一種血小板聚集功能的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種血小板聚集功能的檢測方法，依次包括取樣、血小板血漿的提取、乏血小板血漿的提取、富血小板血漿的提取和測定等步驟。與傳統(tǒng)方法相比，本發(fā)明的檢測方法獲得的富血小板血漿的總量大，其中的血小板濃度不發(fā)生變化，完全可以滿足多次重復(fù)測定的要求，且檢測的結(jié)果準確可信。
【專利說明】
-種血小板聚集功能的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及血液制品的檢測領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種檢測血小板聚集功能的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血小板(blood platelet,簡稱為化T)是哺乳動物血液中的有形成分之一，是從骨 髓成熟的巨核細胞胞質(zhì)裂解脫落下來的具有生物活性的小塊胞質(zhì)。血小板體積小，無細胞 核，即沒有染色體，呈雙面微凸的圓盤狀，直徑為2-3微米，在血液中的濃度為（100-300) X IO9個/L。血小板具有特定的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生化組成，在正常血液中有較恒定的數(shù)量(如人的 血小板數(shù)為每立方毫米10-30萬），在止血、傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血栓形成及器官移植排斥 等生理和病理過程中有重要作用。
[0003] 血小板聚集是血小板參與生理止血的重要環(huán)節(jié)，在許多病理性血栓形成過程中血 小板聚集發(fā)揮著先導(dǎo)而關(guān)鍵的作用。因此，血小板聚集功能的檢測對臨床出血與血栓性疾 病的診斷及療效監(jiān)測有指導(dǎo)意義，已廣泛應(yīng)用于抗血小板聚集藥物的治療監(jiān)測中。
[0004] 目前光學(xué)比濁法（W下簡稱傳統(tǒng)方法)因其操作簡便、快速，易于掌握且經(jīng)濟實用， 作為"金標準"試驗用于臨床血小板聚集功能的檢測中。該方法的操作參見《全國臨床檢驗 操作規(guī)程》(第S版），具體為:采集靜脈血，先經(jīng)lOOOr/min離屯、IOmin后，在上層血漿層中吸 取30化L，作為富血小板血漿(簡稱PRP)，剩余血液樣品再經(jīng)3000r/min離屯、20min后，在上層 血漿層中吸取30化L，作為乏血小板血漿(簡稱PPP);然后將PPP作為透光度100%的對照，W PRP的初始透光度為0 %，加入誘導(dǎo)劑ADP，用血小板聚集儀測定PRP的透光度，從而得到血小 板聚集率，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚集率(PAgT)。該過程中的3(K)化是最 后測定時血小板聚集儀所要求的樣品體積量。
[0005] 然而可W看出傳統(tǒng)方法是先從血液樣品中離屯、提取出30化L富血小板血漿，再從 剩下的大量血液樣品中離屯、提取30化L乏血小板血漿。如果需要重復(fù)測定，就要將離屯、過兩 次的剩余血液樣品重新混勻，重復(fù)W上兩次離屯、，再分別得到PRP和PPP。但是由于前一次測 定時已經(jīng)取走30化L富血小板血漿和30化L乏血小板血漿，剩余血液樣品再次離屯、獲得的 PRP中血小板濃度與前一次測定時偏差很大，而且反復(fù)離屯、會嚴重破壞血小板的聚集功能， 因此重復(fù)測定結(jié)果不可能準確。并且運種方法中影響結(jié)果的因素眾多，即使在同一實驗室 因?qū)嶋H操作不同，結(jié)果也會不同，穩(wěn)定性較差，可比性不強?；赪上缺點傳統(tǒng)方法在臨床 上的廣泛應(yīng)用受到極大的限制;且因結(jié)果不穩(wěn)定，所得的數(shù)據(jù)不被所有臨床醫(yī)生認可，只用 作參考。為此研究出一種新的能夠準確檢測血小板聚集功能的方法是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)缺陷，第一方面，提供一種能為臨床 提供準確血小板聚集功能結(jié)果的檢測方法，使該檢測方法能夠?qū)⒀“寰奂δ艿臋z測流 程標準化，從而得到準確的結(jié)果。該血小板聚集功能的檢測方法，依次包括取樣、血小板血 漿的提取、乏血小板血漿的提取、富血小板血漿的提取和測定等步驟。
[0007] 所述血小板血漿的提取為將血液在200-250g下離屯、5-lOmin，取上層，即是血小板 血漿。
[0008] 所述乏血小板血漿的提取和富血小板血漿的提取同時完成。
[0009] 所述乏血小板血漿的提取和富血小板血漿的提取為將血小板血漿在1200-2500g 下離屯、5-lOmin，上層為乏血小板血漿，其余為富血小板血漿。
[0010] 具體包括W下步驟：
[00川 （1)、取樣：
[0012] 對來自受試對象的靜脈血作抗凝處理；
[0013] (2)、血小板血漿的提?。?br>[0014] 將步驟(1)的靜脈血在200-250g下離屯、5-lOmin，取上層血漿，即是血小板血漿；
[001引 （3 )、乏血小板血漿(PPP)和富血小板血漿(PRP)的提?。?br>[0016] 將步驟(2)得到的血小板血漿Wl200-2500g離屯、5-lOmin，取上層血漿，即是乏血 小板血漿(PPP);剩余血小板血漿混勻后，即是富血小板血漿；
[0017] (4)、巧憶：
[0018] W乏血小板血漿的透光度為100%，W富血小板血漿的初始透光度為0%，加入誘 導(dǎo)劑，測定富血小板血漿的透光度，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚集率 (PA^)O
[0019] 步驟(2)中的離屯、條件為250g下離屯、5min。
[0020] 步驟(3)中的離屯、條件為1200-1500g下離屯、IOmin或2000-2500g下離屯、5min;優(yōu)選 1200g 下離屯、lOmin。
[0021] 所述誘導(dǎo)劑可W是二憐酸腺巧(ADP)、花生四締酸、膠原、腎上腺素或瑞斯托霉素 等。
[0022] 第二方面，本發(fā)明提供一種血小板聚集功能檢測中血小板血漿的提取方法，將血 液在200-250g下離屯、5-lOmin，取上層血漿，即得到血小板血漿;優(yōu)選250g下離屯、5min。
[0023] 第=方面，本發(fā)明提供一種血小板聚集功能檢測中乏血小板血漿和富血小板血漿 的提取方法，包括W下步驟：
[0024] (i)、將血液在200-250g下離屯、5-lOmin，取上層血漿，得到血小板血漿;優(yōu)選250g 下離屯、Smin;
[00巧](ii )、將所述血小板血漿Wl200-2500g離屯、5-lOmin，取上層血漿，即得到乏血小 板血漿(PPP);剩余血小板血漿混勻后，即得到富血小板血漿;優(yōu)選1200-1500g下離屯、IOmin 或2000-2500g下離屯、5min;更優(yōu)選1200g下離屯、lOmin。
[00%]與傳統(tǒng)方法相比，本發(fā)明的有益效果是：
[0027] 1、本發(fā)明的檢測方法在第一次離屯、后一次性吸取含有血小板的全部血漿，棄去血 細胞，第二次離屯、后根據(jù)血小板富集在底部的原理，取30化L上層血漿作為乏血小板血漿， 剩下大量的血漿作為富血小板血漿；由于本發(fā)明檢測方法中W乏血小板血漿作為對照樣 品，可W重復(fù)使用；富血小板血漿作為測定樣品，雖然只能使用一次，但富血小板血漿的總 量大，且血小板濃度與測定過的PRP完全一致，完全可W滿足多次重復(fù)測定的要求，且檢測 的結(jié)果與傳統(tǒng)方法相比，會更加準確。
[00%] 2、本發(fā)明的檢測方法可W實現(xiàn)檢測流程的標準化：
[0029] I)傳統(tǒng)方法是先吸取富血小板血漿，然后最少要經(jīng)過20分鐘的離屯、，才能得到乏 血小板血漿，再用于測定。而實際工作中因樣品量大，富血小板血漿獲取后還需等待相當長 的時間才能用于測定，在靜置等待的過程中富血小板血漿中的血小板會在重力的作用下沉 降，使得PRP中不同位置的血小板濃度并不相同，導(dǎo)致測定出的結(jié)果不能真實反映血小板的 聚集功能。本發(fā)明檢測方法中富血小板血漿與乏血小板血漿是同時提取的，避免了因前后 提取兩種血漿之間存在的時間差及更多的實驗操作，由血小板沉降而造成血小板濃度的差 異引起的誤差，保證了 PRP中血小板濃度的一致性。
[0030] 2)傳統(tǒng)方法中第一次離屯、后，含有血小板的上層血漿層與含有紅細胞和白細胞的 下層血細胞層之間分層不明顯，越靠近血漿層的上部，血小板濃度越低，越靠近血漿層的下 部，即血漿層與血細胞層的分界處，血小板濃度越高。實際操作時，操作者往往為避免誤吸 血細胞層，而靠近血漿層上部液面處吸取血小板，吸取到的血小板濃度極有可能過低，并不 是血漿中血小板濃度的真實值，對檢測結(jié)果造成誤差。而本發(fā)明方法在第一次離屯、時保留 了全部血漿層，棄去血細胞層，之后的整個過程中，沒有血小板的損失，在吸取富血小板血 漿前會混勻樣品，用于測定的富血小板血漿中血小板濃度與真實值相差不大，規(guī)避了傳統(tǒng) 方法中富血小板血漿中的濃度與真實值相差較大的情況出現(xiàn)。
[0031] 3)傳統(tǒng)方法中第一次離屯、得到的血漿量少，易吸取到血細胞層的紅細胞和白細 胞，而紅細胞和白細胞的存在會降低樣品的透光度，掩蓋血小板聚集變化，影響實驗結(jié)果。 本發(fā)明的檢測方法通過調(diào)整第一次離屯、的離屯、條件，不但可W盡可能回收血小板，還能夠 降低紅細胞、白細胞的污染量，使干擾測定的因素減少，從而得到更準確的結(jié)果。
[0032] 4)本發(fā)明的檢測方法得到的富血小板血漿總量大大增加，遠多于傳統(tǒng)方法的30化 L，即使紅細胞壓積大的樣品，也能夠獲得比傳統(tǒng)方法更大量的富血小板血漿。
[0033] 5)本發(fā)明的檢測方法可W測定同樣樣品在不同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下的最大聚集率 (PA巧），進而進行比較，為篩選誘導(dǎo)劑提供科學(xué)可靠的方法，避免了用不同樣品研究不同誘 導(dǎo)劑誘導(dǎo)作用的不可比性。
【具體實施方式】
[0034] 發(fā)明人在使用傳統(tǒng)方法檢測血小板的聚集功能時，發(fā)現(xiàn)在第一次離屯、后，吸取富 血小板血漿時需要十分小屯、，因為血漿層與血細胞層的分界不明顯，為了保證血小板的濃 度符合要求，要盡可能地靠近血漿層與血細胞層的分界處吸取血漿，運樣很容易將下層血 細胞層中的紅細胞和白細胞吸取上來，在等待乏血小板血漿制備的過程中，可W觀察到盛 裝富血小板血漿的容器底部有紅細胞沉淀下來。出現(xiàn)運種情況后，該樣品作廢，只能重新離 屯、，重新吸取，血小板的聚集功能在W上反復(fù)的過程中很可能已被破壞，得到的檢測結(jié)果不 能真實反映被檢者的血小板聚集功能。因此，本發(fā)明對傳統(tǒng)的光學(xué)比濁法進行了改良，優(yōu)化 了檢測過程的操作過程及參數(shù)，使得本發(fā)明的檢測方法可W實現(xiàn)樣品的重復(fù)測定，使血小 板聚集功能的檢測過程標準化、流程化，從而為臨床提供更加準確的數(shù)據(jù)。
[0035] 本發(fā)明提到的血小板聚集功能的檢測方法，包括W下步驟：
[0036] (1)、取樣：
[0037] 用構(gòu)祿酸鋼凝血試驗管(其中構(gòu)祿酸鋼濃度為109mmol/L)盛裝采集到的受試對象 的靜脈血；
[0038] (2)、提取血小板血漿：
[0039] 將步驟（1)采集的靜脈血在200-250g下離屯、5-lOmin，吸取上層全部血漿作為血小 板血漿；
[0040] (3)、提取乏血小板血漿(PPP)和富血小板血漿(PRP):
[0041 ] 將步驟(2)得到的血小板血漿Wl200-2500g離屯、5-lOmin，一般在1200-1500g下離 屯、IOmin或2000-2500g下離屯、5min效果更好，離屯、后吸取30化L上層血漿作為乏血小板血漿 (PPP)于PPP檢測杯內(nèi)；剩余血漿混勻后取300化作為富血小板血漿(PRP)于PRP檢測杯內(nèi)；
[00創(chuàng) （4)、測定：
[0043] WPPP檢測杯的透光度為100% ,WPRP檢測杯的初始透光度為0%，加入誘導(dǎo)劑，用 血小板聚集儀測定PRP檢測杯的透光度，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚集率 (PA巧）；
[0044] 誘導(dǎo)劑可W是二憐酸腺巧(ADP)、花生四締酸、膠原、腎上腺素、瑞斯托霉素等。
[0045] 本發(fā)明的檢測方法中用到的試劑、耗材和儀器均商購得到。如誘導(dǎo)劑為二憐酸腺 巧(ADP)，購自北京普利生儀器有限公司；血小板聚集儀為北京泰利康信科技有限公司的 LBY-NJ4A全自動血小板聚集儀;KX-21型血細胞分析儀購自日本SYSMEX (希森美康)株式會 社。
[0046] W下結(jié)合具體實施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容，并對本發(fā)明作進一步闡述，但 運些實施例絕非對本發(fā)明進行限制。
[0047] 用本發(fā)明提出的血小板聚集功能的檢測方法對若干血液樣品進行檢測，篩選出步 驟(2)和(3)中的離屯、條件;具體實施的步驟同上述檢測方法，僅W下步驟略有不同：
[0048] (1)、取樣：
[0049] 采集受試對象晨起空腹靜脈血，每位受試對象均采集2管;一管作為本發(fā)明不同離 屯、條件下檢測方法中的樣品，另一管作為傳統(tǒng)方法中的樣品。
[0050] (2)和(3)中的離屯、條件見表1;步驟(3)完成后，先用SysmexKX-21型血細胞分析儀 測定得到的PRP中的血小板濃度，用移液槍測量出血漿量，再進行步驟（4)的測定，得到 PA巧;同時也測定用傳統(tǒng)方法得到的PRP中的血小板濃度、血漿量及PA巧，實驗結(jié)果見表2。
[0051] 表1本發(fā)明檢測方法中的不同離屯、條件
[0化2]
[0053]表2不同檢巧巧法得到的PRP中的血小板數(shù)據(jù)結(jié)果
[0化4]
[0055] 本領(lǐng)域的操作規(guī)程規(guī)定富血小板血漿中血小板濃度為（100-200) X IOVl時，得到 的血小板最大聚集率較準確，并顯示血小板濃度過低（< 100 X IO^L)或過高（>200 X IO^ U都會影響結(jié)果，得到的最大聚集率誤差會較大。最大聚集率的誤差大，會導(dǎo)致大夫在診斷 時做出錯誤的判斷，不能準確地判斷出哪些是血小板聚集功能正常的人群，哪些是血小板 聚集功能增強或有缺陷或需要治療的患者。表1和表2的結(jié)果也表明，隨著PRP中血小板濃度 的增加，最大聚集率也增高，PRP中血小板濃度的降低，最大聚集率也降低，誤差較大，因此 測定時血小板的終濃度為（100-200) X ioVl較合適。
[0056] 其余離屯、條件不在本發(fā)明范圍內(nèi)的實驗組(如第1-4組、第17-20組），要不就是最 終得到的血小板濃度過高或過低，要不得到的富血小板血漿量較少，運些因素最終都會導(dǎo) 致得到的血小板最大聚集率的數(shù)據(jù)不準確，或無法進行重復(fù)試驗。例如步驟(2)中：若離屯、 力過小的話(第1組和第2組），獲得的血小板濃度過高（>200 X IO^L) ,PAgT結(jié)果明顯高于 傳統(tǒng)方法得到的結(jié)果;若離屯、時間過短的話(第3組和第4組），雖然PAgT結(jié)果和傳統(tǒng)方法結(jié) 果較一致，但獲取到的富血小板血漿量較少，無法進行重復(fù)試驗;若離屯、時間過長或離屯、力 過大的話（第17組和第18組、第19組和第20組），獲得的血小板濃度過低（<100X IOVl)， PA巧結(jié)果明顯低于傳統(tǒng)方法得到的結(jié)果；因此步驟(2)中最優(yōu)選的離屯、條件為200g-250g下 離屯、5-lOmin，不僅得到的富血小板血漿量多于傳統(tǒng)方法，血小板濃度也比較合適，得到的 檢測結(jié)果準確度高。
[0057] 而步驟(3)中：離屯、條件對最終血小板最大聚集率的影響不大，運是因為步驟(3) 中的離屯、過程結(jié)束后，只要能夠獲取到30化L的乏血小板血漿即可，最終的富血小板血漿是 將剩余的乏血小板血漿與底部富集的血小板混合后得到的，有運一步混合的過程，使得步 驟(3)中的離屯、條件對檢測結(jié)果影響不大，從而減少了影響檢測結(jié)果的因素，保證了檢測結(jié) 果的準確性；為了保證乏血小板血漿中的血小板濃度、血小板活性損失和出于對離屯、設(shè)備 壽命的考慮，步驟(3)中的離屯、條件優(yōu)選為1200-2500g下離屯、5-lOmin，最優(yōu)選的離屯、條件 是 1200-1500旨下離屯、10111；[]1或2000-2500旨下離屯、5111；[]1。
[0058] 實驗例、本發(fā)明檢測方法結(jié)果的準確性
[0059] (1)、取樣：
[0060] 將受試對象分為=組，分別采集晨起空腹靜脈血，每位受試對象均采集2管；一管 作為本發(fā)明檢測方法中的樣品，另一管作為傳統(tǒng)方法中的樣品。
[0061 ] 正常組:受試對象選用健康志愿者，共53例，其中男性32例，女性21例，年齡23-71 歲（平均45.6歲）。健康志愿者均無屯、腦血管、血液或呼吸系統(tǒng)疾病，無高血壓病史，近期無 感染及服用各種抗血小板聚集藥物。
[0062] 高值組:受試對象選用冠屯、病及易栓癥患者，共69例，其中男性42例，女性27例，年 齡45-79歲（平均58.1歲）。
[0063] 低值組：受試對象選用口服氯化格雷的冠屯、病患者及血小板聚集不良患者，共45 例，其中男性25例，女性20例，年齡31-65歲（平均46.7歲）。
[0064] (2)、提取血小板血漿：
[0065] 將步驟（1)采集的靜脈血在250g下離屯、5min，棄掉下層血細胞，取上層全部血漿置 于一空試管內(nèi)，得到血小板血漿并對化T計數(shù)；。
[0066] (3)、提取乏血小板血漿(PPP)和富血小板血漿(PRP):
[0067] 將步驟(2)得到的血小板血漿Wl200g離屯、lOmin，吸取30化L上層血漿作為乏血小 板血漿（PPP)于PPP檢測杯內(nèi)并對化T計數(shù)；剩余血漿混勻后取300化作為富血小板血漿 (PRP)于PRP檢測杯內(nèi)并對化T計數(shù)；
[0068] 本發(fā)明方法本身不用計數(shù)血小板，但此處和W下實驗例中為檢驗本發(fā)明方法取得 的乏血小板血漿和富血小板血漿是否合格，做了血小板計數(shù)，目的是驗證本發(fā)明方法的準 確性。
[0069] (4)、測定：
[0070] WPPP檢測杯的透光度為100 % ,WPRP檢測杯的初始透光度為0 %，加入誘導(dǎo)劑 ADP，用血小板聚集儀測定PRP檢測杯的透光度，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚 集率(PA巧）。
[0071] 傳統(tǒng)方法:參見《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第S版），采集靜脈血，先經(jīng)lOOOr/min 離屯、IOmin后，在上層血漿層中吸取30化L，作為富血小板血漿(簡稱PRP )，剩余血液樣品再 經(jīng)3000r/min離屯、20min后，在上層血漿層中吸取30化L，作為乏血小板血漿(簡稱PPP);然后 將PPP作為透光度100 %的對照，WPRP檢測杯的初始透光度為0 %，加入誘導(dǎo)劑ADP，用血小 板聚集儀測定PRP檢測杯的透光度，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚集率 (PA^)O
[0072] 實驗結(jié)果見表3:
[0073] 表3本發(fā)明檢測方法和傳統(tǒng)方法在血小板最大聚集率(PAgT)上的相關(guān)性(n = 167 例，X±SD)
[0075] 對兩種方法測定的血小板聚集率測定結(jié)果計算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)均大于0.95(P <0.05)，滿足臨床實際需求。說明本發(fā)明方法與傳統(tǒng)方法相比較具有相似的臨床適用性。 配對t檢驗進行比較，結(jié)果均為P>0.05,判定差別無統(tǒng)計學(xué)意義?？梢?，本發(fā)明的檢測方法 得到的結(jié)果準確可信。
[0076] 實施例一、用本發(fā)明的檢測方法測定血小板高聚集患者的血小板聚集率
[0077] 選擇實驗例一高值組中的冠屯、病及易栓癥患者共10例，其中男性6例，女性4例。分 別按照實驗一中本發(fā)明方法和傳統(tǒng)方法檢測10位患者的血小板數(shù)據(jù)，其結(jié)果見表4。
[0078] 表4本發(fā)明檢測方法和傳統(tǒng)方法對血小板高聚集患者的血小板測定結(jié)果
[0079]
[0080] 表4數(shù)據(jù)表明：本發(fā)明檢測方法的PRP中血小板濃度為（100-200) X 109/L，PPP中血 小板濃度為0/L，完全符合實驗要求，并且獲取到的富血小板血漿量遠遠大于傳統(tǒng)方法的 30化L。本發(fā)明檢測方法與傳統(tǒng)方法測定血小板最大聚集率的結(jié)果絕對誤差在10% W內(nèi)，說 明本發(fā)明檢測方法測定結(jié)果準確性良好。
[0081] 實施例二、用本發(fā)明的檢測方法測定血小板低聚集患者的血小板聚集率
[0082] 選擇實驗例一低值組中的口服氯化格雷冠屯、病患者及血小板聚集不良患者共10 例，其中男性7例，女性3例。分別按照實驗例一中本發(fā)明方法和傳統(tǒng)方法檢測10位患者的血 小板數(shù)據(jù)，其結(jié)果見表5。
[0083] 表5數(shù)據(jù)表明：本發(fā)明的檢測方法的PRP中血小板終濃度為（100-200) X IO^L,PPP 中血小板終濃度為0/L，完全符合實驗要求，并且獲取到的富血小板血漿量遠遠大于傳統(tǒng)方 法300化。本發(fā)明的檢測方法與傳統(tǒng)方法測定血小板最大聚集率的結(jié)果絕對誤差在5% W 內(nèi)，說明本發(fā)明的檢測方法測定結(jié)果準確可信。
[0084] 結(jié)合表4和表5的數(shù)據(jù)，可W得出，本發(fā)明的血小板聚集功能的檢測方法不僅可W 檢測正常血液樣品的血小板聚集功能，還可用于血小板高聚集或低聚集患者的血液樣品血 小板聚集功能的檢測，說明本發(fā)明的檢測方法適用范圍全面、準確度高、穩(wěn)定性和重復(fù)性 好，可在臨床檢測中應(yīng)用和推廣。
[0085] 表5本發(fā)明檢測方法和傳統(tǒng)方法對血小板低聚集患者的血小板測定結(jié)果 「00861
[0087] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出的是，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技 術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W做出若干改進和潤飾，運些改進和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的內(nèi)容。
【主權(quán)項】
1. 一種血小板聚集功能的檢測方法，其特征在于，依次包括取樣、血小板血漿的提取、 乏血小板血漿的提取、富血小板血漿的提取和測定等步驟。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述血小板血漿的提取為將血液在200-250g下離心5-10min，取上層，即是血小板血衆(zhòng)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測方法，其特征在于，所述乏血小板血漿的提取和富血小 板血漿的提取同時完成。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測方法，其特征在于，所述乏血小板血漿的提取和富血小板血 漿的提取為將血小板血漿在1200-2500g下離心5-10min，上層為乏血小板血漿，其余為富血 小板血漿。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟： (1) 、取樣： 對來自受試對象的靜脈血作抗凝處理； (2) 、血小板血漿的提?。? 將步驟（1)的靜脈血在200-250g下離心5-10min，取上層血漿，即是血小板血漿； (3) 、乏血小板血漿(PPP)和富血小板血漿(PRP)的提?。? 將步驟(2)得到的血小板血漿以1200-2500g離心5-10min，取上層血漿，即是乏血小板 血漿(PPP);剩余血小板血漿混勻后，即是富血小板血漿； ⑷、測定： 以乏血小板血漿的透光度為100%，以富血小板血漿的初始透光度為0%，加入誘導(dǎo)劑， 測定富血小板血漿的透光度，繪制成血小板聚集曲線，并計算得到最大聚集率(PAgT)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，步驟（2)中的離心條件為250g下離心 5min〇7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述檢測方法，其特征在于，步驟(3)中的離心條件為1200-1500g 下離心10min或2000-2500g下離心5min;優(yōu)選1200g下離心10min。8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7任一所述檢測方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)劑可以是二磷酸腺苷 (ADP)、花生四烯酸、膠原、腎上腺素或瑞斯托霉素等。9. 血小板聚集功能檢測中血小板血漿的提取方法，其特征在于，將血液在200-250g下 離心5-10min，取上層血衆(zhòng)，即得到血小板血衆(zhòng);優(yōu)選250g下離心5min。10. 血小板聚集功能檢測中乏血小板血漿和富血小板血漿的提取方法，其特征在于，包 括以下步驟： (i)、將血液在200-250g下離心5-10min，取上層血漿，得到血小板血漿;優(yōu)選250g下離 心5min; (? )、將所述血小板血衆(zhòng)以1200_2500g離心5-10min，取上層血衆(zhòng)，即得到乏血小板血 漿(PPP);剩余血小板血漿混勻后，即得到富血小板血漿;優(yōu)選1200_1500g下離心10min或 2000_2500g下離心5min;更優(yōu)選1200g下離心10min。
【文檔編號】G01N21/59GK105954239SQ201610264983
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月26日
【發(fā)明人】宋麗潔, 孫濤, 崔娟紅, 王玉飛, 趙怡雯, 張丹丹, 王崢輝, 王莉
【申請人】中國人民武裝警察部隊總醫(yī)院