微室板的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微室板，并且更具體地，涉及具有使用可流動薄膜形成的微室孔的微室板。因此，與在使用真空和/或離心力注射樣品時相比，可以以更平穩(wěn)的方式將樣品注入微室孔中。另外，可以將微室孔中的氣泡和過量的樣品高效地排出，使得以更準(zhǔn)確且高效的方式進(jìn)行反應(yīng)和分析成為可能。
【專利說明】
微室板
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及微室板，并且更具體地，涉及具有使用可流動薄膜形成的微室孔的微 室板，其中，與在利用真空和/或離心力注射樣品時相比，可以以更平穩(wěn)的方式將樣品注入 微室孔中，并且其中，可以將微室孔中的氣泡和過量的樣品高效地排出，使得以更準(zhǔn)確且高 效的方式進(jìn)行反應(yīng)和分析成為可能。
【背景技術(shù)】
[0002] 如本文中所使用的，術(shù)語"微室"是指在其中發(fā)生幾微升或少于一分鐘的反應(yīng)的容 器。這些微室可以由硅片、玻璃、金屬、陶瓷或者塑性材料形成。如本文中所使用的，術(shù)語"微 室板"是指微室以二維模式被布置在其中的板，并且其通常被構(gòu)造為使得樣品可以被注入 到該板的一側(cè)，然后該側(cè)可以被密封。
[0003] 同時，研發(fā)了實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法作為用于測量基因量的方法，該方法 可以在進(jìn)行PCR時實時地測量與基因量成比例增加的熒光值。
[0004] 實時PCR方法可以通過測量針對每個PCR循環(huán)從PCR產(chǎn)物產(chǎn)生的熒光值并且確認(rèn)具 有某個水平或者更高水平的熒光值的循環(huán)，來對樣品中的某個基因的初始濃度進(jìn)行定量分 析。
[0005] 實時PCR方法具有的優(yōu)點在于其在PCR之后不需要電泳過程，并且在于其可以通過 在進(jìn)行PCR時定量地測量PCR產(chǎn)物，來確定樣品中具有特定核酸序列的基因的濃度(其處于 10 9 或者更大的范圍）（由 Stephen A.Bustin 編輯的《A_Z of Quantitative PCR》，2004_ 2006,國際大學(xué)；由M.Tevfik Dorak編輯的《Realtime PCR》，2006,泰勒弗朗西斯集團(tuán) (Taylor&Francis Group))。
[0006] 已經(jīng)提出了用于進(jìn)行實時PCR方法的各種類型的實時PCR裝置。作為能夠?qū)Χ鄠€樣 品進(jìn)行分析的實時PCR裝置，提出了能夠使用標(biāo)準(zhǔn)的96孔板或者384孔板來對96或者384個 基因進(jìn)行分析的裝置(羅氏（Roche)，Light Cycler 480，ABI 7500、7900)。
[0007]由羅氏制造的實時PCR裝置可以對10-50iU的反應(yīng)樣品進(jìn)行分析，但是具有的問題 在于，其需要相對大量的樣品，并且無法對大量的基因同時進(jìn)行分析。
[0008] 為了嘗試解決上述問題，已經(jīng)提出了各種方法，這些方法通過利用MEMS(微電子機 械系統(tǒng))技術(shù)來減少反應(yīng)樣品的量，從而可以在短時間內(nèi)對大量樣品同時進(jìn)行分析。因此， 也提出了使用微室陣列板的方法。
[0009] 使用微室陣列板的方法通常包括以下三個步驟:將反應(yīng)樣品注入微室的步驟;對 微室之間的反應(yīng)溶液進(jìn)行密封的步驟；以及反應(yīng)和分析步驟。首先，作為將樣品溶液單獨地 添加到微室中的方法，提出了微室陣列板。在這種方法中，將半滲透膜覆蓋到用于細(xì)胞培養(yǎng) 的透明微室板上，以使微室相互隔離并且在這些微室的每個微室中培養(yǎng)單個細(xì)胞，隨后移 除介質(zhì)。然后，將Taqman反應(yīng)溶液添加到板中，然后利用透明油對該板進(jìn)行密封以防止蒸 發(fā)。然后，在進(jìn)行溫度循環(huán)時測量板底部的熒光值（YASUDA Kenji，EPl，541，678Al， JP2002245900，Nucleic Acid Analysis Chip and Nucleic Acid Analyzer)。該方法具有 的問題在于，其是耗時的，這是因為不同的溶液是使用微量移液管吸入并且添加到微室中 的。具體而言，應(yīng)當(dāng)使用自動微量分液器來將樣品注入1536個微室中，而在添加不同溶液之 前進(jìn)行的清洗過程是耗時的。因此，該方法具有的問題在于其難以使用384或者更多的板。 [00 10] 其次，為了嘗試解決第一種方法的問題，由教授E.Tamiya組的Hidenori Nagai等 提出了包括通過光刻法和化學(xué)蝕刻方法使用硅片而制造的微室陣列的反應(yīng)器 (Anal.Chem.200173,1043-1047,Development of a Microchamber Array for Picoliter PCR)〇
[0011 ]反應(yīng)器使用顯微鏡載片蓋玻片來防止PCR溶液的蒸發(fā)。然而，當(dāng)將蓋玻片附連和分 離時，可能發(fā)生反應(yīng)溶液的交叉污染。出于該原因，在蓋玻片與晶片之間插入防水膜，并且 應(yīng)當(dāng)在移除蓋玻片、使反應(yīng)溶液干燥并且移除防水膜之后進(jìn)行分析。該過程是麻煩的。另 外，存在的問題在于反應(yīng)器無法用于基因的實時定量擴增。
[0012]第三，為了嘗試克服定量擴增的問題，同一實驗室的Y.Matsubara等研發(fā)了通過以 下方式制造的微室陣列：使用微陣列系統(tǒng)將每種引物添加到晶片上的凹形微室中，隨后進(jìn) 行干燥(關(guān)于小型化的化學(xué)和生化分析系統(tǒng)的第7次國際會議，2003年10月5-9日，美國加利 福尼亞斯闊谷（Squaw Valley California USA)) 〇
[0013] 在該微室陣列中，芯片的上面部分覆蓋有礦物油以對微室進(jìn)行完全密封，并且然 后使用納米噴射的分液器將PCR反應(yīng)溶液逐滴地添加到礦物油中。根據(jù)該方法，通過光刻法 和化學(xué)蝕刻，使用硅片（1 X 3英寸)預(yù)制了具有50納升(0.65 X 0.65 X 0.2mm)的體積的1248 微室陣列芯片。然后，使用納升分液器將引物和Taqman探針溶液逐滴地添加到微室中，隨后 進(jìn)行干燥。整個芯片涂有礦物油，并且因此，微室被相互隔離開并且被密封。
[0014] 使用第三種方法預(yù)制的微室陣列具有的優(yōu)點在于，可以通過利用納升分液器將 Taq DNA聚合酶和樣品DNA的混合物分配到每個微室中的礦物油的上層部分，從而在微室中 成功地進(jìn)行PCR反應(yīng)，而沒有反應(yīng)組分的交叉污染。
[0015] 然而，以上方法具有的缺點在于，需要用于微陣列的單獨的納升分液器來進(jìn)行溶 液的注射，并且該分配過程是耗時的，并且由于礦物油在板移動時的流動，極可能發(fā)生反應(yīng) 溶液之間的交叉污染。另外，存在的問題在于在溫度循環(huán)期間在高溫下形成氣泡，并且在 于，由于油和水溶液的疏水效應(yīng)而導(dǎo)致水溶液變成球形，從而造成透鏡效應(yīng)，該透鏡效應(yīng)造 成光學(xué)測量期間激發(fā)光和發(fā)射光的散射和色散，使得測量誤差更大。
[0016]第四，研發(fā)了皮滴度板(PicoTiterPlate)。類似于第三種方法，其是通過化學(xué)蝕刻 方法制造的微室陣列，但是與第三種方法相比，可以進(jìn)行數(shù)量大得多的反應(yīng)（John H.Leamon等，A massively parallel PicoTiterPlate based platform for discrete pic〇-liter-scale polymerase chain reactions，Electrophoresis2003，24，3769- 3777)。
[0017] 第四種方法可以進(jìn)行300,000個獨立PCR反應(yīng)(39.5pl的量）。然而，這種方法需要 具有固定化在其上的引物/探針的載體，并且因此，無法應(yīng)用于要求統(tǒng)一的光學(xué)特性的實時 定量PCR反應(yīng)。
[0018] 第五，在美國專利No.5948673中公開了用于使微量樣品反應(yīng)的"薄膜反應(yīng)器(或者 DNA卡)"。
[0019] 該薄膜反應(yīng)器包括三個非常薄的層。具體而言，低層薄膜形成反應(yīng)器的底部，中間 層薄膜形成反應(yīng)器的側(cè)面，并且上層薄膜形成樣品進(jìn)口。在使用移液管將微量樣品溶液注 入薄膜反應(yīng)器之后，樣品進(jìn)口應(yīng)當(dāng)是完全密封的以用于反應(yīng)。如果進(jìn)口沒有被完全密封，那 么反應(yīng)溶液可能在PCR反應(yīng)期間完全蒸發(fā)。為了同時處理幾千份樣品，薄膜反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)變 得如此復(fù)雜。因此，實際制備該反應(yīng)器是不可能的。
[0020] 第六，在W0 02/40158以及US 6,232，114中公開了具有標(biāo)準(zhǔn)ELISA板尺寸并且可以 進(jìn)行1，536個熒光分析反應(yīng)的反應(yīng)板。
[0021] 在第六種方法中，在板中形成多個通孔，并且將具有弱熒光的透明薄膜附連到板 上，從而形成多個反應(yīng)器容器。將樣品放置在容器中，該容器然后被密封，隨后進(jìn)行反應(yīng)。該 反應(yīng)板具有透明的頂側(cè)和底側(cè)，以使得可以件將激發(fā)光施加于一側(cè)，并且可以在另一側(cè)測 量熒光。
[0022] 然而，第六種方法也具有問題。具體而言，為了分析大量的基因，應(yīng)當(dāng)將不同的引 物和探針注入每個微室中。在用于對大量樣品進(jìn)行分析的板的情況下，應(yīng)當(dāng)將幾千種不同 的溶液添加到微室中，并且為此，需要諸如納升分液器之類的專用的分液器裝置。這種樣品 注射是頻繁地造成失敗的耗時的操作。
[0023] 另外，存在的問題在于，因為微室無法用反應(yīng)溶液完全地填充，因此在加熱時在微 室的上面部分產(chǎn)生氣泡并且形成水蒸氣，從而造成干擾光學(xué)測量的散射。
[0024]第七，在以本發(fā)明的發(fā)明人的名義提交的PCT/KR2008/005635中公開了包括微室 板的反應(yīng)板。在該微室板中，在一側(cè)形成用于樣品注射的多孔膜，并且在另一側(cè)形成光學(xué)測 量部件。
[0025] 根據(jù)第七種方法，在板中形成多個通孔，并且將具有弱熒光的透明薄膜附連到板 的一側(cè)，從而形成多個反應(yīng)容器。將樣品放置在反應(yīng)容器中，然后用多孔膜密封板的另一 側(cè)，可以通過多孔膜注射樣品，隨后進(jìn)行反應(yīng)。在反應(yīng)板中，通過多孔膜注射樣品溶液，并且 然后將礦物油逐滴地添加到注射側(cè)以密封該側(cè)，并且將激發(fā)光施加到在另一側(cè)形成的光學(xué) 測量部件，隨后進(jìn)行測量。
[0026] 然而，第七種方法具有以下問題。具體而言，該結(jié)構(gòu)是復(fù)雜的，這是因為注射部件 和光學(xué)測量部件是分別形成的。此外，在注射部件中形成的礦物油層可以變得透明，從而導(dǎo) 致測量結(jié)果根據(jù)底表面的現(xiàn)場狀態(tài)而變化。另外，向注射油中逐滴添加礦物油用于反應(yīng)和 測量，該注射油可能朝下，而在這種情況下，具有低于樣品的密度的礦物油可能流入微室 中，從而造成散射。
[0027]最近，本發(fā)明的發(fā)明人研發(fā)了具有新結(jié)構(gòu)的微室板，其可以防止微室中的溶液的 蒸發(fā)，并且有助于樣品注射，從而顯著地減少樣品注射所需的時間。另外，其可以防止微室 孔中的溶液被合并入其它相鄰的腔室孔中。另外，其具有與光學(xué)測量部件集成的注射部件， 以使得在可以增加測量準(zhǔn)確度的同時，其具有簡單的結(jié)構(gòu)（參見韓國公開的公布No.2012-0010118)。
[0028]然而，因為用于注射的樣品被直接施加到多孔膜上，所以該方法具有以下問題。1) 當(dāng)使用在真空下注射樣品的方法時，施加離心力以便防止樣品在樣品施加時沸騰，而在這 種情況下，樣品通過多孔膜的孔隙的排出受樣品的表面張力和離心力干擾。2)微室中的氣 體被離心力壓縮以減小其體積，并且因此，在沒有接收允許將氣體在注射期間通過膜排出 的浮力的情況下，其仍然作為小氣泡，而其在處于大氣壓的測量條件下再次膨脹，從而干擾 測量。
[0029] 然而，傳統(tǒng)的微室板都具有的缺點在于，其難以從每個微室孔中移除氣泡或者過 量的樣品，并且因此測量準(zhǔn)確度仍然低。
[0030] 因此，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)作出大量的努力來解決上述問題，并且因此，已經(jīng)發(fā) 現(xiàn)，當(dāng)微室孔是使用可流動薄膜形成時，在完成樣品注射之后，可以將每個微室孔中的氣泡 和過量的樣品高效地排出，以使得可以提高測量準(zhǔn)確度，從而完成本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0031] 本發(fā)明的目的是提供具有使用可流動薄膜形成的微室孔的微室板，其中，與在利 用真空和/或離心力注射樣品時相比，可以以更平穩(wěn)的方式將樣品注入微室孔中，并且其 中，可以將微室孔中的氣泡和過量的樣品高效地排出，使得以更準(zhǔn)確且高效的方式進(jìn)行反 應(yīng)和分析成為可能。
[0032] 具體地，根據(jù)本發(fā)明的微室板具有的優(yōu)點在于，在進(jìn)行實時PCR、恒溫酶反應(yīng)或者 LCR(連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))時，其能夠?qū)崿F(xiàn)能夠停留在每個微室孔中的氣泡和過量的樣品的完 全移除，從而顯著地提高了光學(xué)測量的準(zhǔn)確度。另外，根據(jù)本發(fā)明的微室板具有的優(yōu)點在 于，其可以防止每個微室孔中的溶液的蒸發(fā)，并且可以縮短將樣品注入每個微室孔中所需 的時間，從而增加了樣品注射的簡便性，并且其可以極佳地防止每個微室中的溶液被合并 入其它相鄰的微室中。
[0033] 本發(fā)明的另一目的是提供用于制造微室板的方法以及使用微室板的分析方法。
【附圖說明】
[0034] 圖1是通過使可流動薄膜和微室主體覆蓋部件附連而制造的微室板的透視圖。
[0035] 圖2示意性地示出將可流動薄膜緊密地附連到微室主體、隨后進(jìn)行樣品注射的方 法。
[0036] 圖2(A)示出可流動薄膜緊密地附連到微室主體的狀態(tài)。
[0037] 圖2(B)示出以下狀態(tài):在該狀態(tài)中，微室孔是通過將熱量、真空或壓力施加到具有 附連到其的可流動薄膜的微室主體上形成的，從而形成圓柱形光學(xué)測量部件。
[0038] 圖2(C)示出以下狀態(tài):在該狀態(tài)中，微室孔是通過將熱量、真空或壓力施加到具有 附連到其的可流動薄膜的微室主體上形成的，從而形成半球形光學(xué)測量部件。
[0039]圖2 (D)示出將特定組分注入微室孔中的狀態(tài)。
[0040] 圖2(E)示出微室主體覆蓋部件附連到微室主體的頂側(cè)的狀態(tài)。
[0041] 圖2(F)示出通過真空和/或離心力將樣品注入微室孔中（所述微室孔包括氣泡）的 狀態(tài)。
[0042] 圖2(G)示出通過可流動薄膜在移除真空和/或離心力之后的收縮而排出并移除微 室孔中的氣泡的狀態(tài)。
[0043] 圖3示意性地示出可流動薄膜和粘性薄膜緊密地附連到微室板上、隨后進(jìn)行樣品 注射的方法。
[0044] 圖3(A)示出可流動薄膜和粘性薄膜緊密地附連到微室主體的狀態(tài)。
[0045] 圖3(B)示出以下狀態(tài):在該狀態(tài)中，微室孔是通過將熱量、真空或壓力施加到具有 附連到其的可流動薄膜和粘性薄膜的微室主體上形成的，從而形成圓柱形光學(xué)測量部件。
[0046] 圖3(C)示出以下狀態(tài):在該狀態(tài)中，微室孔是通過將熱量、真空或壓力施加到具有 附連到其的可流動薄膜和粘性薄膜的微室主體上形成的，從而形成半球形光學(xué)測量部件。
[0047] 圖3(D)示出將特定組分注入微室孔中的狀態(tài)。
[0048] 圖3(E)示出微室主體覆蓋部件附連到微室主體的頂側(cè)的狀態(tài)。
[0049] 圖3(F)示出通過真空和/或離心力將樣品注入微室孔中（所述微室孔包括氣泡）的 狀態(tài)。
[0050] 圖3(G)示出通過可流動薄膜在移除真空和/或離心力之后的收縮而排出并移除微 室孔中的氣泡的狀態(tài)。
[0051 ]圖4是包括制造的微室板的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)腔室的分解透視圖。
[0052]圖5示出包括制造的微室板的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)腔室的形狀。
[0053]圖6示出在微室主體覆蓋部件中形成的樣品進(jìn)口的形狀。
[0054]圖7示出在將樣品注入微室孔中之后氣泡被排出的狀態(tài)。圖7中的照片是在大約60 X的放大倍數(shù)下的照片，并且中心處的黑點指示樣品進(jìn)口的外觀。
[0055] 圖7(A)是示出在將樣品注入傳統(tǒng)微室板中時氣泡形成在微室孔中的狀態(tài)的照片。
[0056] 圖7(B)是示出根據(jù)本發(fā)明的、在將樣品注入微室板中時樣品被注入微室孔中而沒 有氣泡的狀態(tài)的照片。
[0057] 圖8是示出使用本發(fā)明的微室板進(jìn)行的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的結(jié)果的圖。圖8中的結(jié)果 指示發(fā)生了基因擴增。
[0058] 圖9示出使用本發(fā)明的微室板進(jìn)行的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的產(chǎn)物的SDS-PAGE凝膠電泳 的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0059] 除非另外限定，否則本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有如本發(fā)明所涉及的領(lǐng) 域中的技術(shù)人員通常理解的相同的含義。通常，本文中所使用的命名法是公知的，并且是本 領(lǐng)域常用的。
[0060] 參照圖，本發(fā)明提供了包括以下各項的微室板:微室主體300;以及設(shè)置在微室主 體300的頂側(cè)303上的微室主體覆蓋部件500,微室板具有形成在其中的預(yù)定數(shù)量的微室孔 301，微室孔301適于保留用于生物物質(zhì)分析的特定組分，其中微室主體的底側(cè)304的一部分 或者全部(特別是微室孔301中的每一個的底側(cè)305)是由可流動薄膜200制成的。
[0061] 可流動薄膜200緊密地附連到微室主體300上，以形成透明的光學(xué)部件。當(dāng)通過施 加真空和/或離心力來注射樣品時，可流動薄膜200在離心力的作用方向上被拉伸（發(fā)生下 垂），并且通過施加真空將微室孔301中的空氣排出，以使得可以以平穩(wěn)的方式將樣品引入。 當(dāng)移除真空和離心力時，可流動薄膜200恢復(fù)到其原始形狀（下垂移除），并且同時，可以通 過樣品進(jìn)口 800將每個微室孔301中的過量的樣品或者氣泡平穩(wěn)地排出。
[0062]如本文中所使用的，術(shù)語"可流動薄膜200"意指具有以下性質(zhì)的薄膜:在將熱量、 真空或者壓力施加到其上時，因其彈性而自由改變其形狀。具體地，可流動薄膜200優(yōu)選地 具有以下性質(zhì):在施加的10-1000G(優(yōu)選地，300-700G，更優(yōu)選地，400-600G)的離心力作用 的方向上被拉伸（即，下垂）。
[0063]可流動薄膜200可以僅在微室主體的底側(cè)304上形成，并且還可以在微室主體的底 偵004和頂側(cè)303二者上形成。具體地，可流動薄膜200優(yōu)選地形成為從微室主體的頂側(cè)303 延伸通過微室孔的側(cè)面302,到達(dá)微室主體的底側(cè)304的一部分或者全部(特別是微室孔301 的底側(cè)305)?？闪鲃颖∧?00緊密地附連到微室主體，以形成透明的光學(xué)部件和微室孔。 [0064]具體地，如果可流動薄膜200僅在微室主體的底側(cè)304上形成，則可流動薄膜可以 在微室主體的整個底側(cè)(包括微室孔301的底側(cè)305)上形成。如果可流動薄膜200形成為從 微室主體的頂側(cè)303延伸通過微室孔的側(cè)面302到達(dá)微室孔301的底側(cè)305,則可流動薄膜優(yōu) 選地僅在微室主體的底側(cè)304中的微室孔301的底側(cè)305上形成。
[0065]為了將可流動薄膜200形成到微室主體的底側(cè)304,可流動薄膜200還可以直接附 連到微室主體的底側(cè)304,但是可流動薄膜200優(yōu)選地緊密地附連到微室主體的頂側(cè)303,并 且在100到300°C (優(yōu)選地，100到270°C )的溫度吹塑成型，以使得其形成為延伸通過微室孔 的側(cè)面302,到達(dá)微室主體的底側(cè)304的一部分或者全部(特別是微室孔301的底側(cè)305)。另 外，在吹塑成型過程期間優(yōu)選地額外施加壓力和/或真空。如此，形成作為由可流動薄膜200 制成的內(nèi)部空間的微室孔301，其可以注射有用于生物物質(zhì)的分析的特定組分、樣品等。
[0066]在本發(fā)明中，可以使用任何材料作為可流動薄膜200的材料，而不進(jìn)行限制，只要 其是透明的以使得其允許光學(xué)測量。優(yōu)選地，可流動薄膜200可以是由從由以下各項組成的 組中選擇的一種聚合物或者兩種或更多種的共聚物制成的：聚乙烯、聚對苯二甲酸乙二酯、 拉伸的或者非拉伸的聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA。另外，可流動薄膜200的厚度優(yōu)選地是200mi 或者更小，特別是100M1或者更小，但是其并不限于此。
[0067]在本發(fā)明中，為了有助于將微室主體覆蓋部件500附連到可流動薄膜200,可以將 粘性材料施加于微室主體覆蓋部件的表面，或者具有粘性性質(zhì)的粘性薄膜100可以額外地 設(shè)置在可流動薄膜200與微室主體覆蓋部件500之間。另外，為了有助于將可流動薄膜200附 連到微室主體300,可以將粘性材料施加到微室主體的表面以形成粘性涂層600,或者具有 粘性性質(zhì)的粘性薄膜100可以額外地設(shè)置在可流動薄膜200與微室主體300之間。
[0068] 粘性薄膜100和粘性材料優(yōu)選地是透明的，以使得它們可以與可流動薄膜一起形 成光學(xué)測量部件，但是這些材料還可以是具有某一波長的光可透過的或者可選擇性透過的 材料。本發(fā)明中使用的粘性材料可以優(yōu)選地是基于聚乙烯的薄膜型的熱熔粘合劑，并且粘 性薄膜可以例如是諸如ZPMA-film001(平湖展鵬熱熔膠膜有限公司）之類的產(chǎn)品，但是其并 不限于此。
[0069] 如本文中所使用的，表達(dá)"用于生物物質(zhì)的分析的特定組分"意指用于特定生物物 質(zhì)（例如，蛋白質(zhì)、DNA和RNA等）的定量或者定性分析的引物、探針、抗體、適體、DNA或者RNA 聚合酶等。具體地，該表達(dá)意指進(jìn)行實時PCR、恒溫酶反應(yīng)或者LCR(連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))所需要 的組分。具體地，表達(dá)"用于核酸的分析的特定組分"意指用于DNA或者RNA的定量或者定性 分析的引物、探針、抗體、適體、DNA或者RNA聚合酶等。
[0070] 作為本發(fā)明中使用的樣品，可以僅根據(jù)所制造的微室板的類型而使用用于定量或 定性分析的分析物，或者可以使用在添加至用于實時PCR反應(yīng)的組分之后的分析物。用于進(jìn) 行實時PCR的組分包括但不限于反應(yīng)緩沖液、MgCl 2、四種dNTP、DNA或者DNA聚合酶等，并且 還可以使用實時PCR所需要的常規(guī)組分。對于熱啟動實時PCR而言，可以額外地使用焦磷酸 鹽、焦磷酸酶等。
[0071]在本發(fā)明中，微室主體覆蓋部件500可以是由金屬、聚合物薄膜、塑性材料、多孔膜 等制成的，但其不限于此。具體地，微室主體覆蓋部件500可以是由任何材料制成的，該材料 具有這樣的硬度使得其可以附連到微室主體300或者可流動薄膜200,以使得可以將用于生 物物質(zhì)或者樣品700的分析的特定組分400保持在微室孔301中，并且該材料與用于生物物 質(zhì)或者樣品700(其被包含在微室孔301中）的分析的特定組分400沒有反應(yīng)性。具體地，微室 主體部件500可以是由具有0.2-5. Own的孔徑的多孔膜制成的。優(yōu)選地，微室主體覆蓋部件 500可以具有薄膜的形式(例如，鋁、不銹鋼、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA、聚苯乙烯、尼 龍或者聚氨酯薄膜），或者可以是由多孔膜(例如，聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA、尼龍、 PTFE或者PVDF膜）制成的。
[0072] 微室主體覆蓋部件500可以具有5-400M1的厚度(優(yōu)選地，10-200_)。為了提高光 學(xué)測量效率，微室主體覆蓋部件500優(yōu)選地是由反光材料制成的或者是表面涂覆的或者改 性的以便能夠使光線反射。
[0073]另外，微室主體覆蓋部件500通過可流動薄膜200附連到微室主體300,并且用于防 止注入微室孔301中的樣品或者用于生物物質(zhì)的分析的特定組分流到外面。
[0074]優(yōu)選地，針對每個微室孔301，微室主體覆蓋部件500具有在其中形成的至少一個 樣品進(jìn)口 800。每個樣品進(jìn)口800可以根據(jù)微室孔301的面積而不同地形成。具體而言，其優(yōu) 選地具有基于每個微室孔的總面積的0.05-60%的面積(頂端部分的面積與微室主體覆蓋 部件500相接觸），但是其并不限于此。在本發(fā)明中，如果微室主體覆蓋部件500是由金屬制 成的，則樣品進(jìn)口800可以是通過蝕刻形成的，并且如果微室主體覆蓋部件500是由聚合物 薄膜制成的，則樣品進(jìn)口800可以是通過沖孔形成的，但是其并不限于此。
[0075]如上所述，在本發(fā)明中，微室主體覆蓋部件500可以附連到可流動薄膜200的頂層 部分，并且可以在微室薄膜密封部件500與可流動薄膜200之間額外地引入具有粘性性質(zhì)的 粘性薄膜100。在本文中，粘性薄膜可以通過諸如熱粘合、超聲焊接、或者粘合劑施加之類的 方法來引入。如果微室主體覆蓋部件500是通過加熱附連的，則優(yōu)選地將其加熱到100至170 °C (優(yōu)選地，110至160°C，更優(yōu)選地，120至150°C)的溫度，以使得其可以容易地緊密附連。在 緊密附連之后，通過施加真空和/或離心力來注射樣品700。然后，可以使用從由以下各項組 成的組中選擇的至少一種材料來密封樣品進(jìn)口800:聚合物薄膜、油、硅樹脂、石蠟和粘合 劑。
[0076]在本發(fā)明中，微室主體300優(yōu)選地是由金屬或者聚合物材料(更優(yōu)選地，SUS(不銹 鋼））制成的。具體地，微室主體300的表面優(yōu)選地涂有從基于聚酯的聚合物樹脂和基于聚乙 烯的熱熔粘合劑中選擇的至少一種材料，以形成粘性涂層600,以便增加可流動薄膜200的 粘附力以防止可流動薄膜200的分離，并且可流動薄膜200的側(cè)面附連到微室主體300,以使 得由離心力導(dǎo)致的可流動薄膜200的下垂僅受限于離心力的方向。對微室主體的表面的涂 覆可以通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法(例如，噴涂、浸涂或者輥涂)進(jìn)行。
[0077] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于制造微室板的方法。
[0078] 根據(jù)本發(fā)明的用于制造微室板的方法包括以下步驟：
[0079] (a)將可流動薄膜200緊密地附連到微室主體的頂側(cè)303;
[0080] (b)進(jìn)行吹塑成型以將可流動薄膜200緊密地附連到每個微室孔的側(cè)面302,并且 同時，在微室孔的底側(cè)305形成可流動薄膜200,從而形成微室孔301;以及
[0081 ] (C)將微室主體覆蓋部件500附連到微室主體的頂側(cè)303上的可流動薄膜200。
[0082]在用于制造微室板的方法中，微室主體300、可流動薄膜200、微室主體覆蓋部件 500等具有如上所述的技術(shù)特性。
[0083]用于制造微室板的方法可以在步驟(b)與（c)之間進(jìn)一步包括步驟(V):將用于生 物物質(zhì)的分析的特定組分400注入每個微室孔301中。步驟(b)中的吹塑成型可以在100°C至 300°C (優(yōu)選地，110°C至270°C)的溫度下進(jìn)行。此外，進(jìn)行吹塑成型的步驟(b)可以進(jìn)一步包 括施加真空和/或壓力以形成微室孔的步驟。另外，用于制造微室板的方法可以在步驟(c) 之后進(jìn)一步包括以下步驟：（d)注射樣品700;以及(e)對樣品進(jìn)口800進(jìn)行密封。
[0084] 實施例
[0085] 在下文中，將參照附圖進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明的實施例。在描述本發(fā)明的實施 例時，省略了對本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的且與本發(fā)明不直接相關(guān)的技術(shù)內(nèi)容的描述。這樣 做的原因是為了省略不必要的描述，并且更明確地傳達(dá)本發(fā)明的要點，而不是使得本發(fā)明 的要點不清楚。
[0086] 實施例1:微室板的制造 [0087] 1-1:微室主體300的預(yù)制
[0088]對具有預(yù)定厚度的不銹鋼(SUS)進(jìn)行蝕刻以預(yù)制具有在其中形成的某些空間（即， 微室孔301)的微室主體300。形成微室主體300的不銹鋼(SUS)具有1mm的厚度，并且腔室孔 301具有1.2-1.9mm的直徑。每間隔2.25mm形成腔室孔301，并且每個板形成多達(dá)768個腔室。 可以容易地控制腔室孔301的直徑和腔室孔301之間的間隔。
[0089] 1-2:將可流動薄膜200附連到微室板300
[0090]可流動薄膜200可以是由從以下各項中選擇的一種或者兩種或者更多種的組合制 成的：聚乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯以及聚碳酸酯。任何透明 的可塑薄膜可以用于可流動薄膜200。在下文中，將通過舉例的方式描述將流延聚丙烯薄膜 (GCP，60mi，栗村化學(xué)有限公司(YoulChon Chemical)，韓國）用作流延可流動薄膜200〇 [0091]為了將可流動薄膜200緊密地附連到微室主體的頂側(cè)303,將在MEK中稀釋的濃度 為3-5體積％的液體熱熔劑(427T，Aer 〇Chem有限公司）噴涂在微室主體300上。液體熱熔劑 用于將可流動薄膜200固定到微室主體300,以使得可流動薄膜200與微室主體不分離。接 著，將流延聚丙烯（CPP)薄膜（GCP，60_，栗村化學(xué)有限公司，韓國）和粘性薄膜（ZPMA-filmOOl，平湖展鵬熱熔膠膜有限公司）切割為與微室板相對應(yīng)的尺寸，并且將微室主體、 CPP薄膜和粘性薄膜依次沉積在吹塑成型裝置上。
[0092]本發(fā)明中的可流動薄膜200形成為附連到微室主體的頂側(cè)303和每個微室孔的側(cè) 面302。其形成為從微室主體的頂側(cè)303延伸到微室主體的底側(cè)304(特別是微室孔301的底 側(cè)305)，以便界定每個微室孔301。其用于保護(hù)每個微室孔的內(nèi)部，并且使微室孔相互分開， 并且也允許微室主體覆蓋部件500附連到微室主體的頂側(cè)303。
[0093]由透明薄膜制成的可流動薄膜200位于與進(jìn)口部分相對的一側(cè)，以形成光學(xué)測量 部件。可流動薄膜200可以優(yōu)選由從以下各項中選擇的薄膜制成的：聚乙烯、聚對苯二甲酸 乙二醇酯、拉伸的或者非拉伸的聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA以及其共聚物。該薄膜可以通過施 加真空和壓力而緊密地附連到微室主體300,并且同時，可以形成透明光學(xué)測量部件，從而 形成微室孔301。
[0094] 1-3:使用可流動薄膜形成微室孔
[0095]在如實施例1-2所描述的可流動薄膜200附連到微室主體之后，在真空(_201^&至-lOOkPa)或者壓力（l-2kgf/cm 2)的作用下，在170至270°C的溫度下進(jìn)行吹塑成型，從而在微 室孔的側(cè)面302和微室主體的底側(cè)304上形成可流動薄膜200。當(dāng)施加真空或者壓力時，使成 型裝置封閉，以便不會發(fā)生泄漏。在完成吹塑成型的1小時之時，利用冷水對成型裝置進(jìn)行 冷卻，并且使具有在其上形成的可流動薄膜的微室主體與成型裝置分離。根據(jù)微室主體的 形狀，對在微室主體上形成的過量的可流動薄膜進(jìn)行切割。
[0096] 1-4:將特定組分400分配到微室孔301中
[0097]將用于核酸分析的特定組分400分配到在微室主體中形成的每個微室孔301中。特 定組分400包括每種引物或探針。使用樣品分液器進(jìn)行特定組分的分配，并且以針對反應(yīng)所 計算的濃度將l_2yl的樣品分配到每個微室孔301中。在烤箱中在80-90°C下使所分配的特 定組分400干燥5分鐘，以防止其與微室孔301分離。
[0098] 1-5:將微室主體覆蓋部件500附連到微室主體300
[0099]將具有在其中形成的樣品進(jìn)口 800的微室主體覆蓋部件500附連到具有包括不同 的特定組分的微室孔301的微室主體300。微室主體覆蓋部件500具有10-200M1的厚度，并且 可以具有薄膜的形式(例如，鋁、不銹鋼、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA、聚苯乙烯、尼龍或 者聚氨酯膜），或者可以是由多孔膜(例如，聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA、尼龍、PTFE或者 PVDF膜)制成的，或者可以是由金屬形成的。
[0100] 如果微室主體覆蓋部件500是由金屬或者薄膜形成的，則樣品進(jìn)口800具有用于樣 品注射的一個或多個注射孔。注射孔由具有與每個微室孔的面積的0.05-60%相對應(yīng)的面 積的點或者線構(gòu)成，并且優(yōu)選地可以具有如圖6中所示的形狀。
[0101] 在薄膜型的微室主體覆蓋部件500的情況下，在微室之間進(jìn)行隔離的模式可以形 成為使得，即使當(dāng)樣品700的一部分在注射樣品700和密封注射孔期間流出時，也防止一個 微室中的樣品溶液被合并入其它相鄰的微室中。
[0102] 另外，如果微室主體覆蓋部件500是由多孔膜制成的，則其可以是具有0.2-5.Own 的孔徑的透明或者半透明的聚合物多孔膜。在本發(fā)明中，可以使用通過蝕刻形成的具有200 Mi的樣品進(jìn)口 800的50mi厚度的不銹鋼。微室主體覆蓋部件500附連到在微室主體上形成的 可流動薄膜200的表面，以覆蓋微室主體的頂側(cè)，從而形成獨立的微室。
[0103] 可以根據(jù)附連到微室主體300的可流動薄膜200的材料和結(jié)構(gòu)，進(jìn)行微室主體覆蓋 部件500的附連。如果可流動薄膜200是由一種薄膜制成的，則可以對可流動薄膜200施加粘 合劑，并使其固化。如果可流動薄膜是由兩種或更多種薄膜的組合制成的，則可以通過超聲 焊接或者熱壓縮來實現(xiàn)微室主體覆蓋部件500的附連。
[0104]粘合劑可以是可室溫固化的粘合劑、熱固性粘合劑、可反應(yīng)固化的粘合劑等，并且 其優(yōu)選地是在水中不可溶解的一種，并且具有熱穩(wěn)定性。
[0105] 在超聲焊接或者熱粘合的情況下，其優(yōu)選地是在可流動薄膜200的一部分可以被 融化同時附連到微室主體300的可流動薄膜200不變形的溫度下進(jìn)行的。在本發(fā)明中，通過 在150°C下熱壓縮5秒或者更少時間、或者通過輥壓來附連微室主體覆蓋部件500。另外，超 聲焊接可以在任何溫度下進(jìn)行，這是因為在附連側(cè)產(chǎn)生的熱量并不傳遞到微室中。
[0106] 優(yōu)選地，在附連微室主體覆蓋部件500之后，可以進(jìn)一步進(jìn)行冷卻和后壓縮過程， 以使微室主體覆蓋部件500的附連牢固。
[0107] 實施例2:通過樣品進(jìn)口注射樣品
[0108] 現(xiàn)在將詳細(xì)地描述通過在微室主體覆蓋部件500中形成的樣品進(jìn)口 800將樣品真 空注入微室孔301中的過程。在本文中，樣品可以在微室孔301之間是不同的，并且可以將相 同的樣品注入微室孔中的一些或者全部中。
[0109] 當(dāng)將樣品700注入微室孔301中時，可以通過以下方式將微室孔301中的空氣平穩(wěn) 地移除：通過利用真空和離心力將空氣從微室孔301中移除，并且然后對樣品700進(jìn)行鹽浸 處理以接觸微室孔。如此，將樣品700完全地注入，而沒有空氣氣泡。
[0110] 然而，如果長時間維持真空狀態(tài)(甚至當(dāng)從微室孔300移除空氣時），則會發(fā)生樣品 700的蒸發(fā)，而如果沒有施加足夠水平的真空，則對于剩余氣泡的完全移除存在限制。
[0111] 出于該原因，在本發(fā)明中，可以通過離心力可伸縮的可流動薄膜200形成為使得可 以注射足夠量的樣品700,從而使得極佳地注射樣品700成為可能。
[0112] 可流動薄膜200可以通過離心力下垂，并且出于該原因，內(nèi)部體積可以增加，以使 得可以通過樣品進(jìn)口提供足夠量的樣品700。當(dāng)移除離心力時，釋放下垂，以使得可以將過 量的樣品排出到微室孔301的外面，同時可以將能夠停留在微室孔301中的氣泡701通過樣 品進(jìn)口 800完全地排出到微室孔301的外面，從而使得極佳地注射樣品成為可能。
[0113] 在本發(fā)明中，在50G或者更小的離心力下，使真空施加小于1分30秒，在此之后，在 450G或者更大的離心力下注射樣品700,同時維持真空狀態(tài)。離心力優(yōu)選地是足以造成可流 動薄膜下垂的離心力。在本發(fā)明中，可以利用450G或者更大的離心力，以造成可流動薄膜的 充分下垂。
[0114] 在完成樣品注射之后，可以對在微室主體覆蓋部件500中形成的樣品進(jìn)口800進(jìn)行 密封，以防止樣品通過樣品進(jìn)口800流出。優(yōu)選地，可以利用聚合物薄膜、油、硅樹脂、石蠟、 粘合劑等來對樣品進(jìn)口800進(jìn)行密封。在本發(fā)明中，可以通過將聚合物薄膜附連到其上來對 樣品進(jìn)口 800進(jìn)行密封。
[0115] 在本發(fā)明中，可以將HBV試劑盒（柏業(yè)(Bioneer)，AccuP〇wer?HBV定量PCR試劑 盒）用作樣品。具體而言，將〇.5yl的內(nèi)部陽性對照（IPC)、0.5iil的陽性對照(PC)和蒸餾水 (D.W.)添加到96孔板的干燥樣品中，并且將混合物的總體積調(diào)整為50yl。然后通過利用分 液器將混合物注入本發(fā)明的微室板的每個微室孔中，從而完成微室板。
[0116] 在本發(fā)明的實施例中制造的微室板用于確認(rèn)PCR是否將在微室板中正確地進(jìn)行。 省略了實施例1 -4中所描述的注射特定組分的步驟，并且將IPC和PC連同樣品一起注入微室 板中。在本文中，所使用的PC充當(dāng)該實驗中的分析物以確認(rèn)擴增的結(jié)果。
[0117] 實施例3:進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和定量分析
[0118] 使用實施例2中制造的微室板，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。從PCR反應(yīng)的結(jié)果中， 發(fā)現(xiàn)了可以在本發(fā)明的微室板中進(jìn)行基因擴增。
[0119] 使用韓國專利No. 10-1089045中描述的擴增系統(tǒng)，進(jìn)行實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)。下面在表1中示出了 PCR的條件。PCR反應(yīng)中的溫度和時間不限于該實施例中描述的 那些溫度和時間，并且可以改變?yōu)檫m于PCR反應(yīng)的其它條件。在以下條件下進(jìn)行PCR反應(yīng):在 25 °C下穩(wěn)定1分鐘，并且然后在95 °C下變性5分鐘，隨后進(jìn)行50次循環(huán)，每次循環(huán)由95 °C下5 秒和55°C下10秒組成。在圖8和9中示出了PCR反應(yīng)的結(jié)果。如可以在圖8中所看到的，隨著 PCR反應(yīng)循環(huán)進(jìn)行，所測量的熒光值增加，并且出現(xiàn)典型的擴增曲線，其指示在微室板的所 有腔室中發(fā)生擴增。另外，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，以便確認(rèn)擴增產(chǎn)物，并且在圖9中示出了SDS-PAGE電泳的結(jié)果。如圖9中所示，可以看到條帶處于PC(陽性對照）的擴增位置，其指示發(fā)生 正常擴增(標(biāo)記:柏業(yè)，25/100bp混合DNA梯狀帶(mixed DNA ladder))。從這樣的結(jié)果中，發(fā) 現(xiàn)在本發(fā)明的微室板中的正?；驍U增是可能的。
[0120]表1:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)條件
[0122] 實施例4:使用微室板
[0123] 在下文中，將參照圖4和5描述根據(jù)本發(fā)明的微室板的使用。可以在微室板接納部 件5000中接納根據(jù)本發(fā)明的微室板。微室板接納部件5000可以具有平板的形式。微室板接 納部件5000被構(gòu)造為在其上安裝微室板4000以用于樣品注射。附圖標(biāo)記5100指示具有在其 中形成的多個微室板接納部件5000的微室板接納部件模塊。同時，在微室板接納部件模塊 5100的側(cè)面，形成接納部件鎖定突出部5200。圖4中的附圖標(biāo)記3100指示微室板接納部件覆 蓋模塊，其具有在其中形成的相互連接的多個微室板接納部件蓋3000。
[0124] 另外，在微室板接納部件蓋3000的底側(cè)，形成腔室連通部分。腔室連通部分可以是 通過外力變寬的切口線3200。當(dāng)對切口線施加離心力時，通過壓力使切口線變寬，以使得可 以通過切口線將要注射的樣品溶液引入微室孔中。如果外力沒有作用在微室板接納部件蓋 3000的底側(cè)，則暫時存儲在微室板接納部件蓋3000中的包含核酸的樣品溶液將不會通過切 口線3200從微室板接納部件蓋3000流出。微室板接納部件蓋3000可以是由硅樹脂材料制成 的。同時，切口線3200可以具有"+"形狀、"〈"形狀、"="形狀或者"X"形狀。
[0125] 微室板接納部件可以鎖定到鎖殼2000。在鎖殼2000中形成通孔2200。附圖標(biāo)記 2100指示具有在其中形成的、相互連接的多個鎖殼的鎖殼模塊。同時，在鎖殼套2100的側(cè) 面，形成插入接納部件鎖定突出部5200的鎖殼凹槽2300。按壓鎖殼2000抵靠微室板接納部 件蓋3000的頂部，并且將其鎖定到微室板接納部件。鎖殼2000與微室板接納部件5000之間 的鎖定通過將接納部件鎖定突出部5200插入到鎖殼凹槽2300中來實現(xiàn)。隨著鎖殼2000鎖定 到微室板接納部件5000,蓋支撐部分的底端緊密地附連到微室板4000的頂端以用于樣品注 射，并且因此，在微室板接納部件蓋3000與微室板4000之間形成樣品溶液存儲空間以用于 樣品注射。隨著鎖殼2000鎖定在微室板接納部件5100中，通孔的下端與樣品溶液存儲空間 連通，并且殼通孔2200與微室板接納部件蓋3000連通。
[0126] 殼蓋1000附連到鎖殼2000。在殼蓋1000中，形成殼蓋通孔1200。殼蓋通孔1200形成 為使得殼蓋1000在其附連到鎖殼2000時覆蓋微室板接納部件蓋3000的一部分。附圖標(biāo)記 1100指示具有在其中形成的、相互連接的多個殼蓋1000的殼蓋模塊。
[0127] 附圖標(biāo)記
[0128] 100 :粘性薄膜
[0129] 200:流動薄膜
[0130] 300:微室主體
[0131] 301:微室孔
[0132] 302:微室孔側(cè)面
[0133] 303:微室主體頂側(cè)
[0134] 304:微室主體底側(cè)
[0135] 305:微室孔底側(cè)
[0136] 400:用于生物物質(zhì)分析的特定組分
[0137] 500:微室主體覆蓋部件
[0138] 600 :粘性涂層
[0139] 700:樣品
[0140] 701:氣泡
[0141] 800:樣品進(jìn)口
[0142] 1000:殼蓋
[0143] 1100:殼蓋模塊
[0144] 1200:殼蓋通孔
[0145] 2000 :鎖殼
[0146] 2100 :鎖殼模塊
[0147] 2200 :鎖殼通孔
[0148] 2300 :鎖殼凹槽
[0149] 3000:微室板接納部件蓋
[0150] 3100:微室板接納部件覆蓋模塊
[0151] 3200:切口線
[0152] 4000:微室板
[0153] 4100:微室板模塊
[0154] 5000:微室板接納部件
[0155] 5100:微室板接納部件模塊
[0156] 5200:微室板接納部件鎖定突出部
[0157] 工業(yè)實用性
[0158] 如上所述，根據(jù)本發(fā)明的包括可流動薄膜的微室板具有的優(yōu)點在于，在進(jìn)行實時 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、恒溫酶反應(yīng)或者LCR(連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))時，其能夠?qū)崿F(xiàn)從每個微室 孔中完全移除氣泡和過量的樣品，從而顯著地提高了光學(xué)測量的準(zhǔn)確度。另外，其可以防止 每個微室孔中的溶液的蒸發(fā)，并且可以縮短將樣品注入每個微室孔中所需要的時間，從而 增加了樣品注射的簡便性，并且其可以極佳地防止每個微室中的溶液被合并入其它相鄰的 微室中。
[0159]另外，本發(fā)明具有的優(yōu)點在于可以根據(jù)注入微室孔301中的特定組分，以各種方式 來分析少量樣品，并且在于可以使用單個微室板來分析多個樣品。
[0160]盡管已經(jīng)參考具體特征詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但是顯然的是，上述說明對于本領(lǐng) 域技術(shù)人員而言僅為優(yōu)選的實施方案，并且對本發(fā)明的范圍沒有限定作用。因此，本發(fā)明的 實質(zhì)范圍將經(jīng)由所附權(quán)利要求書或其等價物所定義。
【主權(quán)項】
1. 一種微室板，包括： 微室主體300; 微室主體覆蓋部件500，其設(shè)置在所述微室主體的頂側(cè)303上， 以及微室孔301，其能夠在其中具有用于分析生物物質(zhì)的特定組分， 其中，所述微室主體的底側(cè)304的一部分或者全部是由可流動薄膜200制成的。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述可流動薄膜200從所述微室主體的頂側(cè)303 延伸通過所述微室孔的側(cè)面302到達(dá)所述微室孔的底側(cè)305。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述可流動薄膜200附連到所述微室主體的頂 側(cè)303并且是吹塑成型的，并且然后所述微室主體覆蓋部件500緊密地附連到所述微室主體 的頂側(cè)303。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述可流動薄膜200通過加熱、施加真空或者壓 力，或者通過加熱、施加真空和壓力而附連到所述微室主體300。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，當(dāng)通過施加真空和/或壓力提供樣品時，在所述 可流動薄膜200中發(fā)生下垂以使得能夠從樣品進(jìn)口800提供所述樣品，并且當(dāng)釋放真空和壓 力的施加時，解除下垂以使得通過所述樣品進(jìn)口 800將所述微室孔301中的額外的樣品或氣 泡701排出到所述微室孔301的外面。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，還包括:具有粘性性質(zhì)的粘性薄膜100,其設(shè)置在所述 可流動薄膜200與所述微室主體300之間或者在所述可流動薄膜200與所述微室主體覆蓋部 件500之間。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述可流動薄膜200是透明的，以使得其允許光 學(xué)測量。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的微室板，其中，所述可流動薄膜200是由從以下各項組成的組 中選擇的材料制成的：聚乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、拉伸的或者非拉伸的聚丙烯、聚碳 酸酯、PMMA以及其共聚物。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，針對每個微室孔301，所述微室主體覆蓋部件 500具有在其中形成的至少一個樣品進(jìn)口 800。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述微室主體覆蓋部件500是由金屬或者聚合 物薄膜制成的。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述微室主體覆蓋部件500是由具有0.2-5.0μ m的孔徑的多孔膜制成的。12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的微室板，其中，每個樣品進(jìn)口800具有基于每個微室孔的總面 積的0.05-60 %的面積。13. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微室板，其中，所述微室主體覆蓋部件500通過從以下各項中 選擇的至少一種方法粘結(jié)到所述可流動薄膜200:熱粘合、激光焊接和粘合劑涂覆。14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微室板，其中，所述微室主體300的表面涂覆有從以下各項中 選擇的至少一種材料:基于聚酯的聚合物樹脂和基于聚乙烯的熱熔粘合劑。15. -種用于制造微室板的方法，所述方法包括以下步驟： (a) 將可流動薄膜200附連到微室主體的頂側(cè)303; (b) 進(jìn)行吹塑成型以將所述可流動薄膜200附連到每個微室孔的側(cè)面302,并且同時，以 在所述微室孔的底側(cè)305形成所述可流動薄膜200,從而形成微室孔301;以及 (c) 將微室主體覆蓋部件500焊接到所述微室主體的頂側(cè)303上的所述可流動薄膜200 上。16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，在所述步驟(b)與(c)之間還包括： 將用于分析生物物質(zhì)的特定組分400注入每個微室孔301中的步驟(V)。17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述步驟(b)中的所述吹塑成型是在100°C至 300°C的溫度下進(jìn)行的。18. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中在步驟(a)中，具有粘性性質(zhì)的粘性薄膜100進(jìn)一 步設(shè)置在所述可流動薄膜200與所述微室主體300之間或者在所述可流動薄膜200與所述微 室主體覆蓋部件500之間。19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述可流動薄膜200是透明的，以使得其允許光 學(xué)測量。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述可流動薄膜200是由從以下各項中選擇的 材料制成的：聚乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、拉伸的或者非拉伸的聚丙烯、聚碳酸酯、PMMA 及其共聚物。21. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，針對每個微室孔301，所述微室主體覆蓋部件 500具有在其中形成的至少一個樣品進(jìn)口 800。22. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述微室主體覆蓋部件500是由金屬或者聚合 物薄膜制成的。23. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述微室主體覆蓋部件500是由具有0.2-5. Ομπι 的孔徑的多孔膜制成的。24. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，每個樣品進(jìn)口800具有基于每個微室孔的總面 積的0.05-60 %的面積。25. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，在步驟(c)中，所述微室主體覆蓋部件500通過 從以下各項中選擇的至少一種方法粘結(jié)到所述可流動薄膜200:熱粘合、超聲焊接和粘合劑 涂覆。26. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述微室主體300的表面涂有從以下各項中選 擇的至少一種材料:基于聚酯的聚合物樹脂和基于聚乙烯的熱熔粘合劑。27. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，在所述步驟(c)之后還包括以下步驟： (d) 注射所述樣品700;以及 (e) 對所述樣品進(jìn)口 800進(jìn)行密封。28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述對所述樣品進(jìn)口800進(jìn)行密封是使用從由 以下各項組成的組中選擇的至少一種材料進(jìn)行的:聚合物薄膜、油、硅樹脂、石蠟和粘合劑。
【文檔編號】G01N1/36GK105917240SQ201480073551
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2014年11月12日
【發(fā)明人】宋具龍, 樸翰浯, 章元石, 裴俊阿
【申請人】柏業(yè)公司