一種高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法
【專利摘要】一種高效液相檢測(cè)食品添加劑中糖精鈉與脫氫乙酸的方法，采用高效液相法，通過(guò)加入離子對(duì)締合劑來(lái)改變二者出峰時(shí)間，實(shí)現(xiàn)快速有效分離二者重疊峰；所說(shuō)的高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法中，采用色譜柱為C18色譜柱，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為乙酸銨溶液，其中流動(dòng)相B中添加有烷基磺酸鈉作為離子對(duì)締合劑，本發(fā)明檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是方案簡(jiǎn)單易行，分離效果好，靈敏度高，分離速度快，且對(duì)其他組分的分離無(wú)影響，可以更有效準(zhǔn)確的對(duì)二者進(jìn)行檢測(cè)，解決了糖精鈉與脫氫乙酸難以分離的問(wèn)題。
【專利說(shuō)明】
一種高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及食品添加劑的檢測(cè)方法，特別是檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在日常食品生產(chǎn)中，為了達(dá)到美味和延長(zhǎng)保質(zhì)期，經(jīng)常向食品中添加人工合成甜味劑和防腐劑。糖精鈉Sodium sacdari/je是常用甜味劑的一種，防腐劑中通常含有脫氫乙後Dehydroacetic acic/，我國(guó)在GB 2760-2011標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)二者的使用范圍和用量有嚴(yán)格規(guī)定，但是在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，由于各項(xiàng)國(guó)際方法中所使用的檢測(cè)儀器以及樣品前處理方法都不盡相同，造成各組分的檢測(cè)需要分別進(jìn)行，不但加大了實(shí)驗(yàn)人員工作量，而且難以適應(yīng)食品添加劑中多組分同時(shí)檢測(cè)的需求和發(fā)展趨勢(shì)。因此實(shí)現(xiàn)添加劑成分同時(shí)檢測(cè)對(duì)質(zhì)檢行業(yè)的發(fā)展有著重要意義。如今已有文獻(xiàn)報(bào)道用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行多組分檢測(cè)分離。但是由于檢測(cè)樣品的不同和實(shí)驗(yàn)用色譜柱的不同，檢測(cè)條件也就不盡相同。
[0003]以下是檢索到的相關(guān)文獻(xiàn):
1.文獻(xiàn)《HPLC測(cè)定方便榨菜中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉及脫氫乙酸》(馮輝，謝君紅，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014，8:271-272)用沃特斯液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為:色譜柱為SymmetryShield C18(150mmXx4.6mm,5μηι)，流動(dòng)相為0.02mol/L乙酸錢:甲醇=95: 5，波長(zhǎng)220nm，流速1.0mL/min，進(jìn)樣量 10μ1。
[0004]2.文獻(xiàn)《高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)醬腌菜中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜和糖精鈉含量》(吳勝坤，化學(xué)工程與設(shè)備，2010,8:182-183)用安捷倫LCllOO高效液相色譜儀來(lái)檢測(cè)，其色譜條件為:色譜柱為AccurasiI C18( 150mmX 4.6mm, 5μηι)，柱溫30°C ；流速lmL/min；進(jìn)樣量20μ1，流動(dòng)相甲醇:乙酸銨溶液(0.02mol/L)=8:92 ；檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。
[0005]3.文獻(xiàn)《高效液相色譜同時(shí)測(cè)定食品中多種甜味劑和防腐劑的研究》(余濤，葉堅(jiān)等，中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008,18(10): 2014-2016)中提到了一種用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定乙?；前匪徕洝⑺拱吞?、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉、苯甲酸的方法，該方法用島津LC-2010AHT液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為:C18不銹鋼柱柱(250 mmX4.6mm, ΙΟμπι)；流動(dòng)相:甲醇:乙酸銨(0.02mol/L)=6:94保留22 min，22?25min流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，甲醇:乙酸銨(0.02mol/L)由6:94調(diào)整到40:60，甲醇:乙酸銨(0.0211101/1)=40-60保留至371^11;柱流量
1.0ml/min ；波長(zhǎng)230nm保留31min，31min調(diào)整為208nm；柱溫40°C ；進(jìn)樣量ΙΟμΙ。
[0006]
目前已有的文獻(xiàn)資料對(duì)糖精鈉和脫氫乙酸的檢測(cè)方法中，常用的液相色譜儀有安捷倫、島津、或沃特斯液相色譜儀，色譜柱一般為與之配套的C18柱，但是使用沃斯特液相色譜儀和島津C18色譜柱組合測(cè)定的方法尚無(wú)人報(bào)道。在使用沃特斯液相色譜儀，色譜柱為島津C18柱來(lái)檢測(cè)食品添加劑的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，很多物質(zhì)分離度較好，可以直接檢測(cè)出很顯著的峰，從而通過(guò)峰面積定量求出物質(zhì)的質(zhì)量濃度，但是由于糖精鈉與脫氫乙酸的分子量相近，極性相近，因而兩種物質(zhì)檢測(cè)出的保留時(shí)間也相近，二者同時(shí)測(cè)定則出現(xiàn)兩峰重疊的現(xiàn)象，致使無(wú)法判斷峰的種類，影響了對(duì)二者成分的檢測(cè)。因此有必要研發(fā)一種適用于沃斯特液相色譜儀和島津C18色譜柱組合使用時(shí)用來(lái)分離糖精鈉和脫氫乙酸的色譜條件。
[0007]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種有效檢測(cè)分離糖精鈉與脫氫乙酸的方法，通過(guò)加入離子對(duì)締合劑來(lái)改變二者出峰時(shí)間，實(shí)現(xiàn)快速有效分離二者重疊峰的目的。
[0009]本發(fā)明所說(shuō)的高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法中，所用色譜柱為C18色譜柱，所用流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為乙酸銨溶液，其中流動(dòng)相B中添加有烷基磺酸鈉作為離子對(duì)締合劑。
[0010]所述乙酸銨溶液的摩爾濃度為0.005mol/L-0.lmol/L。
[0011 ] 所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比例為4:96-8:92。
[0012]所述烷基磺酸鈉為己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉。
[0013]所述烷基磺酸鈉的質(zhì)量濃度為5mg/L?20mg/L。
[0014]檢測(cè)波長(zhǎng)為225?235nm，檢測(cè)溫度為20?40°C，流速為0.5-1.5mL/min進(jìn)樣量為5?20yL0
[0015]所述色譜柱為C18柱或與C18柱分離效果相似的色譜柱。
[0016]
本發(fā)明在操作過(guò)程中，采用較常用的儀器，用島津C18色譜柱，以甲醇為流動(dòng)相A，以含有20mg/L的己烷磺酸鈉的0.02moVL的乙酸銨為流動(dòng)相B，流速為lmL/min，柱溫設(shè)置為30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nmo
[0017]以上本發(fā)明所說(shuō)的測(cè)定方法，還包括以下步驟:
A)供試品溶液的配制:分別取糖精鈉和脫氫乙酸適量，加水稀釋溶解樣品，配制成
0.001-0.2mg/mL的樣品溶液作為供試品溶液。
[0018]B)設(shè)置流動(dòng)相流速為0.5-1.5mL/min，優(yōu)選為1.0mL/min ；設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)為225?235nm，優(yōu)選為230nm ；設(shè)置色譜柱柱溫為20 °C-40 °C，優(yōu)選為30 °C。
[0019]C)取供試品溶液注入液相色譜儀，用流動(dòng)相A:流動(dòng)相B=5:95進(jìn)行洗脫，記錄色譜圖，完成供試品有關(guān)物質(zhì)的分離測(cè)定。
[0020]其中:
液相色譜儀:沃斯特高效液相色譜儀色譜柱:島津C18柱柱溫:30°C 流動(dòng)相A:甲醇
流動(dòng)相B:含20mg/L己烷磺酸鈉的0.02mol/L乙酸銨溶液洗脫時(shí)流動(dòng)相體積比:流動(dòng)相A:流動(dòng)相B=5:95 流速:I.0mL/min;檢驗(yàn)波長(zhǎng):230nm;進(jìn)樣體積:20yL ο
[0021]本發(fā)明采用高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的原理:
本發(fā)明采用C18色譜柱，能夠有效檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸。
[0022]燒基磺酸鈉作為尚子對(duì)試劑加入極性流動(dòng)相中，被分析樣品尚子在流動(dòng)相中與尚子對(duì)試劑的反離子生成不帶荷電的中性離子對(duì)，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增加，組分保留時(shí)間變短，改善分離效果。疏水性較弱的樣品分子和固定相間的相互作用較弱，較快流出；反之，疏水性相對(duì)較強(qiáng)的分子和固定相間存在較強(qiáng)的相互作用，在柱內(nèi)保留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。
[0023]在本發(fā)明中，洗脫時(shí)，疏水性較強(qiáng)的脫氫乙酸與烷基磺酸鈉結(jié)合后的離子對(duì)，與C18柱的相互作用較糖精鈉強(qiáng)，出峰時(shí)間加快，疏水性較弱的糖精鈉與烷基磺酸鈉結(jié)合后的離子對(duì)，與C18柱的相互作用較弱，出峰時(shí)間較脫氫乙酸更快，使得糖精鈉比脫氫乙酸更早出峰，二者洗脫的色譜峰由重合的單峰變?yōu)楸Ａ魰r(shí)間不同的雙峰，從而改善分離度，得以檢測(cè)。
[0024]本發(fā)明的有益效果:
此方法的優(yōu)點(diǎn)是方案簡(jiǎn)單易行，分離效果好，靈敏度高，分離速度快。且對(duì)其他組分的分離無(wú)影響，可以更有效準(zhǔn)確的對(duì)二者進(jìn)行檢測(cè)，解決了糖精鈉與脫氫乙酸難以分離的問(wèn)題，也給出了食品添加劑檢測(cè)中快速準(zhǔn)確地同時(shí)分析糖精鈉與脫氫乙酸的方法。
[0025]
【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1為不添加己烷磺酸鈉時(shí)糖精鈉與脫氫乙酸混合樣品的液相色譜圖。
[0027]圖2為不添加己烷磺酸鈉時(shí)糖精鈉樣品的液相色譜圖。
[0028]圖3為添加己烷磺酸鈉時(shí)脫氫乙酸樣品的液相色譜圖。
[0029]圖4為添加己烷磺酸鈉時(shí)糖精鈉樣品的液相色譜圖。
[0030]圖5為添加己烷磺酸鈉時(shí)脫氫乙酸樣品的液相色譜圖。
[0031 ]圖6為添加己烷磺酸鈉時(shí)糖精鈉與脫氫乙酸混合樣品的液相色譜圖。
[0032]
具體實(shí)施例
[0033]實(shí)施例1
儀器與條件:
沃特斯液相色譜儀，以島津C18柱為分離色譜柱，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為230nm。流動(dòng)相:A相為甲醇，B相為0.02mol/L乙酸銨溶液。柱溫30°C，流速lmL/min，進(jìn)液量為20yL。
[0034]實(shí)驗(yàn)步驟:
供試品溶液配制:準(zhǔn)確稱取糖精鈉48.2mg，溶解后置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為糖精鈉樣品；準(zhǔn)確稱量脫氫乙酸53.0mg，溶解后置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為脫氫乙酸樣品。準(zhǔn)確稱取糖精鈉48.2mg，脫氫乙酸53.0mg，分別溶解后混合均勻，置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為混合樣品。
[0035]流動(dòng)相B的配制:準(zhǔn)確稱量1.54g乙酸銨溶解后置于100mL容量瓶，加水稀釋到刻度，搖勻，作為流動(dòng)相B。
[0036]分別取糖精鈉樣品和脫氫乙酸樣品，按上述色譜條件進(jìn)行液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1-圖3。
[0037]實(shí)施例2 儀器與條件: 沃特斯液相色譜儀，以島津C18柱為分離色譜柱，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為230nm。流動(dòng)相:A相為甲醇，B相為含有20mg/L己烷磺酸鈉的0.02mol/L乙酸銨溶液。柱溫30°C，流速lmL/min，進(jìn)樣量20yL。
[0038]實(shí)驗(yàn)步驟:
供試品溶液配置:準(zhǔn)確稱取糖精鈉48.2mg，溶解后置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為糖精鈉樣品；準(zhǔn)確稱量脫氫乙酸53.0mg，溶解后置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為脫氫乙酸樣品。準(zhǔn)確稱取糖精鈉48.2mg，脫氫乙酸53.0mg，分別溶解后混合均勻，置于10mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為混合樣品。
[0039]流動(dòng)相B的配制:準(zhǔn)確稱量1.54g乙酸銨，20mg己烷磺酸鈉，分別溶解后混合，置于100mL容量瓶，加水稀釋到刻度，搖勻，作為流動(dòng)相B。
[0040]分別取糖精鈉樣品和脫氫乙酸樣品，按上述色譜條件進(jìn)行液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖4-圖6。
[0041]如圖所示:
當(dāng)流動(dòng)相B中不含己烷磺酸鈉時(shí)進(jìn)行糖精鈉與脫氫乙酸的檢測(cè)，如圖1當(dāng)糖精鈉與脫氫乙酸樣品混合時(shí)只有一個(gè)色譜峰，可見(jiàn)兩峰重疊無(wú)法分離，圖2的色譜峰為糖精鈉樣品的色譜峰，出峰時(shí)間與圖1相同，圖3的色譜峰為脫氫乙酸樣品的色譜峰，出峰時(shí)間與圖1相同。當(dāng)流動(dòng)相B中加入己烷磺酸鈉后，對(duì)比圖1，糖精鈉樣品的保留時(shí)間明顯縮短，出峰加快，如圖4;脫氫乙酸的保留時(shí)間也有所縮短，如圖5，二者混合后的色譜峰如圖6，出現(xiàn)分離效果明顯的兩個(gè)色譜峰，保留時(shí)間更短的為糖精鈉樣品的色譜峰，稍長(zhǎng)的為脫氫乙酸樣品的色譜峰，本方法實(shí)現(xiàn)了二者的有效分離，完成了糖精鈉與脫氫乙酸的檢測(cè)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所用色譜柱為C18色譜柱，所用流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為乙酸銨溶液，其中流動(dòng)相B中添加有烷基磺酸鈉作為離子對(duì)締合劑。2.如權(quán)利要求1中所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所述乙酸錢溶液的摩爾濃度為0.005mol/L~0.lmol/L。3.如權(quán)利要求1中所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比例為4:96-8:92ο4.如權(quán)利要求1中所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所述烷基磺酸鈉為己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉。5.如權(quán)利要求1或4中所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所述烷基磺酸鈉的質(zhì)量濃度為5mg/L?20mg/L。6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:檢測(cè)波長(zhǎng)為225?235nm，檢測(cè)溫度為20?40 V，流速為0.5-1.5mL/min，進(jìn)樣量為5?20yL。7.如權(quán)利要求1中所述高效液相檢測(cè)糖精鈉與脫氫乙酸的方法，其特征在于:所述色譜柱為C18柱或與C18柱分離效果相似的色譜柱。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105911169SQ201610228056
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月13日
【發(fā)明人】黃島平, 林葵, 徐慧, 黃祖林, 陳建紅, 蘇梅清, 江思華
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心