檢測非法添加丙氧基艾地那非的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥品檢測方法，具體是用于補(bǔ)腎壯陽類中成藥和抗疲勞類保健食品中非法添加丙氧基艾地那非化學(xué)品的定性、定量和確證方法。該方法的原理為：將供試品用乙腈提取和稀釋，C18色譜柱分離，根據(jù)高效液相色譜DAD檢測器定性定量檢測，質(zhì)譜一級及二級質(zhì)譜圖確認(rèn)。該方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均滿足要求，表明本法可專屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確地初篩和確證補(bǔ)腎壯陽類中成藥及抗疲勞類保健食品中非法添加丙氧基艾地那非。
【專利說明】
檢測非法添加丙氧基艾地那非的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥品檢測方法，具體是用于補(bǔ)腎壯陽類中成藥和抗疲勞類保健食品中 非法添加丙氧基艾地那非化學(xué)品的定性檢查方法和確證方法。該方法中高效液相色譜法用 于定性檢查;經(jīng)定性檢查結(jié)果為陽性的樣品，須經(jīng)液-質(zhì)聯(lián)用方法確證后出具檢驗(yàn)報(bào)告。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙氧基艾地那非為一種艾地那非類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為:5-[[2_丙氧基-5-(順式-2,6_二甲基哌嗪-4-磺酰）苯基]]-1-甲基-3-正丙基-7,6-二氫-1氫-吡唑并[4,3，d]嘧 啶-7-酮(結(jié)構(gòu)式見下），分子式為C2 4H34N6〇4S，分子量為502.64。目前僅加拿大11(：公司有對 照品，但未命名，ID: S-0643。根據(jù)其結(jié)構(gòu)與艾地那非母核一致(如下所示），僅在苯環(huán)上將 乙氧基代替為丙氧基的結(jié)構(gòu)，建議通用名為：丙氧基艾地那非，英文名為：propoxy aildenafil〇
[0003] 目前，在市場產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)有非法添加此物質(zhì)，但還沒有此物質(zhì)的篩查、定量和確證 方法，且此化合物毒性危害未知，為了保障人民群眾的飲食用藥安全，參考TOE5抑制劑檢測 項(xiàng)目較多的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法2009030,并考慮一測多評，一種條件下盡可能篩選多個類似物， 在前期方法學(xué)驗(yàn)證資料的基礎(chǔ)上，建立丙氧基艾地快速檢驗(yàn)方法，供監(jiān)督應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種針對補(bǔ)腎壯陽類中成藥和抗疲勞類保健食品中非法添 加丙氧基艾地那非補(bǔ)充檢驗(yàn)方法，該方法的原理為:將供試品用乙腈提取和稀釋，C 18色譜柱 分離，根據(jù)高效液相色譜DAD檢測器定性定量檢測，液質(zhì)聯(lián)用儀一級及二級質(zhì)譜圖確認(rèn)。 本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種檢測非法添加丙氧基艾地那非的方法，包括如下步驟： (1)、高效液相色譜法 1.1、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱(規(guī)格為250_X 4.6_，內(nèi)徑5μπι);二 極管陣列（DAD)檢測器，檢測波長為230nm，掃描波長：200-400nm;柱溫：35°C ;流速：1. OmL/ min;以磷酸三乙胺溶液(取三乙胺7mL用水稀釋至1000mL，用磷酸調(diào)pH至2.8)-甲醇一乙腈 (60:20:20)為流動相A，以磷酸三乙胺溶液一甲醇一乙腈(8:46:46)為流動相B，按下表程序 梯度洗脫。理論塔板數(shù)以丙氧基艾地那非峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。
[0005] 1.2、對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品約l〇mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制 成每lmL約含0.4-0.5mg的儲備液，臨用時(shí)，取lmL用甲醇稀釋定容至10mL，即得(置于8°C以 下冰箱保存）。
[0006] 1.3、供試品溶液的制備 若供試品為固體制劑，研細(xì)，精密稱取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超聲 處理15分鐘，放至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過;若供試品為液 體制劑，搖勻，精密量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振搖3分鐘，加乙腈稀 釋至刻度，搖勻后用微孔濾膜(〇.45μπι)濾過，濾液作為供試品溶液，即得。
[0007] 1.4、測定法 分別取供試品溶液和對照品溶液各l〇yL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及DAD光譜圖。
[0008] 1.5、結(jié)果判斷 供試品色譜圖中，應(yīng)不得檢出與對照品色譜保留時(shí)間及DAD光譜一致的色譜峰。若檢出 相應(yīng)的色譜峰，則采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法確證。
[0009] (2)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 照高效液相色譜法(中國藥典2010版二部附錄IX J)測定。
[0010] 2.1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(規(guī)格為150_X2.1_，內(nèi)徑3μπι)，檢測波 長為230nm;以甲醇：乙腈:含0.1%冰醋酸的0.02mol/L的乙酸銨溶液（30:25:45)為流動相； 流速:0.2mL/min〇
[0011] 2.2、質(zhì)譜條件 配有電噴霧離子化源(ESI)，ESI+掃描，干燥氣溫度:320°C，鞘氣流速40arb，輔助氣10 arb，噴霧電壓:4.5KV，掃描方式:一級質(zhì)譜全掃描、二級質(zhì)譜全掃描，掃描范圍：50~600m/z。 [0012] 2.3、對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品約l〇mg，置25mL量瓶中，加乙腈稀釋定容至刻度，搖勻，制成 每lmL約含0.4mg的儲備液，臨用時(shí)，取適量儲備液用50%乙腈稀成濃度為10yg/mL的溶液，即 得(置于8°C以下冰箱保存）。
[0013 ] 2.4、供試品溶液的制備 取高效液相色譜法檢查呈陽性的供試品溶液作為檢查用的供試品溶液，用50%乙腈稀 釋為與對照品濃度相近的溶液。同時(shí)制備空白溶液。
[0014] 2.5、測定法 分別取空白溶液、供試品溶液和對照品溶液各l〇yL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄液相色譜圖 及一、二級質(zhì)譜圖。
[0015] 2.6、結(jié)果判斷 供試品色譜圖中，應(yīng)不得檢出與對照品色譜保留時(shí)間、一級質(zhì)譜圖及二級質(zhì)譜圖一致 的色譜峰。若檢出相應(yīng)的色譜峰，則確定非法添加了丙氧基艾地那非。
[0016] 本發(fā)明建立了一種補(bǔ)腎壯陽類中成藥和抗疲勞類保健食品中非法添加丙氧基艾 地那非的檢驗(yàn)方法。使用基層基本普及的高效液相色譜儀快速定性篩查和定量，液質(zhì)聯(lián)用 儀準(zhǔn)確確認(rèn)，既能適用于基層大批量篩選，又能避免假陽性結(jié)果。經(jīng)驗(yàn)證，本方法靈敏度高、 選擇性好、確證性強(qiáng)、操作簡便快捷，可用于補(bǔ)腎壯陽類中成藥和抗疲勞類保健食品中非法 添加丙氧基艾地那非的定性篩查、定量檢測和準(zhǔn)確確認(rèn)。
【附圖說明】
[0017] 圖1表示實(shí)施例中丙氧基艾地那非的線性范圍。
[0018] 圖2表示實(shí)施例中濃度為214yg/mL的對照品溶液進(jìn)樣10yL色譜圖。
[0019]圖3表示實(shí)施例中濃度為214yg/mL的對照品溶液進(jìn)樣10yL光譜圖。
[0020] 圖4表示實(shí)施例中供試品溶液進(jìn)樣10yL色譜圖。
[0021] 圖5表示實(shí)施例中供試品溶液進(jìn)樣10yL光譜圖。
[0022] 圖6表示實(shí)施例中空白對照色譜圖。
[0023]圖7A表示實(shí)施例中對照品色譜圖。
[0024] 圖7B表示實(shí)施例中對照品一級質(zhì)譜圖。
[0025] 圖7C表示實(shí)施例中對照品二級質(zhì)譜圖。
[0026]圖8A表示實(shí)施例中樣品色譜圖。
[0027]圖8B表示實(shí)施例中樣品一級質(zhì)譜圖。
[0028]圖8C表示實(shí)施例中樣品二級質(zhì)譜圖。
[0029] 圖9表示實(shí)施例中對照品溶液高分辨一級質(zhì)譜圖。
[0030] 圖10表示實(shí)施例中對照品溶液高分辨二級質(zhì)譜圖。
[0031] 圖11表示實(shí)施例中對照品溶液高分辨三級質(zhì)譜圖。
[0032] 圖12表示實(shí)施例中樣品溶液高分辨一級質(zhì)譜圖。
[0033] 圖13表示實(shí)施例中樣品溶液高分辨二級質(zhì)譜圖。
[0034] 圖14表示實(shí)施例中樣品溶液高分辨三級質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0035]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0036] 一種檢測非法添加丙氧基艾地那非的方法，其中方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容包括:高效液相 色譜法從線性范圍、重復(fù)性、檢出限、定量限、加樣回收、專屬性等方面考察;液質(zhì)聯(lián)用法:離 子肼質(zhì)譜和高分辨質(zhì)譜用一級質(zhì)譜、二級質(zhì)譜、三級質(zhì)譜圖確認(rèn)。
[0037]具體方法包括如下步驟： (I)、高效液相色譜法 (一)試驗(yàn)材料： 1、供試品：陽性樣品：市場中一種保健酒，批號:/，125mL/瓶。陰性樣品：牛初乳咀嚼片 (固體樣品），批號：20140203;某保健酒(液體樣品），批號：20130903J。
[0038] 2、對照品：丙氧基艾地那非（Sidenafil Analogue)，批號：1329-054A2,含量 99.0%，規(guī)格1 Omg，購自加拿大TLCpharmachem公司，2~8 °C儲存。
[0039] 3、試劑:見下表1
5、色譜柱：Symmetry，C18，5μηι，4·6 X 250mm，柱溫：35°C。
[0040](二)色譜條件及樣品制備方法： 1、流動相 以磷酸三乙胺溶液(取三乙胺7mL用水稀釋至1000mL，用磷酸調(diào)pH至2.8)-甲醇一乙腈 (60:20:20)為流動相A，以磷酸三乙胺溶液一甲醇一乙腈(8:46:46)為流動相B，按下表3程 序梯度洗脫;檢測波長為230nm。掃描波長 :200-400nm。理論塔板數(shù)以丙氧基艾地那非峰計(jì) 算，應(yīng)不低于2000。流速：1 .OmL/min，進(jìn)樣體積：10yL。
[0041 ]表3高效液相色譜法流動相梯度表
2、對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品約1 Omg，加乙腈2 5mL，制成每1 mL約含0.4mg的儲備液，臨用 時(shí)，取2.5mL用乙腈稀釋至1 OmL，即得(置于8 °C以下冰箱保存）。
[0042] 3、供試品溶液的制備 固體制劑研細(xì)，精密稱取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超聲處理15分鐘， 冷至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(〇.45μπι)濾過;液體制劑搖勻，精密量取一 次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振搖3分鐘，加乙腈稀釋至刻度，搖勻后用微孔 濾膜(0.45μπι)濾過;濾液作為供試品溶液，即得。
[0043](三)線性范圍考察 精密量取上述對照品儲備液(428yg/mL)5mL至10mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻， 制成每lmL含對照品為214yg的對照品溶液，依次稀釋，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為2.14、8.56、42.8、 85.6、214、428yg/mL的溶液，注入液相色譜儀中1 OyL，測定色譜峰面積，以濃度(yg/mL)為橫 坐標(biāo)，積分面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程Y=33790X+1862.8，R 2=0.9998，可見濃度在428yg/ mL至2.14yg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，如圖1所示。
[0044](四）重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 液體試樣:取陽性供試品1批，按供試品制備方法制備6份，進(jìn)樣lOyL，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定 樣品中丙氧基艾地那非的含量分別為〇.129、0.130、0.130、0.130、0.130、0.130mg/mL，平均 0.130mg/mL(以每次飲用100mL計(jì)，折合每次服用量13mg/次），RSD為0.31%，重復(fù)性試驗(yàn)符合 要求。
[0045]固體試樣：因在檢測中未發(fā)現(xiàn)固體陽性樣品，故將加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中的供試品視為 固體樣品進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)樣lOyL，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定樣品中丙氧基艾地那非的含量分別 為4.021、3.990、3.933、3.962、4.013、3.96211^/^，平均3.98011^/^，1?0為0.9%，重復(fù)性試驗(yàn) 符合要求。
[0046](五)定量限及檢出限 液體試樣：將428yg/mL對照品溶液稀釋不同濃度，加入到陰性樣品中，按樣品制備操 作，以信噪比3倍的為檢出限最低響應(yīng)值，8.56yg/mL對照品溶液lmL加入到樣品溶液中達(dá)到 檢出限最低響應(yīng)值，最低檢出濃度為O.nug/mL(以供試品取樣量20mL計(jì)算檢出限為0.43μ g/mL)〇
[0047]如上操作，以信噪比10倍的為定量限最低響應(yīng)值，定量限濃度為OJ^ig/mL(以供 試品取樣量20mL計(jì)算定量限為0.86yg/mL)。
[0048]固體試樣:將428yg/mL對照品溶液稀釋不同濃度，加入到陰性樣品中，按樣品制備 操作，以信噪比3倍的為檢出限最低響應(yīng)值，8.6yg/mL對照品溶液lmL加入到樣品溶液中達(dá) 到檢出限最低響應(yīng)值，最低檢出濃度為O.ntig/mL (以供試品取樣量lg計(jì)算檢出限為8.6μ g/g)〇
[0049] 如上操作，以信噪比10倍的為定量限最低響應(yīng)值，固體試樣的定量限濃度為0.34μ g/mL(以供試品取樣量lg計(jì)算定量限為17. lyg /g)。
[0050] (六）回收率試驗(yàn) 回收率試驗(yàn)采用加樣回收法測定。
[00511液體試樣:精密稱取上述已知含量陽性樣品9份，每份10mL，置于25mL容量瓶中，精 密量取對照品溶液(428yg/mL)2.5mL、5. OmL、7.5mL，每個濃度分別至3份樣品中，加乙腈至 20mL，振搖3分鐘，加乙腈稀釋至刻度，搖勻后用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，取10yL進(jìn)樣，計(jì)算 回收率(結(jié)果見下表4)。
[0052] 表4加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(液體試樣）
固體試樣:精密稱取上述陰性樣品9份，每份約lg，置于50mL容量瓶中，精密量取對照品 溶液(392.8yg/mL)2.0mL、5.0mL、8. OmL，每個濃度分別至3份樣品中，加乙腈約40mL，超聲處 理15分鐘，冷至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，取10yL進(jìn)樣，計(jì) 算回收率(結(jié)果見下表5)。
[0053] 表5加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（固體試樣）
(七)專屬性試驗(yàn) 樣品溶液中目標(biāo)峰與對照品溶液色譜、光譜圖均一致。
[0054] 1、將濃度為214yg/mL的對照品溶液進(jìn)樣10yL，色譜圖及光譜圖如圖2、3所示：圖2 中16.6min色譜峰為對照品的色譜峰，圖3為對照品色譜峰的光譜掃描圖。
[0055] 2、將按上述制備方法制備的供試品溶液進(jìn)樣10yL，色譜圖及光譜圖如圖4、5所示： 圖4中16.6min色譜峰為樣品中目標(biāo)物的色譜峰，圖5為樣品中目標(biāo)物色譜峰的光譜掃描圖。 [0056] (II)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 (一)離子肼質(zhì)譜測定結(jié)果 1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(色譜柱規(guī)格為150_X2.1mm，內(nèi)徑3μπι)，以甲醇： 乙腈:含〇. 1%冰醋酸的〇. 〇2mol/L的乙酸銨溶液（30:25:45)為流動相;流速:0.2mL/min;檢 測波長為230nm。理論塔板數(shù)以丙氧基艾地那非峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。
[0057] 2、質(zhì)譜條件 質(zhì)譜配有電噴霧離子源(ESI)，質(zhì)譜檢測參數(shù):ESI+掃描，干燥氣溫度:320°C，鞘氣流速 40arb，輔助氣10 arb，噴霧電壓:4.5KV，掃描方式:一級質(zhì)譜全掃描、二級質(zhì)譜全掃描，掃描 范圍：50~600m/z。
[0058] 3、對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品約1 〇mg，加乙腈2 5mL，制成每1 mL約含0.4mg的儲備液，臨用 時(shí)，取適量儲備液用50%乙腈稀成濃度為10yg/mL的溶液，即得(置于8°C以下冰箱保存）。 [0059] 4、供試品溶液的制備 取高效液相色譜法檢查呈陽性的供試品溶液作為本項(xiàng)目檢查用的供試品溶液，用50% 乙腈稀釋為與對照品濃度相近的溶液。
[0060] 5、測定法 取供試品溶液和對照品溶液各lOyL，注入液相色譜儀，記錄色譜、質(zhì)譜圖。
[0061] 6、結(jié)果:供試品色譜圖中，出現(xiàn)與對照品色譜保留時(shí)間相同的色譜峰，且其一級質(zhì) 譜及二級質(zhì)譜均與對照品一致，如圖6、7、8所示。圖6為空白溶液的色譜圖，未出現(xiàn)14.4min 的色譜峰。圖7A為對照品溶液色譜圖，出現(xiàn)14.4min色譜峰為丙氧基艾地那非；圖7B為對照 品的一級質(zhì)譜圖，準(zhǔn)分子離子峰為503;圖7C為對照品的二級質(zhì)譜圖，主要離子碎片為m/z 486、461、446、391、347、327、299、283。圖8六為樣品溶液色譜圖，出現(xiàn)14.411^11色譜峰為丙氧 基艾地那非；圖8B為樣品的一級質(zhì)譜圖，準(zhǔn)分子離子峰為503;圖8C為樣品的二級質(zhì)譜圖，主 要離子碎片為m/z 486、461、446、391、347、327、299、283。
[0062] 表6丙氧基艾地那非的HPLC/MS/MS特征離子峰
(二)高分辨質(zhì)譜測定結(jié)果 儀器為島津公司LCMS-IT/T0F，流動相：乙腈(百靈威），流速:0.8ml/min，直接進(jìn)樣，掃 描范圍：1 級m/z100 -2000，2級m/z 100-2000,3級50-400。
[0063] 對照品[M+H] + :m/z-級 503.2438,二級 391 ·1405、299·1129、283·1178、327· 1729、 446.1859、 461.1973、347.0808，三級166.0988。如圖9、10、11所示。
[0064] 樣品[M+H] + :m/z-級503.2429，二級391.1418、299.1110、283.1170、327.1732、 446.1859、 461.1855、347.0775，三級166.0974。如圖12、13、14所示。
[0065] 樣品中未知物與對照品一級、二級、三級質(zhì)譜均一致，樣品[M+H]+m/z為503.2429， 丙氧基艾地那非(C24H34N6〇4S)理論[M+H]+m/z為503.2435，誤差為-1.19??111，誤差小于5??111， 可以認(rèn)為樣品中未知物為丙氧基艾地那非C24H34N6O4S。
[0066] 結(jié)論如下： 液相色譜法:線性范圍考察，回歸方程Y=33790X+1862.8，R2=0.9998，丙氧基艾地那非 濃度在2.14yg/mL至428yg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系；重復(fù)性試驗(yàn)RSD液體樣品為RSD為0.9%，固 體樣品為〇. 31%;液體試樣最低檢出濃度為0.1 Tyg/mL(以供試品取樣量20mL計(jì)算檢出限為 0.43yg/mL)，固體試樣最低檢出濃度為0.17yg/mL(以供試品取樣量lg計(jì)算檢出限為8.6yg/ g);液體試樣定量限濃度為〇. 34yg/mL(以供試品取樣量20mL計(jì)算定量限為0.86yg/mL)，固 體試樣的定量限濃度為〇.34yg/mL(以供試品取樣量lg計(jì)算定量限為17. lyg/g);加樣回收 試驗(yàn)表明，高、中、低3個濃度平均回收率分別為91.4、95.3、94.8%，RSD分別為1.2、0.9、 0.5%;專屬性試驗(yàn)表明，樣品中出現(xiàn)與對照品保留時(shí)間相同的色譜峰，DAD光譜譜圖均與對 照品一致。
[0067]液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法:供試品色譜圖中，出現(xiàn)與對照品色譜保留時(shí)間相同的色譜 峰，且其一級質(zhì)譜及二級質(zhì)譜均與對照品一致，一級[M+H]+m/z 503,二級[M+H]+m/z: 391、 299、283、327、446、461、347、486;高分辨質(zhì)譜測定樣品中未知物與對照品一級、二級、三級 質(zhì)譜均一致，樣品[M+H]+m/z為503.2429，丙氧基艾地那非（(： 24出4財(cái))43)理論[1+!1]+111/2為 503.2435，誤差為-1.19口口111，小于5口口1]1，可以認(rèn)為樣品中未知物為丙氧基艾地那非 C24H34N6O4S0
[0068]綜上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均滿足要求，表明本法可專屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確地初篩和確證補(bǔ)腎 壯陽類中成藥及抗疲勞類保健食品中非法添加丙氧基艾地那非。
[0069]最后所應(yīng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參 照本發(fā)明實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對本發(fā)明的技術(shù)方案 進(jìn)行修改或者等同替換，都不脫離本發(fā)明的技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋本發(fā)明的 權(quán)利要求保護(hù)范圍中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種檢測非法添加丙氧基艾地那非的方法，其特征在于:包括如下步驟： (1) 、高效液相色譜法 1.1、 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱；二極管陣列檢測器，檢測波長為 230nm，掃描波長:200-400nm;柱溫:35°C ;流速：1. OmL/min;以體積比為60:20:20的磷酸三 乙胺溶液一甲醇一乙腈為流動相A，以體積比為8:46:46的磷酸三乙胺溶液一甲醇一乙腈為 流動相B，按如下程序梯度洗脫： 0_6min:流動相 A 100%; 6-30min:流動相 A 100%-0%; 30-35min:流動相A 0%; 35- 36min:流動相A 0%-100%; 36- 50min:流動相 A100%; 1.2、 對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品，置量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勾，制成每lmL含 0 · 4-0 · 5mg的儲備液； 1.3、 供試品溶液的制備 若供試品為固體制劑，研細(xì)，精密稱取一次服用量，置容量瓶中，加乙腈，超聲處理后， 放至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過;若供試品為液體制劑，搖勻，精密量 取一次服用量，置容量瓶中，加乙腈至，振搖，加乙腈稀釋至刻度，搖勻后用微孔濾膜濾過； 濾液作為供試品溶液； 1.4、 測定法 分別取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及DAD光譜圖； 1.5、 結(jié)果判斷 供試品色譜圖中，應(yīng)不得檢出與對照品色譜保留時(shí)間及DAD光譜一致的色譜峰，若檢出 相應(yīng)的色譜峰，則采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法確證； (2) 、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 2.1、 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，檢測波長為230nm;以體積比為30:25:45 甲醇：乙腈:含0.1%冰醋酸的0.02mol/L的乙酸銨溶液為流動相;流速:0.2mL/min; 2.2、 質(zhì)譜條件 配有電噴霧離子化源，ESI+掃描，干燥氣溫度:320°C，鞘氣流速40arb，輔助氣lOarb，噴 霧電壓:4.5KV，掃描方式:一級質(zhì)譜全掃描、二級質(zhì)譜全掃描，掃描范圍：50~600m/z; 2.3、 對照品溶液的制備 取丙氧基艾地那非對照品，置量瓶中，加乙腈稀釋定容至刻度，搖勻，制成每lmL含0.4-〇.5mg的儲備液； 2.4、 供試品溶液的制備 取高效液相色譜法檢查呈陽性的供試品溶液作為檢查用的供試品溶液，用50%乙腈稀 釋為與對照品濃度相近的溶液;同時(shí)制備空白溶液； 2.5、 測定法 分別取空白溶液、供試品溶液和對照品溶液，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄液相色譜圖及一、 二級質(zhì)譜圖； 2.6、結(jié)果判斷 供試品色譜圖中，應(yīng)不得檢出與對照品色譜保留時(shí)間、一級質(zhì)譜圖及二級質(zhì)譜圖一致 的色譜峰;若檢出相應(yīng)的色譜峰，則確定非法添加了丙氧基艾地那非。
【文檔編號】G01N30/02GK105974021SQ201610313677
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月12日
【發(fā)明人】董培智, 申國華, 郭景文, 王子龍, 施懷生
【申請人】山西省食品藥品檢驗(yàn)所