一種5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種5?甲基嗎啉?3?氨基?2?唑烷基酮免疫檢測方法，呋喃它酮在動物體內(nèi)迅速代謝為5?甲基嗎啉?3?氨基?2?唑烷基酮(AMOZ)，檢測呋喃它酮的殘留實際上是檢測AMOZ的殘留。本發(fā)明的檢測方法是將待檢物中的5?甲基嗎啉?3?氨基?2?唑烷基酮(AMOZ)提取后改用3?醛基苯甲酸甲酯進(jìn)行衍生化，得到3?醛基苯甲酸甲酯?5?甲基嗎啉?3?氨基?2?唑烷基酮(PCPME?AMOZ)，然后再測定該衍生物的含量。以NP?AMOZ和PCPME?AMOZ為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定(icELISA)，結(jié)果證明用本發(fā)明的檢測方法能夠顯著提高呋喃它酮殘留即5?甲基嗎啉?3?氨基?2?唑烷基酮(AMOZ)免疫檢測的靈敏度。
【專利說明】
一種5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及含有呋喃它酮代謝物5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的檢測方法及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 呋喃它酮藥物抗菌譜較廣，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌、陰性菌均有抗菌作用。本品內(nèi) 服后在腸道不易吸收，故主要用于腸道感染，也可用于球蟲病、火雞黑頭病的治療。硝基呋 喃類廣譜抗生素(呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林)主要出現(xiàn)在動物源性食品。經(jīng) 過科學(xué)實驗證明，硝基呋喃類藥物及其代謝產(chǎn)物具有致癌和致突變的特性。
[0003] 1995年，歐盟禁止在食用動物中使用硝基呋喃類抗生素，并于1997年將所有的硝 基呋喃類抗生素列為違禁藥物。歐盟于2003年通過了2003/181/EC委員會決議，建立了用于 檢測禽肉產(chǎn)品和水產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的代謝的各種方法的最小要求性能限值為 l.Oug/kg。目前，歐盟、美國及其他國家都對進(jìn)口動物性食品中硝基呋喃類抗生素殘留做了 非常嚴(yán)格的限制。我國于2002年頒布了禁止使用硝基呋喃類抗生素的禁令。
[0004] 本發(fā)明創(chuàng)新地運用了一種呋喃它酮代謝物5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的檢 測方法，使得相應(yīng)的ELISA檢測靈敏度大幅度提高。因此，本發(fā)明建立的酶聯(lián)免疫吸附檢測 方法可以大大提高檢測準(zhǔn)確性，為各層監(jiān)督單位提供快速、高效、準(zhǔn)確的檢測方法，具有不 可估量的市場價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了使得用于檢測如動物源性食品及其加工產(chǎn)品等樣品中AM0Z殘留的icELISA具 有更高的靈敏度，本發(fā)明創(chuàng)新了一種5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的處理方法，使得 icELISA更加高效更適宜于實際樣品的檢測。
[0006] 本發(fā)明所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法如下，將待測樣品中 的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮通過肟反應(yīng)衍生得到3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3_氨基-2-唑烷基酮后進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附檢測，以測定待測樣品中的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮含量。
[0007] 本發(fā)明中用用3-醛基苯甲酸甲酯與待測樣品中的3-氨基-2-惡唑烷酮發(fā)生肟反 應(yīng)。
[0008] 本發(fā)明的酶聯(lián)免疫吸附檢測為間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定。
[0009] 本發(fā)明待測樣品的獲取方法為將待檢物與甲醇-水混合溶液混合研勻，離心后的 沉淀物為待測樣品。
[0010] 本發(fā)明的待測樣品肟反應(yīng)的操作方法步驟包括：1)將沉淀物與鹽酸溶液混合研 勻；2)再與3-醛基苯甲酸甲酯混勻后旋干;3)再加入1，4_二氧六環(huán)加熱回流;4)向步驟(3) 的混合物中加入水和CH2CI2萃取，水洗有機層，再用無水Na 2S〇4干燥有機層，而后濃縮至干 燥，獲得含有衍生物3_醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的物質(zhì)。
[0011] 本發(fā)明所述的酶聯(lián)免疫吸附檢測中用完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-BSA免疫動物 體獲得抗血清。所述的酶聯(lián)免疫吸附檢測為基于抗血清的3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3_氨基-2-唑烷基酮間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)。
[0012] 本發(fā)明所述的酶聯(lián)免疫吸附檢測中以完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-0VA作為固相 抗原。
[0013] 本發(fā)明所述的酶聯(lián)免疫吸附檢測中以3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮為競爭性抑制物，以抗血清為一抗，以IgG-HRP為酶標(biāo)二抗。
[0014] 本發(fā)明所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法的應(yīng)用，尤其在于將 待測樣品中的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮通過肟反應(yīng)衍生得到3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮后進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附檢測在5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基 酮快速檢測試劑盒方面的應(yīng)用。
[0015] 以上檢測方法及其應(yīng)用具有快速、簡單、準(zhǔn)確、高通量、無需專業(yè)操作等優(yōu)點，使得 它成為一種理想的市場監(jiān)查檢測方法。
【附圖說明】
[0016] 圖1為5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AM0Z)的化學(xué)式；
[0017] 圖2為3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-挫烷基酮(PCPME-AM0Z)的化學(xué) 式；
[0018] 圖3為鄰硝基苯甲醛-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(NP-AM0Z)的化學(xué)式；
[0019] 圖4為以PCPME-AM0Z為標(biāo)準(zhǔn)抑制物的抗血清icELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020] 圖5為以NP-AM0Z為標(biāo)準(zhǔn)抑制物的抗血清i cELI SA標(biāo)準(zhǔn)曲線
【具體實施方式】
[0021 ]本發(fā)明中出現(xiàn)的技術(shù)術(shù)語及相關(guān)試劑配方如下：
[0022] AM0Z : 5-甲基嗎啉_3_氨基_2_唑烷基酮（3-amino_5-morphol ino-methy 1-2-oxazolidinone,AM0Z)；
[0023] BSA:牛血清蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA)，分子量約為66.43kDa;
[0024] OVA:卵白蛋白（Albumin，from chicken egg white)，分子量約為44kDa;
[0025] Tween-20:吐溫20;
[0026] Gelatin:明膠；
[0027] PBS:磷酸鹽緩沖液（NaCl 137mM，KH2P04 1.5mM，Na2HP04 ? 12H20 8.3mM，pH 7.5)；
[0028] PBST: PBS溶液中加入0 ? 1 % 的Tween-20;
[0029] PBSTG: PBST溶液中加入0 ? 1 %的明膠；
[0030] 包被緩沖液：1.5g Na2C03、2.93g NaHC03溶于 1000mL水，pH 9.6;
[0031] 底物緩沖液：5.1g-水合檸檬酸、18.43g Na2HP04 ? 12H20、1.0mL Tween-20溶于 lOOOmL水，pH 5.0;
[0032] 文中出現(xiàn)的所有試劑及儀器設(shè)備均可配制或市購獲得，本發(fā)明具體實施例中所使 用的試劑均購買于Sigma公司。
[0033] 試驗例1:
[0034] 待檢物中5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的獲取及其衍生物3-醛基苯甲酸甲酯_ 5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(PCPME-AM0Z)的獲取。
[0035] 可參考國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 20752-2006)的文獻(xiàn)報告，用文獻(xiàn)中的方法把5-甲基嗎啉-3_氨基-2-唑烷基酮提取出來，方法可以是（1)收集市場中或?qū)嶒炇抑苽涞拇龣z物，置于棕 色離心管中，加入甲醇-水混合溶液（甲醇與水的混合體積比為2:1)，研均，再用甲醇-水混 合溶液洗滌均質(zhì)器刀頭，二者合并后離心，吸取上清液棄掉。
[0036] (2)向上述離心管中加入鹽酸溶液，研均，用鹽酸溶液洗滌均質(zhì)刀頭，二者合并。
[0037] (3)把步驟(2)中的混合液中加入3-醛基苯甲酸甲酯，混勻后旋干。加入1，4-二氧 六環(huán)加熱回流；
[0038] (4)向步驟(3)的混合物中加入水和CH2C12萃取，水洗有機層，其中水和CH 2C12的量 分別為20至30mL;再用無水Na2S04干燥有機層，而后濃縮至干燥，獲得含有衍生物3-醛基苯 甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮的物質(zhì)。
[0039]經(jīng)過上述處理方案，若待檢物提取的待測樣品中含有5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷 基酮(AM0Z)，其將與3-醛基苯甲酸甲酯發(fā)生成肟反應(yīng)，衍生得到3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基 嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(PCPME-AM0Z)。
[0040] 具體的：
[00411 (1)待測樣品的獲取。收集市場中或?qū)嶒炇抑苽涞膶嶋H樣品，稱取2.0g( ± 0.01 g)， 分別置于50mL棕色離心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液（甲醇與水的混合體積比為2:1)， 均質(zhì)2min，再用5mL甲醇-水混合溶液洗滌均質(zhì)器刀頭，二者合并5000r/min離心10min，吸取 上清液棄掉。向陰性樣品中加入適量AM0Z，使最終測定濃度為10.0 ng/mL。
[0042] (2)向上述每個離心管中加入10mL 0.2mol/L鹽酸溶液，研均2min，用10mL 0.2mol/L的鹽酸溶液洗滌均質(zhì)刀頭，二者合并。
[0043] (3)向步驟(2)的混合液中加入0.3mL3-醛基苯甲酸甲酯，混勻后懸干。加入干燥的 1,4-二氧六環(huán)（1，4-dioxane)到25mL單口反應(yīng)瓶中，加熱回流反應(yīng)8小時。
[0044] (4)向步驟(3)加入水和CH2C12萃取，有機層水洗三次，其中水和CH 2C12的量分別為 20至30mL;無水Na2S04干燥后濃縮至完全干燥。從而使得AM0Z與3-醛基苯甲酸甲酯發(fā)生成肟 反應(yīng)，衍生得到AM0Z-3-醛基苯甲酸甲酯(PCPME-AMOZ)。
[0045]以上化學(xué)反應(yīng)使得待測樣品中可能含有的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮 (AM0Z)與3-醛基苯甲酸甲酯發(fā)生成肟反應(yīng)，衍生得到3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨 基-2-唑烷基酮(PCPME-AMOZ)。
[0046] 試驗例2:
[0047] 合成AM0Z的半抗原和完全抗原，并用完全抗原免疫實驗小鼠獲得抗血清：
[0048] 參考Yu-Dong Shen等的文獻(xiàn)報道（Yu-Dong Shen，Zhen_Lin Xu，Shi_Wei Zhang, Hong Wang，Jin-Yi Yang,Hong-Tao Lei，Zhi_Li Xiao&Yuan-Ming Sun.Development of a monoclonal antibody-based competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay for furaltadone metabolite AM0Z in fish and shrimp samples.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2012,60,10991-10997.)，合成AM0Z的半抗原和完全 抗原。用完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-BSA(按蛋白的量計量，l.Omg/mL)與弗氏佐劑按1:1 (v/v)混合乳化，乳化完全后注射到小鼠體內(nèi)。免疫Balb/c雌性小鼠，每只小鼠每次分別在 背部和腹腔各注射。四次免疫之后，取小鼠血液，離心之后得到抗血清。
[0049] 具體的，制備了AM0Z半抗原的方法步驟如下：
[0050] (1)依次取適量AM0Z鹽酸鹽固體粉末70 ? 0mg( 1 ? Oequiv ? )，3-醛基苯甲酸41 ? Omg (1 .Oequiv.)，干燥的1,4-二氧六環(huán)（1，4-dioxane)加入到25mL單口反應(yīng)瓶中，加熱反應(yīng)2小 時。
[0051] (2)用減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀脫溶劑得到白色固體粉末。
[0052] (3)向步驟(2)的固體粉末中加入乙醇，在超聲波水浴槽中溶解lmin。
[0053] (4)直接抽濾除掉3-醛基苯甲酸得到白色固體。
[0054] (5)干燥步驟(4)中的白色固體得到半抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸。
[0055] 具體的，制備了AM0Z完全抗原的方法步驟如下：
[0056] (1)稱取適量AM0Z-3-醛基苯甲酸3? 29mg(l ? Oequiv?)加到10? OmL反應(yīng)瓶中，再加 入0.5mL N，N'_二甲基甲酰胺（DMF)攪拌5min使粉末完全溶解。加入N-羥基丁二酰亞胺 (NHS) 1.57mg(1.5equiv.)，攪拌30min后加入N，N' -二環(huán)己基碳二亞胺（DCC) 2 ? 82mg (1.5equiv.)攪拌反應(yīng)過夜。
[0057] (2)稱取牛血清蛋白（BSA)20 ? Omg加入到10 ? OmL反應(yīng)瓶中，加2 ? OmL PBS使之?dāng)嚢?溶解。
[0058] (3)把步驟（1)中的混合物緩慢逐滴加入到步驟(2)的蛋白溶液中，此過程邊攪拌 邊滴加。4 °C攪拌反應(yīng)過夜。
[0059] (4)取步驟(3)的混合物在4.OL PBS中透析3天，每天換透析液2次。最后按蛋白質(zhì) 的量用PBS配成1. Omg/mL，分裝到1. OmL/管，-40 °C長期凍存。此過程就完成了半抗原與蛋白 質(zhì)的偶聯(lián)(即得到完全抗原）。
[0060] 半抗原與卵清白蛋白（OVA)的偶聯(lián)方法同上。
[0061 ]具體的，用完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-BSA免疫Balb/c雌性小鼠獲得抗血清的 方法步驟如下:取實施例3中制備好的完全抗原一管（1 .OmL)與弗氏佐劑按1: l(v/v)混合乳 化，乳化完全后注射到小鼠體內(nèi)。
[0062] 免疫Balb/c雌性小鼠的免疫方案見表1。
[0063]表1完全抗原免疫小鼠的免疫方案
[0065] 將第四次免疫（四免）之后的小鼠進(jìn)行眼眶取血，離心取血清，從而制備得到抗血 清。
[0066] 試驗例3:
[0067] 以抗血清和PCPME-AMOZ、NP-AMOZ分別建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng) (i cELI SA)進(jìn)行對照及建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下：
[0068] (1)取完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-0VA(1 ? Omg/mL)用包被緩沖液稀釋1: 240000 倍，加到酶標(biāo)板中200uL/孔。放入37 °C培養(yǎng)箱中溫育3h。
[0069] (2)用PBST洗板4次，甩干。
[0070] (3)將標(biāo)準(zhǔn)品 PCPME-AMOZ 用 PBSTG 稀釋成系列梯度(2;1;0.5;0.25;0.125 ;0.0625; 0 ? 03125 ; Ong/mL)?；?qū)?biāo)準(zhǔn)品NP-AMOZ用PBSTG稀釋成系列梯度（200; 100 ; 50; 25 ; 12 ? 5 ; 6.25; 3.125 ;0ng/mL)。用PBSTG把抗血清稀釋150000倍。在酶標(biāo)板孔中依次加入100uL濃度 為標(biāo)準(zhǔn)品和1 OOuL抗血清稀釋液。37 °C溫育30min。
[0071] (4)用PBST洗板4次，甩干。
[0072] (5)每孔加入200uL 用 PBSTG 稀釋的 IgG-HRP。
[0073] (6)用PBST洗板4次，甩干。
[0074] (7)每孔加入200uL底物緩沖液，顯色到一定程度再加入50uL硫酸(2M)終止反應(yīng)。 [0075] (8)在492nm波長測吸光值。
[0076] 測得相應(yīng)數(shù)據(jù)后，用分析軟件OriginPro 8.0建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖4(PCPME-AM0Z為 標(biāo)準(zhǔn)品），圖5 (NP-AM0Z為標(biāo)準(zhǔn)品）。
[0077]利用本發(fā)明的檢測方法，可以成功地使待檢物中可能殘留的AM0Z經(jīng)過一系列的衍 生化反應(yīng)，最終得到了 PCPME-AM0Z。并利用制備得到的抗血清，以PCPME-AM0Z作為標(biāo)準(zhǔn)抑制 物建立了 icELISA，其標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。同時，利用以已報道的衍生方法得到的NP-AM0Z作為 標(biāo)準(zhǔn)抑制物建立了 icELISA，其標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5。以NP-AM0Z為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行間接競爭酶聯(lián)免疫 吸附測定（icELISA)，得到的IC50和檢測范圍分別為22.35ng/mL，5.71~96.14ng/mL<^W PCPME-AMOZ為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定（icELISA)，得到的IC50和檢測范圍 分別為0.27ng/mL，0.052~1.35ng/mL。結(jié)果證明以PCPME-AM0Z為標(biāo)準(zhǔn)抑制物時，其icELISA 的靈敏度更高。實驗證明以本發(fā)明的AM0Z檢測方法能大幅度提升icELISA靈敏度。
[0078]將待檢物中可能殘留的AM0Z經(jīng)過一系列的衍生化反應(yīng)，最終得到了 PCPME-AMOZ， 以PCPME-AMOZ作為標(biāo)準(zhǔn)抑制物建立了 icELISA，得到的吸光值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，從而知悉 AM0Z的含量，其能提高icELISA靈敏度，可以快速推廣市場應(yīng)用，在市場監(jiān)測過程中具有更 深遠(yuǎn)的意義。
[0079]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范 圍，本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù) 實體或方法，若是與申請的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將 被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。
【主權(quán)項】
1. 一種5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，將待測樣品中的 5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮通過肟反應(yīng)衍生得到3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮后進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附檢測，以測定待測樣品中的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮含量。2. 如權(quán)利要求1所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，用 3-醛基苯甲酸甲酯與待測樣品中的3-氨基-2-惡唑烷酮發(fā)生肟反應(yīng)。3. 如權(quán)利要求1所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，所 述的酶聯(lián)免疫吸附檢測為間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定。4. 如權(quán)利要求2所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于:待 測樣品的獲取方法為將待檢物與甲醇-水混合溶液混合研勻，離心后的沉淀物為待測樣品。5. 如權(quán)利要求4所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，所 述的待測樣品肟反應(yīng)的操作方法步驟包括： 1) 將沉淀物與鹽酸溶液混合研勻； 2) 再與3-醛基苯甲酸甲酯混勻后旋干； 3) 再加入1，4-二氧六環(huán)加熱回流； 4) 向步驟(3)的混合物中加入水和CH2Cl2萃取，水洗有機層，再用無水Na2SO 4干燥有機 層，而后濃縮至干燥，獲得含有衍生物3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮 的物質(zhì)。6. 如權(quán)利要求1至5所述的任一 5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征 在于，酶聯(lián)免疫吸附檢測中用完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-BSA免疫動物體獲得抗血清。7. 如權(quán)利要求6所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，酶 聯(lián)免疫吸附檢測為基于抗血清的3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮間接 競爭酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)。8. 如權(quán)利要求7所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，酶 聯(lián)免疫吸附檢測中以完全抗原AM0Z-3-醛基苯甲酸-OVA作為固相抗原。9. 如權(quán)利要求8所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法，其特征在于，酶 聯(lián)免疫吸附檢測中以3-醛基苯甲酸甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮為競爭性抑制 物，以抗血清為一抗，以IgG-HRP為酶標(biāo)二抗。10. 如權(quán)利要求1所述的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮免疫檢測方法的應(yīng)用，其特征 在于將待測樣品中的5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮通過肟反應(yīng)衍生得到3-醛基苯甲酸 甲酯-5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮后進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附檢測在5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮快速檢測試劑盒方面的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N33/531GK105911271SQ201610339333
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月20日
【發(fā)明人】王保民, 張威, 陳俊玉, 王冕, 楊濤, 謝紫君, 寧香雪, 郭素琴, 譚桂玉, 丹陽
【申請人】福建安欣睿捷生物科技有限公司