美洲大蠊及其提取物的1h-nmr指紋圖譜的構(gòu)建方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了美洲大蠊及其提取物的1H?NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明采用核磁共振技術(shù)獲得美洲大蠊藥材及其提取物中的15個化合物，包括3個核苷類成分和12個氨基酸類成分。與傳統(tǒng)的HPLC等色譜方法比較，本發(fā)明能夠提供更加全面的信息，單次測量就能同時分析核苷和氨基酸類成分。本發(fā)明創(chuàng)新性運用基于1H?NMR的代謝組學(xué)技術(shù)，首次同時檢測美洲大蠊及其提取物的整體化學(xué)成分，最終建立的1H?NMR指紋圖譜可全面控制美洲大蠊及其提取物的質(zhì)量，為今后美洲大蠊的品種鑒定及其提取物的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
【專利說明】
美洲大釀及其提取物的Ih-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種中藥材的質(zhì)量控制方法，特別設(shè)及美洲大賺及提取物的Ih-醒R指 紋圖譜的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 美洲大賺(Periplaneta americana)最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有活 血通脈、利水消腫、斂瘡生肌的功效，主要用于治療癥瘤積聚、小兒痘積和瘡癡腫毒等癥。目 前已報道的文獻中，美洲大賺及其提取物的質(zhì)量控制主要W-個或多個核巧、氨基酸類成 分為指標(biāo)進行含量測定研究。運種點代面"方式無疑不符合中藥多成分、多祀點的整體 性作用特征。美洲大賺藥材及其提取物的質(zhì)量評價和控制方法應(yīng)該立足于分析其整體的化 學(xué)成分組，而非僅僅分析其中一個或多個成分。而采用Ih-NMR代謝組學(xué)技術(shù)，系統(tǒng)開展美洲 大賺及其提取物的質(zhì)量控制研究至今尚無報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 通過研究，創(chuàng)新性運用基于Ih-NMR的代謝組學(xué)技術(shù)，充分利用其體現(xiàn)整體性、樣品 制備簡單、分析時間快速等方法學(xué)優(yōu)勢，最終建立美洲大賺及其提取物的Ih-NMR指紋圖譜， 可作為測定美洲大賺藥材及提取物中化學(xué)組分的方法，也可作為鑒定美洲大賺藥材及其提 取物質(zhì)量控制方法。為今后美洲大賺的品種鑒定及其提取物的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
[0004] 本發(fā)明對美洲大賺藥材及其提取物的核磁共振圖譜進行研究，提供了一種快速、 簡便的美洲大賺及其提取物的Ih-醒R指紋圖譜構(gòu)建方法，與傳統(tǒng)HPLC等色譜方法比較，本 發(fā)明能夠提供更加全面的信息，單次測量就能同時分析核巧和氨基酸類成分。為美洲大賺 藥材及其提取物全面質(zhì)量檢測奠定基礎(chǔ)。
[0005] 本發(fā)明提供的一種美洲大賺藥材的Ih-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法包括W下 步驟：
[0006] 稱取干燥的美洲大賺藥材粉末0.1~1.Og,置于錐形瓶中，分別加入含3-(S甲基 娃基)気代丙酸鋼(TSP)內(nèi)標(biāo)物的CDsOD和〇2〇溶解，得到美洲大賺藥材粉末的濃度為0.1~ 0.4g/mL，密封，超聲提取0.5~化后，過0.45皿微孔濾膜，取0.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管 中，加封，直接用于Ih-醒R測定;將核磁管置于核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列 壓制水峰測定美洲大賺藥材樣品Ih-NMR指紋圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù) 飽和脈沖序列（Zgpr)壓制水峰信號，頻率內(nèi)鎖為気代甲醇，測定溫度25°C，觀察頻率 400.13MHz，譜寬6393.9化，采樣時間4.089s，脈沖延遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97 ys，采集數(shù)據(jù)點65536;
[0007] 其中，CD3孤和〇2〇溶液的體積比為1:1 ;K也P〇4的含量為12.32mg/血。
[000引美洲大賺藥材的Ih-NMR指紋圖譜上質(zhì)子信號峰分布在S0-8.4之間，根據(jù)質(zhì)子信號 峰的化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品的Ih-醒R波譜數(shù)據(jù)，共 鑒定出3個核巧類化合物(編號1-3)和12個氨基酸化合物(編號4-15)，見表1。
[0009] 表1美洲大賺藥材中化學(xué)成分的Ih-NMR歸屬
[0010]
[0011]量取美洲大賺提取物0.5~3.OmL,置于蒸發(fā)皿中，揮干，分別加入含3-(S甲基娃 基)気代丙酸鋼(TSP)的內(nèi)標(biāo)物的CDsOD和化0溶解，密封，超聲溶解后，過0.45曲!微孔濾膜，取 0.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于Ih-NMR測定；
[001^ 其中，CDsOD和020溶液的體積比為1:1 ;K此P04的含量為12.32mg/血。將核磁管置于 核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列壓制水峰測定美洲大賺提取物樣品Ih-NMR指紋 圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列(Zgpr)壓制水峰信號，頻率內(nèi)鎖 為気代甲醇，測定溫度25°C，觀察頻率400.13MHz，譜寬6393.9Hz，采樣時間4.089s，脈沖延 遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97iis，采集數(shù)據(jù)點65536;
[0013] 美洲大賺藥材的Ih-NMR指紋圖譜上質(zhì)子信號峰分布在S0-8.4之間，根據(jù)質(zhì)子信號 峰的化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品Ih-醒R波譜數(shù)據(jù)，共鑒 定出3個核巧類化合物(編號1 -3)和12個氨基酸化合物(編號4-15)。見表2。
[0014] 表2美洲大賺藥材提取物的Ih-NMR歸屬
[0015]
[0016] 本發(fā)明構(gòu)建的美洲大賺藥材及其提取物的iH-NMR指紋圖譜，能同時表征美洲大賺 藥材及其提取物中的15種化學(xué)成分，均可W在美洲大賺藥材提取物制成的包含但不限于康 復(fù)新液、康復(fù)新膠囊、康復(fù)新片等生產(chǎn)或質(zhì)量檢測中應(yīng)用。與傳統(tǒng)的HPLC等色譜方法比較， 本發(fā)明能夠提供更加全面的信息，單次測量就能同時分析核巧和氨基酸類成分。所述方法 樣品制備簡單、分析速度快。在實現(xiàn)美洲大賺藥材及提取物全面質(zhì)量檢測方面具有廣闊的 應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0017] 圖1美洲大賺藥材代表性的Ih-NMR圖譜。
[001引圖2美洲大賺藥材Ih-醒R圖譜的信號歸屬(A低場區(qū)；B中場區(qū)；C高場區(qū)）：1肌巧；2 次黃嚷嶺；3尿喀晚;4谷氨酸;5組氨酸;6色氨酸；7苯丙氨酸;8脯氨酸;9天冬氨酸；10精氨 酸;11賴氨酸;12鄉(xiāng)氨酸;13甘氨酸;14丙氨酸;15亮氨酸。
[0019] 圖3-7五批美洲大賺藥材Ih-NMR圖譜。
[0020] 圖8美洲大賺藥材提取物代表性的Ih-NMR圖譜。
[0021] 圖9美洲大賺藥材提取物Ih-醒R圖譜的信號歸屬(A低場區(qū)；B中場區(qū)；C高場區(qū)）：1 肌巧;2次黃嚷嶺;3尿喀晚;4谷氨酸;5組氨酸;6色氨酸;7苯丙氨酸;8脯氨酸;9天冬氨酸；10 精氨酸;11賴氨酸;12鄉(xiāng)氨酸;13甘氨酸；
[0022] 14丙氨酸;15亮氨酸。
[0023] 圖10-14五批美洲大賺藥材提取物Ih-NMR圖譜。
【具體實施方式】
[0024] 實施例1:美洲大賺藥材Ih-NMR標(biāo)準指紋圖譜的建立 [00巧]1.1儀器與試藥
[00%] 核磁共振波譜儀化址er AVANCE III 400M;Sadorius BP221S電子天平（北京賽 多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；W201型 恒溫水浴鍋(上海申順生物科技有限公司）；気代甲醇化〇3〇0,99.8%);重水(〇2〇,99.9%); 3-(S甲基娃基)気代丙酸鋼(TSP)購自Sigma-Al化ich(St丄OUis,Mo,USA);分析級憐酸二 氨鐘化出K)4)購自成都市科龍化工試劑廠。
[0027] 美洲大賺藥材由四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。
[0028] 1.2美洲大賺藥材供試品溶液的制備
[0029] 稱取干燥的美洲大賺藥材粉末0.2g，置于錐形瓶中，分別加入含3-(S甲基娃基） 気代丙酸鋼(TSP)內(nèi)標(biāo)物的CDsOD和化0溶解，邸3〇0和化0的體積分別為0.7mL和0.7mL，得到 美洲大賺藥材粉末的濃度為〇.143g/mL，密封，超聲提取0.化后，過0.45WI1微孔濾膜，取 0.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于Ih-NMR測定。
[0030] 1.3IH-NMR指紋圖譜的測定
[0031] 將核磁管置于核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列壓制水峰測定美洲大賺 提取物樣品Ih-NMR指紋圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列（Zgpr) 壓制水峰信號，頻率內(nèi)鎖為気代甲醇，測定溫度25 °C，觀察頻率400.13MHz，譜寬6393.9化， 采樣時間4.089s，脈沖延遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97iis，采集數(shù)據(jù)點65536。
[0032] 1.41H-NMR指紋圖譜質(zhì)子信號峰的鑒定
[00削 Ih-醒R指紋圖譜經(jīng)過相位校正、基線校正和化學(xué)位移校正后，根據(jù)質(zhì)子信號峰的 化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品的Ih-NMR波譜數(shù)據(jù)(表3)和 供試品溶液的Ih-醒R指紋圖譜（圖1，圖2)，共鑒定出3個核巧類化合物和12個氨基酸化合 物。詳細Ih-NMR歸屬見表4。
[0034] 表3參考文獻中獲得的各對照品Ih-NMR波譜數(shù)據(jù)
[0035]
[0036]
[0037] 表4美洲大賺中化學(xué)成分的Ih-NMR鑒定
[00；3 引
[0039] 1.5IH-NMR指紋圖譜相似度分析
[0040] 取5批美洲大賺藥材待測產(chǎn)品，按上述方法測定Ih-醒R指紋圖譜（圖3-7)。將測得 的Ih-醒R自由衰減(FID)信號導(dǎo)入MestReNova軟件進行傅立葉轉(zhuǎn)換，并手動調(diào)整相位和基 線，WTSP(化pm)為基準校正化學(xué)位移。對0.7-8.7ppm范圍的圖譜Wo. 04ppm為化學(xué)位移值 單位進行分段積分，并W總峰面積進行歸一化處理，然后WASCII格式輸出數(shù)據(jù)，得到各化 學(xué)位移段與之相對應(yīng)的信號峰面積值。本試驗共獲得200段積分，再扣除2段屬于甲醇的信 號（3.26-3.34ppm)及4段水峰信號(4.74-4.90ppm)，最終得到194段數(shù)據(jù)點，與制定的標(biāo)準 指紋圖譜進行比較，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦值法計算定性相似度，相似度大于0.95則 認為合格，結(jié)果參見表5。
[0041] 從表5可知，5批美洲大賺藥材樣品Ih-NMR指紋圖譜的相關(guān)系數(shù)分別為0.970、 0.998、0.973、0.990和0.998，平均值為0.986;夾角余弦分別為0.979、0.998、0.981、0.992 和0.998，平均值為0.9905批美洲大賺藥材的相似度較高，均大于0.970，結(jié)果表明批次間的 總體指紋特征相似，也說明所建立的Ih-NMR指紋圖譜能夠很好地檢測美洲大賺藥材的質(zhì)量 穩(wěn)定性。
[0042] 表5為五批美洲大賺樣品的相似度評價結(jié)果
[0043]
[0044] 實施例2:美洲大賺藥材提取物iH-NMR標(biāo)準指紋圖譜的建立
[0045] 1.1儀器與試藥
[0046] 核磁共振波譜儀化址er AVANCE III 400M;Sadorius BP221S電子天平（北京賽 多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；W201型 恒溫水浴鍋(上海申順生物科技有限公司）；気代甲醇化〇3〇0,99.8%);重水(〇2〇,99.9%); 3-(S甲基娃基)気代丙酸鋼(TSP)購自Sigma-Al化ich(St丄OUis ,Mo, USA);分析級憐酸二 氨鐘化此Kk)購自成都市科龍化工試劑廠。美洲大賺藥材提取物由四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有 限責(zé)任公司提供。
[0047] 1.2美洲大賺藥材提取物供試品溶液的制備
[004引量取美洲大賺提取物1.5mL，置于蒸發(fā)皿中，揮干，分別加入含3-(S甲基娃基)気 代丙酸鋼(TSP)的內(nèi)標(biāo)物的CDsOD和化0溶解，超聲溶解后，過0.45皿微孔濾膜，取0.6mL濾液 至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于Ih-NMR測定。
[0049] 1.3IH-NMR指紋圖譜的測定
[0050] 將核磁管置于核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列壓制水峰測定美洲大賺 提取物樣品Ih-NMR指紋圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列（Zgpr) 壓制水峰信號，頻率內(nèi)鎖為気代甲醇，測定溫度25 °C，觀察頻率400.13MHz，譜寬6393.9化， 采樣時間4.089s，脈沖延遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97iis，采集數(shù)據(jù)點65536。
[0051] 1.41H-NMR指紋圖譜質(zhì)子信號峰的鑒定
[0052] Ih-醒R指紋圖譜經(jīng)過相位校正、基線校正和化學(xué)位移校正后，根據(jù)質(zhì)子信號峰的 化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品的Ih-NMR波譜數(shù)據(jù)(表3)和 供試品溶液的Ih-醒R指紋圖譜（圖8,圖9)，共鑒定出3個核巧類化合物和12個氨基酸化合 物。詳細Ih-NMR歸屬見表6。
[0053] 表6美洲大賺提取物中化學(xué)成分的Ih-NMR鑒定 [OOf"
[0化5]
[0056] 1.5IH-NMR指紋圖譜相似度分析
[0057] 取5批美洲大賺提取物待測產(chǎn)品，按上述方法測定Ih-醒R指紋圖譜（圖10-14)。將 測得的Ih-NMR自由衰減(FID)信號導(dǎo)入MestReNova軟件進行傅立葉轉(zhuǎn)換，并手動調(diào)整相位 和基線，WTSP(化pm)為基準校正化學(xué)位移。對0.7-8.7ppm范圍的圖譜W0.0 4ppm為化學(xué)位 移值單位進行分段積分，并W總峰面積進行歸一化處理，然后WASCII格式輸出數(shù)據(jù)，得到 各化學(xué)位移段與之相對應(yīng)的信號峰面積值。本試驗共獲得200段積分，再扣除2段屬于甲醇 的信號（3.26-3.34ppm)及4段水峰信號（4.74-4.90ppm)，最終得到194段數(shù)據(jù)點，與制定的 標(biāo)準指紋圖譜進行比較，采用相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦值法計算定性相似度，相似度大于 0.95則認為合格。結(jié)果參見表7。
[005引從表7可知，5批美洲大賺提取物樣品Ih-匪R指紋圖譜的相關(guān)系數(shù)分別為0.990、 0.998、1.000、0.998 和0.998，平均值為0.997;夾角余弦分別為 0.980、0.998、1.000、0.998 和0.986,平均值為0.992。5批美洲大賺提取物樣品的相似度較高(均大于0.980)，表明所建 立的Ih-NMR指紋圖譜能夠很好地檢測美洲大賺提取物樣品的質(zhì)量穩(wěn)定性，也表明不同批次 美洲大賺提取物在化學(xué)成分分布比例上差別不大。
[0059] 表7為五批美洲大賺提取物的相似度評價結(jié)果
[0060]
【主權(quán)項】
1. 美洲大蠊的1H-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法包括以下步驟： (A)美洲大蠊藥材樣品溶液的制備 稱取干燥的美洲大蠊藥材粉末0.1~l.Og，置于錐形瓶中，分別加入含3-(三甲基硅基） 氘代丙酸鈉(TSP)內(nèi)標(biāo)物的CD30D和D20溶解，得到美洲大蠊藥材粉末的濃度為0.1~0.4g/ mL，密封，超聲提取0.5~2h后，過0.45μηι微孔濾膜，取0.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加 封，直接用于 1H-NMR測定； (BpH-NMR指紋圖譜的測定 將核磁管置于核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列壓制水峰測定美洲大蠊藥材 樣品1H-NMR指紋圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列（zgpr)壓制水 峰信號，頻率內(nèi)鎖為氘代甲醇，測定溫度25°C，觀察頻率400.13MHz，譜寬6393.9Hz，采樣時 間4.089s，脈沖延遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97ys，采集數(shù)據(jù)點65536; (C)質(zhì)子信號峰的定性鑒別 美洲大蠊藥材的1H-匪R指紋圖譜上質(zhì)子信號峰分布在δ〇-8.4之間，根據(jù)質(zhì)子信號峰的 化學(xué)位移值和偶合裂分情況，并結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品的1Η-匪R波譜數(shù)據(jù)，共鑒 定出3個核苷類化合物和12個氨基酸化合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美洲大蠊藥材的h-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于 所述步驟(A)中美洲大蠊藥材樣品溶液的制備方法為:稱取干燥的美洲大蠊藥材粉末0.2g， 置于錐形瓶中，分別加入含3-(三甲基硅基）氘代丙酸鈉(TSP)內(nèi)標(biāo)物的⑶ 30D和D20溶解， CD30D和D20的體積分別為0.7mL和0.7mL，得到美洲大蠊藥材粉末的濃度為0.143g/mL，密封， 超聲提取〇. 5h后，過0.45μηι微孔濾膜，取0.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于 ^-NMR測定。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種美洲大蠊藥材的h-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征 在于:⑶30D和D 20溶液的體積比為1:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種美洲大蠊藥材的h-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征 在于:⑶3〇D和D20溶液中還含有KH 2P〇4，其含量為12.32mg/mL。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種美洲大蠊藥材的h-NMR指紋圖譜構(gòu)建方法，其特征在于： 所述步驟(C)中3個核苷類化合物(編號1-3)和12個氨基酸化合物(編號4-15)分別為： 編號 化合物 δΙΗ 1 肌 ?: 8.35(s),8.20(s),6.05(d,J=5.9Hz),4.71(l,J=5.2Hz),4.39(dd, ,!=5.0,3.〇Hz) 2 次黃嘌呤 8.21(s)，8.16(s) 3 尿嘧啶 7.51(dJ=7.7Hz),5.75(d,J=7.7Hz) 4 :酸 2.42(m)，2.10(rn) 5 組氨酸 7.98(s),3.92(m),3.15(m) 6 7.72(d,J=7.7Hz),7.12(d,J=7.7Hz),4.02(m) 7 術(shù)內(nèi)9、酸 7.38(m),7.34(m),3.93(U=5.a7.4Hz) 8 '從酸 4.09(ddJ:=8,6Hz,6.4H/),3.40(rn),2,33(rn),2,07(rn),2.01 (m) 9 大冬 3酸 2.95(ddJ=4.4,l 6.7Hz),2.S4(dd,J-7.8,16.7Hz) 10 粘&、酸 3.71 (i,J=6. i Hz), 1,92(m). 1.74(m) 11 WdM. 3.02(tJ=7.2Hz),l .91 (ni), 1 ；73(m) 12 纈奴酸 i .06(dJ=7.0Hz),l .00(d,.!=7.0Hz) 13 甘氨酸 3:.51(8) 14 丙￥酸 1.48(d,J=7.2H^) 15 立^；酸 3.66(m)J.70(m),0.97(l,J=5.9Hz)"6. -種美洲大蠊提取物的1H-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法包括以下步驟： (A)美洲大蠊提取物樣品溶液的制備 量取美洲大蠊提取物〇. 5~3. OmL，置于蒸發(fā)皿中，揮干，分別加入含3-(三甲基硅基)氘 代丙酸鈉(TSP)的內(nèi)標(biāo)物的⑶30D和D20溶解，密封，超聲溶解后，過0.45μπι微孔濾膜，取0.6mL 濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于1H-NMR測定； (bVh-nmr指紋圖譜的測定 將核磁管置于核磁共振儀中，采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列壓制水峰測定美洲大蠊提取 物樣品匪R指紋圖譜，其中測試參數(shù)及條件為:采用標(biāo)準的預(yù)飽和脈沖序列（zgpr)壓制 水峰信號，頻率內(nèi)鎖為氘代甲醇，測定溫度25°C，觀察頻率400.13MHz，譜寬6393.9Hz，采樣 時間4.089s，脈沖延遲時間4s，掃描次數(shù)128，脈沖寬度8.97ys，采集數(shù)據(jù)點65536; (C)質(zhì)子信號峰的定性鑒別 美洲大蠊提取物的1H-NMR指紋圖譜上質(zhì)子信號峰分布在δ〇-8.4之間，根據(jù)質(zhì)子信號峰 的化學(xué)位移值和偶合裂分情況，結(jié)合參考相關(guān)文獻獲得各對照品的1Η-匪R波譜數(shù)據(jù)，共鑒 定出3個核苷類化合物和12個氨基酸化合物。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種美洲大蠊藥材提取物的h-NMR指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特 征在于所述步驟（A)中美洲大蠊提取物樣品溶液的制備方法為：量取美洲大蠊提取物 1.5mL，置于蒸發(fā)皿中，揮干，分別加入含3-(三甲基硅基）氘代丙酸鈉（TSP)的內(nèi)標(biāo)物的 CD30D和D2〇溶解，CD30D和D2〇的體積分別為0.7mL和0.7mL，密封，超聲溶解后，過0.45μπι微孔 濾膜，取〇.6mL濾液至標(biāo)準的5mm核磁管中，加封，直接用于 1H-NMR測定。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種美洲大蠊藥材提取物的匪R指紋圖譜的構(gòu)建方法， 其特征在于:⑶3〇D和D20溶液的體積比為1:1。9. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種美洲大蠊藥材提取物的匪R指紋圖譜的構(gòu)建方法， 其特征在于:⑶3〇D和D2〇溶液中還含有KH2PO4，其含量為12.32mg/mL。10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種美洲大蠊藥材提取物的h-NMR指紋圖譜構(gòu)建方法，其特 征在于:所述步驟(C)中3個核苷類化合物(編號為1-3)和12個氨基酸化合物(編號為4-15) 分別為： 編號 化合物 S1H 1 !JiLU; 8.35(s),8.20(s),6.05(d,J=5.9Hz),4.71(i,J=5.2Hz),4.39(dd, .1=5.0,3.〇Hz) 2 次黃嘌呤 8.21(s)，8.16(s) 3: 尿嘧啶 7.51(d,J=7.7Hz),5,75(d,J=7.7Hz) 4 芥9:酸 2.42(m).2.10(m) 5 姐U 酸 7.98(s),3.92(m),3.15(m) 6 色&:酸 7.72(d,J=7,7Hz),7.12(d,J==7.7Hz),4.02(m) 7 笨丙 U 酸 7.38(m)J.34(m),3.93(1,.1=5.0,7.4Hz) 8 、酸 4.09(dcU=8.6Hz，6.4HzU_40(m)，2.33(m)，2_07(m)，2.01 (m) 9 -人2.95(dd,.N4.4,16.7Hz),2.84(dd,J=7.8,16.7Hz) 10 :?? 酸 3.71(1,.1==6.1 Hz),l ,92im),l ,74(m) 11 賴.；^酸 3,02(i,J=7.2Hz), 1,91 (m), 1,73(m) 12 纈奴酸 1,06(d,J=7.0Hz), 1.00(cU=7.0Hz) 13 甘氨酸 3.51(s) 14 丙&、酸 1.48(d,J=7.2Hz) 15 酸 3.66(m), 1.70(m),0.97(t,J=5.9Hz)〇
【文檔編號】G01N24/08GK105954311SQ201610457840
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月22日
【發(fā)明人】耿福能
【申請人】四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司