙腈溶解并定容于100mL容量瓶中，為九種瑪咖酰胺混標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn) 樣量為1 〇μ 1。用于HPLC檢測(cè)。
[0055] 4.供試品溶液
[0056] 瑪咖樣品經(jīng)粉粹，過(guò)60目篩(粒徑< 0.21mm)，準(zhǔn)確稱取lg瑪咖粉(準(zhǔn)準(zhǔn)至1.0000g ±0.0010g)于100ml圓底燒瓶中，加入40ml石油醚后加入冷凝管，置于超聲清洗機(jī)中，40-50 °C，超聲提取90min。超聲完成后搖勾，將提取液和瑪咖渣一同倒入50ml離心管中，5000rpm 離心20min。將上清液倒入100ml圓底燒瓶中，旋蒸干后加入4ml乙腈，充分搖勻溶解提取物 后吸取至5ml容量瓶，再加0.8ml乙腈至圓底燒瓶搖勻后吸取至上述容量瓶，取適量乙腈定 容至5ml，經(jīng)0.22μηι微孔濾膜過(guò)濾后，用于HPLC檢測(cè)。
[0057] 5 .按照對(duì)照樣、供試品、供試品、對(duì)照樣進(jìn)行檢測(cè)，樣品之間的峰面積相對(duì)誤差在 98%-102%。取平均值。
[0058] 6.結(jié)果計(jì)算
[0059]試樣中九種瑪咖酰胺的含量均按式（1)進(jìn)行計(jì)算，瑪咖酰胺總含量按式(2)進(jìn)行計(jì) 算。
[0060] 實(shí)施例2 [00611 1.儀器與材料
[0062]安捷倫1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），UV檢測(cè)器，色譜柱0DS(4.6X 250mm，5ym)(島津0DS-3C18)。色譜乙腈，色譜三氟乙酸，雙蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制）。
[0063] 2.色譜條件
[0064] 色譜柱：0DS(4.6X250mm，5ym)(島津 0DS-3C18);
[0065]流動(dòng)相：等度洗脫，乙腈：水為85 : 15，其中水相含0.05 %的三氟乙酸；流速為 0.8mL· · min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;進(jìn)樣體積為10yL。柱溫30°C〇 [0066] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0067] 3 ·對(duì)照樣的配制
[0068] 取瑪咖酰胺對(duì)照品（1)、（3)、（6)、（7)、（8)、（9)各4mg，瑪咖酰胺對(duì)照品（2)、（4)和 (5)各10mg，使用乙腈溶解并定容于100mL容量瓶中，為九種瑪咖酰胺混標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn) 樣量為1 〇μ 1。用于HPLC檢測(cè)。瑪咖酰胺標(biāo)準(zhǔn)品HPLC譜圖如圖2所示。
[0069] 4.供試品溶液
[0070] 瑪咖樣品經(jīng)粉粹，過(guò)60目篩(粒徑< 0.21mm)，準(zhǔn)確稱取lg瑪咖粉(準(zhǔn)準(zhǔn)至1 .OOOOg ±0.0010g)于150ml圓底燒瓶中，加入60ml石油醚后加入冷凝管，置于超聲清洗機(jī)中，40-50 °C，超聲提取300min。超聲完成后搖勾，將提取液和瑪咖渣一同倒入100ml離心管中， 5000rpm離心10min。將上清液倒入100ml圓底燒瓶中，旋蒸干后加入6ml乙腈，充分搖勻溶解 提取物后吸取至5ml容量瓶，再加 1.5ml乙腈至圓底燒瓶搖勻后吸取至上述容量瓶，取適量 乙腈定容至l〇ml，經(jīng)0.22μπι微孔濾膜過(guò)濾后，用于HPLC檢測(cè);瑪咖樣品HPLC圖如圖1所示； [0071] 5.按照對(duì)照樣、供試品、供試品、對(duì)照樣進(jìn)行檢測(cè)，樣品之間的峰面積相對(duì)誤差在 98%-102%。取平均值。
[0072] 6.結(jié)果計(jì)算
[0073] 試樣中九種瑪咖酰胺的含量均按式（1)進(jìn)行計(jì)算，瑪咖酰胺總含量按式(2)進(jìn)行計(jì) 算。
[0074] 本發(fā)明的效果：以本發(fā)明優(yōu)化得到的色譜分析條件，在等度洗脫的條件下，30min 內(nèi)就可以同時(shí)分離分析10個(gè)以上的色譜峰，通過(guò)化合物對(duì)照品確認(rèn)了其中的1-9號(hào)峰，分別 是（1)、（2)、（3)、（4)、（5)、（6)、（7)、（8)、（9);與從前的方法相比，不但解決了瑪咖中瑪咖酰 胺較難分離的問(wèn)題，并且解決了瑪咖中瑪咖酰胺的定量測(cè)定，因?yàn)椴捎昧说忍荻认疵摰姆?法，重現(xiàn)性良好。
[0075] 九種瑪咖酰胺線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限，精密度如表1所示：
[0076] 表1九種瑪咖酰胺混標(biāo)線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及精密度
[0077]
[0078] 氺Y:peak area;X:mass concentration，mg/L
[0079] 實(shí)施例3精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)
[0080] 精密度試驗(yàn):取同一樣品按上述樣品處理方法制備樣液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次?ομL， 在相同的色譜條件下分析樣液中檢出成分的含量，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得 出，瑪咖中九種瑪咖酰胺各成分含量的RSD值為0.016%~2.10%，見(jiàn)表2，表明精密度良好。 [0081 ]實(shí)施例4穩(wěn)定性試驗(yàn):取剛制備好的樣液，每隔0、2、4、8、12、2411進(jìn)樣一次，每次1(^ 1，根據(jù)樣液中檢出成分的含量，計(jì)算其RSD值。瑪咖中9種瑪咖酰胺含量的RSD值為0.12 %~ 2.80%(詳見(jiàn)表2)。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)測(cè)定的色譜結(jié)果是穩(wěn)定的。
[0082] 實(shí)施例5重復(fù)性試驗(yàn):取同一瑪咖樣品，按樣品處理方法平行制備6份樣液，進(jìn)樣10 μL進(jìn)行色譜分析，根據(jù)檢出組分在樣品中的含量，計(jì)算RSD值。結(jié)果得出，9種瑪咖酰胺含量 的RSD值為1.12%~4.82% (詳見(jiàn)表2)，測(cè)定重復(fù)性良好。
[0083] 表2精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(η = 6)
[0084]
[0085] 實(shí)施例6回收率實(shí)驗(yàn)
[0086] 稱瑪咖樣品1. OOOOg，在5.0、10 . Omg兩個(gè)加標(biāo)水平下平行檢測(cè)3次，加標(biāo)回收率結(jié) 果見(jiàn)表3,由于瑪咖酰胺各含量差別較大，所以回收率波動(dòng)較大。九種瑪咖酰胺成分的回收 率均在76~126%之間。
[0087]表3樣品中瑪咖酰胺的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(η = 3)
[0088]
[0089]以上已以較佳實(shí)施例公開(kāi)了本發(fā)明，然其并非用以限制本發(fā)明，凡采用等同替換 或者等效變換方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，HPLC的色譜分析條件如下： 1) 色譜柱采用反相C18色譜柱； 2) 流動(dòng)相組成為：乙腈-水-酸，流動(dòng)相中各成分的體積比為：乙腈與水比例為4~10:1， 酸的比例為水相的0.05-1 % ; 3) 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210-254nm; 4) 色譜柱溫度為：15~35°C; 5) 瑪咖酰胺對(duì)照品： 選擇瑪咖中主要的九種瑪咖酰胺進(jìn)行檢測(cè)，為1-9號(hào)瑪咖酰胺，分別為（1)間甲氧基芐 基亞麻酰胺1，（2)芐基亞麻酰胺2,（3)間甲氧基芐基亞油酰胺3,（4)芐基亞油酰胺4,（5)間 甲氧基芐基十六烷油酰胺5,（6)芐基十六烷酰胺6,（7)芐基油麻酰胺7,（8)芐基十八烷酰胺 8,（9)芐基十七烷酰胺9; 其化學(xué)結(jié)構(gòu)式及名稱如下所示：瑪咖酰胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式 6) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 取瑪咖酰胺對(duì)照品（1)、（3)、（6)、（7)、（8)、（9)各4mg，瑪咖酰胺對(duì)照品（2)、（4)和(5)各 l〇mg，使用乙腈溶解并定容于lOOmL容量瓶中，為九種瑪咖酰胺混標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)使用液;分別取 標(biāo)準(zhǔn)使用液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.01^，加0.9、0.8、0.6、0.4、0.2和011^乙腈配置成標(biāo)準(zhǔn) 系列各濃度用于HPLC檢測(cè);進(jìn)樣量為ΙΟμΙ; 7) 供試品溶液： 瑪咖樣品經(jīng)粉粹，過(guò)6 0目篩（粒徑< 0.21 m m )，準(zhǔn)確稱取1 g瑪咖粉（準(zhǔn)準(zhǔn)至1.0 0 0 0 g 土 0.0010g)于100-150ml圓底燒瓶中，加入40-60ml石油醚后加入冷凝管，置于超聲清洗機(jī)中， 40-50°C，超聲提取30-90min;超聲完成后搖勻，將提取液和瑪咖渣一同倒入50-100ml離心 管中，5000rpm離心10-20min;將上清液倒入100ml圓底燒瓶中，旋蒸干后加入4-6ml乙腈，充 分搖勻溶解提取物后吸取至5ml容量瓶或10ml容量瓶，再加0.8-1.5ml乙腈至圓底燒瓶搖勻 后吸取至上述容量瓶，取適量乙腈定容至5ml或10ml，經(jīng)0.22μπι微孔濾膜過(guò)濾后，用于HPLC 檢測(cè)； 8)結(jié)果計(jì)算： 試樣中九種瑪咖酰胺的含量分別按式(1)進(jìn)行計(jì)算：瑪咖酰胺總含量按式(2)進(jìn)行計(jì)算： X總=Σχ?..........................................................(2) 式中： xi--試樣中瑪咖酰胺的含量，單位為毫克每千克(mg/kg); ΠΗ標(biāo)--瑪咖酰胺對(duì)照品的質(zhì)量，單位為_(kāi)克(mg); Pi標(biāo)--瑪咖酰胺對(duì)照品的含量； πη--試樣質(zhì)量，單位為克(g); Am一一瑪咖酰胺對(duì)照品的峰面積平均值； Al一一試樣瑪咖酰胺試樣的峰面積平均值； X總--試樣中瑪咖酰胺含量為9種酰胺含量總和。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，其特征在于： 所述酸為甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸中的一種或幾種。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，其特征在于： 酸為甲酸、冰乙酸、三氟乙酸中的一種或幾種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，其特征在于： 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用HPLC分析瑪咖中瑪咖酰胺含量的檢測(cè)方法，其特征在于： 色譜柱溫度為20~25 °C。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105866314SQ201610373483
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月31日
【發(fā)明人】徐德鋒
【申請(qǐng)人】江蘇慧博生物科技有限公司