一種測(cè)定免疫球蛋白a的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分：試劑R1：緩沖液、無(wú)機(jī)鹽離子、促凝劑、防腐劑、抗人類風(fēng)濕因子抗體，試劑R2：緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑、膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)；用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的免疫球蛋白A的濃度。本發(fā)明具有檢測(cè)準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑 盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白D 和免疫球蛋白A，其主要作用是與抗原抗體免疫反應(yīng)，生成抗原-抗體復(fù)合物，從而阻斷病原 體對(duì)機(jī)體的危害，使病原體失去致病作用，另一方面，免疫球蛋白有時(shí)也有致病作用，臨床 上的過(guò)敏癥狀如花粉引起的支氣管痙攣，青霉素導(dǎo)致全身過(guò)敏反應(yīng)，皮膚蕁麻疹(俗稱風(fēng)疹 塊)等，免疫球蛋白制劑能增強(qiáng)人體抗病毒的能力，可作藥用，如注射人血清或人胎盤中提 取的丙種球蛋白制劑可防治麻疹、傳染性肝炎等傳染病。
[0003] 免疫球蛋白A在正常人血清中的含量?jī)H次于免疫球蛋白G，占血清免疫球蛋白含量 的10~20%，從結(jié)構(gòu)來(lái)看，免疫球蛋白A有單體、雙體、三體及多聚體之分，按其免疫功能又分 為血清型及分泌型兩種，血清型免疫球蛋白A存在于血清中，其含量占總免疫球蛋白A的85% 左右，血清型免疫球蛋白A雖有免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的某些功能，但在血清中并不顯 示重要的免疫功能，分泌型免疫球蛋白A存在于分泌液中，如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管 分泌液、胃腸液、尿液、汗液等，分泌型免疫球蛋白A是機(jī)體粘膜局部抗感染免疫的主要抗 體，故又稱粘膜局部抗體，免疫球蛋白A不能通過(guò)胎盤，新生兒血清中無(wú)免疫球蛋白A抗體， 但可從母乳中獲得分泌型免疫球蛋白A，新生兒出生4~6個(gè)月后，血中可出現(xiàn)免疫球蛋白A， 以后逐漸升高，到青少年期達(dá)到高峰。
[0004] 臨床上免疫球蛋白A升高常見(jiàn)的有:免疫球蛋白A型多發(fā)性骨髓瘤，系統(tǒng)性紅斑狼 瘡，結(jié)節(jié)病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，白塞氏綜合征，門靜脈性肝硬化，某些感染性疾病，濕疹，血小 板減少癥，Wiskott-Aldrich綜合征，慢支緩解期等，分泌型免疫球蛋白A介于500~2500mg/ L則病情重，病程長(zhǎng)者<500mg/L，臍帶血免疫球蛋白A升高:風(fēng)疹，單純皰疹，弓形體病，巨細(xì) 胞病毒，柯薩奇病毒，革蘭氏陰性桿菌宮內(nèi)感染等。
[0005] 臨床上免疫球蛋白A降低：遺傳性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥，非IgA型多發(fā)性骨髓瘤，重鏈 病，輕鏈病，吸收不良綜合征，原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥，繼發(fā)性蛋白血癥，繼發(fā)性無(wú)丙種球 蛋白血癥，繼發(fā)性免疫缺陷病，反復(fù)呼吸道感染，輸血反應(yīng)，自身免疫性疾病，腎病綜合征， 慢性淋巴細(xì)胞白血病，霍奇金病，遺傳性胸腺發(fā)育不全，丙種球蛋白異常血癥m型，丙種球 蛋白異常血癥I型，丙種球蛋白異常血癥n型等。
[0006] 目前臨床上使用較為廣泛的免疫球蛋白A的檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附法和高效液 相色譜法，酶聯(lián)免疫吸附法操作過(guò)程復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，且對(duì)操作人員有較高的專業(yè)技術(shù)要求 高，而且檢測(cè)不準(zhǔn)確。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)操作復(fù)雜、測(cè)定準(zhǔn)確度低的缺 陷，而提供一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒及其制備方法。
[0008] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開了一種測(cè)定免疫球蛋白 A的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 30~230 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 150~500 mmol/L 促凝劑 10~45 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.2~0.8g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 80~200 mmol/L 穩(wěn)定劑 15~35 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 1~8g/L 其溶劑為純化水。
[0009] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1 和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 130 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 200 mmol/L 促凝劑 25g/L 防腐劑 0.7 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.5 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 140 mmol/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 防腐劑 0.7 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 8g/L 其溶劑為純化水。
[0010]作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、M0PS0緩 沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無(wú)機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、硫酸鉀 中的一種或多種的組合，所述的促凝劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷 酮中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種 的組合。
[0011] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的抗人類風(fēng)濕因子抗體是含有功能部位的完整 抗體或抗體片段。
[0012] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的抗人類風(fēng)濕因子抗體采用兔抗人多克隆抗體、 羊抗人多克隆抗體、兔抗人單克隆抗體、羊抗人單克隆抗體中的一種。
[0013]作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用Tri S緩沖液、MES緩沖液、MOPSO緩 沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中 的一種或幾種組合而成，所述的防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的 組合。
[0014] 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體的制備方法 為:先用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為80-120nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙 烯微球的質(zhì)量濃度為1 %_5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1 -乙基-3-(3-二甲基 胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在20_37°C的條件下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后加入猝滅劑，使用 離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀用50 mmol/L的MES緩 沖液進(jìn)行稀釋，然后在超聲分散儀上進(jìn)行超聲分散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn) 速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙 烯微球的質(zhì)量濃度為1%_2%時(shí)為止，然后邊攪拌邊加入抗人免疫球蛋白A抗體，再使用離心 機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn) 行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為0.5%-2.0%時(shí)為止，最后加入牛血清白蛋 白，直至溶液中的牛血清白蛋白的濃度為15g/L為止，然后在4°C的條件下封閉8小時(shí)，即可 制備得到膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體。
[0015] 作為優(yōu)選，所述的猝滅劑為2,2'_硫代雙鎳、2-甲基-1，3_丁二烯、反-1，3_戊二烯 中的一種。
[0016] 作為優(yōu)選，所述的抗人免疫球蛋白A抗體為含有能與人免疫球蛋白A特異性結(jié)合的 Fab功能部位的完整抗體或抗體片段。
[0017] 作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒的制備方法和使用方 法，包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 30~230 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 150~500 mmol/L 促凝劑 10~45 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.2~0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 80~200 mmol/L 穩(wěn)定劑 15~35 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 1~8g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d )根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的免疫球蛋白A的濃度。
[0018]作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的試劑R1和試劑R2的體積比為3:1。
[0019]作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1:150之間。
[0020]本發(fā)明的檢測(cè)原理是:本發(fā)明主要采用抗原抗體反應(yīng)的原理。血清樣本中免疫球 蛋白A抗原與吸附在聚苯乙烯微球上的抗人免疫球蛋白A抗體產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)的凝集反 應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，其濁度的變化通過(guò)測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，即可得出免疫球蛋 白A的含量。
[0021] 樣本中免疫球蛋白A的活性
式中：A At以空白管吸光度作對(duì)照的樣品管吸光度值 A As以空白管吸光度作對(duì)照的校準(zhǔn)管吸光度值 Cs校準(zhǔn)液中免疫球蛋白A的濃度。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明主要通過(guò)在試劑R1中添加了抗人 類風(fēng)濕因子抗體，在樣本和試劑R1孵育的時(shí)候特異性的去除了人類風(fēng)濕因子的干擾，從而 有效的提高了本試劑盒的測(cè)定的準(zhǔn)確度，而且本發(fā)明操作比較簡(jiǎn)單，適宜于廣泛推廣使用。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
[0024] 實(shí)施例1 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 130 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-2000 25g/L 疊氮鈉 0.7 g/L 羊抗人多克隆抗體 〇.5g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 140 mmol/L 牛血清白蛋白 20 g/L 苯酚 0.7 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 8g/L 其溶劑為純化水。
[0025] 實(shí)施例2 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MES 緩沖液 30mmol/L 氯化鉀 500 mmol/L 聚乙烯吡咯烷酮 l〇g/L 苯酚 0.9 g/L 兔抗人單克隆抗體 0.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 200 mmol/L 甘油 15 g/L 疊氮鈉 0.6 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 lg/L 其溶劑為純化水。 實(shí)施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體的制備:先用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為lOOnm 的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為3%的溶液，然后每毫升溶液中 加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽，在26°C的條件下反應(yīng)1小 時(shí)，反應(yīng)完成后加入2，2硫代雙鎳，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘， 去上清，然后將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，然后在超聲分散儀上進(jìn)行超聲分 散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L 的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為2%時(shí)為止，然后邊攪拌邊加 入抗人免疫球蛋白A抗體，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清， 再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%時(shí) 為止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的濃度為15g/L為止，然后在4°C 的條件下封閉8小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: Tris緩沖液 130 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 聚乙二醇-2000 25g/L 疊氮鈉 0.7 g/L 羊抗人多克隆抗體 0.5 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 140 mmol/L 牛血清白蛋白 20 g/L 苯酚 0.7 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 8g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)340nm，副波長(zhǎng)700nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、檢測(cè)步驟 (a) 取225yl試劑R1與3yl待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入75yl試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1;
(d) 根據(jù)樣本中免疫球蛋白A的活性 計(jì)算出樣本中的免疫 球蛋白A的濃度。
[0026] 實(shí)施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體的制備:先用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為120nm 的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為3%的溶液，然后每毫升溶液中 加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽，在20°C的條件下反應(yīng)1小 時(shí)，反應(yīng)完成后加入2-甲基-1,3-丁二稀，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分 鐘，去上清，然后將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，然后在超聲分散儀上進(jìn)行超聲 分散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/ L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為2%時(shí)為止，然后邊攪拌邊 加入抗人免疫球蛋白A抗體，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上 清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為 1.0%時(shí)為止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的濃度為15g/L為止，然 后在4°C的條件下封閉8小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MES 緩沖液 30mmol/L 氯化鉀 500 mmol/L 聚乙烯吡咯烷酮 l〇g/L 苯酚 0.9 g/L 兔抗人單克隆抗體 0.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 200 mmol/L 甘油 15 g/L 疊氮鈉 0.6 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 lg/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)340nm，副波長(zhǎng)700nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測(cè)步驟 (a) 取225yl試劑R1與3yl待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入75yl試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中免疫球蛋白A的活性
計(jì)算出樣本中的免疫 球蛋白A的濃度。
[0027] 表1為實(shí)施例1所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定免 疫球蛋白A的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品1進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的免疫球蛋白A的濃度 為1.57 (g/L)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1: 表1
由表1可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒對(duì)質(zhì)控品1的測(cè)定結(jié)果偏差較 小，因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0028] 表2為實(shí)施例1所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定免疫球 蛋白A的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品2進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的免疫球蛋白A的濃度為 1.85 g/L，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒對(duì)質(zhì)控品2的測(cè)定結(jié)果偏差較 小，因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0029]表3為實(shí)施例3所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反 復(fù)測(cè)定以及實(shí)施例4所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反復(fù) 測(cè)定，對(duì)所得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計(jì)算，結(jié)果如下： 表3
由表3可知本發(fā)明所制得的測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒的精密度比較好，而且由表3可 知，實(shí)施例3為最優(yōu)的選擇。
[0030]上述實(shí)施例僅例示性說(shuō)明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試劑Rl和試劑R2雙液 體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑Rl: 緩沖液 30~230 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 150~500 mmol/L 促凝劑 10~45 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.2~0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 80~200 mmol/L 穩(wěn)定劑 15~35 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 1~8g/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立 的試劑Rl和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑Rl: 緩沖液 130 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 200 mmol/L 促凝劑 25g/L 防腐劑 0.7 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.5 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 140 mmol/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 防腐劑 0.7 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 8 g/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:所述的試劑 Rl中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、MOPSO緩沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多 種的組合，所述的無(wú)機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、硫酸鉀中的一種或多種的組合，所述的 促凝劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述 的防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的組合，所述的抗人類風(fēng)濕因子 抗體采用兔抗人多克隆抗體、羊抗人多克隆抗體、兔抗人單克隆抗體、羊抗人單克隆抗體中 的一種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:所述的試劑 R2中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、M0PS0緩沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多 種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中的一種或幾種組合而成，所述的 防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:所述的試劑 R2中，所述的膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體的制備方法為:先用50 mmol/L的MES緩沖液將 粒徑為80-120nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%-5%的溶 液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在 20-37°C的條件下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后加入猝滅劑，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn) 速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，然后在超聲分散 儀上進(jìn)行超聲分散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉 淀用50 mmo I/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%-2%時(shí)為 止，然后邊攪拌邊加入抗人免疫球蛋白A抗體，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離 心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至溶液中聚苯乙烯微球 的質(zhì)量濃度為〇. 5%-2.0%時(shí)為止，最后加入牛血清白蛋白，直至溶液中的牛血清白蛋白的濃 度為15g/L為止，然后在4°C的條件下封閉8小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人免疫球蛋白A 抗體。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:所述的猝滅劑 為2，2 硫代雙鎳、2-甲基-1，3-丁二烯、反-1，3-戊二烯中的一種。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒，其特征在于:所述的抗人免 疫球蛋白A抗體為含有能與人免疫球蛋白A特異性結(jié)合的Fab功能部位的完整抗體或抗體片 段。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒的制備方法和使用方法， 其特征在于:包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑Rl: 緩沖液 30~230 mmol/L 無(wú)機(jī)鹽離子 150~500 mmol/L 促凝劑 10~45 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 抗人類風(fēng)濕因子抗體 0.2~0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 80~200 mmol/L 穩(wěn)定劑 15~35 g/L 防腐劑 0.6~0.9 g/L 膠乳包被抗人免疫球蛋白A抗體 1~8g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑Rl和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的免疫球蛋白A的濃度。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:步驟(b)中，所述的試劑Rl和試劑R2的體積比為3:1。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種測(cè)定免疫球蛋白A的試劑盒的制備方法和使用方法，其 特征在于:步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑Rl和試劑R2的總體積的體積比在1:5到1:150 之間。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK105911293SQ201610358116
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月26日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請(qǐng)人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司