5-羥基-1h-咪唑-4-甲酰胺的有效給予量或感受性的預(yù)測(cè)方法及預(yù)測(cè)裝置、黃苷一磷酸的 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供一種能夠通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行測(cè)定的5?羥基?1H?咪唑?4?甲酰胺的有效給予量或感受性的預(yù)測(cè)方法及預(yù)測(cè)裝置、黃苷一磷酸量的測(cè)定方法、以及骨髓增生異常綜合征的處置劑及處置方法。根據(jù)本發(fā)明，可提供包含測(cè)定血液中的黃苷一磷酸的量的步驟的5?羥基?1H?咪唑?4?甲酰胺的有效給予量或感受性的預(yù)測(cè)方法及預(yù)測(cè)裝置、包含通過(guò)質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一磷酸的工序的黃苷一磷酸量的測(cè)定方法、以及骨髓增生異常綜合征的處置劑及處置方法。
【專利說(shuō)明】
5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺的有效給予量或感受性的預(yù)測(cè)方 法及預(yù)測(cè)裝置、黃苷一磷酸的量的測(cè)定方法、以及骨髓増生異 常綜合征的處置劑及處置方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種對(duì)骨髓增生異常綜合征患者給予的5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺或 其鹽或其水合物的有效給予量的預(yù)測(cè)方法。本發(fā)明還涉及一種預(yù)測(cè)骨髓增生異常綜合征患 者對(duì)使用5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的方法。本發(fā) 明還涉及一種血液中所含的黃苷一磷酸量的測(cè)定方法。本發(fā)明還涉及一種用于預(yù)測(cè)對(duì)骨髓 增生異常綜合征患者給予的5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺的有效給予量的裝置、以及用于預(yù) 測(cè)骨髓增生異常綜合征患者對(duì)使用5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是 否有感受性的裝置。本發(fā)明還涉及一種用于被預(yù)測(cè)為對(duì)使用5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺或 其鹽或其水合物的處置有感受性的骨髓增生異常綜合征患者的處置中的處置劑及處置方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 已知5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺（以下，也稱作"化合物A"。）或其鹽或其水合物對(duì) 骨髓增生異常綜合征(MDS)是有用的（非專利文獻(xiàn)1)?；衔顰或其鹽或其水合物在生物體 內(nèi)通過(guò)腺噪呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(adenine phosphoribosyltransferase，APRT)被轉(zhuǎn)換而成 為核糖一磷酸(ribosyl monophosphate，RMP)，會(huì)抑制肌苷-5 單磷酸脫氫酶（inosine-5'-monophosphate dehydrogenase，IMPDH) qIMPDH為由肌苷單磷酸（inosine monophosphate，IMP)生成黃苷一磷酸（xanthosine monophosphate，XMP)的酶。
[0003] 作為IMPDH抑制劑，已知有霉酚酸及霉酚酸酯等免疫抑制劑。關(guān)于這些免疫抑制 劑，已報(bào)告如下方法：在從血液中得到的包含淋巴球等的成分即末梢血單個(gè)核細(xì)胞 (peripheral blood mononuclear cell，PBMC)的細(xì)胞破碎液中以體外（in vitro)方式加 入頂P來(lái)進(jìn)行基于頂PDH的酶反應(yīng)，測(cè)定XMP的量，由此評(píng)價(jià)基于頂PDH抑制劑的抑制程度(非 專利文獻(xiàn)2)。
[0004] 關(guān)于核苷酸的分析，已報(bào)告使用親水性相互作用色譜-質(zhì)譜(HILIC-MS)及水性正 相色譜-質(zhì)譜的方法(非專利文獻(xiàn)3)。并且，關(guān)于XMP的分析，已報(bào)告基于使用離子對(duì)試劑的 反相色譜及離子交換色譜的方法。
[0005] 由IMPDH生成的XMP進(jìn)一步通過(guò)生物體內(nèi)的酶反應(yīng)被轉(zhuǎn)換為鳥(niǎo)苷一磷酸 (guanosine monophosphate，GMP)、鳥(niǎo)苷二磷酉愛(ài)（guanosine diphosphate，GDP)、鳥(niǎo)苷三磷 酸(guanosine triphosphate，GTP)，成為核酸合成的材料(非專利文獻(xiàn)4)。
[0006] 以往技術(shù)文獻(xiàn) [0007]非專利文獻(xiàn)
[0008] 非專利文獻(xiàn)1:癌和化學(xué)療法、1989年、第16卷、第1號(hào)、第123~130頁(yè)
[0009]非專利文獻(xiàn)2Analytical Chemistry、2012年、第84卷、第216~223頁(yè) [0010]非專利文獻(xiàn)3〖Analytical Chemistry、2012年、第84卷、第 1994~2001 頁(yè)
[0011] 非專利文獻(xiàn)4:stryer生物化學(xué)(第7版）、2013年、第689~693頁(yè) [0012]發(fā)明的概要
[0013] 發(fā)明要解決的技術(shù)課題
[0014] MDS為呈現(xiàn)血球形態(tài)的增生異常和血球減少的疾病，基于治療劑的治療效果主要 通過(guò)血液學(xué)上的緩解、改善來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。但是，直至顯現(xiàn)治療劑的效果是需要時(shí)間的，因此 難以在短時(shí)間內(nèi)監(jiān)控治療劑的作用。非專利文獻(xiàn)2中所記載的方法在PBMC的分離中需要繁 瑣的操作和時(shí)間。并且，該方法為添加非內(nèi)源性的MP來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法，并沒(méi)有準(zhǔn)確反映 生物體內(nèi)的頂PDH抑制程度。
[0015] 關(guān)于核苷酸的分析，進(jìn)行了幾次嘗試。但是，核苷酸由于是親水性低分子，因此難 以在通常用于分析中的反相色譜中進(jìn)行保持。并且，由于具有磷酸基，因此分離分析時(shí)容易 引起吸附現(xiàn)象和/或拖尾。因此，難以進(jìn)行內(nèi)源性核苷酸的定量。并且，核苷酸的代謝物中存 在大量質(zhì)量及結(jié)構(gòu)近似的物質(zhì)。它們?cè)谝合嗌V(IX)上的行跡及保持時(shí)間在多數(shù)情況下近 似，因此難以用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)區(qū)分來(lái)進(jìn)行定量。關(guān)于XMP的分析，有非專利文獻(xiàn)2的 報(bào)告，但該方法以富有XMP的試樣為對(duì)象，并沒(méi)有對(duì)微量的內(nèi)源性的XMP進(jìn)行分析。
[0016] 本發(fā)明應(yīng)解決的課題在于提供一種能夠通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)對(duì)MDS患 者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的方法。
[0017] 本發(fā)明還應(yīng)解決的課題在于提供一種通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)MDS患者對(duì) 使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的方法。
[0018] 本發(fā)明還應(yīng)解決的課題在于提供一種準(zhǔn)確地測(cè)定血液中所含的微量的XMP的量的 方法。
[0019] 本發(fā)明還應(yīng)解決的課題在于提供一種通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)用于預(yù)測(cè)對(duì)MDS 患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的裝置、及用于預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化 合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的裝置。
[0020] 本發(fā)明還應(yīng)解決的課題在于提供一種用于被預(yù)測(cè)為對(duì)使用化合物A或其鹽或其水 合物的處置有感受性的MDS患者的處置中的處置劑及處置方法。
[0021 ]用于解決技術(shù)課題的手段
[0022] 本發(fā)明人等為了解決上述課題而進(jìn)行了深入研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)通過(guò)測(cè)定血液中所 含的XMP的量的變動(dòng)，能夠預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量、 以及MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置的感受性。另外，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，通 過(guò)設(shè)定MS法中的測(cè)定條件，能夠準(zhǔn)確地測(cè)定血液中所含的微量的XMP的量。本發(fā)明是基于這 些見(jiàn)解而完成的。
[0023] 即，根據(jù)本發(fā)明，提供以下發(fā)明。
[0024] [ 1 ]一種預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的方法， 其包含如下工序：
[0025] (a)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量；
[0026] (b)根據(jù)在(a)工序中所得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率;及
[0027] (c)根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有 效給予量。
[0028] [2]根據(jù)[1]所述的方法，其中，血液為末梢血。
[0029] [3]根據(jù)[1]或[2]所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)樵谀軌騾^(qū)分測(cè)定血液 中所含的摻雜物與XMP的條件下進(jìn)行的工序。
[0030] [4]根據(jù)[1]至[3]中任一個(gè)所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)橥ㄟ^(guò)質(zhì)譜 (MS)法進(jìn)行測(cè)定的工序。
[0031 ] [5]根據(jù)[4]所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍?br>[0032] (al)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP;
[0033] (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離 子強(qiáng)度比；及
[0034] (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。
[0035] [6]根據(jù)[5]所述的方法，其中，（al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)LC-MS法在不同的兩種測(cè)定條件下 測(cè)定血液中所含的XMP的工序。
[0036] [7]根據(jù)[6]所述的方法，其中，液相色譜(LC)中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。
[0037] [8]根據(jù)[6]或[7]所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~ 300mmol/L。
[0038] [9]根據(jù)[6]至[8]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相為含有碳酸氫 銨水溶液的流動(dòng)相。
[0039] [10]根據(jù)[6]至[9]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC為親水性相互作用色譜 (HILIC)o
[0040] [11]根據(jù)[5]至[10]中任一個(gè)所述的方法，其中，不同的兩種測(cè)定條件為MS法中的 檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。
[0041] [12]根據(jù)[1]至[11]中任一個(gè)所述的方法，其中，（c)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍?br>[0042] (cl)用函數(shù)表示給予化合物A或其鹽或其水合物之后的時(shí)間或接觸時(shí)間與在(b) 工序中所得到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及
[0043] (c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予 量。
[0044] [13]根據(jù)[12]所述的方法，其中，（c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば?預(yù)測(cè)XMP的變 動(dòng)率在規(guī)定處置期間內(nèi)成為規(guī)定變動(dòng)率以上的化合物A或其鹽或其水合物的給予量為有效 給予量。
[0045] [14]根據(jù)[12]所述的方法，其中，（c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば?預(yù)測(cè)XMP的變 動(dòng)率在規(guī)定處置期間中的規(guī)定比例以上的期間內(nèi)成為規(guī)定變動(dòng)率以上的化合物A或其鹽或 其水合物的給予量為有效給予量。
[0046] [15] -種預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的 方法，其包含如下工序：
[0047] (a)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量；
[0048] (b)根據(jù)在(a)工序中所得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率;及
[0049] (c)根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其 水合物的處置是否有感受性。
[0050] [16]根據(jù)[15]所述的方法，其中，血液為末梢血。
[0051] [17]根據(jù)[15]或[16]所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)樵谀軌騾^(qū)分測(cè)定血 液中所含的摻雜物與XMP的條件下進(jìn)行的工序。
[0052] [ 18 ]根據(jù)[15 ]至[17 ]中任一個(gè)所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)橥ㄟ^(guò)MS法 進(jìn)行測(cè)定的工序。
[0053] [19]根據(jù)[18]所述的方法，其中，測(cè)定XMP的量的工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍?br>[0054] (al)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP;
[0055] (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離 子強(qiáng)度比；及
[0056] (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。
[0057] [20]根據(jù)[19]所述的方法，其中，（al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)LC-MS法在不同的兩種測(cè)定條件 下測(cè)定血液中所含的XMP的工序。
[0058] [21]根據(jù)[20]所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。
[0059] [22]根據(jù)[20]或[21]所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~ 300mmol/L。
[0060] [23]根據(jù)[20]至[22]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相為含有碳 酸氫銨水溶液的流動(dòng)相。
[0061 ] [ 24 ]根據(jù)[20 ]至[23 ]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC為HILIC。
[0062] [25]根據(jù)[19]至[24]中任一個(gè)所述的方法，其中，不同的兩種測(cè)定條件為MS法中 的檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。
[0063] [26]根據(jù)[15]至[25]中任一個(gè)所述的方法，其中，（c)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓?序：
[0064] (cl)用函數(shù)表示給予化合物A或其鹽或其水合物之后的時(shí)間或接觸時(shí)間與在(b) 工序中所得到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及
[0065] (c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物 的處置是否有感受性。
[0066] [27]根據(jù)[26]所述的方法，其中，（c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍寒?dāng)XMP的變動(dòng) 率在規(guī)定處置期間內(nèi)為規(guī)定變動(dòng)率以上時(shí)，預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的 處置有感受性。
[0067] [28]根據(jù)[26]所述的方法，其中，（c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍寒?dāng)XMP的變動(dòng) 率在規(guī)定處置期間中的規(guī)定比例以上的期間內(nèi)為規(guī)定變動(dòng)率以上時(shí)，預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合 物A或其鹽或其水合物的處置有感受性。
[0068] [29] -種測(cè)定血液中所含的XMP的量的方法，其包含如下工序：
[0069] (al)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP;
[0070] (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離 子強(qiáng)度比；及
[0071 ] (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。
[0072] [30]根據(jù)[29]所述的方法，其中，（al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)LC-MS法在不同的兩種測(cè)定條件 下測(cè)定血液中所含的XMP的工序。
[0073] [31]根據(jù)[30]所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。
[0074] [32]根據(jù)[30]或[31]所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~ 300mmol/L。
[0075] [33]根據(jù)[30]至[32]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC中所使用的流動(dòng)相為含有碳 酸氫銨水溶液的流動(dòng)相。
[0076] [34]根據(jù)[30]至[33]中任一個(gè)所述的方法，其中，LC為HILIC。
[0077] [35]根據(jù)[29]至[34]中任一個(gè)所述的方法，其中，不同的兩種測(cè)定條件為MS法中 的檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。
[0078] [36] -種用于預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的 裝置，其包含如下機(jī)構(gòu)：
[0079] (A)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的XMP的 量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集 的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量的機(jī)構(gòu)；
[0080] (B)根據(jù)由(A)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率的機(jī)構(gòu);及
[0081] (C)根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合 物的有效給予量的機(jī)構(gòu)。
[0082] [37]根據(jù)[36]所述的裝置，其中，測(cè)定XMP的量的機(jī)構(gòu)為使用MS裝置的機(jī)構(gòu)。
[0083] [38]根據(jù)[37]所述的裝置，其中，MS裝置為與LC裝置連結(jié)的MS裝置(LC-MS裝置）。
[0084] [39]-種用于預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受 性的裝置，其包含如下機(jī)構(gòu)：
[0085] (A)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量的機(jī)構(gòu);及
[0086] (B)根據(jù)由(A)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率的機(jī)構(gòu);及
[0087] (C)根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其 鹽或其水合物的處置是否有感受性的機(jī)構(gòu)。
[0088] [40]根據(jù)[39]所述的裝置，其中，(A)中所記載的機(jī)構(gòu)為使用MS裝置的機(jī)構(gòu)。
[0089] [41]根據(jù)[40]所述的裝置，其中，MS裝置為與LC裝置連結(jié)的MS裝置(LC-MS裝置）。
[0090] [42]-種處置劑，其用于MDS患者的處置中且有效成分為化合物A，包含預(yù)測(cè)MDS患 者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的工序，其中，預(yù)測(cè)工序?yàn)榘?下工序的工序：
[0091] (a)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量；
[0092 ] (b)根據(jù)在(a)工序中所得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率;及
[0093] (c)根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其 水合物的處置是否有感受性，并且患者是被預(yù)測(cè)為對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處 置有感受性的患者。
[0094] [43]-種處置方法，其用于MDS患者的處置中且有效成分為化合物A的MDS，所述處 置方法包含預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的工序，其 中，預(yù)測(cè)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍?br>[0095] (a)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量；
[0096] (b)根據(jù)在(a)工序中所得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率;及
[0097] (c)根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其 水合物的處置是否有感受性，并且患者是被預(yù)測(cè)為對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處 置有感受性的患者。
[0098]發(fā)明效果
[0099]本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法為使用血液作為試樣的方法，由此，能夠通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短 時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，能夠通過(guò)簡(jiǎn) 便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。 [0100]通過(guò)預(yù)測(cè)有效給予量，能夠適當(dāng)設(shè)定發(fā)揮藥效所需的給予量。能夠避免必要量以 上的給予，且能夠減少副作用。并且，通過(guò)預(yù)測(cè)是否有感受性，能夠避免向?qū)衔顰或其鹽 或其水合物沒(méi)有感受性的患者的不必要的給藥。
[0101 ]本發(fā)明的測(cè)定方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定血液中所含的微量的XMP的量。
[0102] 本發(fā)明的預(yù)測(cè)裝置為使用血液作為試樣的裝置，由此，能夠用于通過(guò)簡(jiǎn)便的操作 在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，能夠用 于通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否 有感受性。
[0103] 本發(fā)明的處置劑及處置方法用于被預(yù)測(cè)為對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處 置有感受性的MDS患者的處置，因此能夠避免向?qū)衔顰或其鹽或其水合物沒(méi)有感受性的 患者的不必要的給藥。
[0104] 本發(fā)明的方法及處置劑按照常規(guī)方法能夠應(yīng)用于MDS患者的處置用的試劑盒。
【附圖說(shuō)明】
[0105] 圖1表示化合物A的抗腫瘤效果。
[0106] 圖2表示PK/H)分析的結(jié)果(PK參數(shù):Cmax)。
[0107]圖3表示PK/H)分析的結(jié)果(PK參數(shù):Time above IC50)。
[0108] 圖4表示PK/H)分析的結(jié)果(PK參數(shù):AUCo-48)。
[0109] 圖5表示XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及人血液(試樣）中所含的XMP的測(cè)定結(jié)果(測(cè)定條件:A、B)。
[0110] 圖6表示XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及人血液(試樣）中所含的XMP的測(cè)定結(jié)果(測(cè)定條件:C、D)。
[0111] 圖7表示XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及人血液（試樣）中所含的XMP的測(cè)定結(jié)果（測(cè)定條件:A'、 B，）。
[0112] 圖8表示人血液中所含的XMP的測(cè)定結(jié)果(LC條件:a、b)。
【具體實(shí)施方式】
[0113] 以下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。另外，本說(shuō)明書(shū)中，"~"是以將其前后所記載的數(shù) 值作為下限值及上限值而包含的含義來(lái)使用。
[0114] 處置是指對(duì)疾病的預(yù)防或治療等。
[0115] 處置劑是指針對(duì)疾病以預(yù)防或治療等為目的而給予的物質(zhì)。
[0116]處置期間是指實(shí)施處置的期間。
[0117]離子強(qiáng)度例如包含從LC-MS法中的色譜圖得到的峰面積或MS譜圖上的相應(yīng)的離子 的強(qiáng)度。
[0118] XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指測(cè)定血液中所含的XMP時(shí)所使用的標(biāo)樣。作為XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可以 舉出市售的黃苷一磷酸的鈉鹽等。
[0119] (1)預(yù)測(cè)對(duì)MD S患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的方法、以及 預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的方法
[0120] 在本發(fā)明的方法中，作為(a)工序，測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前 的患者中采集的血液中所含的XMP的量、以及(ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的 患者中采集的血液中所含的XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或 其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量。
[0121] 作為化合物A的鹽，可以舉出通常已知的堿性基團(tuán)或酸性基團(tuán)中的鹽。作為堿性基 團(tuán)的鹽，例如可以舉出與鹽酸、溴化氫、磷酸及硫酸等無(wú)機(jī)酸的鹽;與酒石酸、甲酸、乙酸、富 馬酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、三氯乙酸及三氟乙酸等有機(jī)羧酸的鹽;及與甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯 磺酸、均三甲苯磺酸及萘磺酸等磺酸的鹽等。作為酸性基團(tuán)的鹽，例如可以舉出與鈉及鉀等 堿金屬的鹽;與鈣及鎂等堿土類金屬的鹽;銨鹽;及與三甲胺、三乙胺、三丁胺、氨丁三醇、吡 啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二乙胺、二環(huán)己胺、普魯卡因、二芐胺、N-芐 基-0-苯乙胺及N，N'_二芐基乙二胺等含氮有機(jī)堿的鹽等。作為優(yōu)選的鹽，可以舉出藥理學(xué) 上容許的鹽。
[0122] 化合物A或其鹽或其水合物例如能夠通過(guò)日本特開(kāi)昭53-32124號(hào)公報(bào)、日本特開(kāi) 昭58-24569號(hào)公報(bào)、國(guó)際公開(kāi)第2009/035168號(hào)小冊(cè)子或國(guó)際公開(kāi)第2013/047758號(hào)小冊(cè)子 等中所記載的方法來(lái)制造。
[0123] 本發(fā)明的特征之一在于以血液中所含的XMP的量作為指標(biāo)。為了準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)對(duì)MDS 的藥物的有效給予量及對(duì)藥物的感受性，優(yōu)選使用作為病灶的骨髓的骨髓細(xì)胞來(lái)評(píng)價(jià) 頂PDH抑制效果，但骨髓細(xì)胞的采集對(duì)患者帶來(lái)的身體上、精神上的負(fù)荷較大，因此頻度受 限。因此，在IMPDH抑制效果的評(píng)價(jià)中通常無(wú)法獲得所需的骨髓細(xì)胞。本發(fā)明中，首次發(fā)現(xiàn)化 合物A或其鹽或其水合物的IMTOH抑制效果在骨髓細(xì)胞和末梢血的血液細(xì)胞中相等。由此， 能夠根據(jù)血液細(xì)胞中的IMPDH抑制效果來(lái)預(yù)測(cè)骨髓細(xì)胞中的IMPDH抑制效果，從而預(yù)測(cè)對(duì) MDS的藥物的有效給予量及對(duì)藥物的感受性。本發(fā)明中所使用的血液并沒(méi)有特別限定，例如 可以是末梢血、骨髓、淤積在脾臟或肝臟中的血液、淋巴液、組織液或臍帶血，但優(yōu)選為末梢 血。從患者中的血液的采集能夠通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行。并且，從通過(guò) 簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行預(yù)測(cè)的觀點(diǎn)考慮，本發(fā)明中所使用的血液優(yōu)選全血。
[0124] 本發(fā)明中的（a)工序能夠用以下兩個(gè)方式中的任意一種進(jìn)行。第一方式為測(cè)定從 給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的XMP的量、及從給予化合 物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的XMP的量的方式。
[0125] 第二方式為測(cè)定從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所 含的XMP的量、及使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的 患者中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量的方式。
[0126] 在第一方式中，給予患者的化合物A或其鹽或其水合物在患者體內(nèi)與血液細(xì)胞接 觸而發(fā)揮其作用。在第二方式中，使化合物A或其鹽或其水合物在生物體外與從給予化合物 A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液接觸，由此化合物A或其鹽或其水合物對(duì)血液 細(xì)胞發(fā)揮作用。
[0127] 在本發(fā)明中，XMP的量例如能夠通過(guò)MS法來(lái)測(cè)定。血液試樣可以在利用MS法進(jìn)行測(cè) 定之前進(jìn)行蛋白質(zhì)的去除等試樣的粗分離，也可以通過(guò)LC等進(jìn)行試樣中的成分的分離。
[0128] 血液中所含的蛋白質(zhì)、肽及脂質(zhì)為MS測(cè)定的代表性阻礙成分，因此這些阻礙成分 能夠通過(guò)試樣的粗分離來(lái)預(yù)先去除。例如，能夠通過(guò)分離處理(基于離心分離的細(xì)胞成分的 分離、基于溶血操作的液性成分和/或紅血球的去除等）、過(guò)濾、脫蛋白質(zhì)處理、液相萃取和/ 或固相萃取等來(lái)進(jìn)行粗分離。并且，也可以與后述的成分的分離及檢測(cè)操作的同時(shí)，通過(guò)預(yù) 柱或柱切換等在線進(jìn)行試樣的粗分離。
[0129] 另外，在本發(fā)明中，優(yōu)選通過(guò)LC分離出試樣中的成分之后，將試樣供給給MS裝置。
[0130] 作為試樣中的成分的分離方法，可以使用HILIC、反相色譜(RP)、使用離子對(duì)試劑 的色譜或離子交換色譜等。只要可以得到所需分離和性能且能夠用可導(dǎo)入到MS中的流動(dòng)相 組成來(lái)洗脫，則模式及測(cè)定條件并沒(méi)有特別限定。并且，也可以使用毛細(xì)管電泳或氣相色譜 等分離法。
[0131 ]在XMP的測(cè)定中能夠檢測(cè)的摻雜物，可以舉出質(zhì)量與XMP近似的化合物、通過(guò)分解 等生成質(zhì)量與XMP近似的化合物的化合物和/或LC的洗提時(shí)間與XMP近似的化合物等。作為 質(zhì)量與XMP近似的化合物，例如可以舉出GMP的同位素等。作為通過(guò)分解等生成質(zhì)量與XMP近 似的化合物的化合物，例如可以舉出GDP的同位素及GTP的同位素等。作為L(zhǎng)C的洗提時(shí)間與 XMP近似的化合物，例如可以舉出還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)等。
[0132] 通過(guò)MS法測(cè)定XMP的量的工序優(yōu)選在能夠區(qū)分測(cè)定血液中所含的摻雜物與XMP的 條件下進(jìn)行。通過(guò)本發(fā)明人等的驗(yàn)證明確如下:在XMP(質(zhì)量364.04)的測(cè)定中能夠檢測(cè)的摻 雜物中含有結(jié)構(gòu)類似且質(zhì)量小于1的GMP(質(zhì)量363.06)的同位素（質(zhì)量364.06及質(zhì)量 364.06)、GDP及GTP的源內(nèi)分解物(在電離部分解而產(chǎn)生GMP。）的同位素及源自NADPH的2價(jià) 離子。
[0133] 在進(jìn)行LC-MS測(cè)定時(shí)，優(yōu)選避免摻雜物的影響并選擇性地檢測(cè)XMP。在本發(fā)明中，通 過(guò)建立驗(yàn)證是否能夠以充分的特異性檢測(cè)XMP的方法，即使在存在多種且大量的摻雜物的 條件下，也能夠選擇性地、高靈敏度且簡(jiǎn)便地將XMP進(jìn)行定量。
[0134] 優(yōu)選測(cè)定XMP的量的工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍?br>[0135] (al)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP;
[0136] (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離 子強(qiáng)度比；及
[0137] (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。
[0138] 關(guān)于包含(al)~(a3)的XMP的測(cè)定方法的詳細(xì)內(nèi)容，將在本說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行后述。
[0139] XMP的定量能夠通過(guò)校準(zhǔn)曲線法(外標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法或內(nèi)標(biāo)法)或同位素稀釋法 等公知的定量法來(lái)進(jìn)行，并沒(méi)有特別限定。
[0140] 在本發(fā)明中，在(a)工序之后，作為(b)工序，進(jìn)行根據(jù)在(a)工序中所得到的XMP的 量求出XMP的變動(dòng)率的工序。
[0141] 求出變動(dòng)率的方法并沒(méi)有特別限定，例如可以用下述式求出。
[0142] 變動(dòng)率（％ ) = (1-(給予化合物A或其鹽或其水合物之后的XMP的量/給予化合物A 或其鹽或其水合物之前的XMP的量））X 100
[0143] 或
[0144] 變動(dòng)率（％ ) = (1-(接觸化合物A或其鹽或其水合物之后的XMP的量/接觸化合物A 或其鹽或其水合物之前的XMP的量））X 100
[0145] 另外，XMP的量也可以使用每單位血液量的值，但優(yōu)選每單位血液細(xì)胞數(shù)的值。
[0146] 在本發(fā)明中，在(b)工序之后，作為(c)工序，進(jìn)行根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP的 變動(dòng)率預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量、或者根據(jù)在(b)工序中所得到的XMP 的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。
[0147] 例如，（c)工序能夠通過(guò)如下工序來(lái)進(jìn)行：（cl)用函數(shù)表示給予化合物A或其鹽或 其水合物之后的時(shí)間與在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及(c2)根據(jù)在(c 1) 工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，（c)工序能夠通 過(guò)工序來(lái)進(jìn)行：（cl)用函數(shù)表示給予化合物A或其鹽或其水合物之后的時(shí)間與在(b)工序中 所得到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及(c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)患者對(duì)使 用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。
[0148] 并且，（c)工序能夠通過(guò)如下工序來(lái)進(jìn)行：（cl)用函數(shù)表示化合物A或其鹽或其水 合物的接觸時(shí)間與在(b)工序中所得到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及(c2)根據(jù)在(c 1)工序 中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，（c)工序能夠通過(guò)如 下工序來(lái)進(jìn)行：（cl)用函數(shù)表示化合物A或其鹽或其水合物的接觸時(shí)間與在(b)工序中所得 到的XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及(c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化 合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。
[0149] 在(c2)工序中，預(yù)測(cè)XMP的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間內(nèi)XMP成為規(guī)定變動(dòng)率(減少率） 以上的化合物A或其鹽或其水合物的給予量為有效給予量。
[0150] 并且，在(c2)工序中，當(dāng)XMP的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間內(nèi)XMP成為規(guī)定變動(dòng)率(減少 率)以上時(shí)，預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置有感受性。
[0151]規(guī)定處置期間可以根據(jù)生物種類適當(dāng)選擇，例如可以是1天至2個(gè)月，也可以是規(guī) 定處置期間中的規(guī)定比例以上的期間。
[0152]規(guī)定處置期間中的規(guī)定比例以上的期間可以根據(jù)生物種類適當(dāng)選擇，例如可以設(shè) 為規(guī)定處置期間中的40%以上的期間。
[0153] 規(guī)定變動(dòng)率可以根據(jù)生物種類適當(dāng)選擇，例如可以設(shè)為45%以上(優(yōu)選50%以上， 更優(yōu)選55%以上）。
[0154] 例如，在使用化合物A或其鹽或其水合物的處置期間的40%以上的期間內(nèi)，可以將 XMP的變動(dòng)率(減少率)成為45 %以上(優(yōu)選50 %以上，更優(yōu)選55 %以上）的給予量預(yù)測(cè)為有 效給予量。將在此所得的有效給予量的化合物A或其鹽或其水合物給予MDS患者即可。
[0155] 并且，例如在使用化合物A或其鹽或其水合物的處置期間的40%以上的期間內(nèi)，當(dāng) XMP的變動(dòng)率(減少率)成為45 %以上(優(yōu)選50 %以上，更優(yōu)選55 %以上)時(shí)，可以預(yù)測(cè)患者對(duì) 使用化合物A或其鹽或其水合物的處置有感受性。對(duì)被預(yù)測(cè)為有感受性的患者給予化合物A 或其鹽或其水合物即可。
[0156] (2)血液中所含的XMP的量的測(cè)定方法
[0157] 本發(fā)明中所使用的測(cè)定血液中所含的XMP的量的方法為包含如下工序的方法：
[0158] (al)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP;
[0159] (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離 子強(qiáng)度比；及
[0160] (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。
[0161] 在(al)工序中，通過(guò)MS法檢測(cè)XMP。在(al)工序中，在不同的兩種測(cè)定條件下進(jìn)行 測(cè)定，在(a2)工序中，求出不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比，在 (a3)工序中確認(rèn)離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)，由此能夠?qū)MP與摻雜物區(qū)分測(cè)定。
[0162] 在(al)工序中，優(yōu)選通過(guò)LC進(jìn)行試樣的分離，并通過(guò)MS法進(jìn)行檢測(cè)XMP(LC_MS法）。
[0163] 并且，在另一方式中，本發(fā)明的測(cè)定血液中所含的XMP的量的方法可以使用包含如 下工序的方法：
[0164] (al 1)通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及血液中所含的XMP;
[0165] (al2)求出在(all)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子 強(qiáng)度比及血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比；及
[0166] (a 13)比較在(a 12)工序中所得到的XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比與血液中所含的 XMP的離子強(qiáng)度比。
[0167] 在(al2)工序中，求出在(all)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的XMP標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)的離子強(qiáng)度比及血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比，在(al3)工序中，比較在(al2)工序中 所得到的XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比與血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比。
[0168] 在此，當(dāng)血液試樣的離子強(qiáng)度比和XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)時(shí)，可 以判斷為能夠以較高的特異性檢測(cè)血液中的XMP。相反，當(dāng)血液試樣的離子強(qiáng)度比和XMP標(biāo) 準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍外時(shí)，判斷為在取比值的條件中的任意一方或雙方選擇性 不充分。
[0169]作為L(zhǎng)C，可以使用HILIC、RP、使用離子對(duì)試劑的色譜或離子交換色譜等，優(yōu)選為 HILICo
[0170] 作為L(zhǎng)C中所使用的流動(dòng)相，優(yōu)選可以使用堿性水溶液的流動(dòng)相A及含有有機(jī)溶劑 的流動(dòng)相B。
[0171] 流動(dòng)相A的pH值優(yōu)選為7~11，更優(yōu)選為8~11，進(jìn)一步優(yōu)選為8.4~10.4，尤其優(yōu)選 為9.0~9.8〇
[0172] 流動(dòng)相A的pH值根據(jù)所使用的柱的種類進(jìn)行設(shè)定即可。
[0173] LC中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度優(yōu)選為5~300mmol/L，更優(yōu)選為20~200mmol/L。
[0174] 在LC-MS測(cè)定中，通常為了獲得較高的靈敏度而將鹽濃度設(shè)為較低(例如，lOmmol/ L等），但在本發(fā)明中采用比通常高的鹽濃度，由此能夠?qū)MP和摻雜物進(jìn)行分離。
[0175] 作為L(zhǎng)C中所使用的流動(dòng)相A，優(yōu)選含有碳酸氫銨水溶液。
[0176]作為流動(dòng)相B中所使用的有機(jī)溶劑，可以舉出乙腈、甲醇、2-丙醇或乙醇等，優(yōu)選為 乙腈或甲醇，更優(yōu)選為乙腈。
[0177] 在本發(fā)明的一例中，使用HILIC柱(例如，SeQuant ZIC_pHILIC，Merck公司）等，將 50mmol/L碳酸氫銨水溶液（用25質(zhì)量％氨水溶液調(diào)整為pH9.4)及乙腈用作流動(dòng)相，通過(guò)經(jīng) 時(shí)改變流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的比率的梯度法或固定流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的比率的等度法進(jìn)行 洗脫，由此能夠?qū)MP與摻雜物進(jìn)行分離。
[0178]當(dāng)使用乙腈作為流動(dòng)相B時(shí)，流動(dòng)相中的乙腈的濃度優(yōu)選為20~90容量％，更優(yōu)選 為35~70容量％，進(jìn)一步優(yōu)選為65容量％。洗脫也可以通過(guò)經(jīng)時(shí)改變流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的 比率的梯度洗脫來(lái)進(jìn)行，但從提高與摻雜物的分離的方面及能夠在增加注入量的條件下進(jìn) 行分析的方面考慮，優(yōu)選不改變流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的比率的等度法。
[0179] 在本發(fā)明中，通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的XMP。
[0180] 在MS法中，通過(guò)MS裝置將試樣中的成分電離，從而選擇源自XMP的離子進(jìn)行檢測(cè)。 為了從大量且多種的質(zhì)量及結(jié)構(gòu)類似的摻雜物中選擇性地檢測(cè)XMP，優(yōu)選通過(guò)（1)基于MS/ MS模式進(jìn)行測(cè)定、（2)使用高分辨率型MS裝置、（3)使用（1)及(2)，來(lái)確保較高的質(zhì)量過(guò)濾效 果。另外，本發(fā)明的方法的特征在于設(shè)定分離條件和MS條件(檢測(cè)離子和/或離子化條件）， 以便能夠?qū)崿F(xiàn)較高的選擇性。在本發(fā)明的方法中，通過(guò)分離與MS檢測(cè)的組合來(lái)采用能夠區(qū) 分XMP和摻雜物的條件。關(guān)于選擇性是否充分，能夠通過(guò)(al)工序、（a2)工序及(a3)工序所 示的方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。在本發(fā)明中，若LC中的分離充分，則即使在使用藥代動(dòng)力學(xué)中通常使用 的低分辨率的MS裝置的情況下，也能夠準(zhǔn)確地測(cè)定血液中所含的XMP的量。
[0181] 當(dāng)使用三重四極等低分辨率的MS裝置時(shí)，通過(guò)MRM(Multiple Reaction Monitoring)模式等的MS/MS測(cè)定，能夠確保特異性來(lái)進(jìn)行測(cè)定。優(yōu)選在從測(cè)定對(duì)象中產(chǎn)生 的多個(gè)MS/MS產(chǎn)物離子的檢測(cè)等多種條件下進(jìn)行測(cè)定。在分析時(shí)能夠選擇特異性良好的條 件，并且能夠進(jìn)行后述的特異性的驗(yàn)證。
[0182] 使用 Orbitrap 型 MS(例如，Q-Exactive，Thermo 公司）或 T0F 型 MS(例如， 6550iFunnelQ_T0F，Agilent Technologies Japan，Ltd.，SYNAPT，Waters公司）等高分辨率 的裝置的MS/MS測(cè)定或MS測(cè)定能夠以更高的特異性進(jìn)行測(cè)定。裝置的分辨率優(yōu)選較高，優(yōu)選 使用可得到XMP的定量分析中所需的靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍的裝置。
[0183] 在本發(fā)明的（al)工序中，通過(guò)MS法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的 XMP。即，在不同的兩種MS條件下測(cè)定源自XMP的離子。不同的兩種測(cè)定條件優(yōu)選為MS法中的 檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。具體而言，可以舉出在MS/MS測(cè)定中產(chǎn)生 的多個(gè)MS/MS產(chǎn)物離子的測(cè)定、在不同的離子化條件(離子源溫度(渦輪加熱器的氣體溫度） 或離子導(dǎo)入部(孔板(orifice plate))的電壓等）下的測(cè)定及posi模式和nega模式下的測(cè) 定等。例如，當(dāng)測(cè)定多個(gè)MS/MS產(chǎn)物離子時(shí)，可以使用將365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的97.0 (m/z)的產(chǎn)物離子與將365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的153.0(m/z)的產(chǎn)物離子的組合、以及 將365.0 (m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的97.0 (m/z)的產(chǎn)物離子與將365.0 (m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的 213.0 (m/z)的產(chǎn)物離子的組合。當(dāng)測(cè)定全血中的XMP的量時(shí)，優(yōu)選使用將365.0 (m/z)設(shè)為前 體離子時(shí)的97.0 (m/z)的產(chǎn)物離子與將365.0 (m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的213.0 (m/z)的產(chǎn)物離 子的組合。當(dāng)測(cè)定溶血中的XMP的量時(shí)，優(yōu)選使用將365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的97.0(m/ z)的產(chǎn)物離子與將365.0 (m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的153.0 (m/z)的產(chǎn)物離子的組合。
[0184] 在各條件下，為了評(píng)價(jià)是否能夠特異性檢測(cè)XMP(是否檢測(cè)了摻雜物），計(jì)算任意選 擇的兩種測(cè)定條件下的離子強(qiáng)度比并確認(rèn)離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)。即，在本發(fā)明的(a2) 工序中，求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的XMP的離子強(qiáng) 度比，在(a3)工序中，確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范 圍內(nèi)。
[0185] 離子強(qiáng)度比例如能夠用下述式求出。
[0186] 離子強(qiáng)度比=(其他測(cè)定條件的離子的強(qiáng)度)/將(365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的 97.0 (m/z)的產(chǎn)物離子的強(qiáng)度）
[0187] 其中，作為其他條件的離子的強(qiáng)度，例如可以使用將365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí) 的153.0(m/z)的產(chǎn)物離子的強(qiáng)度或?qū)?65.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的213.0(m/z)的產(chǎn)物離 子的強(qiáng)度。
[0188] 在此，當(dāng)血液試樣的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍內(nèi)時(shí)，能夠判斷為能夠以較高的特異 性檢測(cè)血液中的XMP。相反，當(dāng)血液試樣的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍外時(shí)，判斷為在取比值的 條件中的任意一方或雙方選擇性不充分。規(guī)定范圍內(nèi)是指用上述式求出離子強(qiáng)度比時(shí)的離 子強(qiáng)度比小于1的情況。當(dāng)其他條件的離子的強(qiáng)度為將365.0(m/z)設(shè)為前體離子時(shí)的213.0 (m/z)的產(chǎn)物離子的強(qiáng)度時(shí)，優(yōu)選離子強(qiáng)度比為0.1~0.3。為了提高測(cè)定精確度，也能夠?qū)?某一條件改變?nèi)”戎档膶?duì)象并以多個(gè)的組合來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于在XMP的測(cè)定時(shí)能夠檢測(cè)的 GMP等摻雜物，能夠用該方法評(píng)價(jià)有無(wú)重復(fù)。特異性的驗(yàn)證并不限于色譜圖中的峰面積比或 譜圖中的離子強(qiáng)度比，只要是能夠充分評(píng)價(jià)特異性的驗(yàn)證方法，則并沒(méi)有特別限定。若在某 一測(cè)定條件下特異性充分，則可以采用該測(cè)定條件下的結(jié)果。當(dāng)某一測(cè)定條件下的特異性 不充分時(shí)，對(duì)分離、檢測(cè)條件重新研討即可。例如，通過(guò)發(fā)明人等的研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)變更所檢 測(cè)的MS/MS產(chǎn)物離子或者降低離子源的溫度(渦輪加熱器的氣體溫度)及離子導(dǎo)入部(孔板） 的電壓，能夠抑制摻雜物的檢測(cè)。
[0189] 并且，比較XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比與血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比時(shí)的規(guī)定 范圍內(nèi)是指血液中所含的XMP的離子強(qiáng)度比為XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的離子強(qiáng)度比的0.5~1.5的情 況。
[0190] 如上所述，根據(jù)被判斷為特異性充分的通過(guò)MS測(cè)定檢測(cè)出的離子，能夠?qū)MP進(jìn)行 定量。
[0191] (3)用于預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量的裝置、以及用于預(yù)測(cè)對(duì)化 合物A或其鹽或其水合物的感受性的裝置
[0192] 本發(fā)明還提供一種用于預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物A或其鹽或其水合物的有效 給予量的裝置、及用于預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性 的裝置。本發(fā)明的裝置為包含如下機(jī)構(gòu)的裝置：
[0193] (A)測(cè)定（i)從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、以及（ii)從給予化合物A或其鹽或其水合物之后的患者中采集的血液中所含的 XMP的量、或使化合物A或其鹽或其水合物與從給予化合物A或其鹽或其水合物之前的患者 中采集的血液接觸而得到的血液中所含的XMP的量的機(jī)構(gòu)；
[0194] (B)根據(jù)由(A)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的量求出XMP的變動(dòng)率的機(jī)構(gòu);及
[0195] (C)根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)化合物A或其鹽或其水合 物的有效給予量的機(jī)構(gòu)、或預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受 性的機(jī)構(gòu)。
[0196] (A)中所記載的機(jī)構(gòu)只要是能夠測(cè)定血液中所含的XMP的量的機(jī)構(gòu)，則并沒(méi)有特別 限定，例如可以使用MS裝置等，進(jìn)而，也可以使用將分離裝置和MS裝置組合而得到的裝置。 作為分離裝置，可以使用高速液相色譜裝置、毛細(xì)管電泳或氣相色譜裝置等。優(yōu)選為L(zhǎng)C-MS 裝置。
[0197] MS裝置通常具有試樣導(dǎo)入部、離子源、分析部、離子檢測(cè)部及數(shù)據(jù)處理部。
[0198] 試樣導(dǎo)入部為將試樣導(dǎo)入到MS裝置內(nèi)的部位。例如，也可以將MS裝置連結(jié)于高速 液相色譜裝置、毛細(xì)管電泳或氣相色譜裝置并從這些裝置將試樣導(dǎo)入到MS裝置中。
[0199] 離子源為對(duì)試樣帶來(lái)電荷的部位，已知有電子電離法(EI法）、化學(xué)電離法(CI法）、 場(chǎng)解吸法(FD法）、快原子轟擊法(FAB法）、基質(zhì)輔助激光解吸電離法(MALDI法）、大氣壓電離 法(APPI法）、大氣壓化學(xué)電離法(APCI法)及電噴霧電離法(ESI法)等。作為用作LC-MS法的 離子源，可以使用APPI法、APCI法或ESI法，優(yōu)選ESI法。
[0200] 分析部為分離出電離的試樣的部位。已知有磁場(chǎng)偏轉(zhuǎn)型、四極型、離子阱型、飛行 時(shí)間型、傅里葉變換離子回旋共振型及串聯(lián)型等。
[0201] 檢測(cè)部為用電倍增管或微通道板將由分析部分選的離子增感后進(jìn)行檢測(cè)的部位。
[0202] 數(shù)據(jù)處理部為根據(jù)所得到的數(shù)據(jù)制作質(zhì)譜圖的部位。
[0203] (B)中所記載的作為求出XMP的變動(dòng)率的機(jī)構(gòu)，只要是能夠根據(jù)所得到的XMP的量 及上述式求出變動(dòng)率的機(jī)構(gòu)即可，例如可以使用具有計(jì)算軟件或程序的電子計(jì)算機(jī) (computer)〇
[0204] (C)中記載的作為根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的XMP的變動(dòng)率預(yù)測(cè)化合物A或 其鹽或其水合物的有效給予量的機(jī)構(gòu)、或預(yù)測(cè)患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處 置是否有感受性的機(jī)構(gòu)，只要是能夠根據(jù)XMP的變動(dòng)率基于規(guī)定基準(zhǔn)預(yù)測(cè)有效給予量或感 受性的機(jī)構(gòu)，則并沒(méi)有特別限定。例如，可以使用通用的計(jì)算軟件等來(lái)進(jìn)行。例如，可以使用 包含如下機(jī)構(gòu)且具有程序的電子計(jì)算機(jī)(computer):用函數(shù)表示給予化合物A或其鹽或其 水合物之后的時(shí)間或接觸時(shí)間與XMP的變動(dòng)率之間的關(guān)系的機(jī)構(gòu);及根據(jù)所得到的函數(shù)預(yù) 測(cè)化合物A或其鹽或其水合物的有效給予量、或?qū)κ褂没衔顰或其鹽或其水合物的處置有 無(wú)感受性的機(jī)構(gòu)。
[0205] (4)有效成分為化合物A的MDS的處置劑及有效成分為化合物A的MDS的處置方法
[0206] 本發(fā)明還提供一種包含預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是 否有感受性的工序的、有效成分為化合物A的MDS的處置劑及有效成分為化合物A的MDS的處 置方法。
[0207] 本發(fā)明的預(yù)測(cè)MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的 工序如上所述。
[0208] 當(dāng)被預(yù)測(cè)為MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置有感受性時(shí)，有效成 分為化合物A的MDS的處置劑用于患者的處置。
[0209] 當(dāng)將化合物A或其鹽或其水合物用作MDS的處置劑時(shí)，通?？梢赃m當(dāng)混合在制劑化 中使用的賦形劑、載體及稀釋劑等制劑輔助劑。它們可以按照常規(guī)方法以片劑、膠囊劑、散 劑、糖漿劑、顆粒劑、丸劑、懸浮劑、乳劑、液劑、粉體制劑、栓劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、貝占 劑、軟膏劑或注射劑等形態(tài)口服或非口服給藥。并且，給藥方法、給予量及給藥次數(shù)可以根 據(jù)患者的年齡、體重及癥狀適當(dāng)選擇，優(yōu)選選擇在處置期間的40%以上的期間內(nèi)XMP的變動(dòng) 率(減少率)成為45 %以上(優(yōu)選50 %以上，更優(yōu)選55 %以上）的給予量。
[0210] 通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行具體的說(shuō)明，但本發(fā)明并不限定于這些。
[0211] 超濾管使用UltrafreeMC-PLHCC 250/pk for Metabolome Analysis(Human Metabolome Technologies，Inc?)〇
[0212] 離心蒸發(fā)器使用miVac Duo HV(Genevac Ltd.) 〇
[0213] PBS溶液使用PBS、pH7 ? 4(Thermo Fisher Scientific K.K.) 〇 [0214]實(shí)施例
[0215]實(shí)施例1化合物A的細(xì)胞增殖抑制作用
[0216] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0217] 使用SKM-1 (獨(dú)立行政法人醫(yī)藥基礎(chǔ)研究所(National Institute of Biomedical Inno vat i on) JCRB細(xì)胞庫(kù))作為人骨髓性白血病細(xì)胞株。
[0218] 將人骨髓性白血病細(xì)胞株SKM-1以90此(5000個(gè))接種在96孔板上。將試驗(yàn)化合物 的 PBS 溶液(作為化合物 A為0、1、3、10、30、100、300、1000、3000或10000_〇1/1)10此加入板 中，并在37°C、5%C〇2下孵育72小時(shí)。各以 100yL添加Cel ITiter-Glo (Promega Corporation)來(lái)制作細(xì)胞破碎液。
[0219] 通過(guò)讀板器求出化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)值。
[0220]化合物A的IC5Q值為21.5wnol/L(作為化合物A為2.73yg/mL)?；衔顰顯示優(yōu)異的 增殖抑制活性。
[0221] 實(shí)施例2基于PK/PD分析（藥代動(dòng)力學(xué)（Pharmacokinetics)/藥效動(dòng)力學(xué) (Pharmacodynamics)分析)的藥物濃度預(yù)測(cè)
[0222] (1)化合物A的抗腫瘤效果
[0223] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0224]使用SKM-1細(xì)胞作為人骨髓性白血病細(xì)胞。
[0225] 將人骨髓性白血病細(xì)胞5.0X106個(gè)移植到雌性裸小鼠（BALB/cAJcl-nu/nu)的右 側(cè)腹部皮下，以形成皮下腫瘤。移植后第9天進(jìn)行分組，以1組10只的方式作成7組。將組構(gòu)成 示于表1。移植后第10天起間歇口服給藥(給予2天之后停藥4天，將此作為1個(gè)療程，合計(jì)5個(gè) 療程)對(duì)照溶劑(0.5w/v%甲基纖維素400水溶液，以下也稱作"0.5%MC"。）或試驗(yàn)化合物， 測(cè)定移植后第39天的腫瘤體積，并評(píng)價(jià)抗腫瘤效果。用下式計(jì)算抑制率。
[0226]抑制率（％) = (1_(移植后第39天的腫瘤體積）八組1的移植后第39天的腫瘤體 積））X100 [0227][表 1]
[0229] *1)給予 〇.5%MC
[0230] 將移植后第39天的腫瘤體積示于圖1。
[0231] 組4、組5、組6及組7顯示優(yōu)異的抗腫瘤效果。
[0232] (2)化合物A的PK試驗(yàn)
[0233] 對(duì)非禁食狀態(tài)的雌性小鼠（BALB/cAJcl)單次口服給藥試驗(yàn)化合物(作為化合物A 為10、40、80及160mg/kg)。在5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、5小時(shí)、10小時(shí)或24小時(shí) 后進(jìn)行肝素采血之后，使用LC/MS/MS測(cè)定血漿中的化合物A的濃度，從而計(jì)算PK參數(shù)(t max、 Cmax、tl/2及AUC〇-24)。
[0234] (3)PK/TO 分析
[0235] 根據(jù)單次口服給藥化合物A時(shí)的血衆(zhòng)中濃度變化，計(jì)算作為two-compartment model的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的￥1/^、1(()1、1(1()、1(12及1(21。使用這些參數(shù)，預(yù)測(cè)各種用法、用量下反 復(fù)給藥時(shí)的化合物A的血衆(zhòng)中濃度變化。另外，從10mg/kg至80mg/kg，觀察到線性，因此使用 給予10mg/kg的參數(shù)來(lái)進(jìn)行20、40及8〇11^/1^的反復(fù)給藥時(shí)的預(yù)測(cè)。對(duì)于12〇11^/1^及24〇11^/ kg，使用160mg/kg的參數(shù)來(lái)進(jìn)行預(yù)測(cè)。根據(jù)所得到的化合物A的血漿中濃度變化來(lái)計(jì)算C max (ng/mL)、AUC〇-48(ng ?小時(shí)/mL)及Time above IC5Q(%、IC5〇值：21.5iimol/L(作為化合物A為 2.73yg/mL))。將PK參數(shù)Cmax、Time above IC5Q及AUC〇-48)繪制在X軸上，并將腫瘤體積的抑制 率繪制在Y軸上。將結(jié)果示于圖2、圖3及圖4。
[0236] 根據(jù)(：_與抑制率的相關(guān)系數(shù)為-0.5447、111116&13(^1(：5()與抑制率的相關(guān)系數(shù)為 0.9814、AUC〇-48與抑制率的相關(guān)系數(shù)為0.4684，可知Time above IC5〇為與抑制率相關(guān)性最 大的參數(shù)。
[0237] 并且，在Time above IC5Q為40%以上的組中腫瘤體積在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著得到抑制。 據(jù)此，預(yù)測(cè)人血漿中的藥物濃度在處置期間中的40%以上的期間內(nèi)作為化合物A維持2.73y g/mL以上是非常重要的。
[0238] 實(shí)施例3 XMP的定量
[0239] (1-1)將通過(guò)添加肝素的采血從健康人中采集的血液450yL及ros溶液50yL加入管 中，并在37°C的恒溫箱中攪拌8小時(shí)。
[0240] (1-2)向在（1-1)中所得到的試樣100此中添加甲醇400此。用旋渦混合器攪拌之 后，添加氯仿400此，用旋渦混合器攪拌之后，添加超純水120此。用旋渦混合器攪拌之后，在 4°C、10000 X g下離心分離15分鐘?；厥账?00yL，添加到超濾管中，在12 °C、9200 X g下離 心分離2小時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器在40 °C下減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的 冷凍庫(kù)中。
[0241] (1-3)將試樣溶解于水中，離心分離之后，回收上清液，作為測(cè)定試樣。將測(cè)定試樣 及XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)供給至LC-MS/MSJMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用XMP (黃苷-S'-單磷酸脂，鈉鹽 (Xanthosine-57 -monophosphate, Sodium salt)) (Jena Bioscience GmbH)。以下不出裝置 結(jié)構(gòu)及測(cè)定條件。
[0242] (LC-MS/MS)
[0243] LC：UFLC(Shimadzu Corporation)
[0244] MS:QTRAP 5500(AB Sciex公司）
[0245] (LC)
[0246] 柱：SeQuant ZIC-pHILIC 5um，聚合物（polymeric)PEEK 150 X 2 ? 1mm不含金屬 (metal-free)的HPLC 柱（column) (Merck 公司）
[0247] 柱溫箱溫度:40°C
[0248] 流動(dòng)相A: 50mmol/L碳酸氫銨(用25質(zhì)量％氨水溶液調(diào)整為pH9.4)
[0249]流動(dòng)相B:乙腈
[0250] 送液條件:0.3mL/分鐘
[0251 ]將梯度循環(huán)示于表2。表2中的％表示體積％。
[0252][表 2]
[0254] (MS/MS)
[0255] 電離:ESI正極（電噴霧電離正極:Electrospray ionization positive)
[0256] 掃描模式;MRM(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式:Multiple Reaction Monitoring)
[0257] 將測(cè)定條件示于表3。
[0258] [表 3]
[0260]將（1-3)中所得到的測(cè)定結(jié)果示于圖5。
[0261] (1-4)分析 1
[0262] 在試樣的色譜圖中觀察到多個(gè)靠近峰。根據(jù)XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰推斷試樣的XMP的 峰，并計(jì)算面積。為了驗(yàn)證特異性，計(jì)算測(cè)定條件B下的峰面積與測(cè)定條件A下的峰面積之比 (B/A)。將結(jié)果不于表4。
[0263] [表 4]
[0265] 試樣的峰面積比（B/A)為1.2。根據(jù)試樣的峰面積比為1以上，判定為在測(cè)定條件A 及B中的任意一方或雙方中特異性不充分(摻雜物被重疊檢測(cè)出。）。
[0266] (1-5)分析 2
[0267] 在測(cè)定條件C及D下測(cè)定XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及在(3)中所得到的試樣。將測(cè)定條件C及D示 于表5。將XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試樣的測(cè)定結(jié)果示于圖6及表6。
[0272] 試樣的峰面積比(D/C)為0.4。根據(jù)試樣的峰面積比小于1，判定為特異性良好。
[0273] 根據(jù)該結(jié)果，判定為能夠利用測(cè)定條件C及D測(cè)定XMP的量。
[0274] (2-1)在表7所示的測(cè)定條件下進(jìn)行測(cè)定，除此以外，與（1-1)~（1-3)中記載的方 法同樣地制作試樣，并測(cè)定試樣的XMP。
[0277] 將(2-1)中所得到的測(cè)定結(jié)果示于圖7。
[0278] (2-2)分析
[0279] 為了驗(yàn)證特異性，計(jì)算測(cè)定測(cè)定條件B'下的峰面積與條件A'下的峰面積之比(B'/ A )。將結(jié)果不于表8。
[0280] [表 8]
[0282] 試樣的峰面積比（BVA')為0.2。根據(jù)試樣的峰面積比在0.1~0.3的范圍內(nèi)，判定 為特異性極其良好。
[0283] 根據(jù)該結(jié)果，判定為能夠利用測(cè)定條件A'及B'測(cè)定XMP的量。
[0284] 實(shí)施例4使用化合物A的3/4水合物作為人骨髓性白血病細(xì)胞中的XMP與健康人的 血液細(xì)胞中的XMP試驗(yàn)化合物。
[0285] 使用K562(獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所生物資源中心（RIKEN BioResource Center))作為人骨髓性白血病細(xì)胞。
[0286] (1)
[0287] 將人骨髓性白血病細(xì)胞2 X 107個(gè)懸浮于放入有RPMI 1640培養(yǎng)基（Life Technologies Corporation) 18mL的培養(yǎng)瓶中。將試驗(yàn)化合物的PBS溶液(作為化合物A為0、 10、100或1000yg/mL)2mL加入燒瓶中，并在37°C、5%C〇2條件下孵育24小時(shí)。在20°C、300Xg 下離心分離3分鐘之后，去除上清液，懸浮于PBS溶液10mL中。其后，在4°C、300Xg下離心分 離5分鐘之后，去除上清液。添加甲醇1000yL并進(jìn)行攪拌之后，添加超純水500此，進(jìn)一步進(jìn) 行攪拌。各以600yL分配到兩個(gè)管中，向各個(gè)管中添加氯仿400此并攪拌之后，在4°C、10000 Xg下離心分離15分鐘?；厥账?00yL，添加到超濾管中，在12°C、9200Xg下離心分離2小 時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器在40 °C下減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0288] (2)
[0289] 將通過(guò)添加肝素的采血從2名健康人中采集的血液(檢體A及檢體B)各以450yL加 入1.5mL管中，并將試驗(yàn)化合物的PBS溶液(作為化合物A為0、10、30、100、30(M100 0yg/mL) 分別以各濃度50yL加入管中。在37 °C下，在恒溫箱中攪拌8小時(shí)。其后，向血液中加入BD Pharm Lyse(555899，Becton，Dickinson and Company)(對(duì)血液0.2mL添加BD Pharm Lyse 2mL)。用旋渦混合器進(jìn)行攪拌之后，遮光，在室溫下靜置15分鐘。在20°C、1000 X g下離心分 離5分鐘之后，去除上清液，懸浮于PBS溶液10mL中。在4°C、1000Xg下離心分離5分鐘之后， 去除上清液，向各自之中添加甲醇1〇〇〇此并進(jìn)行攪拌之后，添加超純水500yL，進(jìn)一步進(jìn)行 攪拌。各以600iiL分配到兩個(gè)管中，向各自之中添加氯仿400此并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、 10000Xg下離心分離15分鐘。回收水相400yL，添加到超濾管中，并在12°C、9200Xg下離心 分離2小時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器在40 °C下減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷 凍庫(kù)中。
[0290] (3)
[0291] 使在（1)及(2)中保存的試樣恢復(fù)室溫，向各自之中加入超純水40yL并進(jìn)行攪拌， 在4°C、21500Xg下離心分離5分鐘。將上清液35yL移到玻璃小瓶中，在4°C下保存之后，在實(shí) 施例3 (3)中所記載的LC-MS/MS測(cè)定裝置、LC條件及MS/MS條件下測(cè)定試樣中的XMP。
[0292] (4)
[0293] 將化合物A未處理組的XMP的值(峰面積值)設(shè)為100%來(lái)計(jì)算XMP的量（％ )。
[0294] 將結(jié)果示于表9。
[0295] [表 9]
[0297] 健康人的血液細(xì)胞及人骨髓性白血病細(xì)胞中的XMP的量的變動(dòng)相等。這暗示著通 過(guò)測(cè)定末梢血中的血液細(xì)胞中的變動(dòng)，能夠預(yù)測(cè)MDS患者的骨髓中的未成熟細(xì)胞(Blast)中 XMP相對(duì)于化合物A的量的變動(dòng)。
[0298] 實(shí)施例5溶血后的血液細(xì)胞中的XMP與全血中的XMP
[0299] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0300] (1)
[0301]將通過(guò)添加肝素的采血從2名健康人中采集的血液(檢體A及檢體B)各以450yL加 入管中，并將試驗(yàn)化合物的PBS溶液(作為化合物A為0、10、30、100、300或1000yg/mL)分別以 各濃度50yL加入管中。在37 °C下，在恒溫箱中攪拌8小時(shí)。
[0302] (2-1)
[0303] 向（1)中所得到的血液樣品中加入BD Pharm Lyse(555899、Becton，Dickinson and Company)(對(duì)血液0.2mL添加BD Pharm Lyse 2mL。）。用旋禍混合器進(jìn)行攪拌之后，遮 光，在室溫下靜置15分鐘。在20°C、1000 Xg下離心分離5分鐘之后，去除上清液，懸浮于 PBSlOmL中。在20°C、1000 X g下離心分離5分鐘之后，去除上清液，懸浮于roSlOmL中。在4°C、 1000 Xg下離心分離5分鐘之后，去除上清液，向各自之中添加甲醇1000yL并進(jìn)行攪拌之后， 添加超純水500yL，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。各以600此分配到兩個(gè)管中，向各自之中添加氯仿400ii L并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、10000Xg下離心分離15分鐘。回收水相400此，添加到超濾管（用 于代謝組分析（Metabolome Analysis)的UltrafreeMC-PLHCC 250/pk(Human Metabolome Technologies，Inc.))中，并在12°C、9200 Xg下離心分離2小時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器 在40 °C下減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0304] (2-2)
[0305]向（1)中所得到的血液樣品100yL中添加400yL的甲醇并進(jìn)行攪拌之后，添加400yL 的氯仿，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。添加120yL的超純水并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、10000 X g下離心分 離15分鐘?；厥账?00此，添加到超濾管中，并在12°C、9200Xg下離心分離2小時(shí)。使用離 心蒸發(fā)器在40 °C下將濾液減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0306] (3)
[0307] 使(2-1)及(2-2)中所得到的試樣恢復(fù)室溫，向各自之中加入超純水40此并進(jìn)行攪 拌，在4°C、21500 X g下離心分離5分鐘。將上清液35yL移到玻璃小瓶中，在4°C下保存之后， 在實(shí)施例3 (3)中所記載的LC-MS/MS測(cè)定裝置、LC條件及MS/MS條件下測(cè)定試樣中的XMP。 [0308] (4)
[0309] 將化合物A未處理組中的XMP的量設(shè)為100%來(lái)計(jì)算XMP的量（％ )。
[0310] 將結(jié)果示于表10。
[0311][表 10]
[0313] 溶血后的血液細(xì)胞中的XMP的量與全血中的XMP的量大致相等。全血中的XMP量反 映血液細(xì)胞中的XMP的量。
[0314] 實(shí)施例6血液細(xì)胞中的XMP與骨髓細(xì)胞中的XMP
[0315] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0316] (1)
[0317] 對(duì)雌性小鼠（BALB/cAJc 1) 口服給藥0.5 %MC或試驗(yàn)化合物的0.5 %MC(作為化合物 A為 100mg/kg)。
[0318] (2-1)
[0319]給藥后經(jīng)1、4、8或24小時(shí)之后，在基于異氟烷吸入的麻醉下，使用由乙二胺四乙酸 二鈉鹽處理的聚丙烯制注射筒及25號(hào)(gauge)的注射針，從后大靜脈進(jìn)行全血采集。向血液 中加入BD Pharm Lyse(555899，Becton，Dickinson and Company)(對(duì)0.2mL的血液添加2mL 的BD Pharm Lyse。）。用旋渦混合器進(jìn)行攪拌之后，遮光，在室溫下靜置15分鐘。在20°C、 1000 Xg下離心分離5分鐘之后，去除上清液，懸浮于PBS溶液10mL中。在4°C、1000 Xg下離心 分離5分鐘之后，去除上清液，向各自之中添加1000yL的甲醇并進(jìn)行攪拌之后，添加500yL的 超純水，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。各以600此分配到2個(gè)管中，向各自之中添加400此的氯仿并進(jìn)行 攪拌之后，在4°C、10000 Xg下離心分離15分鐘。回收水相400yL，添加到超濾管中，并在12 °C、9200Xg下離心分離2小時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器在40°C下減壓干燥2小時(shí)。干燥 后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0320] (2-2)
[0321] 給藥后經(jīng)1、4、8或24小時(shí)之后，在基于異氟烷吸入的麻醉下，采集左右大腿骨，切 斷骨端，在4°C、3000rpm下離心分離1分鐘，回收骨髓細(xì)胞。懸浮于lmL的roS中，將細(xì)胞數(shù)進(jìn) 行計(jì)數(shù)。在4 °C、1000 X g下離心分離5分鐘之后，去除上清液，向各自之中添加1000yL的甲醇 并進(jìn)行攪拌之后，添加500yL的超純水，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。各以600yL分配到兩個(gè)管中，向各 自之中添加400yL的氯仿并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、10000 X g下離心分離15分鐘。回收水相 400此，添加到超濾管中，在12°C、9200Xg下離心分離2小時(shí)。合并濾液，使用離心蒸發(fā)器在 40 °C下減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0322] (3)
[0323] 使（2-1)及（2-2)中所得到的試樣恢復(fù)室溫，并將40此超純水加入溶血樣品中，將 150yL超純水加入骨髓樣品中。攪拌后，在4 °C、21500 X g下離心分離5分鐘。對(duì)于溶血樣品， 將上清液35yL移到玻璃小瓶中，對(duì)于骨髓樣品，將上清液140此移到玻璃小瓶中，在4°C下保 存之后，在實(shí)施例3 (3)中所記載的LC-MS/MS測(cè)定裝置、LC條件及MS/MS條件下測(cè)定試樣中的 XMP〇
[0324] (4)
[0325] 將化合物A未處理組中的XMP的量設(shè)為100%來(lái)計(jì)算XMP的量（％ )。
[0326] 將結(jié)果示于表11。
[0327] [表 11]
[0329]血液細(xì)胞及骨髓細(xì)胞中的XMP的變動(dòng)相等。暗示著血液細(xì)胞中的XMP相對(duì)于化合物 A的變動(dòng)反映骨髓細(xì)胞中的變動(dòng)。
[0330]根據(jù)實(shí)施例4、實(shí)施例5及實(shí)施例6的結(jié)果，顯示末梢血全血的XMP的變動(dòng)反映MDS患 者骨髓的未成熟細(xì)胞中的XMP的變動(dòng)。
[0331] 實(shí)施例7人骨髓性白血病細(xì)胞中的XMP
[0332] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0333]使用SKM-1作為人骨髓性白血病細(xì)胞。
[0334] (1)
[0335] 將人骨髓性白血病細(xì)胞2 X 107個(gè)懸浮于放入有RPMI 1640培養(yǎng)基（Life Technologies Corporation) 18mL的培養(yǎng)瓶中。將試驗(yàn)化合物的PBS溶液(作為化合物A為0、 10、30、100、300或1000邱/111〇21^加入燒瓶中，并在37°(：、5%0) 2的條件下孵育24小時(shí)。在20 °C、300Xg下離心分離3分鐘之后，去除上清液，懸浮于PBS溶液10mL中。分取10此，使用TC10 (BioRad Laboratories，Inc.)測(cè)量細(xì)胞數(shù)。在300 Xg下離心分離5分鐘之后，去除上清液。 添加甲醇1 〇〇〇此并進(jìn)行攪拌之后，添加超純水500此，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。各以600此分配到兩 個(gè)管中，向各自之中添加400yL的氯仿并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、10000 Xg下離心分離15分 鐘。回收水相400此，添加到超濾管中，并在12°C、9200Xg下離心分離2小時(shí)。將濾液合并到 一個(gè)管中，使用離心蒸發(fā)器在40°C下減壓干燥約2小時(shí)。干燥后，保存在-80°C的冷凍庫(kù)中。
[0336] (2)
[0337] 使（1)中所得到的試樣恢復(fù)室溫，向各自之中加入含有4ng/此2~氟_2~脫氧胞苷 一磷酸的5mmol/L甲酸銨50此并進(jìn)行攪拌。將上清液12.5此移到玻璃小瓶中，在以下測(cè)定條 件下測(cè)定試樣中的XMP。
[0338] (LC-MS/MS)
[0339] LC：UFLC(Shimadzu Corporation)
[0340] MS:QTRAP3200(AB Sciex公司）
[0341] (LC)
[0342] 柱：SeQuant ZIC-pHILIC 5um，聚合物（polymeric)PEEK 150 X 2 ? 1mm不含金屬 (metal-free)的HPLC 柱(Merck公司）
[0343] 柱溫箱溫度：40 °C
[0344] 流動(dòng)相A:10mmol/L碳酸氫銨（用25質(zhì)量％氨水溶液調(diào)整為pH9.4)
[0345] 流動(dòng)相B:乙腈
[0346] 送液條件:0.5mL/分鐘
[0347] 將梯度循環(huán)示于表12。表12中的％表示體積％。
[0348] [表 12]
[0350] (MS/MS)
[0351] 電離:ESI 正極(positive)
[0352] 掃描模式:MRM
[0353] 將測(cè)定條件示于表13。
[0354] [表 13]
[0357] 將化合物A未處理組的XMP的值設(shè)為100%，并用下式計(jì)算XMP量（％ )。
[0358] XMP的量（％) = ((XMP的峰面積)/((2'_氟_2'_脫氧胞苷一磷酸的峰面積）X(細(xì)胞 數(shù)）））/((未處理組的XMP的峰面積)/((未處理組的2'-氟_2'_脫氧胞苷一磷酸的峰面積）X (未處理組的細(xì)胞數(shù)）））X 100
[0359] 用下式計(jì)算XMP的減少率（％)。
[0360] XMP的減少率（％ ) = 100-XMP的量（％ )
[0361] 將結(jié)果示于表14。
[0362][表 14]
[0364] 化合物A的SKM-1細(xì)胞中的IC5Q值為2.73yg/mL(實(shí)施例1)。因此，在IC 5Q值附近的 XMP減少率為43~55%。
[0365] 根據(jù)實(shí)施例2及實(shí)施例7的結(jié)果，可預(yù)測(cè)在處置期間中的40 %以上的期間內(nèi)XMP減 少率為45 %以上時(shí)，其給予量是有效的。
[0366] 實(shí)施例8全血中的XMP、GMP及GTP
[0367] 使用化合物A的3/4水合物作為試驗(yàn)化合物。
[0368] (1)
[0369] 將通過(guò)添加肝素的采血從健康人中采集的血液各以450yL加入管中，并將試驗(yàn)化 合物的溶液(作為化合物A為0、1、10或100yg/mL)分別以各濃度50此加入管中。在37°C 下，在恒溫箱中攪拌8小時(shí)。
[0370] (2)
[0371] 向（1)中所得到的血液樣品100yL中添加400yL的甲醇并進(jìn)行攪拌之后，添加400yL 的氯仿，進(jìn)一步進(jìn)行攪拌。添加120yL的超純水并進(jìn)行攪拌之后，在4°C、10000 X g下離心分 離15分鐘?；厥账?00此，添加到超濾管中，并在12°C、9200Xg下離心分離2小時(shí)。使用離 心蒸發(fā)器在40 °C下將濾液減壓干燥2小時(shí)。干燥后，保存在-80 °C的冷凍庫(kù)中。
[0372] (3)
[0373] 使(2)中所得到的試樣恢復(fù)室溫，向各自之中加入超純水40此并進(jìn)行攪拌，在4°C、 21500Xg下離心分離5分鐘。將上清液35yL移到玻璃小瓶中，在4°C下保存后，在實(shí)施例3(3) 中所記載的LC-MS/MS測(cè)定裝置及LC條件以及表15所示的MS/MS條件下測(cè)定試樣中的XMP、 GMP及GTP 〇
[0374] [表 15]
[0376] (4)
[0377] 將化合物A未處理組的XMP、GMP及GTP的值(峰面積(Peak Area)值)設(shè)為100%來(lái)計(jì) 算XMP、GMP及GTP的量（％ )。將結(jié)果示于表16。
[0378] [表 16]
[0380]全血中的XMP的量隨著化合物A的濃度變高而減少。另一方面，可知即使化合物A的 濃度變高，全血中的GMP及GTP的量也未出現(xiàn)大幅變動(dòng)。該結(jié)果表示，在GMP或GTP等XMP的下 游的代謝物中無(wú)法評(píng)價(jià)化合物A的治療效果，而在XMP中能夠評(píng)價(jià)化合物A的治療效果。
[0381] 實(shí)施例9 LC的梯度條件
[0382] 與實(shí)施例3(1-1)及（1-2)中所記載的方法同樣地制作試樣。將試樣溶解于水中，進(jìn) 行離心分離之后，回收上清液作為測(cè)定試樣。將測(cè)定試樣及XMP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)供給至LC-MS/MS。 以下示出裝置結(jié)構(gòu)及測(cè)定條件。
[0383] (LC-MS/MS)
[0384] LC：UFLC(Shimadzu Corporation)
[0385] MS:QTRAP 5500(AB Sciex公司）
[0386] (LC)
[0387] 柱：SeQuant ZIC-pHILIC 5um，聚合物（polymeric)PEEK 150 X 2 ? 1mm不含金屬 (metal-free)的HPLC 柱（column) (Merck 公司）
[0388] 柱溫箱溫度：40 °C
[0389] 流動(dòng)相A: 50mmol/L碳酸氫銨(用25質(zhì)量％氨水溶液調(diào)整為pH9.4)
[0390]流動(dòng)相B:乙腈
[0391] 送液條件:0.3mL/分鐘
[0392] 注入量：2此(條件a)、5yL(條件b)
[0393] 將條件a及b的梯度循環(huán)示于表17及18。表17及表18中的％表示體積％。
[0394] 條件 a
[0400] (MS/MS)
[0401] 電離:ESI 正極(positive)
[0402] 掃描模式:MRM
[0403] 將測(cè)定條件示于表19。
[0404] [表 19]
[0406] 將所得到的測(cè)定結(jié)果示于圖8。
[0407] 當(dāng)在LC條件b的XMP洗脫中使用等度法時(shí)，與使用LC條件a的梯度法的情況相比，確 認(rèn)到試樣中的XMP與摻雜物的分離度得到提高，能夠以更高的特異性檢測(cè)試樣中的XMP。另 外，在LC條件b下，能夠?qū)悠纷⑷肓吭黾又罫C條件a的2.5倍。
[0408] 產(chǎn)業(yè)上的可利用性
[0409] 本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法能夠通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化合物 A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，能夠通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)MDS患者對(duì) 使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。
[0410] 本發(fā)明的測(cè)定方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定血液中所含的微量的XMP的量。
[0411] 本發(fā)明的預(yù)測(cè)裝置能夠用于通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè)對(duì)MDS患者給予的化 合物A或其鹽或其水合物的有效給予量。并且，能夠用于通過(guò)簡(jiǎn)便的操作在短時(shí)間內(nèi)預(yù)測(cè) MDS患者對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。
[0412] 本發(fā)明的處置劑及處置方法用于被預(yù)測(cè)為對(duì)使用化合物A或其鹽或其水合物的處 置有感受性的MDS患者的處置，因此能夠避免向?qū)衔顰或其鹽或其水合物沒(méi)有感受性的 患者的不必要的給藥。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種預(yù)測(cè)對(duì)于骨髓增生異常綜合征患者的、5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其 水合物的有效給予量的方法，其包含如下工序： (a) 測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量； (b) 根據(jù)在(a)工序中所得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率;及 (c) 根據(jù)在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或 其鹽或其水合物的有效給予量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中， 血液為末梢血。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)樵谀軌騾^(qū)分測(cè)定血液中所含的摻雜物與黃苷一磷酸的 條件下進(jìn)行的工序。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)橥ㄟ^(guò)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定的工序。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (al)通過(guò)質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一磷酸； (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的黃苷一磷酸 的離子強(qiáng)度比；及 (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的黃苷一磷酸的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍 內(nèi)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中， (al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)液相色譜-質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一 磷酸的工序。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~300mmo I /L。9. 根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相為含有碳酸氫銨水溶液的流動(dòng)相。10. 根據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜為親水性相互作用色譜。11. 根據(jù)權(quán)利要求5至10中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 不同的兩種測(cè)定條件為質(zhì)譜法中的檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。12. 根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，其中， (c)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (Cl)用函數(shù)表示給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之后的時(shí)間或接觸 時(shí)間與在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及 (c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合 物的有效給予量。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中， (c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば?預(yù)測(cè)黃苷一磷酸的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間內(nèi)成為規(guī) 定變動(dòng)率以上的5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的給予量為有效給予量。14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中， (c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば?預(yù)測(cè)黃苷一磷酸的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間中的規(guī)定 比例以上的期間內(nèi)成為規(guī)定變動(dòng)率以上的5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的 給予量為有效給予量。15. -種預(yù)測(cè)骨髓增生異常綜合征患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其 水合物的處置是否有感受性的方法，其包含如下工序： (a) 測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量； (b) 根據(jù)在(a)工序中所得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率;及 (c) 根據(jù)在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑_ 4_甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性。16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中， 血液為末梢血。17. 根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)樵谀軌騾^(qū)分測(cè)定血液中所含的摻雜物與黃苷一磷酸的 條件下進(jìn)行的工序。18. 根據(jù)權(quán)利要求15至17中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)橥ㄟ^(guò)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定的工序。19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中， 測(cè)定黃苷一磷酸的量的工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (al)通過(guò)質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一磷酸； (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的黃苷一磷酸 的離子強(qiáng)度比；及 (a3)確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的黃苷一磷酸的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍 內(nèi)。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中， (al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)液相色譜-質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一 磷酸的工序。21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。22. 根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~300mmo I /L。23. 根據(jù)權(quán)利要求20至22中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相為含有碳酸氫銨水溶液的流動(dòng)相。24. 根據(jù)權(quán)利要求20至23中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜為親水性相互作用色譜。25. 根據(jù)權(quán)利要求19至24中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 不同的兩種測(cè)定條件為質(zhì)譜法中的檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。26. 根據(jù)權(quán)利要求15至25中任一項(xiàng)所述的方法，其中， (с) 工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (cl)用函數(shù)表示給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之后的時(shí)間或接觸 時(shí)間與在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率之間的關(guān)系;及 (c2)根據(jù)在(cl)工序中所得到的函數(shù)預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其 鹽或其水合物的處置是否有感受性。27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中， (c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍寒?dāng)黃苷一磷酸的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間內(nèi)為規(guī)定變 動(dòng)率以上時(shí)，預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置有感受 性。28. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中， (c2)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍寒?dāng)黃苷一磷酸的變動(dòng)率在規(guī)定處置期間中的規(guī)定比 例以上的期間內(nèi)為規(guī)定變動(dòng)率以上時(shí)，預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽 或其水合物的處置有感受性。29. -種測(cè)定血液中所含的黃苷一磷酸的量的方法，其包含如下工序： (al)通過(guò)質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一磷酸； (a2)求出在(al)工序中所得到的不同的兩種測(cè)定條件下的血液中所含的黃苷一磷酸 的離子強(qiáng)度比；及 (аз) 確認(rèn)在(a2)工序中所得到的血液中所含的黃苷一磷酸的離子強(qiáng)度比在規(guī)定范圍 內(nèi)。30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中， (al)工序?yàn)橥ㄟ^(guò)液相色譜-質(zhì)譜法在不同的兩種測(cè)定條件下測(cè)定血液中所含的黃苷一 磷酸的工序。31. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的pH值為7~11。32. 根據(jù)權(quán)利要求30或31所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相的鹽濃度為5~300mmo I /L。33. 根據(jù)權(quán)利要求30至32中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜中所使用的流動(dòng)相為含有碳酸氫銨水溶液的流動(dòng)相。34. 根據(jù)權(quán)利要求30至33中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 液相色譜為親水性相互作用色譜。35. 根據(jù)權(quán)利要求29至34中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 不同的兩種測(cè)定條件為質(zhì)譜法中的檢測(cè)離子和/或離子化條件不同的兩種測(cè)定條件。36. -種用于預(yù)測(cè)對(duì)于骨髓增生異常綜合征患者的、5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽 或其水合物的有效給予量的裝置，其包含如下機(jī)構(gòu)： (A) 測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量的機(jī)構(gòu)； (B) 根據(jù)由（A)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率的機(jī) 構(gòu);及 (C) 根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)5-羥基-IH-咪唑-4-甲 酰胺或其鹽或其水合物的有效給予量的機(jī)構(gòu)。37. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的裝置，其中， (A)中所記載的機(jī)構(gòu)為使用質(zhì)譜裝置的機(jī)構(gòu)。38. 根據(jù)權(quán)利要求37所述的裝置，其中， 質(zhì)譜裝置為與液相色譜裝置連結(jié)的質(zhì)譜裝置。39. -種用于預(yù)測(cè)骨髓增生異常綜合征患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽 或其水合物的處置是否有感受性的裝置，其包含如下機(jī)構(gòu)： (A) 測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量的機(jī)構(gòu)； (B) 根據(jù)由（A)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率的機(jī) 構(gòu);及 (C) 根據(jù)由（B)中所記載的機(jī)構(gòu)得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基_ IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的機(jī)構(gòu)。40. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的裝置，其中， (A)中所記載的機(jī)構(gòu)為使用質(zhì)譜裝置的機(jī)構(gòu)。41. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的裝置，其中， 質(zhì)譜裝置為與液相色譜裝置連結(jié)的質(zhì)譜裝置。42. -種處置劑，其是用于骨髓增生異常綜合征患者的處置中且有效成分為5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺的、骨髓增生異常綜合征的處置劑，其包含預(yù)測(cè)骨髓增生異常綜合征患 者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性的工序， 預(yù)測(cè)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (a)測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量； (b) 根據(jù)在(a)工序中所得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率;及 (c) 根據(jù)在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑_ 4_甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性， 患者為被預(yù)測(cè)出對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置有感受性 的患者。43.-種處置方法，其是用于骨髓增生異常綜合征患者的處置中且有效成分為5-羥基-1H-咪唑-4-甲酰胺的、骨髓增生異常綜合征的處置方法，所述處置方法包含預(yù)測(cè)骨髓增生 異常綜合征患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性 的工序， 預(yù)測(cè)工序?yàn)榘缦鹿ば虻墓ば颍? (a) 測(cè)定（i)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采集的 血液中所含的黃苷一磷酸的量、以及（ii)從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水 合物之后的患者中采集的血液中所含的黃苷一磷酸的量、或使5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺 或其鹽或其水合物與從給予5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物之前的患者中采 集的血液接觸而得到的血液中所含的黃苷一磷酸的量； (b) 根據(jù)在(a)工序中所得到的黃苷一磷酸的量求出黃苷一磷酸的變動(dòng)率;及 (c) 根據(jù)在(b)工序中所得到的黃苷一磷酸的變動(dòng)率預(yù)測(cè)患者對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑_ 4_甲酰胺或其鹽或其水合物的處置是否有感受性， 患者為被預(yù)測(cè)出對(duì)使用5-羥基-IH-咪唑-4-甲酰胺或其鹽或其水合物的處置有感受性 的患者。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK105899951SQ201580004057
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年1月9日
【發(fā)明人】村瀨元彥, 松下美奈子, 小松兼介, 渡邊久美子, 桑田祐輔, 武尾厚, 山下亮
【申請(qǐng)人】富士膠片株式會(huì)社