一種浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方法
【專利摘要】一種浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方法，其特征在于：將浸膏類添加劑樣品置于頂空瓶中，加入N,N?二甲基甲酰胺（DMF），密閉后常溫下超聲振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶置于加熱器中加熱至一定溫度，平衡一段時(shí)間后，抽取頂空氣體，GC/MS分析浸膏類添加劑溶劑殘留含量。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：能準(zhǔn)確測(cè)定浸膏類添加劑溶劑殘留含量，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有頂空溫度低，時(shí)間短，副反應(yīng)少，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，結(jié)果可靠的特點(diǎn)，開(kāi)創(chuàng)了一種新的用于浸膏類添加劑溶劑殘留的測(cè)定方法。
【專利說(shuō)明】
一種浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方法。該方法利用靜態(tài)頂空進(jìn)樣結(jié)合氣 質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)浸膏類添加劑中的殘留溶劑進(jìn)行定性定量分析，建立浸膏類添加劑溶劑殘留的 質(zhì)量控制指標(biāo)。
【背景技術(shù)】
[0002] 近些年，關(guān)于浸膏類添加劑的研究主要集中在理化及生物性能、加工技術(shù)和風(fēng)味 物質(zhì)分析方面，而浸膏產(chǎn)品質(zhì)量的安全性卻鮮有提及。浸膏在加工時(shí)多采用有機(jī)溶劑萃取， 致使終產(chǎn)品中含有少量的易揮發(fā)性有機(jī)溶劑，其中部分溶劑還可能對(duì)人體產(chǎn)生一定的毒副 作用，但浸膏中的溶劑殘留尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
[0003] 在我國(guó)藥典中有溶劑殘留限量的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)溶劑對(duì)人體的毒副作用以及對(duì)環(huán) 境的危害程度將其分為4大類:第1類有機(jī)溶劑對(duì)人體和環(huán)境具有不可接受的毒性或危害； 第2類是指無(wú)基因毒性但有動(dòng)物致癌性的溶劑，在制藥中應(yīng)該限制使用;第3類的危害較小， 為低毒性溶劑，濃度限度大約為0.5%;第4類為到目前還沒(méi)有毒理學(xué)資料證明其毒性的溶 劑。藥品的溶劑殘留水平過(guò)高時(shí)，殘留的溶劑就可能會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。隨著添加劑產(chǎn)品質(zhì) 量工作不斷加強(qiáng)，建立浸膏類添加劑中的溶劑殘留分析方法，加強(qiáng)產(chǎn)品質(zhì)量的控制，進(jìn)一步 提高產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性顯得尤為重要。
[0004] 目前溶劑殘留的研究在藥物【Cheng C，Liu S，Mueller B J，et al. A generic static headspace gas chromatography method for determination of residual solvents in drug substance[J]. Journal of Chromatography A， 2010， 1217(41): 6413-6421.】和食品【劉永明，葛娜，王飛，等.頂空氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定 蜂蜜中57種揮發(fā)性有機(jī)溶劑殘留[J].色譜，2012，30(8): 782-791】中已有報(bào)道，但對(duì)于 浸膏類添加劑的溶劑殘留鮮有研究報(bào)道。浸膏類添加劑與食品或藥品無(wú)論是形態(tài)還是理化 性質(zhì)都存在較大差異，且浸膏種類千差萬(wàn)別，采用文獻(xiàn)中報(bào)道的二甲亞砜或水作為溶劑不 能很好的溶解。同時(shí)，文獻(xiàn)中采用的頂空條件溫度較高，且時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)于浸膏這一復(fù)雜的 混合物可能會(huì)引起副反應(yīng)如Millard反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，食品和藥品 中溶劑殘留的分析方法不能完全適用于浸膏類添加劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的正是針對(duì)上述現(xiàn)有狀況，而專門(mén)開(kāi)發(fā)的一種浸膏類添加劑溶劑殘留 的分析方法。該方法利用靜態(tài)頂空進(jìn)樣結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)浸膏類添加劑中的殘留溶劑進(jìn)行 定性定量分析，該方法溫度低，時(shí)間短，副反應(yīng)少，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，結(jié)果可靠。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：種浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方 法，將浸膏類添加劑樣品置于頂空瓶中，加入％，二甲基甲酰胺(DMF)，密閉后常溫下超聲 振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶置于加熱器中加熱至一定溫度，平衡一段時(shí)間后，抽取頂空 氣體，GC/MS分析浸膏類添加劑溶劑殘留含量，具體包括以下步驟： a、 浸膏樣品收集； b、 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備:分別稱取異己烷0.03g，甲基環(huán)己烷0.03g，甲酸乙酯0.08g，3-甲 基戊烷0.03g，2，2-二甲基丁烷0.03g，甲基環(huán)戊烷0.25g于10mL容量瓶中，用二甲基甲 酰胺定容至刻度搖勾。分別稱取正庚燒〇.〇3g，環(huán)己燒0.03g，丙酮0.06g，正己燒0.05g，乙酸 乙酯0.05g，乙醇0.05g 20mL容量瓶中，用#，，二甲基甲酰胺定容，搖勻。再將3-甲基戊烷， 正己烷，用二甲基甲酰胺稀釋10倍，將甲基環(huán)戊烷稀釋50倍，備用。
[0007] C、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：具有濃度梯度的乙醇、丙酮、甲酸乙酯、2,2_甲基丁烷、異己 烷、3-甲基戊烷、正己烷、乙酸乙酯、甲基環(huán)戊烷、環(huán)己烷、正庚烷和甲基環(huán)己烷系列混合標(biāo) 準(zhǔn)溶液具體配制方式如下：準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇1 〇〇此，正己烷30yL，甲酸乙 酯20yL，2，2-二甲基丁烷5yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、 丙酮、乙酸乙酯分別取1〇此至10mL容量瓶中，用見(jiàn)，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得一 級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇150yL，正己烷40yL，甲酸乙酯30yL，2， 2-二甲基丁烷10yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙 酸乙酯分別取20yL至10mL容量瓶中，用二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得二級(jí)混合標(biāo) 準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇200此，正己烷50yL，甲酸乙酯40yL，2，2-二甲基 丁烷15yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分 別取30yL至10mL容量瓶中，用二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得三級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； 準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇250yL，正己燒60yL，甲酸乙酯60yL，2，2-二甲基丁燒20μ L，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取40yL 至10mL容量瓶中，用見(jiàn)二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得四級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取 制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇300yL，正己燒70yL，甲酸乙酯100yL，2，2-二甲基丁燒25yL，異己 烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取50yL至10mL 容量瓶中，用Μ A二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得五級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0008] d、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:將配置的五級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按由低到高順序進(jìn)行GC-MS分析，并 以各組分標(biāo)準(zhǔn)溶劑的峰面積(Y)對(duì)其相應(yīng)的濃度(X，ng/mL)進(jìn)行線性回歸分析，得到各溶劑 的工作曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)； e、 樣品前處理:稱取0.1 g浸膏樣品，置于20 mL頂空瓶中，加入3 mL 二甲基甲酰 胺(樣品中殘留溶劑峰面積明顯超過(guò)濃度的線性范圍所對(duì)應(yīng)的峰面積時(shí)，可適當(dāng)加大樣品 的稀釋比例）；密閉后常溫下超聲振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶置于加熱器中加熱至60 °C，平衡15 min后，抽取0.40 mL頂空氣體，進(jìn)行GC/MS分析； f、 數(shù)據(jù)處理和分析，對(duì)浸膏類添加劑中的溶劑殘留進(jìn)行檢測(cè)，得到浸膏樣品的溶劑殘 留量，進(jìn)而為提高浸膏類添加劑產(chǎn)品質(zhì)量提供保證。
[0009] 本發(fā)明依據(jù)的測(cè)試原理在于:將浸膏樣品直接進(jìn)行處理，然后進(jìn)行靜態(tài)頂空GC-MS 分析，測(cè)定浸膏類添加劑中的溶劑殘留，掌握浸膏樣品的溶劑殘留量。
[0010] 這一實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能準(zhǔn)確測(cè)定浸膏樣品中常用的提取溶劑的殘留含量，與現(xiàn)有技術(shù)相 比具有樣品前處理簡(jiǎn)單，頂空溫度低、時(shí)間短，樣品發(fā)生熱分解或者被氧化等副反應(yīng)少，靈 敏度高，結(jié)果可靠的特點(diǎn)，開(kāi)創(chuàng)了一種新的用于浸膏類添加劑中溶劑殘留測(cè)定的方法。
【具體實(shí)施方式】
[0011]本發(fā)明結(jié)合以下實(shí)施例做進(jìn)一步描述，但并不限制本發(fā)明。
[0012] 實(shí)施例1 市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)4種茉莉浸膏樣品，分別稱取0.1 g并置于20 mL頂空瓶中，加入3 mL N，N-二 甲基甲酰胺(樣品中殘留溶劑峰面積明顯超過(guò)濃度的線性范圍所對(duì)應(yīng)的峰面積時(shí)，可適當(dāng) 加大樣品的稀釋比例）;密閉后常溫下超聲振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶置于加熱器中加 熱至60 °C，平衡15 min后，抽取0.40 mL頂空氣體，進(jìn)行GC/MS分析。
[0013] 色譜條件 色譜柱:HP-5，毛細(xì)管柱（30m X 0.25mm X 0.25μπι);升溫程序:初溫35 °C，保持5min;以5 °C/min升至200°C，保持Omin;恒流流速1 .OmL/min;分流進(jìn)樣，分流比：50:1;進(jìn)樣口溫度： 250 °C;載氣：He (99.999%)。
[0014]質(zhì)譜條件 EI源；電子能量70eV;離子源溫度250°C ;四級(jí)桿150°C ;傳輸管線溫度:250°C ;掃描模式 full scan;掃描質(zhì)量范圍m/z 34~400〇 [0015] 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立 準(zhǔn)確稱取異己烷〇. 〇3g，甲基環(huán)己烷0.03g，甲酸乙酯0.08g，3-甲基戊烷0.03g，2，2-二 甲基丁烷0.03g，甲基環(huán)戊烷0.25g于10mL容量瓶中，用，二甲基甲酰胺定容至刻度搖勻。 分別稱取正庚燒〇.〇3g，環(huán)己燒0.03g，丙酮0.06g，正己燒0.05g，乙酸乙酯0.05g，乙醇0.05g 20mL容量瓶中，用#，，二甲基甲酰胺定容，搖勻。再將3-甲基戊烷，正己烷，用#，，二甲基甲 酰胺稀釋10倍，將甲基環(huán)戊烷稀釋50倍，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取制備好的儲(chǔ)備液乙醇100μ L，正己燒30yL，甲酸乙酯20yL，2，2-二甲基丁燒5yL，異己燒、甲基環(huán)己燒、3-甲基戊燒、甲基 環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取l〇yL至10mL容量瓶中，用#，，二甲基甲酰胺定 容到刻度，搖勻，得一級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的儲(chǔ)備液乙醇150yL，正己烷40yL， 甲酸乙酯30yL，2,2-二甲基丁烷10yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、 環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取20yL至10mL容量瓶中，用#，，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖 勻，得二級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的儲(chǔ)備液乙醇200yL，正己烷50yL，甲酸乙酯40μ L，2,2-二甲基丁烷15yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙 酮、乙酸乙酯分別取30yL至10mL容量瓶中，用見(jiàn)，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得三級(jí) 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的儲(chǔ)備液乙醇250yL，正己烷60yL，甲酸乙酯60yL，2，2-二甲 基丁烷20yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯 分別取40yL至10mL容量瓶中，用見(jiàn)，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勾，得四級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶 液;準(zhǔn)確移取制備好的儲(chǔ)備液乙醇300yL，正己燒70yL，甲酸乙酯100yL，2，2-二甲基丁燒25μ L，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取50yL 至10mL容量瓶中，用見(jiàn)，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勾，得五級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。將配置的 五級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按由低到高順序進(jìn)行GC-MS分析，并以各組分標(biāo)準(zhǔn)溶劑的峰面積(Y)對(duì)其 相應(yīng)的濃度(X，ng/mL)進(jìn)行線性回歸分析，得到各溶劑的工作曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn) 表1 表1溶劑的回歸方程、相關(guān)系數(shù)

測(cè)定結(jié)果:將樣品測(cè)定的分析物實(shí)際峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比，與相應(yīng)得線性回歸方程 進(jìn)行擬和，計(jì)算出分析物的含量見(jiàn)表4。
[0016] 表2茉莉浸膏樣品中溶劑殘留結(jié)果表(mg.g^1)
本實(shí)施例基本同于實(shí)施例1，僅是浸膏樣品不同，為3種杭白菊浸膏，結(jié)果見(jiàn)表3。
[0017] 表3杭白菊浸膏樣品中溶劑殘留結(jié)果表(mg.g-1) 實(shí)施例3
本實(shí)施例基本同于實(shí)施例1，僅是浸膏樣品，為3種楓槭浸膏，結(jié)果見(jiàn)表4。
[0018]表4楓槭浸膏中殘留溶劑及含量(mg.gH)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種浸膏類添加劑溶劑殘留的分析方法，其特征在于：將浸膏類添加劑樣品置于頂 空瓶中，加入％，二甲基甲酰胺(DMF)，密閉后常溫下超聲振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶 置于加熱器中加熱至一定溫度，平衡一段時(shí)間后，抽取頂空氣體，GC/MS分析浸膏類添加劑 溶劑殘留含量，具體包括以下步驟： a、 浸膏樣品收集； b、 配制具有濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:配制含有溶劑異己烷、甲基環(huán)己烷、甲酸乙酯、 3_甲基戊烷、2,2_二甲基丁烷、甲基環(huán)戊烷、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、正己烷、乙酸乙酯和乙醇 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； c、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：將具有濃度梯度的乙醇、正己烷、甲酸乙酯、2，2_二甲基丁烷、異己 烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮和乙酸乙酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液由 低到高順序進(jìn)行GC-MS分析，并以各組分標(biāo)準(zhǔn)溶劑的峰面積Y對(duì)其相應(yīng)的濃度X進(jìn)行線性回 歸分析，得到各溶劑的工作曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)； e、 樣品前處理:稱取0.1 g浸膏樣品，置于20 mL頂空瓶中，加入3 mL見(jiàn)，二甲基甲酰 胺;密閉后超聲振蕩至均一狀態(tài)，然后將頂空瓶置于加熱器中加熱至60 °C，平衡15 min后， 抽取0.40 mL頂空氣體，進(jìn)行GC/MS分析； f、 數(shù)據(jù)處理和分析，對(duì)浸膏類添加劑中的溶劑殘留進(jìn)行檢測(cè)，得到浸膏樣品的溶劑殘 留量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏類添加劑中的溶劑殘留的分析方法，其特征在于:混合標(biāo) 準(zhǔn)溶液配制方式具體如下： (1) 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制 分別稱取異己烷〇.〇3g，甲基環(huán)己烷0.03g，甲酸乙酯0.08g，3-甲基戊烷0.03g，2,2-二 甲基丁烷0.03g，甲基環(huán)戊烷0.25g于10mL容量瓶中，用，二甲基甲酰胺定容至刻度搖勻； 分別稱取正庚燒〇.〇3g，環(huán)己燒0.03g，丙酮0.06g，正己燒0.05g，乙酸乙酯0.05g，乙醇0.05g 20mL容量瓶中，用#，，二甲基甲酰胺定容，搖勻，再將3-甲基戊烷，正己烷，用#，，二甲基甲 酰胺稀釋1 〇倍，將甲基環(huán)戊烷稀釋50倍，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； (2) 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇l〇〇yL，正己烷30yL，甲酸乙酯20yL，2，2-二甲基丁 烷5yL，異己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取 10yL至10mL容量瓶中，用％，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得一級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確 移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇150yL，正己燒40yL，甲酸乙酯30yL，2，2-二甲基丁燒1 OyL，異 己烷、甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取20yL至 10mL容量瓶中，用見(jiàn)，二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得二級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制 備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇200yL，正己燒50yL，甲酸乙酯40yL，2，2-二甲基丁燒15yL，異己燒、 甲基環(huán)己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取30yL至10mL容 量瓶中，用見(jiàn)二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得三級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液乙醇250yL，正己燒60yL，甲酸乙酯60yL，2，2-二甲基丁燒20yL，異己燒、甲基環(huán) 己烷、3-甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取40yL至10mL容量瓶中， 用二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得四級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液;準(zhǔn)確移取制備好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 液乙醇300yL，正己燒70yL，甲酸乙酯100yL，2,2-二甲基丁燒25yL，異己燒、甲基環(huán)己燒、3- 甲基戊烷、甲基環(huán)戊、正庚烷、環(huán)己烷、丙酮、乙酸乙酯分別取50此至lOmL容量瓶中，用見(jiàn)， 二甲基甲酰胺定容到刻度，搖勻，得五級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏類添加劑中的溶劑殘留的分析方法，其特征在于:GC/MS 分析的具體條件如下： 色譜條件 色譜柱:HP-5，毛細(xì)管柱規(guī)格30m X 0.25mm X 0.25μπι;升溫程序：初溫35 °C，保持5min; 以5°C/min升至200°C，保持Omin;恒流流速1 .OmL/min;分流進(jìn)樣，分流比：50:1;進(jìn)樣口溫 度：250°C;載氣:He; 質(zhì)譜條件 EI源；電子能量70eV;離子源溫度250°C ;四級(jí)桿150°C ;傳輸管線溫度:250°C ;掃描模式 full scan;掃描質(zhì)量范圍m/z 34~400〇
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK106018631SQ201610673247
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年8月16日
【發(fā)明人】盧斌斌, 曾世通, 茹呈杰, 孫世豪, 毛健, 劉珊, 柴國(guó)璧, 黃明泉, 張啟東, 李鵬
【申請(qǐng)人】中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院