一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)及制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)及制備方法，包括卡盒和試劑條，試劑條由基板、樣品墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水墊組成，其特征在于：膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬病毒蛋白和牛血清白蛋白，反應(yīng)膜上包被有檢測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬病毒抗原；質(zhì)量控制抗體顯示為質(zhì)控線(xiàn)C，為羊抗鼠IgG抗體。本發(fā)明充分應(yīng)用了膠體金的操作簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用于各種現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，配套膠體金定量分析儀和特有的曲線(xiàn)建立方法，達(dá)到了膠體金能定量檢測(cè)出樣品的含量，綜合了膠體金和ELISA的雙重優(yōu)點(diǎn)，形成兩種技術(shù)的互補(bǔ)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系 統(tǒng)及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，也是畜牧大國(guó)。以豬養(yǎng)殖為例，2009年全國(guó)性豬存欄約4.7億頭， 出欄6.45億頭，豬肉產(chǎn)量4889萬(wàn)噸，約占全球總產(chǎn)量的50%，在世界上排名第一。但中國(guó)并 不是畜牧強(qiáng)國(guó)，在每頭母豬年平均分娩胎數(shù)、每頭母豬提從斷奶仔豬數(shù)、仔豬存活率及肉豬 出欄率等方面，與世界畜牧強(qiáng)國(guó)仍然存在巨大的差距。其原因之一在于集約化養(yǎng)殖程度不 高，規(guī)模不夠，農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)或小型化養(yǎng)殖場(chǎng)所占比重高，造成疫病多發(fā)，生產(chǎn)力低下，添加違禁 藥物和濫用抗生素現(xiàn)像嚴(yán)重，且環(huán)境污染嚴(yán)重。
[0003] 由于中國(guó)養(yǎng)殖業(yè)比重較大的是農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)或者小型養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖，規(guī)模分散，動(dòng)物疫 病防治水平和生產(chǎn)管理能力落后，在發(fā)生疫病流行時(shí)，難以有效控制。存在著獸醫(yī)領(lǐng)域監(jiān)管 對(duì)像種類(lèi)多、數(shù)量大、分布廣、規(guī)模不一等問(wèn)題，尤其養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中具有極強(qiáng)的隱蔽性和時(shí)間 性的特點(diǎn)，現(xiàn)場(chǎng)執(zhí)法檢查如果靠眼面檢查從根本上不能積習(xí)難改現(xiàn)其問(wèn)題和隱患。傳統(tǒng)實(shí) 驗(yàn)檢測(cè)也存在程序復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的技術(shù)問(wèn)題，檢測(cè)結(jié)果出來(lái)后產(chǎn)品已經(jīng)銷(xiāo)售或轉(zhuǎn)移，無(wú) 法及時(shí)處理，無(wú)法滿(mǎn)足現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)需要及時(shí)、高效、快速的需要。而且，目前成熟的快速檢測(cè)技 術(shù)大多是針對(duì)單一疫病或者藥物殘留進(jìn)行，也難以達(dá)到對(duì)檢測(cè)樣品種類(lèi)多樣、檢測(cè)項(xiàng)目繁 多的檢測(cè)的目的。
[0004] 隨著生物技術(shù)的發(fā)展，開(kāi)始用生物技術(shù)來(lái)對(duì)動(dòng)物疫病、動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行安全檢 測(cè)。比如PCR檢測(cè)法、酶聯(lián)免疫法(ELI SA)和操作比較簡(jiǎn)單的動(dòng)物疫病免疫層析檢測(cè)方法， PCR檢測(cè)法常用于核酸方面的檢測(cè)，敏感度好且準(zhǔn)確性相對(duì)較高，酶聯(lián)免疫法常用于檢測(cè)獸 藥殘留及動(dòng)物疫病，具有特異性和靈敏度比較高的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)初篩有較好的應(yīng)用前景， 但這兩者都需要專(zhuān)業(yè)的儀器設(shè)備和操作人員進(jìn)行檢驗(yàn)操作，對(duì)試驗(yàn)條件要求較高，施行不 方便，成本高。
[0005]目前應(yīng)用比較成熟的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法還有免疫膠體金試紙檢測(cè)方法，膠體金技 術(shù)具有方便快捷、特異敏感、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀(guān)等優(yōu)勢(shì)，適合 于大批量檢測(cè)和大面積普查等。
[0006] 膠體金(colloidal gold)，又稱(chēng)金溶膠(gold solution)，是指分散相粒子直徑在 1一150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標(biāo) 記物用于免疫組織化學(xué)，近10多年來(lái)膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠 體金免疫分析在藥物檢測(cè)、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來(lái)越受到相關(guān) 研究領(lǐng)域的重視。膠體金作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)始于1971年，F(xiàn)aulk等應(yīng)用電鏡免疫 膠體金染色法(IGS)觀(guān)察沙門(mén)氏菌，此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合.1974年Romano等 將膠體金標(biāo)記在第二抗體(馬抗人IgG)上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega 發(fā)現(xiàn)了膠體金標(biāo)記物在光鏡水平的應(yīng)用。膠體金在免疫化學(xué)中的這種應(yīng)用，又被稱(chēng)為免疫 金.之后，許多學(xué)者進(jìn)一步證實(shí)膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)的生物活性無(wú) 明顯改變.它可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多膚、抗原、激素、核酸等 生物大分子的精確定位，也可以用于日常的免疫診斷，進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位，因而在臨床 診斷及藥物檢測(cè)等方面的應(yīng)用已受到廣泛的重視。
[0007] 具有高效、快速、結(jié)果判斷直觀(guān)和穩(wěn)定的檢測(cè)動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒的方法和相關(guān) 的產(chǎn)品是目前市場(chǎng)所需。
【具體實(shí)施方式】
[0008]
[0009] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系 統(tǒng)及制備方法，其特點(diǎn)是充分應(yīng)用了膠體金的操作簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用于各種現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的技術(shù) 優(yōu)點(diǎn)，配套膠體金定量分析儀和特有的曲線(xiàn)建立方法，達(dá)到了膠體金能定量檢測(cè)出樣品的 含量，綜合了膠體金和ELISA的雙重優(yōu)點(diǎn)，形成兩種技術(shù)的互補(bǔ)。
[0010] 解決以上技術(shù)問(wèn)題的本發(fā)明中的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)， 包括膠體金定量檢測(cè)盒和手持式讀卡儀器，其特征在于:所述檢測(cè)系統(tǒng)能夠?qū)Υ龣z測(cè)的動(dòng) 物樣品給出準(zhǔn)確的定量檢測(cè)結(jié)果，該動(dòng)物疫病可包括豬瘟、豬圓環(huán)、豬偽狂犬、豬口蹄疫、豬 藍(lán)耳。所述待檢測(cè)的動(dòng)物樣品為血清或全血;檢測(cè)步驟為取50-150ul的動(dòng)物樣品加入到檢 測(cè)卡中，反應(yīng)5-20分鐘后放入手持式讀卡儀進(jìn)行T/C值讀數(shù)，根據(jù)不同濃度的比值運(yùn)用函數(shù) 擬合建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0011] 所述定量檢測(cè)結(jié)果為根據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的 函數(shù)關(guān)系，該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得 出定量檢測(cè)結(jié)果;該手持式讀卡儀器為通過(guò)成像系統(tǒng)測(cè)量C/T線(xiàn)的反射光強(qiáng)度，并通過(guò)隨機(jī) 芯片將檢測(cè)結(jié)果通過(guò)無(wú)限網(wǎng)絡(luò)傳輸?shù)街醒胂到y(tǒng)或云端服務(wù)器;該手持式讀卡儀器包括智能 手機(jī)、塑料模具、鏡片、玻璃板、9V電池、LED燈帶、抽屜式托盤(pán)。
[0012] 所述函數(shù)關(guān)系式為:y = aln(x)-b，其中y代表T/C值，x代表濃度，a代表斜率，b代表 常數(shù)。
[0013] 所述每個(gè)批次的產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以相應(yīng)調(diào)整，這樣減少了不同批次產(chǎn)品間定 量分析關(guān)系的差別，確保不同批次產(chǎn)品對(duì)同一待測(cè)物定量檢測(cè)關(guān)系的一致性，并將內(nèi)標(biāo)曲 線(xiàn)輸入軟件制成二維碼方便客戶(hù)操作使用。
[0014] 所述檢測(cè)盒，包括卡盒和試劑條，試劑條由基板、樣品墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水 墊組成，膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬病毒蛋白和牛血清白蛋白，反應(yīng)膜上包被有檢 測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬病毒抗原；質(zhì)量控制抗體顯示為質(zhì) 控線(xiàn)C，為羊抗鼠IgG抗體。
[0015] 檢測(cè)線(xiàn)T與質(zhì)控線(xiàn)C距離可為5-10mm，間距太長(zhǎng)了會(huì)增長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間，且對(duì)檢測(cè)卡殼 的視窗要求就更長(zhǎng)。T線(xiàn)中豬病毒抗原質(zhì)量濃度可為0.5-3mg/ml，T線(xiàn)濃度過(guò)低，對(duì)后面顯色 效果不理想，過(guò)高了會(huì)降低檢測(cè)條的靈敏度，所以T線(xiàn)的濃度是需要在實(shí)驗(yàn)研發(fā)中選擇一個(gè) 合適濃度，進(jìn)而達(dá)到市場(chǎng)產(chǎn)品的質(zhì)量要求。
[0016]所述試劑條制備方法包括以下步驟，所用原料用量份數(shù)為重量份：
[0017] (1)膠體金溶液的制備：
[0018] 將500份蒸餾水加熱至沸騰后，再加入氯金酸1-5份和檸檬酸三鈉1-5份，攪拌并煮 沸8-12min，冷卻至常溫，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)檢測(cè)其峰值及半峰寬；原料在使用前經(jīng)過(guò)純 化，純度達(dá)到97%以上，特異性強(qiáng)，無(wú)非特異性結(jié)合。
[0019] 膠體金溶液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):清亮透明的橘紅色或紫紅色，無(wú)懸浮顆粒、液體表面無(wú)飄金 情況，用紫外檢測(cè)波峰應(yīng)該越陡峭半峰寬越窄，膠體金的質(zhì)量越好。
[0020] (2)膠體金的標(biāo)記及噴金：
[0021] 取100份膠體金溶液，加入1.38%的碳酸鉀緩沖液8-12份，攪拌中加入豬病毒蛋白 0.015-0.025份繼續(xù)攪拌8-12min，再加入牛血清白蛋白10-20份進(jìn)行偶聯(lián)，10000r/min離心 4-7min，去掉上清，留下膠體金顆粒溶液進(jìn)行噴金使用;一般膠體金在進(jìn)行標(biāo)記前都會(huì)進(jìn)行 方正梯度實(shí)驗(yàn)，既對(duì)膠體金的標(biāo)記條件和標(biāo)記量進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)，在最佳的PH值和標(biāo)記量的 條件下進(jìn)行標(biāo)記和封閉。
[0022]用噴金劃膜機(jī)在玻璃纖維素膜上噴金，用量2.5-8.5111/(^，再在溫度35-38°(：下干 燥10-14h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0023] (3)硝酸纖維素膜的C/T畫(huà)線(xiàn)：
[0024]用DC緩沖液將羊抗鼠IgG稀釋成0.5-3mg/ml的羊抗鼠IgG溶液，在PVC底板上貼好 硝酸纖維素膜，中間用羊抗鼠IgG畫(huà)C線(xiàn)，用量0.5-3ul/cm;
[0025] DC緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.05g KCl+0.144gNa2HP04+0.067g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml。
[0026]用DT緩沖液將豬病毒蛋白稀釋成0.5-3mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn) 往下5-10_處用稀釋后的豬病毒蛋白畫(huà)T線(xiàn)，用量0.5-3ul/cm;原料豬病毒抗原質(zhì)量濃度要 達(dá)到 lmg/ml。
[0027] DT緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.15g KCl+0.288gNa2HP04+0.134g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml，再加入5 %體積的海藻糖。
[0028] 將畫(huà)好線(xiàn)的PVC底板在溫度35-38°C下干燥8-12h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0029] (4)膠體金大板的制作：
[0030]在步驟（3)中的PVC底板上貼上噴好金的玻璃纖維塑模，貼上樣品墊及吸水紙即 可。
[0031 ] 所述步驟(2)中膠體金顆粒大小為15-60nm，優(yōu)化顆粒大小為20-40nm，膠體金顆粒 溶液質(zhì)量濃度為〇. 8-1.2%，優(yōu)化濃度為1 %。
[0032]所述樣品墊使用前進(jìn)行處理，用定量的DY緩沖液進(jìn)行均勻涂抹，其中，100ml的D Y 緩沖液配方為：10%tw20+表面活性劑5-15% + l%PEG20000+10%海藻糖，用蒸餾水定容到 100ml。表面活性劑可為 TritonX-100、Tween-20、Tween-80 等。
[0033] 樣品墊處理步驟:將進(jìn)口的Alhstorm8964裁切成2cm*30cm，用定量的DY緩沖液進(jìn) 行均勻涂抹，保證樣品墊的均一性。
[0034]所述膠體金溶液PH值為6.2-7.8，原料的等電點(diǎn)ph值加0.5為最適PH標(biāo)記點(diǎn)。
[0035]所述步驟(2)中豬病毒蛋白質(zhì)量體積濃度為3-4mg/ml，牛血清白蛋白質(zhì)量濃度10-15%〇
[0036]本發(fā)明中的試劑盒基于膠體金雙抗夾心技術(shù)，檢測(cè)卡的硝酸纖維膜上預(yù)先包被了 豬病毒抗原(T線(xiàn))和羊抗鼠IgG抗體(C線(xiàn)）。其中T線(xiàn)為檢測(cè)線(xiàn)，C線(xiàn)為質(zhì)控線(xiàn)。金標(biāo)抗原特異 性結(jié)合豬病毒抗體，T線(xiàn)顯色深度隨豬病毒抗體濃度呈線(xiàn)性改變，通過(guò)手持檢測(cè)儀的分析即 可測(cè)出樣本中豬病毒抗體效價(jià)高低。
[0037]本發(fā)明中的試劑盒檢測(cè)時(shí)間快、方便、穩(wěn)定、且準(zhǔn)確，適合范圍廣。不即只顯色，還 可以定量測(cè)定，可測(cè)定出具體的數(shù)值，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，易把握，誤差少，減少人為評(píng)估帶來(lái)的 偏差。
【附圖說(shuō)明】
[0038] 圖1為本發(fā)明中豬瘟病毒抗體檢測(cè)血清曲線(xiàn)圖
[0039] 圖2為本發(fā)明中豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)血清曲線(xiàn)圖
[0040] 圖3為本發(fā)明中豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)血清曲線(xiàn)圖
【具體實(shí)施方式】
[0041] 以下用具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明：
[0042] 以下實(shí)施例中待檢測(cè)的動(dòng)物樣品為血清或全血;檢測(cè)步驟為取50-150ul的動(dòng)物樣 品加入到檢測(cè)卡中，反應(yīng)5-20分鐘后放入手持式讀卡儀進(jìn)行T/C值讀數(shù)，根據(jù)不同濃度的比 值運(yùn)用函數(shù)擬合建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0043] 定量檢測(cè)結(jié)果為根據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù) 關(guān)系，該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得出定 量檢測(cè)結(jié)果;該手持式讀卡儀器為通過(guò)成像系統(tǒng)測(cè)量C/T線(xiàn)的反射光強(qiáng)度，并通過(guò)隨機(jī)芯片 將檢測(cè)結(jié)果通過(guò)無(wú)限網(wǎng)絡(luò)傳輸?shù)街醒胂到y(tǒng)或云端服務(wù)器;該手持式讀卡儀器包括智能手 機(jī)、塑料模具、鏡片、玻璃板、9V電池、LED燈帶、抽屜式托盤(pán)。
[0044] 每個(gè)批次的產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以相應(yīng)調(diào)整，這樣減少了不同批次產(chǎn)品間定量分 析關(guān)系的差別，確保不同批次產(chǎn)品對(duì)同一待測(cè)物定量檢測(cè)關(guān)系的一致性，并將內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)輸 入軟件制成二維碼方便客戶(hù)操作使用。
[0045] 實(shí)施例1
[0046] 動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng):豬瘟病毒抗體膠體金定量檢測(cè)試劑系 統(tǒng)，設(shè)有膠體金定量檢測(cè)盒和手持式讀卡儀器，對(duì)待檢測(cè)的動(dòng)物樣品給出準(zhǔn)確的定量檢測(cè) 結(jié)果。定量檢測(cè)結(jié)果為根據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù)關(guān) 系，函數(shù)關(guān)系式為:y = aln(x)-b。
[0047] 該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得出 定量檢測(cè)結(jié)果。
[0048] 豬瘟病毒抗體膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括卡盒和試劑條，試劑條由基板、樣品 墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水墊組成，膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬瘟病毒蛋白和牛血 清白蛋白，反應(yīng)膜上包被有檢測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬瘟病 毒抗原;質(zhì)量控制抗體顯示為質(zhì)控線(xiàn)C，為羊抗鼠IgG抗體。
[0049] 檢測(cè)線(xiàn)T與質(zhì)控線(xiàn)C一般控制在5mm，間距太長(zhǎng)了會(huì)增長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間，且多檢測(cè)卡殼的 視窗要求就更長(zhǎng)。T線(xiàn)中豬病毒抗原質(zhì)量濃度為0.3mg/ml。
[0050] 試劑條制備方法包括以下步驟，所用原料用量份數(shù)為重量份：
[00511 (1)膠體金的制備：
[0052]將500份蒸餾水加熱至沸騰后，再加入氯金酸1份和檸檬酸三鈉1份，攪拌并煮沸 lOmin，冷卻至常溫，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)檢測(cè)其峰值及半峰寬，峰值229-231，半峰寬580-585〇
[0053] 原料在使用前經(jīng)過(guò)純化，通過(guò)儀器檢測(cè)其純度達(dá)到97%以上，特異性強(qiáng)，無(wú)非特異 性結(jié)合。膠體金液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):清亮透明的橘紅色或紫紅色，無(wú)懸浮顆粒、液體表面無(wú)飄金情 況，用紫外檢測(cè)波峰應(yīng)該越陡峭半峰寬越窄，膠體金的質(zhì)量越好。
[0054] 膠體金溶液PH值為6.2，膠體金顆粒大小為30nm，膠體金濃度為0.8%。
[0055] (2)膠體金的標(biāo)記及噴金：
[0056]取100份膠體金溶液，加入1.38%的碳酸鉀緩沖液8份，攪拌中再加入3mg/ml豬病 毒蛋白0.015份繼續(xù)攪拌8min，再加入15%牛血清白蛋白15份進(jìn)行偶聯(lián)，10000r/min離心 7min，去掉上清，留下清金顆粒溶液進(jìn)行噴金使用；
[0057]用噴金劃膜機(jī)在玻璃纖維素膜(GE公司進(jìn)口的Acuuflow G)上噴金，用量2.5ul/ cm，蛋白濃度為4ug/ml，再在溫度35 °C下干燥14h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0058]豬瘟病毒原料通過(guò)儀器檢測(cè)其純度達(dá)到97%以上，特異性強(qiáng)，沒(méi)有非特異性吸附； 蛋白在使用前，一般都需要進(jìn)行純化或電泳，保證其純度和蛋白含量。
[0059] (3)硝酸纖維素膜的C/T畫(huà)線(xiàn)：
[0060]用DC緩沖液將羊抗鼠IgG稀釋成0.5mg/ml的羊抗鼠IgG溶液，在PVC底板上貼好硝 酸纖維素膜，中間用羊抗鼠IgG畫(huà)C線(xiàn)，用量0.5ul/cm;
[0061 ] DC緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.05g KCl+0.144gNa2HP04+0.067g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml。
[0062]用DT緩沖液將豬瘟病毒抗原稀釋成0.5mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn) 下端5mm處用稀釋后的豬瘟病毒蛋白畫(huà)T線(xiàn)，用量lul/cm;原料豬瘟病毒抗原質(zhì)量濃度要達(dá) 至丨Jlmg/ml〇
[0063] DT緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.15g KCl+0.288gNa2HP04+0.134g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml，再加入5 %體積的海藻糖。
[0064] 將畫(huà)好線(xiàn)的PVC底板在溫度37°C下干燥12h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0065] (4)膠體金大板的制作：
[0066]在步驟（3)中的PVC底板上貼上噴好金的玻璃纖維塑模，貼上樣品墊及吸水紙即 可。玻璃纖維素膜在貼的過(guò)程中要疊加硝酸纖維素膜貼樣品墊按照樣品墊下端與 PVC底端邊緣對(duì)齊，貼吸水紙時(shí)必須與硝酸纖維素膜上端疊加l-2mm即可。粘貼過(guò)程中一定 要注意別再硝酸纖維素膜上留下痕跡，粘貼地方一定要牢固，疊加部分一定要相互接觸，不 能彼此脫離。
[0067]樣品墊使用前進(jìn)行處理：用定量的DY緩沖液將裁切好的樣品墊進(jìn)行均勻涂抹，可 以用移液器、玻璃棒進(jìn)行涂抹，或者直接用濕侵法，使其樣品墊均勻涂抹。其中，l〇〇ml的D Y 緩沖液配方為：10%丨￥20+了￥6611-20 15% + 1%?￡620000+10%海藻糖，用蒸餾水定容到 100ml〇
[0068] 樣品墊處理步驟:將進(jìn)口的Alhstorm8964裁切成2cm*30cm，用定量的DY緩沖液進(jìn) 行均勻涂抹，保證樣品墊的均一性。
[0069]實(shí)施例2豬圓環(huán)病毒抗體膠體金定量檢測(cè)試劑系統(tǒng)
[0070]其它內(nèi)容如實(shí)施例1中，豬圓環(huán)病毒抗體定量檢測(cè)試劑系統(tǒng)，設(shè)有膠體金定量檢測(cè) 盒和手持式讀卡儀器，對(duì)待檢測(cè)的動(dòng)物樣品給出準(zhǔn)確的定量檢測(cè)結(jié)果。定量檢測(cè)結(jié)果為根 據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù)關(guān)系，函數(shù)關(guān)系式為:y = aln (x)-b〇
[0071]該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得出 定量檢測(cè)結(jié)果。
[0072]豬圓環(huán)病毒抗體膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括卡盒和試劑條，試劑條由基板、樣品 墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水墊組成，膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬圓環(huán)病毒和牛血清 白蛋白，反應(yīng)膜上包被有檢測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬圓環(huán)病 毒抗原;質(zhì)量控制抗體顯示為質(zhì)控線(xiàn)C，為羊抗鼠IgG抗體。
[0073]檢測(cè)線(xiàn)T與質(zhì)控線(xiàn)C一般控制在5mm，間距太長(zhǎng)了會(huì)增長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間，且多檢測(cè)卡殼的 視窗要求就更長(zhǎng)。
[0074] T線(xiàn)中豬圓環(huán)病毒抗原質(zhì)量濃度為3ug/ml。
[0075] 試劑條制備方法包括以下步驟，所用原料用量份數(shù)為重量份：
[0076] (1)膠體金的制備：
[0077]將500份蒸餾水加熱至沸騰后，再加入氯金酸5份和檸檬酸三鈉5份，攪拌并煮沸 lOmin，冷卻至常溫，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)檢測(cè)其峰值及半峰寬；
[0078] 膠體金溶液PH值為7.3，膠體金顆粒大小為40nm，膠體金濃度為1.2%。
[0079] (2)膠體金的標(biāo)記及噴金：
[0080] 取100份膠體金溶液，加入1.38%的碳酸鉀緩沖液12份，攪拌中再加入3.5mg/ml豬 病毒蛋白〇. 025份繼續(xù)攪拌8min，再加入10 %牛血清白蛋白20份進(jìn)行偶聯(lián)，10000r/min離心 4min，去掉上清，留下清膠體金顆粒溶液進(jìn)行噴金使用；
[0081]用噴金劃膜機(jī)在玻璃纖維素膜(GE公司進(jìn)口的Acuuflow G)上噴金，用量4.5ul/ cm，蛋白濃度為6ug/ml，再在溫度37 °C下干燥10h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0082] (3)硝酸纖維素膜的C/T畫(huà)線(xiàn)：
[0083]用DC緩沖液將羊抗鼠IgG稀釋成3mg/ml的羊抗鼠IgG溶液，在PVC底板上貼好硝酸 纖維素膜，中間用羊抗鼠IgG畫(huà)C線(xiàn)，用量3ul/cm;
[0084] DC緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.05g KCl+0.144gNa2HP04+0.067g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml。
[0085]用DT緩沖液將豬病毒蛋白稀釋成3mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn)往下 用稀釋后的豬病毒蛋白畫(huà)T線(xiàn)，用量8ul/cm;
[0086] DT緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.15g KCl+0.288gNa2HP04+0.134g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml，再加入5 %體積的海藻糖。
[0087]將畫(huà)好線(xiàn)的PVC底板在溫度37 °C下干燥8h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0088] (4)膠體金大板的制作：
[0089] 在步驟（3)中的PVC底板上貼上噴好金的玻璃纖維塑模，貼上樣品墊及吸水紙即 可。
[0090] 樣品墊使用前進(jìn)行處理：用定量的DY緩沖液將裁切好的樣品墊進(jìn)行均勻涂抹，可 以用移液器、玻璃棒進(jìn)行涂抹，或者直接用濕侵法，使其樣品墊均勻涂抹。其中，l〇〇ml的D Y 緩沖液配方為：10 % tw20+Tween-80 5 % + 1 % roG20000 + 10 %海藻糖，用蒸餾水定容到 100ml〇
[0091] 實(shí)施例3豬藍(lán)耳病毒抗體膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)
[0092] 其它內(nèi)容如實(shí)施例1中，豬圓環(huán)病毒膠體金抗體定量檢測(cè)試劑系統(tǒng)，設(shè)有膠體金定 量檢測(cè)盒和手持式讀卡儀器，對(duì)待檢測(cè)的動(dòng)物樣品給出準(zhǔn)確的定量檢測(cè)結(jié)果。定量檢測(cè)結(jié) 果為根據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù)關(guān)系，函數(shù)關(guān)系式為： y = aln(x)_b〇
[0093] 該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得出 定量檢測(cè)結(jié)果。
[0094] 豬藍(lán)耳病毒抗體膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括卡盒和試劑條，試劑條由基板、樣品 墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水墊組成，膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬病毒蛋白和牛血清 白蛋白，反應(yīng)膜上包被有檢測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬藍(lán)耳病 毒抗原;質(zhì)量控制抗體顯示為質(zhì)控線(xiàn)C，為羊抗鼠IgG抗體。
[0095] 檢測(cè)線(xiàn)T與質(zhì)控線(xiàn)C一般控制在8mm，間距太長(zhǎng)了會(huì)增長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間，且多檢測(cè)卡殼的 視窗要求就更長(zhǎng)。
[0096] T線(xiàn)中豬藍(lán)耳病毒抗原質(zhì)量濃度為0.6mg/ml，牛血清白蛋白質(zhì)量濃度為。
[0097] 試劑條制備方法包括以下步驟，所用原料用量份數(shù)為重量份：
[0098] (1)膠體金的制備：
[0099]將500份蒸餾水加熱至沸騰后，再加入氯金酸5份和檸檬酸三鈉3份，攪拌并煮沸 lOmin，冷卻至常溫，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)檢測(cè)其峰值及半峰寬；
[0100] 膠體金溶液PH值為7，原料的等電點(diǎn)ph值加0.5。膠體金顆粒大小為40nm，膠體金濃 度為1%。
[0101] (2)膠體金的標(biāo)記及噴金：
[0102] 取100份膠體金溶液，加入1.38%的碳酸鉀緩沖液9份，攪拌中加入3.8mg/ml豬病 毒蛋白0.022份繼續(xù)攪拌10111；[11，再加入12%牛血清白蛋白10份進(jìn)行偶聯(lián)，1000017 /1]1；[11離心 6min，去掉上清，留下清金顆粒溶液進(jìn)行噴金使用；
[0103] 用噴金劃膜機(jī)在玻璃纖維素膜(GE公司進(jìn)口的Acuuflow G)上噴金，用量3.2ul/ cm，蛋白濃度為8ug/ml，再在溫度36 °C下干燥13h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0104] (3)硝酸纖維素膜的C/T畫(huà)線(xiàn)：
[0105]用DC緩沖液將羊抗鼠IgG稀釋成2mg/ml的羊抗鼠IgG溶液，在PVC底板上貼好硝酸 纖維素膜，中間用羊抗鼠IgG畫(huà)C線(xiàn)，用量2ul/cm;
[0106] DC緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.05g KCl+0.144gNa2HP04+0.067g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml。
[0107]用DT緩沖液將豬病毒蛋白稀釋成0.6ug/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn)往 下6mm處用稀釋后的豬病毒蛋白畫(huà)T線(xiàn)，用量5ul/cm;
[0108] DT緩沖液配方為：0.8g NaCl+0.15g KCl+0.288gNa2HP04+0.134g NaH2P04,用蒸 餾水定容到l〇〇ml，再加入5 %體積的海藻糖。
[0109] 將畫(huà)好線(xiàn)的PVC底板在溫度37 °C下干燥9h，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0110] (4)膠體金大板的制作：
[0111] 在步驟（3)中的PVC底板上貼上噴好金的玻璃纖維塑模，貼上樣品墊及吸水紙即 可。
[0112] 粘貼過(guò)程中一定要注意別再硝酸纖維素膜上留下痕跡，粘貼地方一定要牢固，疊 加部分一定要相互接觸，不能彼此脫離。
[0113]樣品墊使用前進(jìn)行處理：用定量的DY緩沖液將裁切好的樣品墊進(jìn)行均勻涂抹，可 以用移液器、玻璃棒進(jìn)行涂抹，或者直接用濕侵法，使其樣品墊均勻涂抹。其中，l〇〇ml的D Y 緩沖液配方為：10%丨￥20+1^切1^-100 10%+1%?￡620000+10%海藻糖，用蒸餾水定容到 100ml〇
[0114] 實(shí)施例4豬口蹄疫病毒抗體膠體定量檢測(cè)系統(tǒng)
[0115] 其它內(nèi)容如實(shí)施例1中的內(nèi)容，生產(chǎn)工藝如下：
[0116] (1)膠體金的制備
[0117]膠體金的制備，500ml蒸餾水加熱至沸騰后，快速加入氯金酸5mg，在加入4mg的朽1 檬酸三鈉還原劑，持續(xù)攪拌并煮沸10分鐘，停止加熱后冷卻至常溫，通過(guò)可見(jiàn)光分光光度計(jì) 檢測(cè)其峰值及半峰寬即可。
[0118] (2)膠體金的標(biāo)記及噴金
[0119] 取100ml膠體金溶液，加入10ml碳酸鉀(稱(chēng)取13.8g無(wú)水K2C03,定容到1000ml)緩沖 液，在攪拌中加入311^/1]11的豬病毒蛋白2〇111繼續(xù)攪拌1〇1]1；[11，再加入15%的牛血清白蛋白 1^八(稱(chēng)取1581^4加蒸餾水1001111)151111進(jìn)行偶聯(lián)，100001'/111；[11離心5111；[11，去掉上清 ；留下清金 顆粒溶液進(jìn)行噴金使用。用噴金劃膜機(jī)按照3ul/cm的量在玻璃纖維素膜上進(jìn)行均勻噴金， 在37 °C恒溫干燥箱里進(jìn)行12h干燥；用自封袋進(jìn)行密封保存。
[0120] (3)硝酸纖維素膜的c/t的畫(huà)線(xiàn)
[0121] 先將羊抗鼠 IgG用DC緩沖液（0.8g NaCl+0.05g KC1+0.144gNa2HP04+0.067g NaH2P04用蒸餾水定容到100ml)稀釋成1.5mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜中間用羊 抗鼠IgG按照l(shuí)ul/cm進(jìn)行畫(huà)C線(xiàn)；T線(xiàn)用DT緩沖液（0.8g NaCl+0.15g KCl+0.288gNa2HP04+ 0.134gNaH2P04用蒸餾水定容到100ml，在加入5%體積的海藻糖)將豬病毒蛋白稀釋成2mg/ ml或2.5mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn)往下用稀釋后的豬病毒蛋白按照8ul/cm 進(jìn)行畫(huà)T線(xiàn);在37°C的恒溫干燥箱干燥10h即可，用自封袋進(jìn)行密封保存。
[0122] 試驗(yàn)一:對(duì)豬瘟病毒抗體的檢測(cè)
[0123] 陰性血清的驗(yàn)證:根據(jù)已知(經(jīng)過(guò)國(guó)家動(dòng)物疾控中心定的金標(biāo)法測(cè)定的）的20份陰 性血清，進(jìn)行雙樣平行性的測(cè)定，最終結(jié)果應(yīng)該是C線(xiàn)顯色，T線(xiàn)不顯色即為正確結(jié)果。
[0124] 陽(yáng)性血清的驗(yàn)證:根據(jù)經(jīng)過(guò)國(guó)家動(dòng)物獸醫(yī)規(guī)定的金標(biāo)法測(cè)定的的5份強(qiáng)陽(yáng)性豬血 清，分別按照等比稀釋成7個(gè)濃度點(diǎn)（1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512)各lml，再 用本發(fā)明中的豬病毒檢測(cè)試劑條分別測(cè)定其以上不同濃度的35份血清。
[0125] 即檢測(cè)具體操作步驟為:每個(gè)檢測(cè)條加入液稀釋后的150ul血清后，在10-30°C的 條件下靜置15min后，用手持式讀卡儀器進(jìn)行共計(jì)35份不同濃度的血清的測(cè)定;分別測(cè)定其 每個(gè)檢測(cè)條的C值、T值、T/C值三個(gè)數(shù)據(jù)。
[0126] 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:根據(jù)這5份血清的七個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定其值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立(橫 坐標(biāo)為效價(jià)，縱坐標(biāo)也為T(mén)/C值），具體如圖1:
[0127] 再根據(jù)T和C線(xiàn)的色度變化通過(guò)儀器的檢測(cè)和方程式計(jì)算出數(shù)值，T/C值和抗體效 價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù)關(guān)系即標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程式為y = aln(x)-b，如圖1。
[0128] 結(jié)果分析:當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)> = 16時(shí)，呈陽(yáng)性，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬瘟病毒抗 體的滴度較高，暫不需要接種豬瘟疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)〈16時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬 瘟病毒抗體效價(jià)不能達(dá)到抵御豬瘟病毒強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)效價(jià)，應(yīng)當(dāng)及時(shí)補(bǔ)種豬瘟病毒 疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品檢測(cè)結(jié)果呈陰性時(shí)，說(shuō)明被檢測(cè)樣品中沒(méi)有豬瘟病毒抗體。如果豬群健 康，應(yīng)當(dāng)及時(shí)接種豬瘟病毒疫苗。
[0129] 試驗(yàn)二:對(duì)豬圓環(huán)病毒抗體的檢測(cè)
[0130] 其它內(nèi)容如試驗(yàn)一中的操作步驟，曲線(xiàn)圖如圖2:
[0131] 結(jié)果分析：當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)>=40時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬圓環(huán)病毒抗體的 滴度較高，暫不需要接種豬圓環(huán)疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)〈40時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬圓 環(huán)病毒抗體效價(jià)不能達(dá)到抵御豬圓環(huán)病毒強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)效價(jià)，應(yīng)當(dāng)及時(shí)補(bǔ)種豬圓環(huán) 病毒疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品檢測(cè)結(jié)果呈陰性時(shí)，說(shuō)明被檢測(cè)樣品中沒(méi)有豬圓環(huán)病毒抗體。如果 豬群健康，應(yīng)當(dāng)及時(shí)接種豬圓環(huán)病毒疫苗。
[0132] 試驗(yàn)三:對(duì)豬藍(lán)耳病毒抗體的檢測(cè)
[0133] 其它內(nèi)容如試驗(yàn)一中的操作步驟，曲線(xiàn)圖如圖3:
[0134] 結(jié)果分析：當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)>=40時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬藍(lán)耳病毒抗體的 滴度較高，暫不需要接種豬藍(lán)耳疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品抗體效價(jià)〈40時(shí)，說(shuō)明檢測(cè)樣品中豬藍(lán) 耳病毒抗體效價(jià)不能達(dá)到抵御豬藍(lán)耳病毒強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)效價(jià)，應(yīng)當(dāng)及時(shí)補(bǔ)種豬藍(lán)耳 病毒疫苗。當(dāng)被檢測(cè)樣品檢測(cè)結(jié)果呈陰性時(shí)，說(shuō)明被檢測(cè)樣品中沒(méi)有豬藍(lán)耳病毒抗體。如果 豬群健康，應(yīng)當(dāng)及時(shí)接種豬藍(lán)耳病毒疫苗。
[0135] 試驗(yàn)四：
[0136] 檢測(cè)操作方法如試驗(yàn)一，設(shè)置對(duì)照組1 (進(jìn)口愛(ài)德士試劑盒，ELISA試劑盒），對(duì)照組 2 (間接血凝試劑盒)和實(shí)驗(yàn)組(本發(fā)明中的檢測(cè)盒），對(duì)比結(jié)果如下：
[0137] 血清號(hào)對(duì)照組1 對(duì)照組2 實(shí)驗(yàn)組符合率 1 + + + 定量膠體金與進(jìn)口試劑盒的陽(yáng)性符合率是:90%,與間接血凝試劑盒符合本是 100%； ^： + + + 3_ + + + i + + + 5 + _ _ 6 + + + 7 + + + 8. + + + 9 + + + :]-0+ + + U _ 定量膠體金與進(jìn)口試劑盒的陽(yáng)性符合率是1〇(?，與間接血凝試劑盒符合率 是 100%; 12 _ 13 14 15 16 17 _ _ _ 18 19 20 _
[0138] (注:其中"+"代表陽(yáng)性，"一"代表陰性，符合率都達(dá)到了90%及以上）
[0139] 從以上可以看出，本發(fā)明中的檢測(cè)盒檢測(cè)出的結(jié)果與目前國(guó)際認(rèn)可的檢測(cè)盒的檢 測(cè)結(jié)果基本一致，且速度快，操作方便，適用范圍廣，對(duì)檢測(cè)操作人員的要求不高，檢測(cè)結(jié)果 穩(wěn)定、準(zhǔn)確。
[0140] 本發(fā)明中進(jìn)行動(dòng)物疫病檢測(cè)，步驟可如下：
[0141] (1)將檢測(cè)箱的拉桿縮放到箱體里面，箱體正面向上平放于臺(tái)面，打開(kāi)正面的兩個(gè) 保險(xiǎn)扣；
[0142] (2)詳細(xì)閱讀檢測(cè)箱里面的使用說(shuō)明書(shū)、技術(shù)參數(shù)表；
[0143] (3)取出血清板、移液器、離心機(jī)，用移液器移取一定量的動(dòng)物血液在離心機(jī)的作 用下分離出血清；
[0144] (4)取出檢測(cè)試劑條、計(jì)時(shí)器，打開(kāi)外包裝平放于臺(tái)面，用移液器量取一定量的血 清于檢(5)測(cè)條的加樣孔中，開(kāi)始計(jì)時(shí)20min;
[0145] (6)取出手持檢測(cè)儀，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，待15分鐘時(shí)將檢測(cè)條放入檢測(cè)儀進(jìn)行定量讀 數(shù)。
[0146] 本發(fā)明中試劑和樣本用量較小，血清樣品量150ul，不需y-計(jì)數(shù)器、熒光顯微鏡、 酶標(biāo)檢測(cè)儀等貴重儀器，更適于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用，沒(méi)有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質(zhì)參 與，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以長(zhǎng)期保存，時(shí)間大大縮短，提高了檢測(cè)速度。因此膠體金定量檢測(cè)試劑盒 在霉菌毒素檢測(cè)行業(yè)中可以得到廣泛應(yīng)用，從重復(fù)性、準(zhǔn)確性、靈敏度三方面結(jié)果來(lái)說(shuō)都符 合檢測(cè)要求;對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)大量樣品篩選檢測(cè)來(lái)說(shuō)，為客戶(hù)提供了操作簡(jiǎn)單、儀器化程度低、專(zhuān) 業(yè)性低、快速等優(yōu)勢(shì)，極大的縮短了客戶(hù)的檢測(cè)時(shí)間，提高了工作效率。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)，包括膠體金定量檢測(cè)盒和手持式讀 卡儀器，其特征在于:所述檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)待檢測(cè)的動(dòng)物樣品給出準(zhǔn)確的定量檢測(cè)結(jié)果;該動(dòng)物 疫病類(lèi)包括豬瘟、豬藍(lán)耳、豬圓環(huán)、豬偽狂犬和豬口蹄疫。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于： 所述待檢測(cè)的動(dòng)物樣品為血清或全血;檢測(cè)步驟為取50-150ul的動(dòng)物樣品加入到檢測(cè)卡 中，待檢測(cè)卡層析反應(yīng)5-20分鐘后放入手持式讀卡儀進(jìn)行讀數(shù)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于： 所述定量檢測(cè)結(jié)果為根據(jù)手持式讀卡儀測(cè)出的T/C值和抗體效價(jià)梯度值成相應(yīng)的函數(shù)關(guān) 系，該函數(shù)關(guān)系式按照對(duì)數(shù)函數(shù)進(jìn)行擬合曲線(xiàn)，從而制定每批產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)而得出定量 檢測(cè)結(jié)果;該手持式讀卡儀器為通過(guò)成像系統(tǒng)測(cè)量C/T線(xiàn)的反射光強(qiáng)度，并通過(guò)隨機(jī)芯片將 檢測(cè)結(jié)果通過(guò)無(wú)限網(wǎng)絡(luò)傳輸?shù)街醒胂到y(tǒng)或云端服務(wù)器;該手持式讀卡儀器主要由智能手 機(jī)、塑料模具、鏡片、玻璃板、9V電池、LED燈帶、抽屜式托盤(pán)組成。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)， 其特征在于:所述檢測(cè)盒包括試劑條和試劑盒，試劑條由基板、樣品墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和 吸水墊組成，膠體金墊上吸附有膠體金標(biāo)記的豬病毒蛋白和牛血清白蛋白，反應(yīng)膜上包被 有檢測(cè)抗原和質(zhì)量控制抗體，檢測(cè)抗原顯示為檢測(cè)線(xiàn)T，為豬病毒抗原；質(zhì)量控制抗體顯示 為質(zhì)控線(xiàn)C，為羊抗鼠 IgG抗體。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于： 所述函數(shù)關(guān)系式為:y = a In (X) -b，其中y代表T/C值，X代表濃度，a代表斜率，b代表常數(shù)。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于： 所述每個(gè)批次的產(chǎn)品的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，這樣減少了不同批次產(chǎn)品間定量分 析關(guān)系的差別，確保不同批次產(chǎn)品對(duì)同一待測(cè)物定量檢測(cè)關(guān)系的一致性，并將內(nèi)標(biāo)曲線(xiàn)輸 入軟件制成二維碼方便客戶(hù)操作使用。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)的制備方 法，其特征在于:所述檢測(cè)盒中的試劑條制備方法包括以下步驟，所用原料用量份數(shù)為重量 份： (1) 膠體金溶液的制備： 將500份蒸餾水加熱至沸騰后，再加入氯金酸1-5份和檸檬酸三鈉1-5份，攪拌并煮沸8-12min，冷卻至常溫； (2) 膠體金的標(biāo)記及噴金： 取100份膠體金溶液，加入1.38 %的碳酸鉀緩沖液8-12份，攪拌中加入豬病毒蛋白 0.015-0.025份繼續(xù)攪拌8-12min，再加入牛血清白蛋白10-20份進(jìn)行偶聯(lián)，10000r/min離心 4-7min，去掉上清，留下層膠體金顆粒溶液進(jìn)行噴金使用； 在玻璃纖維素膜上噴金，用量2.5-8.5ul/cm，蛋白濃度2-10ug/ml，再在溫度35-38°C下 干燥IO-Hh，密封保存?zhèn)溆茫? (3) 硝酸纖維素膜上的C/T畫(huà)線(xiàn)： 用DC緩沖液將羊抗鼠 IgG稀釋成0.5-3mg/ml的羊抗鼠 IgG溶液，在PVC底板上貼好硝酸 纖維素膜中間用羊抗鼠 IgG畫(huà)C線(xiàn)，用量0.5-3ul/cm; 用DT緩沖液將豬病毒抗原稀釋成0.5-3mg/ml，在PVC底板上貼好硝酸纖維素膜C線(xiàn)往下 5-10mm處用稀釋后的豬病毒蛋白畫(huà)T線(xiàn)，用量0.5-3ul/cm; 將畫(huà)好線(xiàn)的PVC底板在溫度35-38°C下干燥8-12h，密封保存?zhèn)溆茫? (4)膠體金大板的制作： 在步驟(3)中的PVC底板上貼上噴好金的玻璃纖維塑模，貼上樣品墊及吸水紙即可。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)的制備方法， 其特征在于:所述步驟(2)中膠體金顆粒大小為15-60nm，膠體金顆粒溶液質(zhì)量濃度為0.5- 2%〇9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)的制備方法， 其特征在于:所述步驟(4)中的樣品墊使用前進(jìn)行處理，即用定量的DY緩沖液進(jìn)行均勻涂 抹，其中，100mL的D Y緩沖液配方為：10%tw20+表面活性劑5-15%+1 %PEG20000+10%海藻 糖，用蒸餾水定容到l〇〇ml。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種動(dòng)物疫病抗體類(lèi)病毒膠體金定量檢測(cè)系統(tǒng)的制備方法， 其特征在于:所述膠體金溶液PH值為6.2-7.8。
【文檔編號(hào)】G01N33/569GK105911277SQ201610260006
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月25日
【發(fā)明人】蔡文勝, 劉文副, 李丹, 胡俊峰, 徐江波, 馬路春
【申請(qǐng)人】成都盛泰爾生物醫(yī)藥科技有限公司