癌癥的血中生物標(biāo)記的制作方法
【專利摘要】提供一種新的癌癥的血中生物標(biāo)記，其能夠準(zhǔn)確地確認(rèn)罹患由全身的各臟器、組織發(fā)生的癌癥的狀態(tài)、且能夠簡便地測定。一種癌癥的血中生物標(biāo)記，其特征在于，包含以組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸為必須的至少7種的特定氨基酸組。
【專利說明】
癌癥的血中生物標(biāo)記
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及癌癥的血中生物標(biāo)記。
【背景技術(shù)】
[0002]從體內(nèi)存在的癌癥的預(yù)測以及抗癌藥的藥效預(yù)測等觀點(diǎn)出發(fā)，癌癥的生物標(biāo)記是有用的。
[0003]例如，專利文獻(xiàn)I公開了一種可作為癌癥特異性的生物標(biāo)記使用的新的多肽、及其的特異性的部分肽等。此外，專利文獻(xiàn)2公開了一種癌癥的生物標(biāo)記，其以miRNA的表達(dá)量為指標(biāo)。進(jìn)而，專利文獻(xiàn)3公開了一種用于肝癌檢測的生物標(biāo)記，其包含在正常人和肝癌患者中存在的有無、存在量不同的蛋白質(zhì)。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0005]專利文獻(xiàn)
[0006]專利文獻(xiàn)1:日本特開2014 —14368
[0007]專利文獻(xiàn)2:日本特開2014 — 082953
[0008]專利文獻(xiàn)3:日本特開2006 — 308533

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]發(fā)明要解決的課題
[0010]如上所述，作為癌癥的生物標(biāo)記，已經(jīng)提出了各種生物標(biāo)記，但迄今為止，尚不存在對(duì)罹患由全身各臟器、組織發(fā)生的癌癥的狀態(tài)、即荷癌狀態(tài)進(jìn)行把握的確定的血中生物標(biāo)記。并且，例如，如專利文獻(xiàn)I?3所述，多種生物標(biāo)記為特殊的肽、特殊的核酸，可以說測定也并不容易。因此，本發(fā)明的課題在于，提供一種新的癌癥的血中生物標(biāo)記，其能夠準(zhǔn)確地確認(rèn)罹患由全身的各臟器、組織發(fā)生的癌癥的狀態(tài)、且能夠簡便地測定。
[0011]用于解決課題的手段
[0012]本發(fā)明(I)為一種癌癥的血中生物標(biāo)記，其特征在于，包含以組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸為必須的至少7種的特定氨基酸組。
[0013]本發(fā)明(2)為根據(jù)前述發(fā)明(I)的癌癥的血中生物標(biāo)記，其中，前述特定氨基酸組還包含苯丙氨酸。
[0014]本發(fā)明(3)為根據(jù)前述發(fā)明(I)或(2)的癌癥的血中標(biāo)記，其中，前述癌癥為選自肝癌、大腸癌、肺癌、膽囊癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌(例如，肝門部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌等)、胃癌及胰腺癌中的至少I種癌癥。
[0015]本發(fā)明(4)為一種收集用于被檢者的癌癥診斷的數(shù)據(jù)的方法，所述方法包含如下工序:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0016]本發(fā)明(5)為根據(jù)前述發(fā)明(4)的方法，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。
[0017]本發(fā)明(6)為一種收集用于被檢者的癌癥診斷的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含如下單元:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0018]本發(fā)明(7)為根據(jù)前述發(fā)明(6)的系統(tǒng)，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。
[0019]本發(fā)明(8)為一種收集用于評(píng)價(jià)抗癌藥對(duì)被檢者的藥效的數(shù)據(jù)的方法，所述方法包含如下工序:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0020]本發(fā)明(9)為根據(jù)前述發(fā)明(8)的方法，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。
[0021]本發(fā)明(10)為根據(jù)前述發(fā)明(8)或(9)的方法，其中，前述抗癌藥為LATl抑制劑。
[0022]本發(fā)明(11)為一種收集用于評(píng)價(jià)抗癌藥對(duì)被檢者的藥效的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含如下單元:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0023]本發(fā)明(12)為根據(jù)前述發(fā)明(11)的系統(tǒng)，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。
[0024]本發(fā)明(13)為根據(jù)前述發(fā)明(11)或(12)的系統(tǒng)，其中，前述抗癌藥為LATl抑制劑。
[0025]本發(fā)明(14)為一種收集用于判定的數(shù)據(jù)的方法，所述判定為抗癌藥對(duì)被檢者的選自治療的開始、治療效果的預(yù)測及治療的繼續(xù)中的至少一種判定，所述方法包含如下工序:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0026]本發(fā)明(15)為根據(jù)前述發(fā)明(14)的方法，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。
[0027]本發(fā)明(16)為根據(jù)前述發(fā)明(14)或(15)的方法，其中，前述抗癌藥為LATl抑制劑。
[0028]本發(fā)明(17)為一種收集用于判定的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述判定為抗癌藥對(duì)被檢者的選自治療的開始、治療效果的預(yù)測及治療的繼續(xù)中的至少一種判定，所述系統(tǒng)包含如下單元:獲取由該被檢者采集的血液中的、前述發(fā)明(I)?(3)中任一項(xiàng)的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。
[0029]本發(fā)明(18)為根據(jù)前述發(fā)明(17)的系統(tǒng)，其還包含對(duì)前述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。
[0030]本發(fā)明(19)為根據(jù)前述發(fā)明(17)或(18)的系統(tǒng)，其中，前述抗癌藥為LATl抑制劑。
[0031]發(fā)明效果
[0032]根據(jù)本發(fā)明，能夠提供一種新的癌癥的血中生物標(biāo)記，其能夠準(zhǔn)確地確認(rèn)罹患由全身的各臟器、組織發(fā)生的癌癥的狀態(tài)、且能夠簡便地測定。因此，通過本發(fā)明，能夠切實(shí)地進(jìn)行體內(nèi)存在的癌癥的預(yù)測，對(duì)于癌癥患者，能夠切實(shí)地預(yù)測對(duì)該癌癥患者施予的藥劑的有效性，進(jìn)而，能夠?qū)拱┧幍乃幮ьA(yù)測等也是有效的，能夠高效地進(jìn)行新藥開發(fā)。
【附圖說明】
[0033]圖1a:左圖為檢索癌癥患者和正常人的血中7種氨基酸濃度的平均值的比較，右圖為7種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0034]圖1b:左圖為全部胃癌患者和正常人的血中7種氨基酸濃度的平均值的比較，右圖為氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0035]圖1c:左圖為胃癌未治療患者和正常人的血中7種氨基酸濃度的平均值的比較，右圖為氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0036]圖1d:左圖為胃癌I期未治療患者和正常人的血中7種氨基酸濃度的平均值的比較，右圖為氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0037]圖2a:左圖為胃癌細(xì)胞株44As3_lI培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的推移，右圖為8種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0038]圖2b:左圖為胃癌細(xì)胞株44As3-ll培養(yǎng)體系中的、LATlinhibiter(LATl抑制劑)的添加所引起的培養(yǎng)液中的氨基酸濃度的推移，右圖為8種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0039]圖3a:左圖為胰腺癌細(xì)胞株T3M-4培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的推移，右圖為8種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0040]圖3b:左圖為胰腺癌細(xì)胞株T3M-4培養(yǎng)體系中的、LATlinhibiteHLATl抑制劑)添加所引起的培養(yǎng)液中的氨基酸濃度的推移，右圖為8種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0041 ]圖3c:左圖為胰腺癌細(xì)胞株MIAPaCa-2培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的推移，右圖為8種氨基酸各自的濃度的雷達(dá)圖。
[0042]圖4a:LATl抑制劑施予下的、BSC期患者血清中的纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸的游離氨基酸濃度的推移。
[0043]圖4b:LATl抑制劑施予下的、BSC期患者血清中的酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸的游離氨基酸濃度的推移。
[0044]圖4c:實(shí)施了LATI抑制劑的單次施予和LATI抑制劑的反復(fù)施予的患者中的、以正常人的血中氨基酸濃度為基準(zhǔn)值的血中氨基酸濃度的推移。
【具體實(shí)施方式】
[0045]《癌癥的血中生物標(biāo)記》
[0046]本發(fā)明的癌癥的血中生物標(biāo)記的特征在于，分析必須成分包含組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸(以下，有時(shí)也將這些稱為“特定氨基酸”)。其中，在癌細(xì)胞中，特異性地存在攝取(取D込乜)中性氨基酸的中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(LAT1、LAT3)。在此，該中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白不僅攝取前述特定氨基酸，而且還攝取精氨酸、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、脯氨酸、L 一二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)等中性氨基酸，因此，理論上這些氨基酸也能夠作為生物標(biāo)記發(fā)揮作用。但是，將多次的臨床試驗(yàn)疊加，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，至少包含前述7種特定氨基酸的組合才是作為癌癥的生物標(biāo)記極有效的，這是本發(fā)明的本質(zhì)。
[0047]在此，作為生物標(biāo)記被測定的氨基酸為組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸這7種氨基酸。但是，只要將這些作為必須，則也不排除其它氨基酸的測定。例如，在前述7種氨基酸的基礎(chǔ)上，還可以將苯丙氨酸作為測定對(duì)象。此外，作為其它測定對(duì)象氨基酸的候補(bǔ)，可以列舉丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸等。
[0048]《用途》
[0049](被檢者的癌癥診斷)
[0050]本發(fā)明的生物標(biāo)記對(duì)于被檢者的癌癥診斷是有效的。在此，“癌癥診斷”是除了判斷被檢者(受檢者等)是否存在為癌癥的可能性以外、還包含判斷癌癥患者的癌癥的程度(進(jìn)行度和/或惡性度)的概念。作為被檢者的癌癥診斷的方法，首先將由被檢者采集的血液中的特定氨基酸(組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸)作為必須成分進(jìn)行定量。然后，例如，如圖1b所示，對(duì)這些特定氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖(radarchart)化。在此，本發(fā)明中所述雷達(dá)圖是能夠?qū)Χ鄠€(gè)項(xiàng)目(至少特定氨基酸、S卩7個(gè)項(xiàng)目)的大小進(jìn)行直觀比較的圖。各項(xiàng)目的軸從中心起配置為正多邊形是合適的。并且，圖1b的例子中，通過將“被檢者的雷達(dá)圖”和“平均(正常人)的雷達(dá)圖”進(jìn)行對(duì)比，從而可以推定為癌癥的可能性、癌癥的程度。具體而言，在被檢者罹患癌癥時(shí)，根據(jù)癌細(xì)胞的存在和/或其量，該被檢者的雷達(dá)圖與平均的雷達(dá)圖相比雷達(dá)圖形狀整體上縮小。更具體而言，當(dāng)將正常人的各氨基酸濃度的平均值設(shè)為100%時(shí)，則各血中氨基酸濃度的百分率之和顯示為700以下時(shí)，懷疑該被檢者的體內(nèi)存在癌癥。需要說明的是，作為能夠應(yīng)用本發(fā)明的生物標(biāo)記的癌癥種類，沒有任何限定，例如為選自胃癌、食道癌、小腸癌、大腸癌、直腸癌、肛門癌、胰腺癌、膽囊癌、肝癌、甲狀腺癌、腎上腺皮質(zhì)癌、乳腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸腫瘤、陰莖癌、口腔癌、唾液腺癌、咽癌、喉癌、皮膚癌、黑色素瘤、軟組織肉瘤、膀胱癌、尿道癌、腎癌、間皮瘤、肺癌、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、腦腫瘤、向各臟器、組織轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移性癌癥中的任意一種或多種癌癥種類。
[0051]在此，在制作該雷達(dá)圖時(shí)，適合利用安裝有規(guī)定的程序的系統(tǒng)來進(jìn)行。該系統(tǒng)具有如下的圖表化單元:基于由被檢者采集的血液中的、至少前述7種特定氨基酸的濃度分析結(jié)果，對(duì)該各氨基酸濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化。需要說明的是，關(guān)于該系統(tǒng)，作為一例，通過輸入(包括介由網(wǎng)絡(luò)、專線從外部獲取信息)在外部進(jìn)行分析而得的分析結(jié)果，從而獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。但是，該系統(tǒng)自身也可以具有對(duì)血液進(jìn)行分析的單元，此時(shí)，能夠在系統(tǒng)內(nèi)部獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。
[0052](藥效判定)
[0053]本發(fā)明的生物標(biāo)記對(duì)于抗癌劑的藥效判定是有效的。具體而言，首先，將由施予了某種抗癌劑的癌癥患者采集的血液中的特定氨基酸(組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸)作為必須成分并進(jìn)行定量。然后，按照(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目中所說明那樣，對(duì)這些特定氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖(radar chart)化。隨著時(shí)間的經(jīng)過，反復(fù)進(jìn)行該操作。其結(jié)果是，通過對(duì)該癌癥患者的雷達(dá)圖是否隨著時(shí)間的經(jīng)過而變大進(jìn)行判定，從而能夠判定所施予的抗癌劑是否適合于該癌癥患者。從而，該方法是判定可否繼續(xù)對(duì)該癌癥患者施予該抗癌劑的簡便方法。
[0054]此外，在該藥效判定時(shí)，與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，也適合利用安裝有規(guī)定的程序的系統(tǒng)來進(jìn)行。該系統(tǒng)具有如下的圖表化單元:基于由施予了某種抗癌劑的癌癥患者采集的血液中的、至少前述7種特定氨基酸的濃度分析結(jié)果，對(duì)該各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化。需要說明的是，該系統(tǒng)也與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，作為一例，通過輸入(包括介由網(wǎng)絡(luò)、專線從外部獲取信息)在外部進(jìn)行分析的分析結(jié)果，從而獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。但是，其也與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，該系統(tǒng)自身也可以具有對(duì)血液進(jìn)行分析的單元，此時(shí)，能夠在系統(tǒng)內(nèi)部獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。另外，由于能夠適當(dāng)?shù)嘏袛嘣摽拱﹦┦欠襁m合于該癌癥患者，因此優(yōu)選施予抗癌劑后多次地、隨著時(shí)間的經(jīng)過地進(jìn)行分析，而不是在施予抗癌劑后僅進(jìn)行I次分析。因此，從該觀點(diǎn)出發(fā)，該系統(tǒng)適合具有用于隨著時(shí)間的經(jīng)過而存儲(chǔ)同一人的信息的存儲(chǔ)單元。
[0055](抗癌劑開發(fā))
[0056]本發(fā)明的生物標(biāo)記對(duì)抗癌劑的開發(fā)是有效的。具體而言，首先，通過臨床試驗(yàn)，將由施予了抗癌劑的候補(bǔ)成分的癌癥患者采集的血液中的特定氨基酸(組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸)作為必須成分并進(jìn)行定量。然后，按照(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目中所說明那樣，對(duì)這些特定氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖(radar chart)化。隨著時(shí)間的經(jīng)過，反復(fù)進(jìn)行該操作。其結(jié)果是，通過對(duì)該癌癥患者的雷達(dá)圖是否隨著時(shí)間的經(jīng)過而變大進(jìn)行判定，從而能夠?qū)λ┯璧目拱﹦┑暮蜓a(bǔ)成分的有效性進(jìn)行判定。
[0057]此外，在該抗癌劑的開發(fā)時(shí)，與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，也適合利用安裝有規(guī)定的程序的系統(tǒng)來進(jìn)行。該系統(tǒng)具有如下的圖表化單元:基于由施予了抗癌劑的候補(bǔ)成分的癌癥患者采集的血液中的、至少前述7種特定氨基酸的濃度分析結(jié)果，對(duì)該各氨基酸濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化。需要說明的是，該系統(tǒng)也與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，作為一例，通過輸入(包括介由網(wǎng)絡(luò)、專線從外部獲取信息)在外部進(jìn)行分析的分析結(jié)果，從而獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。但是，其也與(被檢者的癌癥診斷)的項(xiàng)目同樣地，該系統(tǒng)自身也可以具有對(duì)血液進(jìn)行分析的單元，此時(shí)，能夠在系統(tǒng)內(nèi)部獲取前述7種特定氨基酸的濃度信息。另外，由于能夠適當(dāng)?shù)嘏袛嘣摵蜓a(bǔ)成分的有效性，因此優(yōu)選在施予候補(bǔ)成分后多次地、隨著時(shí)間的經(jīng)過地進(jìn)行分析，而不是在施予候補(bǔ)成分后僅進(jìn)行I次分析。因此，從該觀點(diǎn)出發(fā)，該系統(tǒng)適合具有用于隨著時(shí)間的經(jīng)過而存儲(chǔ)同一人的信息的存儲(chǔ)單元。
[0058]【實(shí)施例】
[0059]《材料和方法》
[0060]I)利用患者血清的解析
[0061]由胃癌[100例，年齡平均值(最小一最大值)66.1(31-89歲)、男女比72:28]、胰腺癌[27，70.3(56-81) 13:14]、膽道癌患者[6,70.5(68-75)5:1]及非癌癥正常人[12，50.8(29-73)11:1]采血后，立即分離血清，在直至檢索為止的期間內(nèi)均超低溫冰箱內(nèi)(-80°C)保存。通過質(zhì)譜對(duì)其測定7種氨基酸(組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸)的濃度，與由正常人的血液獲得的值進(jìn)行比較。關(guān)于各氨基酸的濃度，將正常人的平均值作為100%，以相對(duì)于其的百分率來表示各癥例的值，在癌癥患者和正常人的2組間進(jìn)行比較。
[0062]2)作為發(fā)明基礎(chǔ)的依據(jù)，利用成為封閉環(huán)境的癌細(xì)胞株培養(yǎng)體系的解析
[0063]使用44As3_ll(胃癌細(xì)胞系)、T3M_4(胰腺癌細(xì)胞系)，MIAPaCa_2(胰腺癌細(xì)胞系)的各癌細(xì)胞株。使用6孔板，在5xl04細(xì)胞/3mL(10%FBS，L-Glu+PS in RPMI1640)、37°C的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在O、24、48、72、97小時(shí)回收培養(yǎng)液，以I，OOOrpm進(jìn)行離心，將1.0mL上清在直至測定為止的期間內(nèi)在超低溫冰箱內(nèi)(-80°C)保存。通過質(zhì)譜對(duì)8種氨基酸(在前述的組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸基礎(chǔ)上加上苯丙氨酸)進(jìn)行測定。各培養(yǎng)用三個(gè)重復(fù)(triplet)進(jìn)行，對(duì)該被檢體進(jìn)行測定，將各氨基酸的濃度以平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差形式表不，在各組間進(jìn)行比較。此外，將抗癌劑(O —(5 —氨基一2—苯基苯并嚼卩坐一7—基)甲基一3，5 — 二氯一L一酪氨酸)以各濃度添加到培養(yǎng)液中，從而觀察對(duì)培養(yǎng)液中的氨基酸濃度降低的抑制。
[0064]3)關(guān)于統(tǒng)計(jì)處理，2組間的比較使用Mann-Whitney U test，將顯著水平0.05以下確定為顯著性差異。
[0065]《結(jié)果》
[0066]I)癌癥患者血清中氨基酸濃度的降低
[0067].全部131個(gè)癌癥患者血清中的7種氨基酸濃度的全部平均值與12個(gè)正常人血清的平均值相比，顯示出顯著低的值(P = 0.0043)。(圖1a)
[0068].全部100個(gè)胃癌患者血清中的7種氨基酸濃度的全部平均值與12個(gè)正常人血清的平均值相比，顯示出顯著低的值(P = 0.0021)。(圖1b)
[0069].43個(gè)胃癌未治療患者血清中的7種氨基酸濃度的全部平均值與12個(gè)正常人血清的平均值相比，顯示出顯著低的值(P = 0.0394)。(圖1c)
[0070].35個(gè)胃癌stage I未治療患者血清中的7種氨基酸濃度的全部平均值與12個(gè)正常人血清的平均值相比，顯示出顯著低的值(p = 0.0205)。(圖1d)(早期胃癌包含在stage I中)
[0071]2)癌細(xì)胞株培養(yǎng)體系中的氨基酸濃度的降低
[0072].與培養(yǎng)O小時(shí)相比，胃癌細(xì)胞株44As 3_11的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的平均值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，可見階段性的降低(96小時(shí)后，P = 0.0008)。(圖2a)
[0073]?另一方面，在將LATI抑制劑(LATI inhibi tor)添加到培養(yǎng)液中的組中，可見藥劑濃度依賴性的該氨基酸降低的抑制(圖2b)
[0074].與培養(yǎng)O小時(shí)相比，胰腺癌細(xì)胞株T3M-4的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的平均值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，可見階段性的降低(96小時(shí)后，P = 0.0008。(圖3a)
[0075]?另一方面，在將LATI抑制劑(LATI inhibi tor)添加到培養(yǎng)液中的組中，可見藥劑濃度依賴性的該氨基酸降低的抑制(圖3b)
[0076].與培養(yǎng)O小時(shí)相比，胰腺癌細(xì)胞株MIAPaCa-2的培養(yǎng)液中的8種氨基酸濃度的平均值隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，可見階段性降低(96小時(shí)后，p = 0.0008。(圖3c)
[0077]需要說明的是，本實(shí)施例中所示的LATl抑制劑{有時(shí)表示為LATl抑制劑(或簡單地抑制劑、inhibitor)等。}為O —(5 —氨基一2—苯基苯并噁唑一7—基)甲基一3，5 — 二氯一L 一酪氨酸。
[0078]《最佳支持治療(bestsupportive care，BSC)期癌癥患者血液的分析》
[0079]I)利用BSC期患者血清的解析
[0080 ]在規(guī)定的臨床試驗(yàn)(c I i n i ca I t r i a I)的當(dāng)局手續(xù)結(jié)束、獲得臨床試驗(yàn)實(shí)施設(shè)施的臨床試驗(yàn)審查委員會(huì)(IRB)的許可的基礎(chǔ)上，選擇患者并采集分析用血清，保存，進(jìn)行分析。對(duì)象患者具有癌癥標(biāo)準(zhǔn)療法無效或處于不耐受的狀態(tài)的實(shí)體癌，一般處于被稱為處于BSC期的狀態(tài)。血清的采集和分析方法如《材料和方法》中所述。將采集的時(shí)期為(a)抑制劑施予(12mg/m2/day)前和(b)最初的單次施予開始25.5小時(shí)后、(。)反復(fù)施予開始前、((1)一周連日反復(fù)施與12mg/m2/day的抑制劑25.5小時(shí)后、(6)反復(fù)施予結(jié)束三周后的5個(gè)結(jié)果示于圖4a?4c0
[0081]2)關(guān)于正常人(64人)和各患者的8種氨基酸濃度各自的相對(duì)的濃度的平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差，對(duì)應(yīng)2組間的比較使用Student t test統(tǒng)計(jì)處理法，將顯著水平0.05以下視為顯著性差異來表不。
[0082]《結(jié)果》
[0083 ] I) BSC期患者血清中的游離氨基酸濃度
[0084].患者編號(hào)101?104中的、癌癥的原發(fā)部位及轉(zhuǎn)移部位如下。
[0085][患者編號(hào)101]原發(fā);胰腺癌、轉(zhuǎn)移;肝臟(肝癌)
[0086][患者編號(hào)102]原發(fā);胰腺癌、轉(zhuǎn)移;肝臟(肝癌)
[0087][患者編號(hào)103]原發(fā);大腸癌、轉(zhuǎn)移;肝臟和肺(肝癌、肺癌)
[0088][患者編號(hào)104]原發(fā);膽囊癌、轉(zhuǎn)移;肝門部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌(淋巴癌)
[0089].患者編號(hào)101?104中，101為僅單次施予，103為僅反復(fù)施予，102、104這2人為進(jìn)行了單次施與和反復(fù)施與兩者。
[0090].各8種氨基酸中的纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸的結(jié)果示于圖4a，其余的酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸的結(jié)果示于圖4b。圖中的方框包圍的部分意味著血中氨基酸濃度的正常范圍。
[0091].概而言之，這些氨基酸在單次施予前的值顯示為接近正常區(qū)域的最下段的低值，推測血中氨基酸可能通過LATl而被攝入癌細(xì)胞中的結(jié)果。
[0092].在單次施予抑制劑后，各氨基酸濃度比施予前的值高，認(rèn)為:通過LATl抑制，從而上述類推的向癌中的攝取受到抑制，結(jié)果血中氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)樯仙?，是極為重要的生物體反應(yīng)。
[0093].此后的推移、例如反復(fù)施予前和施與后的值的推移有多種情況，施予后的采血時(shí)間為反復(fù)施予結(jié)束三周后的點(diǎn)時(shí)，與單次施予時(shí)顯著不同。進(jìn)而，認(rèn)為，這是施予抑制劑后的體內(nèi)氨基酸代謝的變動(dòng)(與新的體內(nèi)動(dòng)向的結(jié)果相適應(yīng)的反應(yīng))顯示出患者間的差異等幾種因素相加的結(jié)果。
[0094]2)抑制劑對(duì)血中氨基酸濃度的反應(yīng)
[0095].將抑制劑對(duì)實(shí)施了單次施與及反復(fù)施予的102及104的癥例的血中氨基酸濃度的作用示于圖4c。在各圖的左柱中，以Normal表示以正常人(64人)的各氨基酸的血中濃度的平均值設(shè)為100時(shí)的各人的偏差(標(biāo)準(zhǔn)偏差)。將各患者的8種氨基酸濃度各自的相對(duì)的濃度的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差與各采血時(shí)間點(diǎn)一起作為右側(cè)的4柱進(jìn)行比較。這2個(gè)癥例中重要的要點(diǎn)有2個(gè)，一個(gè)是Normal和單次施予前(before Ix inhibitor)之間差異具有顯著性這一點(diǎn)，第二個(gè)是單次施予之前和之后同樣具有顯著性差異。
[0096].如此次處于BSC期的患者所示，進(jìn)行性的癌癥中，LAT1對(duì)于血中氨基酸濃度的作用較大，因此血中8種氨基酸均降低。因此，提供了抑制劑的是否適合于各患者的標(biāo)準(zhǔn)。這8種氨基酸的降低通過施與抑制劑而顯示出上升的反應(yīng)，表明該LATl的功能與抑制劑發(fā)生了反應(yīng)。
[0097].進(jìn)而，即使在判斷此后繼續(xù)進(jìn)行抑制劑治療時(shí)，這些血中氨基酸濃度的推移也與臨床觀察結(jié)果、檢查觀察結(jié)果、尤其是腫瘤的尺寸變化相結(jié)合，發(fā)揮作為癌癥的生物標(biāo)記的作用。
[0098]從而，根據(jù)本發(fā)明，通過使用7種(或8種)特定氨基酸作為血中的生物標(biāo)記，利用將正常人的特定氨基酸濃度的合計(jì)值(或平均值)與被檢者的特定氨基酸濃度的合計(jì)值(或平均值)相對(duì)地比較這一簡便的方法，從而能夠確認(rèn)是否為罹患了由各臟器、組織發(fā)生的癌癥的狀態(tài)。進(jìn)而，能夠應(yīng)用于對(duì)癌癥患者的癌癥治療、尤其是對(duì)中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、LATl的選擇性抑制劑(LAT1抑制劑)的應(yīng)用進(jìn)行判定的、使個(gè)性化醫(yī)療成為可能的系統(tǒng)或方法(個(gè)性化醫(yī)療用系統(tǒng)或方法)，能夠應(yīng)用于對(duì)利用抑制劑治療的開始、治療效果的預(yù)測、治療的繼續(xù)進(jìn)行判定的系統(tǒng)或方法(判定用系統(tǒng)或方法)等。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種癌癥的血中生物標(biāo)記，其特征在于， 包含以組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、纈氨酸及酪氨酸為必須的至少7種的特定氨基酸組。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癌癥的血中生物標(biāo)記，其中， 所述特定氨基酸組還包含苯丙氨酸。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的癌癥的血中標(biāo)記，其中， 所述癌癥為選自肝癌、大腸癌、肺癌、膽囊癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌、胃癌及胰腺癌中的至少I種癌癥。4.一種收集用于被檢者的癌癥診斷的數(shù)據(jù)的方法，所述方法包含如下工序: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。6.—種收集用于被檢者的癌癥診斷的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含如下單元: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的系統(tǒng)，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。8.—種收集用于評(píng)價(jià)抗癌藥對(duì)被檢者的藥效的數(shù)據(jù)的方法，所述方法包含如下工序: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其中，所述抗癌藥是LATl抑制劑。11.一種收集用于評(píng)價(jià)抗癌藥對(duì)被檢者的藥效的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包含如下單元: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的系統(tǒng)，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的系統(tǒng)，其中， 所述抗癌藥是LATI抑制劑。14.一種收集用于判定的數(shù)據(jù)的方法，所述判定為抗癌藥對(duì)被檢者的選自治療的開始、治療效果的預(yù)測及治療的繼續(xù)中的至少一種判定，所述方法包含如下工序: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化工序。16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的方法，其中， 所述抗癌藥是LATI抑制劑。17.—種收集用于判定的數(shù)據(jù)的系統(tǒng)，所述判定為抗癌藥對(duì)被檢者的選自治療的開始、治療效果的預(yù)測及治療的繼續(xù)中的至少一種判定，所述系統(tǒng)包含如下單元: 獲取由該被檢者采集的血液中的、權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的血中生物標(biāo)記所涉及的各氨基酸的濃度分析結(jié)果。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的系統(tǒng)，其還包含對(duì)所述各氨基酸的濃度進(jìn)行雷達(dá)圖化的圖表化單元。19.根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的系統(tǒng)，其中， 所述抗癌藥是LATI抑制劑。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK105934672SQ201580000973
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2015年6月9日
【發(fā)明人】遠(yuǎn)藤仁, 岡安勛, 花樹代美
【申請人】J制藥股份有限公司