高效液相色譜法檢測五味子中五味子甲素的方法
【專利摘要】高效液相色譜法檢測五味子中五味子甲素的方法，以五味子甲素為對照品，在以十二烷基硅烷鍵合硅膠為固定相和含氯化鹽水溶液的流動相為色譜條件下檢測，其中的流動相是體積比為(65?50):(35?50)的氯化鹽水溶液和乙氰的水溶液，檢測波長為200±10nm，所述的鹽酸鹽水溶液為含有0.02?0.8％氯化鹽且pH值為2.5?5.0的水溶液。該方法分離效果更佳，簡便快捷，重復(fù)性好，為含五味子甲素的五味子中成藥的質(zhì)量控制提供了高效的檢測方法。
【專利說明】
高效液相色譜法檢測五味子中五味子甲素的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種以高效液相色譜法檢測五味子中五味子甲素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]五味子甲素由五味子果仁中提取出的一類木脂素類。其結(jié)構(gòu)可以五味子丙素為代表。在不同的產(chǎn)物中，苯環(huán)上的亞甲二氧基可由兩個甲氧基所代替，八元環(huán)的脂架部分也可以具有一個或多個羥基(或其酯基)。五味子為常用中藥，對迀延性和慢性病毒性肝炎血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)升高患者有較好的療效。故提取五味子甲素和建立五味子甲素的含量測定方法尤為重要。目前已有報道的對五味子甲素的含量測定方法，有HPLC—UV法、GC—MS法、LC 一 MS法和HPLC—ELSD法等。其中GC-MS，LC-MS，HPLC-ELSD對設(shè)備條件要求較高，儀器價格昂貴、運(yùn)行成本高，方法普適性較差，作為中藥質(zhì)量檢測包括藥典方法和生產(chǎn)企業(yè)等均較少應(yīng)用;HPLC-UV則是目前包括中國藥典、生產(chǎn)企業(yè)、檢測單位等最常用的方法，該方法設(shè)備通用性和普適性均較好。故
【申請人】在對HPLC-UV法測定五味子中五味子甲素含量的研究中發(fā)現(xiàn)，由于水溶性強(qiáng)，并且紫外僅為末端弱吸收，在檢測波長約200nm條件下，五味子甲素中大量的紫外強(qiáng)吸收的酚酸類成分給HPLC-UV法測定蒼術(shù)苷類成分的含量帶來了很大的干擾，部分樣品沒有完全達(dá)到基線分離，影響了測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對上述情況，本發(fā)明的目的是提供一種可以取得更為理想效果的高效液相色譜法檢測五味子甲素的新方法。
[0004]本申請發(fā)明人通過深入的實驗和研究發(fā)現(xiàn)，采用反相離子對色譜法能夠有效消除酚酸類成分的干擾，實現(xiàn)甲素類成分的基線分離。基于此，在檢測過程中的色譜條件中，除流動相需選用離子對緩沖液外，包括如固定相、檢測波長、對照品和供試品溶液等條件在內(nèi)的其余條件和操作，均可采用目前已有文獻(xiàn)報道的同類檢測方法一致。
[0005]在以十二烷基硅烷鍵合硅膠為固定相和氯化鹽水溶液為流動相的色譜條件下，對含五味子甲素的五味子被檢品溶液中五味子甲素的含量進(jìn)行檢測，其特征是流動相是體積比為(65-50): (35-50)的氯化鹽-乙氰的水溶液，檢測波長為200士 10nm，所述的氯化鹽水溶液的pH值為2.5-5.0，且含有體積濃度0.03-0.5 %的鹽酸。
[0006]在本發(fā)明中所述的氯化鹽水溶液為氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣中的一種，氯化磷酸鹽的質(zhì)量/體積濃度為0.1-0.5%。
[0007]在本發(fā)明中色譜柱的理論板數(shù)按五味子甲素峰計不低于3000，進(jìn)樣量為5_20uL。
[0008]在本發(fā)明中最佳的進(jìn)樣量為10-20uL。
[0009]在本發(fā)明中檢測用的樣品溶液分別經(jīng)下述方式得到:取五味子甲素對照品，精密稱定后，用乙醇體積含量為0-50%的乙醇一水溶液配制成對照品溶液;一取含五味子甲素的被檢品精密稱定后，加水超聲提取20-60分鐘，取上清液濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
[0010]對照品溶液由五味子甲素對照品約1mg精密稱定后，分別置于1mL量瓶中，用體積含量20%乙醇一水溶液溶解并稀釋至刻度，混合均勻后再各精密吸取ImL置同一 1mL量瓶中加水稀釋至刻度，混合均勻即得。
[0011 ]所述的供試品溶液由精密稱定的五味子粉末約1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入水20mL后，超聲提取，在300W和40kHz的超聲處理30min后取出，離心分離后取上清液即得。
[0012]具體操作按下述方式進(jìn)行:
[0013]I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為體積比為35:65的氯化鹽-乙氰的水溶液，用鹽酸調(diào)pH值至3.5;檢測波長為200士 1nm;理論板數(shù)按五味子甲素峰計不低于3000;
[0014]2)對照品溶液的制備:取五味子甲素對照品約1mg，精密稱定后置于1mL量瓶中，用體積含量20%的乙醇一水溶液溶解并稀釋至刻度，混合均勻，再各精密吸取ImL于同一I OmL量瓶中加水稀釋至刻度，混合均勻即得；
[0015]3)測定:分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10-20U1，注入液相色譜儀測定。
[0016]以下結(jié)合附圖所示的實施例，對本發(fā)明上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【附圖說明】
[0017]圖1是本發(fā)明方法檢測的部分樣品的HPLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0018]實施例1
[0019]色譜條件色譜柱:AgilentEclipse XDB-Cl 8 (250mmX 4.6mm, 5.0u m);流動相:乙睛-0.15%氯化鉀溶液(鹽酸酸調(diào)pH至3.5) (35:65)，等度洗脫，流速:1.0mL.min — Imin;柱溫:300C;檢測波長:203nm;進(jìn)樣量:10uL。在此色譜條件下，所測成分20min內(nèi)出峰完畢，分離度、峰形均良好，符合定量分析要求，色譜圖見圖1(a).
[0020]供試品溶液的制備:取蒼耳子粉末(過3號篩)約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水20mL，超聲(300W，40kHz)處理40min，取出，離心(12000r〃min I，6min)，取上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。
[0021]測定法:分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各1ul，注入液相色儀，測定，即得。
[0022]實施例2
[0023]色譜條件色譜柱:AgilentEclipse XDB-Cl 8 (250mmX 4.6mm, 5.0u m);流動相:乙睛-0.15%氯化鈉鉀溶液(鹽酸酸調(diào)pH至3.5)(50:50)，等度洗脫，流速:1.0mL.min—Imin;柱溫:300C;檢測波長:203nm;進(jìn)樣量:10uL。在此色譜條件下，所測成分20min內(nèi)出峰完畢，分離度、峰形均良好，符合定量分析要求，色譜圖見圖1(b).
[0024]供試品溶液的制備:取蒼耳子提取物約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水25mL，超聲(300W，40kHz)處理20min，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0025]測定法:分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各5-lOul，注入液相色譜儀，測定，即得。
【主權(quán)項】
1.高效液相色譜法檢測五味子中五味子甲素的方法，以五味子甲素溶液為對照品，在以十二烷基硅烷鍵合硅膠為固定相和氯化鹽水溶液為流動相的色譜條件下，對含五味子甲素的五味子被檢品溶液中五味子甲素的含量進(jìn)行檢測，其特征是流動相是體積比為(65-50):(35-50)的氯化鹽-乙氰的水溶液，檢測波長為200士 I Onm，所述的氯化鹽水溶液的pH值為2.5-5.0，且含有體積濃度0.03-0.5 %的鹽酸。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的氯化鹽水溶液為氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣中的一種，氯化磷酸鹽的質(zhì)量/體積濃度為0.1-0.5%。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是色譜柱的理論板數(shù)按五味子甲素峰計不低于3000，進(jìn)樣量為5-20u L04.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征是所述進(jìn)樣量為10-20UL。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是檢測用的樣品溶液分別經(jīng)下述方式得到: 一取五味子甲素對照品，精密稱定后，用乙醇體積含量為0-50%的乙醇一水溶液配制成對照品溶液;一取含五味子甲素的被檢品精密稱定后，加水超聲提取20-60分鐘，取上清液濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征是所述的對照品溶液由五味子甲素對照品約1mg精密稱定后，分別置于1mL量瓶中，用體積含量20%乙醇一水溶液溶解并稀釋至刻度，混合均勻后再各精密吸取ImL置同一 1mL量瓶中加水稀釋至刻度，混合均勻即得。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是所述的供試品溶液由精密稱定的五味子粉末約1.0g,置具塞錐形瓶中，精密加入水20mL后，超聲提取，在300W和40kHz的超聲處理30min后取出，離心分離后取上清液即得。8.如權(quán)利要求1至7之一所述的方法，其特征是按下述方式進(jìn)行: 1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為體積比為35:65的氯化鹽-乙氰的水溶液，用鹽酸調(diào)pH值至3.5;檢測波長為200 士 1nm;理論板數(shù)按五味子甲素峰計不低于3000; 2)對照品洛液的制備:取五味子甲素對照品約1mg，精當(dāng)稱定后置于1mL量瓶中，用體積含量20%的乙醇一水溶液溶解并稀釋至刻度，混合均勻，再各精密吸取ImL于同一 1mL量瓶中加水稀釋至刻度，混合均勻即得； 3)測定:分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10-20ul，注入液相色譜儀測定。
【文檔編號】G01N30/06GK106018607SQ201610411255
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月14日
【發(fā)明人】張國躍, 馬鵬飛, 李濤
【申請人】陜西省食品藥品檢驗所