一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體的hplc方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種順式2?氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛?6?烯?3?酮對映異構(gòu)體分析分離方法。采用手性色譜柱以正向混合溶劑為流動相的HPLC方法。該方法能夠簡單、準(zhǔn)確、高效分析分離順式2?氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛?6?烯?3?酮對映異構(gòu)體，從而實現(xiàn)對順式2?氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛?6?烯?3?酮對映異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本發(fā)明也可以用來制備高純度單一旋光性的順式2?氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛?6?烯?3?酮。
【專利說明】
一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-稀-3-酮對映異 構(gòu)體的HPLC方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種色譜分析分離方法，尤其是一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3， 0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體的高效液相色譜法。 技術(shù)背景
[0002] 前列腺素是存在于動物和人體中的一類不飽和脂肪酸組成的具有多種生理作用 的活性物質(zhì)，含量極低，因此，前列腺素類藥物全合成的研究十分重要。順式2-氧雜雙環(huán)[3， 3,0]辛-6-烯-3-酮是一種合成前列腺素藥物的常用中間體和起始原料，分子式為C 7H802,英 文名：cis_2-〇xabicyclo[3 · 3 · 0]0ct-6-En-3_0ne，結(jié)構(gòu)式為：
[0004] 該分子中有2個手性中心，理論上存在4個光學(xué)異構(gòu)體，但根據(jù)其反應(yīng)機理及合成 方法推斷，只存在一對對映異構(gòu)體，即（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R， 5S)-2-氧雜雙環(huán)[3，3,0]辛-6-烯-3-酮。其互為對映異構(gòu)體雜質(zhì)在后續(xù)步驟中繼續(xù)參與反 應(yīng)，進而形成多種對應(yīng)雜質(zhì)，影響前列腺素類藥物的質(zhì)量，這也是該類藥物引發(fā)不良反應(yīng)的 重要因素之一。因此，如何分析分離該對對映異構(gòu)體，進而控制前列腺素類藥物質(zhì)量，是目 前需要解決的技術(shù)問題。
[0005] 目前，含有手性碳原子的對映異構(gòu)體的分析與分離一直是手性藥物合成和質(zhì)量控 制的關(guān)鍵問題，經(jīng)文獻檢索，未見有順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體檢測 方法的相關(guān)報道。
[0006] 因此，有必要建立一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu) 體的方法，能夠有效分析分離該對對映異構(gòu)體，控制雜質(zhì)含量，提高該目標(biāo)產(chǎn)物純度，進而 提高前列腺素類藥物質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種采用手性色譜柱以正向混合 溶劑為流動相的HPLC方法，該方法能夠簡單、準(zhǔn)確、高效分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0] 辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體，從而實現(xiàn)對順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體 的質(zhì)量控制，同時也可以用來制備高純度單一旋光性的順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯- 3-酮。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過以下方案實現(xiàn)的：
[0009] -種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體的HPLC方法，采 用手性色譜柱并使用正相色譜法分離測定。
[0010]本發(fā)明所述的手性色譜柱為多糖衍生物正相涂敷型手性色譜柱，硅膠表面涂覆有 纖維素-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）。
[0011]本發(fā)明正相色譜法所使用的流動相是正己烷/異丙醇混合溶劑或正己烷/無水乙 醇混合溶劑。
[0012]進一步地，本發(fā)明所使用的正己烷/異丙醇的體積比例為85:15~98:2,最優(yōu)為87: 13 ~97:3
[0013]進一步地，本發(fā)明所使用的正己烷/無水乙醇的體積比例為85 :15~98: 2，最優(yōu)為 90:10~97:3
[0014] 本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(xiàn)：
[0015] (1)順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體供試品用流動相溶解，配制 成lmL含順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體1~10yL的供試品溶液;進樣量 為2~20yL，較優(yōu)選的是5~10yL;
[0016] (2)設(shè)置流動相流速為0.3~1. OmL/min，正己烷/異丙醇流動相流速優(yōu)選為0.4~ 0.8mL/min，正己燒/無水乙醇流動相流速優(yōu)選為0.5-0.8mL/min;檢測波長為205~210nm， 較優(yōu)選為205nm;柱溫15~50°C，較優(yōu)選為20~40°C ;
[0017] (3)取步驟（1)所制供試品溶液5~10yL注入手性色譜柱(250 X 4 · 6mm，5 · Ομπι)，完 成順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-稀-3-酮對映異構(gòu)體的分析與分離。
[0018] 實驗結(jié)果表明，本發(fā)明采用纖維素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性色譜柱； 采用較優(yōu)選的流動相;選擇流動相溶解樣品，選用較優(yōu)的進樣量，選用較優(yōu)的柱溫;選用較 優(yōu)的波長;從而確保了樣品的穩(wěn)定性，提高了色譜峰的對稱性，并且有較好的分離效果。其 中（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體先后出峰，分離度多1.5,有效的分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3，0]辛-6-稀-3-酮對映異構(gòu)體。
[0019] 本發(fā)明分析分離方法簡單、快速、準(zhǔn)確和高效，能夠確保順式雙環(huán)[3，2，0 ]庚-2-烯-6-酮對映異構(gòu)體的質(zhì)量可控性;本發(fā)明分析分離方法，也可以用來制備高純度單一旋光 性的順式雙環(huán)[3，2，0 ]庚-2-烯-6-酮。
[0020] 本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，解決了順式雙環(huán)[3,2,0]庚-2-烯-6-酮對映異構(gòu) 體的分析分離問題，能夠有效控制目標(biāo)產(chǎn)物及其對映異構(gòu)體雜質(zhì)含量，免除對映異構(gòu)體雜 質(zhì)對后續(xù)合成反應(yīng)的干擾，提高前列腺素類藥物質(zhì)量，確保用藥安全。
[0021] 由此可見，本發(fā)明開發(fā)一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映 異構(gòu)體的HPLC方法是十分必要的
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體的HPLC方法做進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于實施例。
[0023] 實施例1 [0024]儀器與條件
[0025]色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0026] 流動相:正己烷-異丙醇(85:15)
[0027]柱溫：5(TC
[0028] 流速:0.3mL/min
[0029] 進樣體積:2yL
[0030] 檢測波長：200nm
[0031] 實驗步驟
[0032] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(85:15)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液2 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0033] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.7，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0034] 實施例2 [0035]儀器與條件
[0036] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0037] 流動相：正己烷-異丙醇（85:15)
[0038] 柱溫：15°C
[0039] 流速:0.5mL/min
[0040] 進樣體積:10yL [0041 ] 檢測波長：205nm
[0042] 實驗步驟
[0043] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體10yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(85:15)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 10yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0044] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.8，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0045] 實施例3
[0046] 儀器與條件
[0047] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0048] 流動相:正己烷-異丙醇(98:2)
[0049] 柱溫:22。。
[0050] 流速：1.0mL/min
[0051] 進樣體積:20yL
[0052] 檢測波長：205nm
[0053] 實驗步驟
[0054] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(98:2)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液20 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0055] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.9，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0056] 實施例4 [0057]儀器與條件
[0058] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0059] 流動相:正己烷-異丙醇(97:3)
[0060] 柱溫：40 Γ
[0061] 流速:0.8mL/min
[0062] 進樣體積：10yL
[0063] 檢測波長：210nm
[0064] 實驗步驟
[0065] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(97:3)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液10 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0066] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.7，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0067] 實施例5 [0068]儀器與條件
[0069] 色譜柱：BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0070] 流動相：正己烷-異丙醇（87:13)
[0071] 柱溫：24°C
[0072] 流速:0.4mL/min
[0073] 進樣體積:5yL
[0074] 檢測波長：200nm
[0075] 實驗步驟
[0076] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體10yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(87:13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液5 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0077] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2_氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2_氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.9，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0078] 實施例6 [0079]儀器與條件
[0080]色譜柱：BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[00811 流動相:正己烷-異丙醇(90:10)
[0082] 柱溫：40 Γ
[0083] 流速：1.0mL/min
[0084] 進樣體積：5yL
[0085] 檢測波長：210nm
[0086] 實驗步驟
[0087] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(90:10)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液5 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0088] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.4，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0089] 實施例7 [0090]儀器與條件
[0091] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0092] 流動相：正己烷-異丙醇（92:8)
[0093] 柱溫：40°C
[0094] 流速:〇.8mL/min
[0095] 進樣體積：10yL
[0096] 檢測波長：210nm
[0097] 實驗步驟
[0098] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(92:8)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液10 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0099] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.4，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0100] 實施例8
[0101] 儀器與條件
[0102] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0103] 流動相:正己烷-異丙醇(95:5)
[0104] 柱溫：40°C
[0105] 流速:0.8mL/min
[0106] 進樣體積：10yL
[0107] 檢測波長：205nm
[0108] 實驗步驟
[0109] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(95:5)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液10 yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0110] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0111] 實施例9
[0112] 儀器與條件
[0113] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0114] 流動相:正己烷-異丙醇(91:9)
[0115] 柱溫：2(TC
[0116]流速:0.5mL/min [0117] 進樣體積：5yL
[0118] 檢測波長：205nm [0119] 實驗步驟
[0120] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體10yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(91:9)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液5μ L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0121] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.0，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0122] 實施例10
[0123] 儀器與條件
[0124] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0125] 流動相:正己烷-異丙醇(93:7)
[0126] 柱溫:23°C
[0127] 流速:0.5mL/min
[0128] 進樣體積:5yL
[0129] 檢測波長:205nm
[0130] 實驗步驟
[0131 ] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-異丙醇(93:7)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液5μ L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0132] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.9，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0133] 實施例11
[0134] 儀器與條件
[0135] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0136] 流動相:正己烷-無水乙醇(85:15)
[0137] 柱溫：5(TC
[0138] 流速:0.3mL/min
[0139] 進樣體積:2yL
[0140] 檢測波長:200nm
[0141] 實驗步驟
[0142] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于lOmL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇87:13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 2yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0143] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0144] 實施例12
[0145] 儀器與條件
[0146] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0147] 流動相:正己烷-無水乙醇(97:3)
[0148] 柱溫：15°C
[0149] 流速:〇.8mL/min
[0150] 進樣體積:10yL
[0151] 檢測波長:210nm
[0152] 實驗步驟
[0153] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(97:3)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 10yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0154] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.2，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0155] 實施例13
[0156] 儀器與條件
[0157] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0158] 流動相:正己烷-無水乙醇(96:4)
[0159] 柱溫:37°C
[0160] 流速:0.6mL/min
[0161] 進樣體積:20yL
[0162] 檢測波長：205nm
[0163] 實驗步驟
[0164] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體10yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(87:13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶 液20yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0165] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.6，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0166] 實施例14
[0167] 儀器與條件
[0168] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0169] 流動相:正己烷-無水乙醇(90:10)
[0170] 柱溫：2(TC
[0171] 流速:0.3mL/min
[0172] 進樣體積:5yL
[0173] 檢測波長：205nm
[0174] 實驗步驟
[0175] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(90:10)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶 液5yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0176] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0177] 實施例15
[0178] 儀器與條件
[0179] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0180] 流動相:正己烷-無水乙醇(98:2)
[0181] 柱溫：23Γ
[0182] 流速：1.0mL/min
[0183] 進樣體積：10yL
[0184] 檢測波長:205nm
[0185] 實驗步驟
[0186] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(98:2)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 10yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0187] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0188] 實施例16
[0189] 儀器與條件
[0190] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0191] 流動相:正己烷-無水乙醇(95:5)
[0192] 柱溫：40°C
[0193] 流速:0.8mL/min
[0194] 進樣體積:5yL
[0195] 檢測波長:210nm
[0196] 實驗步驟
[0197] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(95:5)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 5yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0198] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為2.0，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0199] 實施例17
[0200] 儀器與條件
[0201] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0202] 流動相：正己烷-無水乙醇（92:8)
[0203] 柱溫：20 Γ
[0204] 流速:0.8mL/min
[0205] 進樣體積:5yL
[0206] 檢測波長：205nm
[0207] 實驗步驟
[0208] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體50yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(87:13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶 液5yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0209] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.6，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0210] 實施例18 [0211]儀器與條件
[0212] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0213] 流動相:正己烷-無水乙醇(87:13)
[0214]柱溫：24Γ
[0215]流速:0.5mL/min [0216] 進樣體積：1〇此 [0217] 檢測波長：205nm [0218] 實驗步驟
[0219] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-稀-3-酮對映異構(gòu)體10yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(87:13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶 液10yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0220] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0221] 實施例19 [0222]儀器與條件
[0223] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0224] 流動相：正己烷-無水乙醇（93:7)
[0225]柱溫：20°C
[0226]流速:0.5mL/min
[0227] 進樣體積:5yL
[0228] 檢測波長：205nm
[0229] 實驗步驟
[0230] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(93:7)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 5yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0231] 實驗結(jié)果：（lS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮和（lR，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
[0232] 實施例20 [0233]儀器與條件
[0234] 色譜柱:BC chiral 0D(250X4.6mm，5.0ym)
[0235] 流動相：正己烷-無水乙醇（95:5)
[0236]柱溫：35°C
[0237] 流速:0.6mL/min
[0238] 進樣體積:5yL
[0239] 檢測波長:200nm
[0240] 實驗步驟
[0241 ] 精密量取順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體100yL，置于10mL容量 瓶中，正己烷-無水乙醇(95:5)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。吸取供試品溶液 5yL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0242] 實驗結(jié)果：（IS，5R)-2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮和（1R，5S)-2-氧雜雙環(huán)[3， 3，0 ]辛-6-烯-3-酮兩個對映異構(gòu)體的分離度為1.5，順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮 對映異構(gòu)體能夠完全分離。
【主權(quán)項】
1. 一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，Ο]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體的HPLC方法，其特 征在于采用手性色譜柱并使用正向色譜法進行分析分離。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異 構(gòu)體的HPLC方法，其特征在于，所述的手性色譜柱為多糖衍生物正相涂覆型手性色譜柱，硅 膠表面涂覆有纖維素-三(3，5-二甲基苯基甲酸酯）。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異 構(gòu)體的HPLC方法，其特征在于，所述正相色譜法所用的流動相為正己烷/異丙醇或正己烷/ 無水乙醇混合溶劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu) 體的HPLC方法，其特征在于，所述的所述正相色譜法所用的流動相為正己烷/異丙醇混合溶 劑，正己烷/異丙醇混合溶劑的體積比例為85:15~98: 2。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異 構(gòu)體的HPLC方法，其特征在于，所述的正己烷/異丙醇混合溶劑的體積比例為87:13~97: 3。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu) 體的HPLC方法，其特征在于，所述的所述正相色譜法所用的流動相為正己烷/無水乙醇混合 溶劑，正己烷/無水乙醇混合溶劑的體積比例為85:15~98: 2。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異 構(gòu)體的HPLC方法，其特征在于，所述的正己烷/無水乙醇混合溶劑的體積比例為90:10~97: 3〇8. 如權(quán)利要求1所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3,3，0]辛-6-稀-3-酮對映異構(gòu) 體的HPLC方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 順式2-氧雜雙環(huán)[3,3,0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體供試品用流動相溶解，配制成 lmL含順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu)體1~10yL的供試品溶液;進樣量為2 ~20yL; (2) 設(shè)置流動相流速為0.3~1.0mL/min，檢測波長為205~210nm，柱溫15~50°C; (3) 取步驟（1)所制供試品溶液5~10yL注入手性色譜柱（250 X 4 · 6mm，5 · Ομπι)，完成順 式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0]辛-6-稀-3-酮對映異構(gòu)體的分析與分離。9. 如權(quán)利要求8所述的一種分析分離順式2-氧雜雙環(huán)[3，3，0 ]辛-6-烯-3-酮對映異構(gòu) 體的HPLC方法，其特征在于，所述正己烷/異丙醇流動相流速為0.4~0.8mL/min，正己烷/無 水乙醇流動相流速為0.5~0.8mL/min;檢測波長為205nm;柱溫為20~40°C。
【文檔編號】G01N30/02GK106018605SQ201610363228
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】王淑紅, 孫中研, 彭悅, 趙春影, 修志明
【申請人】長春百純和成醫(yī)藥科技有限公司