Hplc測定山楂含片熊果酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，旨在提供一種操作簡便，專屬性強的HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，該方法依次包括下述步驟：對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；分別精密吸取對照品和供試品溶液各4μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得；制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；屬于化學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【專利說明】
HPLC測定山楂含片熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明公開了一種熊果酸的測定方法，具體地說，是一種HPLC測定山楂含片熊果 酸的方法，屬于化學(xué)提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 山楂含片由山楂、白砂糖制成。山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理氣，活血化 瘀，助消化等功效，主要用于治療脂肪肝和肝纖維化等癥狀。本研究采用HPLC法對三箭草和 堂山楂含片中指標(biāo)成分熊果酸進行含量測定。經(jīng)查閱文獻，尚未有對其成分熊果酸做含量 測定的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便，專屬性強的HPLC測定山楂 含片熊果酸的方法。
[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：
[0005] -種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，依次包括下述步驟：
[0006] 1)對照品溶液的制備
[0007] 精密稱取熊果酸對照品1 .〇78mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每 lml含107.8yg的溶液；
[0008] 2)供試品溶液的制備
[0009] 精密量取本品粉末3g，置于50ml錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱定重量，超聲 20min，放置室溫后用甲醇補足重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0010] 3)分別精密吸取對照品和供試品溶液各如1，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積 分值，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
[0011] 4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
[0012] 精密稱取熊果酸對照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度作為 對照品儲備液，精密吸取對照品儲備液，lml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度， 搖勻，用微孔濾膜(0.22M1)濾過，取續(xù)濾液，按分別進樣分別吸取上述對照品溶液1、5、8、 10、20iU，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，熊果酸對照品進樣量為橫 坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程:Y = 1941.82X+0.185，r = 0.9999。
[0013]進一步的，上述的一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，所述的流動相為乙腈_ 0.1 %磷酸按體積比68:32。
[0014]進一步的，上述的一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，所述的檢測波長210nm。 [0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案檢測方法簡單，穩(wěn)定，可重復(fù)性好，專屬 性強，有利于控制楂含片的質(zhì)量。
【附圖說明】
[0016]圖1是熊果酸對照品HPLC色譜圖；
[0017]圖2是樣品HPLC色譜圖；
[0018] 圖3是陰性樣品HPLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0019]下面結(jié)合【具體實施方式】，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對 本發(fā)明的任何限制，任何人在本發(fā)明權(quán)利要求保護范圍內(nèi)所做的有限次的修改，仍在本發(fā) 明的權(quán)利要求保護范圍之內(nèi)。
[0020] 本發(fā)明所涉及到的百分濃度，沒有特別說明的，液體均為體積濃度，溶質(zhì)為固體的 指質(zhì)量濃度。
[0021] 實施例1
[0022] 1儀器與試藥
[0023] 1 . 1儀器Agl i ent 1260生物惰性四元高效液相色譜儀，德國梅特勒-托利多 XA20OTU電子分析天平。
[0024] 1.2樣品：草和堂山楂含片：廣西梧州三箭制藥有限公司保健品廠出品（批號 20120816,20121217,20120320);陰性樣品：按處方缺山楂按工藝制備。熊果酸對照品購于 中國藥品生物制品檢定所(批號：110742-200517,供含量測定用）；其他化學(xué)試劑均為分析 純。
[0025] 2方法與結(jié)果
[0026] 2.1 色譜條件色譜柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18100A柱（100mmX4.6mm，5ii m);乙腈-0.1 %磷酸水溶液(68:32)為流動相;流速為1.0ml .mirT1;檢測波長為210nm。
[0027] 2.2對照品溶液的制備精密稱取熊果酸對照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解 并稀釋至刻度，制成每lml含107.8yg的溶液。
[0028] 2.3供試品溶液的制備精密量取本品粉末3g，置于50ml錐形瓶中，精密加入20ml甲 醇，稱定重量，超聲20min，放置室溫后用甲醇補足重量，搖勻，用微孔濾膜(0.22M1)濾過，取 續(xù)濾液，即得。
[0029] 2.4測定法分別精密吸取對照品和供試品溶液各4iU，注入高效液相色譜儀，測定 峰面積積分值。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
[0030] 2.5專屬性考察取陰性樣品，按2.3制備陰性供試品溶液，按2.1色譜條件測定。結(jié) 果表明在該色譜條件下，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖1至圖3。
[0031] 2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取熊果酸對照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶 解并稀釋到刻度(濃度為：1. 〇78mg .ml/1)作為對照品儲備液，精密吸取對照品儲備液，lml置 l〇ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度（濃度為：0.1078mg.ml/1)，搖勻，用微孔濾膜 (0.22mi)濾過，取續(xù)濾液，按2.1色譜條件分別進樣分別吸取上述對照品溶液1、5、8、10、20y 1，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，熊果酸對照品進樣量(mg)為 橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程:Y = 1941.82X+0.185(r = 0.9999)結(jié)果表明：熊果酸 在13.5~53.9ng范圍內(nèi)，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
[0032] 2.7精密度實驗取同一份供試品溶液，按2.1色譜條件，連續(xù)進樣5次，測定峰面積 積分值，RSD = 0.3 %。表明儀器精密度良好。
[0033] 2.8穩(wěn)定性實驗取同一份樣品溶液，放置0、2、4、6、8、101!，按2.1色譜條件，分別測 定峰面積積分值，按外標(biāo)法以峰面積計算RSD為0.8%。結(jié)果表明待測物在10小時內(nèi)穩(wěn)定。 [0034] 2.9重復(fù)性實驗精密稱取同一批的樣品（批號：20120816)，按2.3供試品溶液的制 備方法試驗，平行操作5份，按2.1色譜條件近樣測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果平均含 量是5.3mg. gi，RSD = 0.6 %。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。
[0035] 2.10加樣回收率實驗精密稱取已測定含量的山楂含片(批號：20120816)，（熊果酸 含量為5.3mg. ) 1.0g，平行取樣9份。分別上述濃度為1.078mg. ml/1的熊果酸對照品溶液 0.5、0.8、lml，每個加樣量平行做3份。按2.3供試品溶液的制備方法制備供試品溶液、按2.1 色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算回收率，平均回收率為97.6% (n = 9)，RSD = 0.9%。
[0036] 2.11樣品含量測定按2.3供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，2.1的色譜條 件，2.4測定法測定了本品2批樣品中的熊果酸含量，結(jié)果見表2。
[0037]表2、樣品測定結(jié)果
【主權(quán)項】
1. 一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，其特征在于，依次包括下述步驟： 1) 對照品洛液的制備 精密稱取熊果酸對照品I. 〇78mg置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml 含107.8yg的溶液； 2) 供試品溶液的制備 精密量取本品粉末3g，置于50ml錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱定重量，超聲20min， 放置室溫后用甲醇補足重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得； 3) 分別精密吸取對照品和供試品溶液各4μ1，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分 值，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。 4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取熊果酸對照品10.78mg，置IOml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度作為對照 品儲備液，精密吸取對照品儲備液，Iml置IOml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度，搖 勻，用微孔濾膜(〇.22μπι)濾過，取續(xù)濾液，按分別進樣分別吸取上述對照品溶液1、5、8、10、 20μ1，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，熊果酸對照品進樣量為橫坐 標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程:Y = 1941.82Χ+0.185，r = 0.9999。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，其特征在于，所述的流 動相為乙腈-0.1 %磷酸按體積比68:32。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種HPLC測定山楂含片熊果酸的方法，其特征在于，所述的檢 測波長2 IOnm 〇
【文檔編號】G01N30/02GK105929039SQ201610234951
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月15日
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 黃林杰, 韋韜, 林冬杰, 嚴(yán)飛龍
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所