一種蜥蜴的飼喂染毒方法及其應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蜥蜴的飼喂染毒方法及其應用。本發(fā)明公開一種檢測樣品對動物的毒性的方法，包括如下步驟：將樣品均勻涂于黃粉蟲體表，待黃粉蟲體表的所述樣品干燥后，得到體表涂有所述樣品的黃粉蟲，再將其飼喂動物，檢測樣品對所述動物的毒性。本發(fā)明簡化了傳統(tǒng)麗斑麻蜥毒性實驗中所采用方法的諸多弊端，提高了蜥蜴毒理實驗的可操作性，該方法適用于多種藥液對蜥蜴的毒性實驗。
【專利說明】
一種蜥蜴的飼喂染毒方法及其應用
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種蜥蜴的飼喂染毒方法及其應用；特別涉及一種麗斑麻蜥的飼喂染毒方法及其應用，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002]麗斑麻蜥(Eremias argus)是我國長江以北最常見的一種小型蜥蜴，俗名麻蛇子，屬于蜥蜴目，麻蜥屬。迄今為止，全世界已發(fā)現(xiàn)蜥蜴50種左右我國現(xiàn)有9種蜥蜴，黑龍江省只有3種，其中以麗斑麻蜥為優(yōu)勢種。麗斑麻蜥是一種晝行動物。喜在晴天外出活動，陰天少見，雨天不外出活動，每天活動時間與季節(jié)有關。秋季9-11時、13-17時活動，人工條件下最適溫度25°C。每年從3月中下旬至10月中下旬，在田間捕食，主要以昆蟲和各種小動物為食，在農(nóng)田中對粘蟲、地老虎、蛾姑、金針蟲、擬地甲、葉蟬等農(nóng)業(yè)害蟲有很強的捕食能力。同時也捕食蜘蛛類等有益生物。但其捕食害蟲的種類和數(shù)量都遠遠超過益蟲，因此可以認為基本是有益的。
[0003]隨著棲息環(huán)境的缺失、寄生疾病的爆發(fā)、全球氣候變化以及環(huán)境污染的發(fā)生，麗斑麻蜥作為爬行動物中的主要物種，物種數(shù)量在急劇下降，而人類活動諸如農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、森林伐木和城市化等會造成外源化學物質(zhì)進入生態(tài)環(huán)境中，人為污染物已經(jīng)成為麗斑麻蜥的巨大威脅。因此，研究外源污染物對麗斑麻蜥的毒理學效應對保護爬行動物和維持全球生態(tài)平衡都具有重大意義。
[0004]蜥蜴的染毒方式主要有體表接觸、經(jīng)口灌胃以及腹腔注射等。其中后兩種方式均為污染物進入到蜥蜴體內(nèi)，由消化系統(tǒng)吸收，進而產(chǎn)生毒害作用，因此從作用機理方面歸為一類論述。目前，對于蜥蜴的毒性暴露試驗所采用的染毒方式一般是經(jīng)口灌胃，即試驗用蜥蜴以經(jīng)口灌注法一次性給藥10 μ L?20 μ L/g.bwt，連續(xù)7d觀察試驗用蜥蜴的死亡情況與中毒癥狀，試驗期間正常飼喂。記錄各處理組受試蜥蜴的死亡數(shù)，對試驗數(shù)據(jù)進行數(shù)理統(tǒng)計，求出LD5。值及95%置信限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術問題是對蜥蜴進行染毒。
[0006]為了解決以上技術問題，本發(fā)明提供一種檢測樣品對動物的毒性的方法，包括如下步驟:將樣品均勻涂于黃粉蟲體表，待黃粉蟲體表的所述樣品干燥后，得到體表涂有所述樣品的黃粉蟲，再將其飼喂動物，檢測樣品對所述動物的毒性；
[0007]所述動物為以黃粉蟲為食的動物，具體可為蜥蜴，如麗斑麻蜥、草原沙蜥、石龍子等。
[0008]上述方法中，所述樣品是以樣品溶液的形式均勻涂于黃粉蟲體表的；
[0009]對于化學性質(zhì)較穩(wěn)定的樣品，可配制供兩天以上使用的樣品溶液，配好后低溫保存。
[0010]上述任一所述的方法中，所述樣品溶液是將所述樣品溶于水得到的；
[0011]所述水為標準稀釋水、去離子水或蒸餾水。
[0012]上述任一所述的方法中，所述樣品溶液是將所述樣品加入助溶劑溶解后再溶于水得到的；
[0013]所述助溶劑對動物不具有毒性，具體可為二甲基亞砜。
[0014]上述任一所述的方法中，所述黃粉蟲為黃粉蟲幼蟲。
[0015]上述任一所述的方法中，所述動物為蜥蜴。
[0016]上述任一所述的方法中，所述蜥蜴為麗斑麻蜥。
[0017]為了解決以上技術問題，本發(fā)明還提供上述任一所述的方法在檢測樣品毒性中的應用。
[0018]本發(fā)明克服了傳統(tǒng)的蜥蜴染毒方式(如體表接觸、經(jīng)口灌胃以及腹腔注射等暴露途徑)的諸多缺陷，提供了一種無需人工照看，蜥蜴能自動取食的飼喂染毒方式。
[0019]本發(fā)明提供的方法與其他蜥蜴飼喂染毒方式相比，其優(yōu)點在于:
[0020]1、簡化了整個染毒過程，并且實驗中不會對蜥蜴造成機械損傷。
[0021]2、本方法適用于多種藥液的毒性實驗，使用方便靈活且成本低，可操作性強。
[0022]3、本方法可以適應小范圍的蜥蜴染毒實驗，利于實驗室條件下的推廣。
[0023]4、本方法模擬麗斑麻蜥在自然狀態(tài)下的捕食方式，符合蜥蜴的采食習慣。
【具體實施方式】
[0024]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0025]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0026]麗斑麻蜥(Eremias argus)收集自河北邢臺地區(qū)。
[0027]黃粉蟲(Tenebr1 moIitor L.)幼蟲為北京官園花鳥魚蟲市場產(chǎn)品，黃粉蟲幼蟲是指從黃粉蟲蟲卵孵化到黃粉蟲化蛹前該段時期的黃粉蟲。
[0028]下述實施例中蜥蜴的飲水可使用自來水(需要除氯)或高質(zhì)量的天然水，水的pH值應為6.5-8.0，在實驗期間保持水源和水質(zhì)的一致性。
[0029]實施例1、麗斑麻蜥的飼喂染毒I
[0030]—、馴養(yǎng)期
[0031](一 )飼喂染毒前，在照明條件為每天14h光照1h黑暗(光暗比為14h:1Oh)的環(huán)境中用黃粉蟲幼蟲飼喂麗斑麻蜥，至少7天。
[0032]( 二 )飼喂染毒前24h停止喂食，僅供飲水，每天清除糞便及食物殘渣。
[0033]馴養(yǎng)期間麗斑麻蜥的死亡率不得超過10%，否則該批蜥蜴不能用于后續(xù)實驗。
[0034]二、實驗期
[0035](—)受試物的處理
[0036]受試物為全氟十二烷酸，將一定量的全氟十二烷酸溶于不同體積的水，得到不同濃度的全氟十二烷酸溶液。
[0037](二)將不同濃度的全氟十二烷酸溶液分別均勻涂抹在等質(zhì)量的黃粉蟲幼蟲體表，并待黃粉蟲幼蟲體表的全氟十二烷酸溶液完全干燥后，得到涂有不同濃度的全氟十二烷酸溶液的黃粉蟲幼蟲。
[0038](三)將步驟一得到的停止喂食24h的麗斑麻蜥進行如下分組:
[0039]1、實驗組:每一個實驗組飼喂麗斑麻蜥步驟(二)制備的涂有某一種濃度的全氟十二烷酸溶液的黃粉蟲幼蟲。
[0040]2、空白對照組:正常飼喂麗斑麻蜥黃粉蟲幼蟲(不涂任何受試物的黃粉蟲幼蟲)。
[0041]以上實驗組各組、空白對照組每組10只蜥蜴，雌雄各半。
[0042]將以上各組麗斑麻蜥在溫度28±3°C，光暗比為14h:1Oh的環(huán)境中，連續(xù)飼喂7天，
觀察各組麗斑麻蜥的死亡情況與中毒癥狀。
[0043]結(jié)果表明，空白對照組的麗斑麻蜥日常活動情況正常，進食量和體重均沒有明顯的變化，沒有出現(xiàn)死亡。而實驗組麗斑麻蜥出現(xiàn)死亡，通過記錄實驗組各組麗斑麻蜥的死亡數(shù)，對數(shù)據(jù)進行數(shù)理統(tǒng)計，求出全氟十二烷酸對麗斑麻蜥的LD5。(半數(shù)致死量，這里具體指能殺死一半數(shù)量的麗斑麻蜥的全氟十二烷酸的劑量)值及95%置信限，得到全氟十二烷酸對麗斑麻蜥的LD5。為800mg/kg體重。
[0044]實施例2、麗斑麻蜥的飼喂染毒2
[0045]—、馴養(yǎng)期
[0046](一 )飼喂染毒前，在照明條件為每天14h光照1h黑暗(光暗比為14h:1Oh)的環(huán)境中用黃粉蟲幼蟲飼喂麗斑麻蜥，至少7天。
[0047]( 二 )飼喂染毒前24h停止喂食，僅供飲水，每天清除糞便及食物殘渣。
[0048]馴養(yǎng)期間麗斑麻蜥死亡率不得超過10%，否則該批蜥蜴不能用于后續(xù)實驗。
[0049]二、實驗期
[0050](一)受試物的處理
[0051]受試物為四氯雙酚A，將一定量的四氯雙酚A加入一定的助溶劑二甲基亞砜后溶于不同體積的水中，得到不同濃度的四氯雙酚A溶液。
[0052](二)將不同濃度的四氯雙酚A溶液分別均勻涂抹在等質(zhì)量的黃粉蟲幼蟲體表，并待黃粉蟲幼蟲體表的四氯雙酚A溶液完全干燥后，得到涂有不同濃度的四氯雙酚A溶液的黃粉蟲幼蟲。
[0053]另外，將二甲基亞砜均勻涂抹在與上述等質(zhì)量的黃粉蟲幼蟲體表，并待黃粉蟲幼蟲體表的助溶劑完全干燥后，得到涂有助溶劑的黃粉蟲幼蟲。
[0054](三)將步驟一得到的停止喂食24h的麗斑麻蜥進行如下分組:
[0055]1、實驗組:每一個實驗組飼喂麗斑麻蜥步驟(二)制備的涂有某一種濃度四氯雙酚A溶液的黃粉蟲幼蟲。
[0056]2、空白對照組:正常飼喂麗斑麻蜥黃粉蟲幼蟲(不涂任何受試物的黃粉蟲幼蟲)。
[0057]3、溶劑對照組:飼喂麗斑麻蜥步驟(二 )制備的涂有助溶劑的黃粉蟲幼蟲。
[0058]以上實驗組各組、空白對照組和溶劑對照組每組10只蜥蜴，雌雄各半。
[0059]將以上各組麗斑麻蜥在溫度28±3°C，光暗比為14h:1Oh的環(huán)境中，連續(xù)飼喂7天，觀察各組麗斑麻蜥的死亡情況與中毒癥狀。
[0060]結(jié)果表明，空白對照組和溶劑對照組的麗斑麻蜥日?；顒忧闆r正常，進食量和體重均沒有明顯的變化，沒有出現(xiàn)死亡。而實驗組麗斑麻蜥出現(xiàn)死亡，通過記錄實驗組各組麗斑麻蜥的死亡數(shù)，對數(shù)據(jù)進行數(shù)理統(tǒng)計，求出四氯雙酚A對麗斑麻蜥的LD5。(半數(shù)致死量，這里具體指能殺死一半數(shù)量的麗斑麻蜥的四氯雙酚A的劑量)值及95%置信限，得到四氯雙酚A對麗斑麻蜥的LD5。為1702mg/kg體重。
[0061]實施例1和實施例2證明，本發(fā)明提供的方法可以應用于檢測多種化學農(nóng)藥對麗斑麻蜥的急性毒性試驗，沒有對蜥蜴造成機械損傷，操作簡單，成本低，經(jīng)濟實用。
【主權項】
1.一種檢測樣品對動物的毒性的方法，包括如下步驟:將樣品均勻涂于黃粉蟲體表，待黃粉蟲體表的所述樣品干燥后，得到體表涂有所述樣品的黃粉蟲，再將其飼喂動物，檢測樣品對所述動物的毒性。2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于:所述樣品是以樣品溶液的形式均勻涂于黃粉蟲體表的。3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述樣品溶液是將所述樣品溶于水得到的。4.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述樣品溶液是將所述樣品加入助溶劑溶解后再溶于水得到的。5.根據(jù)權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于:所述黃粉蟲為黃粉蟲幼蟲。6.根據(jù)權利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述動物為蜥蜴。7.根據(jù)權利要求1-6任一所述的方法，其特征在于:所述蜥蜴為麗斑麻蜥。8.權利要求1-7任一所述的方法在檢測樣品毒性中的應用。
【文檔編號】G01N33/00GK106033084SQ201510122602
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年3月19日
【發(fā)明人】李建中, 李濟彤, 李偉, 王會利
【申請人】中國科學院生態(tài)環(huán)境研究中心