發(fā)夾dna支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法及其應(yīng)用，傳感界面的構(gòu)建方法是將含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II共同孵育后，修飾在表面修飾有納米金的電極表面即得；該方法獲得的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面穩(wěn)定性好，成本低，傳感界面可以分別檢測兩種腫瘤標(biāo)志物，也可以在同一界面上同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志物，且具有檢測更簡單、檢出限低、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
【專利說明】
發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法以及用所述傳感界 面同步檢測兩種腫瘤標(biāo)志物的電化學(xué)方法;屬于電化學(xué)生物傳感器領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌坯抗原CEA是一種蛋白多糖復(fù)合物，可廣泛存在于內(nèi)胚葉起源的消化系統(tǒng)癌，是 一個廣譜性腫瘤標(biāo)志物，根據(jù)血清中CEA的含量初步判斷腫瘤的存在，評價療效，預(yù)估癌細(xì) 胞生長狀況;MUC1粘蛋白是一種大分子量的糖蛋白，它在癌變上皮細(xì)胞表面高度異常表達(dá)， 是一種常見腫瘤標(biāo)志物，MUC1的血清水平還與腫瘤的惡性程度相關(guān)。因此對這兩種腫瘤標(biāo) 志物的檢測對癌細(xì)胞的偵探和檢測有十分重要的作用。但是在已有的檢測方法中，檢測的 靈敏度檢和濃度范圍還有待提高，并且分布檢測效率低，為了更好的評估疾病的發(fā)展情況， 對這兩種標(biāo)志物的檢測顯得尤為重要，特別是如果能同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志物，將大大提 高檢測效率和準(zhǔn)確性。
[0003] 中國專利（申請?zhí)枮?01410181470.2)公開了 一種同時檢測兩種急性白血病標(biāo)志 物的電化學(xué)傳感器的制備方法，具體公開了將溶菌酶報告探針和γ -干擾素報告探針分別 在含有TCEP的溶液中靜置，以打開二硫鍵并分別與溶菌酶適體和γ-干擾素適體形成雙鏈 結(jié)構(gòu);對金電極進(jìn)行預(yù)處理，將處理好的金電極浸在預(yù)處理后的溶菌酶報告探針-適體雙鏈 和γ -干擾素報告探針-適體雙鏈的混合液中，室溫靜置過夜，之后用二次蒸餾水和清洗液 清洗;然后將電極浸在含有MCH的溶液中，以封閉電極，之后用二次蒸餾水和清洗液清洗;將 上述步驟處理后的電極作為工作電極，和參比電極、對電極連接在化學(xué)工作站上，以得到可 用于兩種急性白血病標(biāo)志物溶菌酶和γ -干擾素的同時檢測電化學(xué)傳感器。但是其構(gòu)建的 傳感器和方法還存在以下明顯的缺點(diǎn)：1、兩種探針分別和對應(yīng)的適體形成雙鏈時存在競爭 反應(yīng);形成的兩種發(fā)夾結(jié)構(gòu)連接到電極上又存在競爭反應(yīng)，步驟繁瑣，傳感器性質(zhì)不穩(wěn)定； 2、接到電極上的分子存在四種形式:兩種探針分子及兩種發(fā)夾結(jié)構(gòu)分子，每次接上去的有 效的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的數(shù)量和比例不確定，其重復(fù)性差，并且兩種探針分子在電極上對檢測形成 干擾;3、用到四種核酸分子鏈，造成傳感器的成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有的檢測腫瘤標(biāo)志物的方法存在的缺陷，本發(fā)明的目的是在于提供一種操 作簡單、重復(fù)性好、成本低的構(gòu)建發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的方法，構(gòu)建的傳感界 面穩(wěn)定性好、信號強(qiáng)、特異性高、靈敏度高，且可以用于檢測一種或同時檢測兩種腫瘤標(biāo)記 物。
[0005] 本發(fā)明的第二個目的是在于提供一種發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的應(yīng)用， 該生物傳感器可以分別用于檢測兩種腫瘤標(biāo)志物，也可以在同一界面上同時檢測兩種腫瘤 標(biāo)志物，且具有檢測更簡單、檢出限低、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的 構(gòu)建方法，該方法包括以下步驟：
[0007] (1)在電極表面通過沉積法修飾納米金；
[0008] (2)含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II在 25~40°C溫度下，于避光環(huán)境中，在溶液中混合孵育2~4h，得到孵育混合溶液；
[0009] 所述的孵育混合溶液中含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫 瘤標(biāo)志物適體Π 濃度分別為1~1 ΟμΜ和1~1 ΟμΜ;
[0010] (3)在避光環(huán)境中，將表面修飾納米金的電極置于所述孵育混合溶液中，孵育14~ 16h后，用水沖洗；
[0011] (4)再將(3)處理后的表面修飾納米金的電極置于MCH溶液中封閉，即得發(fā)夾DNA支 撐雙信號分子傳感界面。
[0012] 優(yōu)選的方案，（1)中所述電極置于濃度為2~5mM的氯金酸溶液中，進(jìn)行恒電位沉 積，電位為-〇. 4V到-0.1 V，沉積時間為150~200s，得到表面修飾納米金電極。在電極上沉積 一層納米金顆粒后，電極比表面增大，一方面有利于結(jié)合適體，另一方面可以大大增強(qiáng)信號 強(qiáng)度，具備更高的檢測量。
[0013] 優(yōu)選的方案，發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面包括含亞甲基藍(lán)(MB)探針的腫瘤 標(biāo)志物適體I和含二茂鐵(Fc)探針的腫瘤標(biāo)志物適體II。
[0014] 較優(yōu)選的方案，含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志 物適體II經(jīng)過孵育后共同修飾在表面修飾納米金的電極表面。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選的方案，腫瘤標(biāo)志物適體I為CEA適體。
[0016] 進(jìn)一步優(yōu)選的方案，腫瘤標(biāo)志物適體II為MUC1適體。
[0017] 本發(fā)明的方法構(gòu)建的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面采用適體來作用于相應(yīng)的 蛋白，具有更高的特異性和識別力，檢測的靈敏度更高；同時引入了兩種信號分子，分別檢 測兩種不同腫瘤標(biāo)記物，同時檢測時互不干擾，檢測限低，效率高。
[0018] 本發(fā)明還提供了所述方法構(gòu)建的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的應(yīng)用，將所 述發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面應(yīng)用于檢測腫瘤標(biāo)志物適體I對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物I，或 者檢測腫瘤標(biāo)志物適體II對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物II，或者同時檢測腫瘤標(biāo)志物適體I對應(yīng)的腫 瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志物適體II對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物II。本發(fā)明的傳感器可以分別檢測CEA和 MUC1，而且也可以同時檢測CEA和MUC1，并且兩種腫瘤標(biāo)記物的檢測分別對應(yīng)兩種不同信號 分子的變化量，特異性、獨(dú)立性和穩(wěn)定性更高。
[0019]優(yōu)選的方案將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于檢測腫瘤標(biāo)志物I，根據(jù)腫瘤 標(biāo)志物I加入前后亞甲基藍(lán)電化學(xué)信號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物I的含量；
[0020] 或者，將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于檢測腫瘤標(biāo)志物II，根據(jù)腫瘤標(biāo)志 物II加入前后二茂鐵電化學(xué)信號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物II的含量；
[0021] 或者，將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于同時檢測腫瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志 物II，腫瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志物II同時加入，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物I加入前后亞甲基藍(lán)電化學(xué) 信號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物I的含量，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物II加入前后二茂鐵電化學(xué)信號 的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物II的含量。
[0022] 較優(yōu)選的方案，腫瘤標(biāo)志物I為CEA。
[0023]較優(yōu)選的方案，腫瘤標(biāo)志物II為MUC1。
[0024] 本發(fā)明的含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體 II可以通過現(xiàn)有的常規(guī)方法篩選方法獲得?；蛘咧苯油ㄟ^購買得到，如生工生物工程上海 (股份)有限公司。本發(fā)明采用的含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫 瘤標(biāo)志物適體II 一端修飾有巰基，主要通過巰基與電極表面的納米金鍵合，將相應(yīng)的適體 固定在電極表面。
[0025] 本發(fā)明采用的分子探針，F(xiàn)c是還原性物質(zhì)，于PBS中測量方波，在0.35V左右會有明 顯的Fc的峰;根據(jù)方波電流的變化量，可以定量檢測MUC1的量。MB也是還原性物質(zhì)，于PBS中 測量方波，在-〇. 27V左右會有明顯的亞甲基藍(lán)的峰;根據(jù)方波電流的變化量，可以定量檢測 CEA的量。
[0026] 相對現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明技術(shù)方案帶來的有益技術(shù)效果：
[0027] 1)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法關(guān)鍵在于將兩種含不同 分子探針的腫瘤標(biāo)志物適體孵育雜交后，再修飾至表面修飾納米金的電極表面。該方法可 以通過簡單調(diào)節(jié)孵育雜交過程中兩種腫瘤標(biāo)志物適體濃度來實(shí)現(xiàn)兩種腫瘤標(biāo)志物適體在 電極表面的修飾比例，兩種適體進(jìn)行雜交，不存在競爭關(guān)系，兩種分子雜交后形成一個整 體，連接到電極上也不存在競爭，其可控性強(qiáng)，且構(gòu)建的傳感界面修飾物成分穩(wěn)定。完全克 服了現(xiàn)有技術(shù)中的同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志物電化學(xué)傳感器存在穩(wěn)定性差、重復(fù)性差的缺 陷。
[0028] 2)通過本發(fā)明的方法構(gòu)建的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面，兩種含不同分子 探針的腫瘤標(biāo)志物適體通過共同孵育雜交，再修飾在表面修飾金的電極表面，接到電極上 的分子存在兩種形式:單獨(dú)檢測一種物質(zhì)的適體及支撐雙信號的適體，兩種適體的數(shù)量比 例是一定的，接在電極上的分子都可以對標(biāo)志物進(jìn)行檢測，沒有干擾物質(zhì)，檢測限低，靈敏 度更高。
[0029] 3)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面構(gòu)建方法簡單、重復(fù)性好，且僅采用 兩種核酸分子鏈，成本相對更低。
[0030] 4)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面修飾的探針分子即適體，可直接用 來檢測標(biāo)志物。
[0031] 5)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面通過修飾腫瘤標(biāo)志物適體 (aptamer)來作用于腫瘤標(biāo)志物，同時根據(jù)分子探針的電化學(xué)信號的大小來檢測腫瘤標(biāo)志 物的含量，具有靈敏度高、檢出限低、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
[0032] 6)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面同時修飾了兩種不同腫瘤標(biāo)志物適 體以及引入了兩種信號分子，可以用于檢測一種腫瘤標(biāo)志物也可以同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志 物，實(shí)現(xiàn)了基于同一界面兩種腫瘤標(biāo)志物的同時檢測，具有檢測更簡單、檢出限更低、靈敏 度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，且同時檢測兩種腫瘤標(biāo)志物時，互不干擾，檢測限低，效率高。
[0033] 7)本發(fā)明的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面引入適體，穩(wěn)定性好，且適體與相應(yīng) 的腫瘤標(biāo)志物能形成穩(wěn)定的聚合體，靈敏度高、檢出限低。且適體相比較于抗體，其處理過 程更為簡單，且易合成，易修飾信號分子，能夠更容易檢測其出所需的電化學(xué)信號。
[0034] 8)本發(fā)明發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面引入的兩種適體序列可變，適體更換 序列后可以推廣到檢測相對應(yīng)的其他標(biāo)志物，如多肽，DNA，RNA，使得傳感器能得到更廣泛 的應(yīng)用，具有一定的普遍性。
【附圖說明】
[0035]【圖1】為構(gòu)建傳感界面的過程示意圖；
[0036]【圖2】為電沉積前后電極的cv表征 [0037]【圖3】為傳感界面構(gòu)建過程的EIS表征；
[0038]【圖4】為在構(gòu)建的傳感界面表面加入一系列不同濃度的MUC1后的SWV圖；【圖5】為 在一定的濃度范圍內(nèi)MUC1的線性關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范 圍。
[0040] (1)在電極上構(gòu)建的生物傳感器的方法，步驟如下：
[0041 ] 將兩條可以部分互補(bǔ)的ΙΟμΜ DNA1-MB和ΙΟμΜ DNA2-FC在25-40°C到下黑暗中混合 孵育3h，得到DNA混合液。
[0042]電極在0.5mM的氯金酸溶液中進(jìn)行恒電位沉積，電位為-0.25V，沉積時間為180s， 表面得到一層納米金顆粒，這層納米金可以在隨后的步驟中固定適配體，同時起到信號放 大的作用。在室溫下，電極上修飾1 〇μΜ的DNA混合物黑暗中孵育15h，然后用二次水沖洗，去 除沒有修飾上的殘留的DNA，然后在將電極放在MCH中，加入MCH的目的是為了封閉電極上未 反應(yīng)的位點(diǎn)以及使得修飾的DNA呈直立結(jié)構(gòu)。由于亞甲基藍(lán)見光容易分解，所以所有的操作 過程都是在黑暗條件下進(jìn)行的。
[0043]對CEA的定量分析步驟如下：
[0044] (2)分別配制不同濃度的CEA，分別依次加入到以上構(gòu)建的生物傳感器上，由于 DNA1-MB部分片段是CEA的aptamer，它能夠和CEA形成穩(wěn)定的聚合結(jié)構(gòu)。從而使得DNA1-MB的 發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開，使得MB距離電極更遠(yuǎn)，根據(jù)DNA-MB上亞甲基藍(lán)信號的變化量來定量分析 CEA〇
[0045] 對MUC1的定量分析步驟如下：
[0046] (3)分別配置不同濃度的MUC1，分別依次加入到以上構(gòu)建的生物傳感器上，由于 DNA2-FC是MUC1的aptamer，它能夠和MUC1形成穩(wěn)定的聚合結(jié)構(gòu)從而脫落至溶液中，使得電 極上Fc信號降低。根據(jù)二茂鐵信號的變化量來定量分析MUC1。
[0047] (4)對CEA和MUC1的同步檢測的步驟如下：
[0048]檢測制備好的傳感器的亞甲基藍(lán)和二茂鐵信號為初始信號，同時加入不同濃度的 CEA和MUC1，通過亞甲基藍(lán)信號的變化量來定量檢測CEA，通過二茂鐵信號的變化量來定量 檢測MUC1。
[0049] 從圖2可以看出電沉積納米金后0.8-1V的金的還原峰出現(xiàn)，且比裸金電極的大，表 明納米金成功沉積到了電極上。
[0050] 從圖3可以看出隨著電極表面構(gòu)建的越多，其阻抗增大，表面生物傳感器的成功構(gòu) 建。
[0051] 從圖4隨著加入的腫瘤標(biāo)志物MUC1的量逐漸增多，其響應(yīng)信號逐漸增大。
[0052]從圖5可以看出在一定的濃度范圍內(nèi)MUC1濃度越大，其電流的變化量越大，達(dá)到某 一濃度后會趨于平衡，在低濃度范圍內(nèi)有很好的其線性關(guān)系。
[0053] 對比實(shí)施例1
[0054] 對照組的具體實(shí)驗(yàn)如下：按照已公開專利（申請?zhí)枮?01410181470.2)的方法，將 兩種探針分別在含有TCEP的溶液中靜置，以打開二硫鍵并分別與各自相應(yīng)的適體形成雙鏈 結(jié)構(gòu);對金電極進(jìn)行預(yù)處理，將處理好的金電極浸在預(yù)處理后的兩種探針-適體雙鏈的混合 液中，室溫靜置過夜，之后用二次蒸餾水和清洗液清洗;然后將電極浸在含有MCH的溶液中， 以封閉電極，之后用二次蒸餾水和清洗液清洗;將上述步驟處理后的電極作為工作電極，和 參比電極、對電極連接在化學(xué)工作站上，以得到可用于兩種標(biāo)志物同時檢測的電化學(xué)傳感 器。不加入任何檢測物，用方波伏安法檢測制備好的傳感器的亞甲基藍(lán)和二茂鐵初始信號， 并計算得到兩種信號大小的比值，分別進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，得到5次實(shí)驗(yàn)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0055] 實(shí)驗(yàn)組組的具體實(shí)驗(yàn)如下：按照本文所述方法，將含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物 適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II在25~40°C溫度下，于避光環(huán)境中，在溶液中混 合孵育2~4h，得到含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體 II的混合溶液;對金電極進(jìn)行預(yù)處理，并電沉積一層納米金，在室溫下，電極上修飾DNA混合 物黑暗中孵育15h，用二次水沖洗;然后將電極浸在含有MCH的溶液中，以封閉電極，之后用 二次蒸餾水清洗;將上述步驟處理后的電極作為工作電極，和參比電極、對電極連接在化學(xué) 工作站上，以得到可用于兩種標(biāo)志物同時檢測的電化學(xué)傳感器。不加入任何檢測物，用方波 伏安法檢測制備好的傳感器的亞甲基藍(lán)和二茂鐵初始信號，并計算得到兩種信號大小的比 值，分別進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，得到5次實(shí)驗(yàn)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0056]
[0057]由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得可知，對照組和實(shí)驗(yàn)組的RSD分別為10.25%，1.28%，由此可知， 本方法構(gòu)建的傳感界面修飾物成分更穩(wěn)定，重復(fù)性更高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法，其特征在于:包括以下步驟： (1) 在電極表面通過沉積法修飾納米金； (2) 含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II在25~ 40°C溫度下，于避光環(huán)境中，在溶液中混合孵育2~4h，得到孵育混合溶液;所述的孵育混合 溶液中含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II濃度分別 為1~ΙΟμΜ和1~ΙΟμΜ; (3) 在避光環(huán)境中，將表面修飾納米金的電極置于所述孵育混合溶液中，孵育14~16h 后，用水沖洗； (4) 再將(3)處理后的表面修飾納米金的電極置于MCH溶液中封閉，即得發(fā)夾DNA支撐雙 信號分子傳感界面。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法，其特征在于： (1)中所述電極置于濃度為2~5mM的氯金酸溶液中，進(jìn)行恒電位沉積，電位為_0.4￥到_ 0.1 V，沉積時間為150~200s，得到表面修飾納米金電極。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的構(gòu)建方法，其特征在于： 所述的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面包括含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二 茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的亞甲基藍(lán)和二茂鐵雙信號分子核酸適體傳感器，其特征在于： 所述的含亞甲基藍(lán)探針的腫瘤標(biāo)志物適體I和含二茂鐵探針的腫瘤標(biāo)志物適體II經(jīng)過孵育 后共同修飾在表面修飾納米金的電極表面。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的亞甲基藍(lán)和二茂鐵雙信號分子核酸適體傳感器，其特征在于： 所述的腫瘤標(biāo)志物適體I為CEA適體;所述的腫瘤標(biāo)志物適體II為MUC1適體。6. 權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述方法構(gòu)建的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的應(yīng)用，其 特征在于:應(yīng)用于檢測腫瘤標(biāo)志物適體I對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物I，或者檢測腫瘤標(biāo)志物適體II 對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物II，或者同時檢測腫瘤標(biāo)志物適體I對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志物適 體II對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物II。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的應(yīng)用，其特征在于： 將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于檢測腫瘤標(biāo)志物I，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物I加入前 后亞甲基藍(lán)電化學(xué)信號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物I的含量； 或者，將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于檢測腫瘤標(biāo)志物II，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物II 加入前后二茂鐵電化學(xué)信號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物II的含量； 或者，將發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面用于同時檢測腫瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志物 II，腫瘤標(biāo)志物I和腫瘤標(biāo)志物II同時加入，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物I加入前后亞甲基藍(lán)電化學(xué)信 號的變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物I的含量，根據(jù)腫瘤標(biāo)志物II加入前后二茂鐵電化學(xué)信號的 變化量來檢測腫瘤標(biāo)志物II的含量。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的發(fā)夾DNA支撐雙信號分子傳感界面的應(yīng)用，其特征在于:所述 的腫瘤標(biāo)志物I為CEA;所述的腫瘤標(biāo)志物II為MUC1。
【文檔編號】G01N27/327GK105973963SQ201610264706
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年4月26日
【發(fā)明人】鄧春艷, 皮曉梅, 向娟
【申請人】中南大學(xué)