甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種甲磺酸非諾多泮及其制劑的含量及有關物質檢測控制方法，該方法采用高效液相色譜法檢測甲磺酸非諾多泮及其制劑。本發(fā)明通過大量實驗優(yōu)選出最佳流動相組成、流速、檢測波長和色譜柱等分析條件，經多次實驗驗證表明，本發(fā)明提供的甲磺酸非諾多泮及其制劑的含量及有關物質檢測控制方法，穩(wěn)定性和重復性好、分析效率高、分離度好，可以靈敏準確的定性、定量檢測甲磺酸非諾多泮及其有關物質，從而可以客觀、全面、準確的評價甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量，對甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量和保證臨床療效具有重要意義。
【專利說明】
甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物新技術領域，涉及一種用于改善高血壓癥狀的藥物甲磺酸非諾多 泮及其制劑分析測定方法，具體說是一種高效液相色譜法，采用紫外檢測器，利用特征峰吸 收，選用適當?shù)牧鲃酉?，對甲磺酸非諾多泮及其制劑進行有關物質分析和含量測定。
【背景技術】
[0002] 甲磺酸非諾多泮(Fenoidopan Mesylate)是由愛爾蘭Elan研制開發(fā)的一種D1類多 巴胺受體激動劑，于1998年最先在美國上市。甲磺酸非諾多泮作用于重癥高血壓短期治療 的藥物，是強效血管擴張劑，化學名為6-氯-2,3,4,5-四氫-1-(4-羥苯基)-[1捫-3-苯并氮 雜卓-7，8_二醇甲磺酸鹽。臨床顯示甲磺酸非諾多泮能降低血壓，增加腎血流量并促進利 尿、利鈉。甲磺酸非諾多泮副作用小，無正性肌力和擴張靜脈活性，也不通過血腦屏障而導 致中樞作用，是目前用于重癥高血壓治療效果較好的藥物。
[0003] 根據(jù)文獻報道及國家藥品標準，測定甲磺酸非諾多泮及其制劑采用高效液相分析 方法有： 美國藥典36版收載的原料含量的方法。
[0004] 照高效液相色譜法（中國藥典2015年版通則0512 )。
[0005] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用苯烷基鍵合硅膠為填充劑色譜柱；以16.33g磷酸 二氫鉀(每2000ml含2ml三乙胺，用磷酸調pH值至2.5)-甲醇（19:1)。檢測波長:225nm;流速： 1.7ml/min;進樣體積:20yl。理論塔板數(shù)按甲磺酸非諾多泮峰計算應不低于2000，甲磺酸非 諾多泮峰與雜質A峰的分離度應大于1.5;拖尾因子應小于1.3. 系統(tǒng)適用性儲備液的制備:取甲磺酸非諾多泮原料50mg，置于50ml容量瓶中，用流動相 溶解稀釋至刻度即得。
[0006] 系統(tǒng)適用性溶液的制備:取非諾多泮雜質A對照品5mg，置于50ml容量瓶中，加25ml 流動相溶解，在加5ml系統(tǒng)適用性儲備液，用流動相溶解稀釋至刻度即得。
[0007] 測定法:精密量取5ml系統(tǒng)適用性儲備液于50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至 刻度，作為供試品溶液；另取甲磺酸非諾多泮對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋 成每lml含0. lmg的溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20yl，記錄色譜圖，按外標法 以峰面積計算，既得。
[0008] 美國藥典36版收載的原料有關物質的方法。
[0009] 取本品，用流動相溶解稀釋成每lml中含lmg的溶液，作為供試品溶液;精密量取 lml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照高效液相色譜法（中國 藥典2015年版通則0512)測定。用苯烷基鍵合硅膠為填充劑色譜柱；以流動相A: 16.33g磷酸 二氫鉀(每2000ml含2ml三乙胺，用磷酸調pH值至2.5):甲醇（19:1);流動相B:甲醇，按下表 進行梯度洗脫。檢測波長:225nm;流速：1.7ml/min。精密量取供試品溶液和對照溶液各20y 1，分別注入液相色譜儀。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，雜質A峰的峰面積不得大于 0.3%，單個雜質峰的峰面積不得大于0.1%，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面 積。
美國藥典36版收載的制劑含量的方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基鍵合硅膠柱為填充劑色譜柱；以：1.38g磷酸 二氫鈉一水合物+己烷磺酸鈉1.888，加水10001^，磷酸（1-9)調口112.5)-甲醇(67:33)，檢測 波長:225nm;流速：1.0ml/min;進樣體積：lOyl。理論塔板數(shù)按甲磺酸非諾多泮峰計算應不 低于1800,甲磺酸非諾多泮峰與雜質B峰的分離度應大于1.5;拖尾因子應小于2.0。
[0011] 稀釋液的配制：取磷酸二氫鈉一水合物1.38g，加水lOOOmL，磷酸（1-9)調pH2.5， 即得。
[0012]系統(tǒng)適用性溶液的制備:取非諾多泮-雜質B 2.74mg，置于100ml容量瓶中，用稀釋 液溶解稀釋至刻度即得。
[0013]測定法:精密量取本品0.5ml，置于25ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，作 為供試品溶液;另取甲磺酸非諾多泮對照品26.3mg，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加75ml 稀釋液溶解，再加lml系統(tǒng)適用性溶液，搖勻，用稀釋液溶解至刻度，作為對照品溶液。精密 量取供試品溶液與對照品溶液各l〇yl，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
[0014] 美國藥典36版收載的制劑有關物質的方法 精密量取本品〇. 5ml，置于25ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶 液;對照品溶液同含量測定項下。照高效液相色譜法（中國藥典2015年版通則0512)測定。用 十八烷基鍵合硅膠柱為填充劑色譜柱；以：1.38g磷酸二氫鈉一水合物+己烷磺酸鈉1.88g， 加水 1000mL，磷酸（1-9)調 pH2.5)_ 甲醇(67:33)，檢測波長:22511111;流速：1.〇1111/111111。精密量 取供試品溶液和對照品溶液各l〇yl，分別注入液相色譜儀。供試品溶液的色譜圖中，記錄色 譜圖，按外標法以峰面積計算，雜質B不得過0.6%。

【發(fā)明內容】

[0015] 本發(fā)明目的在于提供一種穩(wěn)定性好、重復性好、操作簡單、理論塔板數(shù)高、雜質檢 出量高，用于甲磺酸非諾多泮及其制劑的分析測定方法。應用該方法測定治療高血壓癥狀 的藥物甲磺酸非諾多泮及其制劑，方便可行，準確度高，對人體和環(huán)境造成的危害小。
[0016] 本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案是:采用高效液相色譜法，將甲磺酸 非諾多泮及其制劑用流動相溶解稀釋成每lml中含甲磺酸非諾多泮0.04mg~0.5mg的溶液作 為供試品溶液，注入高效液相色譜儀，利用紫外檢測器，檢測波長為220~240nm，甲醇-磷酸 鹽溶液作為流動相，磷酸鹽溶液中加入拖尾劑，流動相流速為〇. 5~2.0ml/min，采用固定相 烷基鍵合硅膠色譜柱，對甲磺酸非諾多泮及其制劑的有關物質和含量進行測定。其中所述 的流動相中含甲醇的比例范圍為20%~70%，含磷酸鹽溶液的體積比例范圍為30%~80%。
[0017] 所述的拖尾劑為三乙胺，在磷酸鹽溶液中所含的體積比例范圍為0.05%~0.5%。
[0018] 在上述技術方案基礎上，所述的固定相烷基鍵合硅膠為十八烷基鍵合硅膠。
[0019] 在上述技術方案基礎上，所述的磷酸鹽溶液為磷酸二氫鉀溶液。
[0020] 在上述技術方案基礎上，所述的磷酸鹽溶液為磷酸二氫鉀溶液，其中磷酸二氫鉀 溶液的摩爾濃度為〇. 〇1~〇. 05m〇l/l，最佳為0.03mol/l。
[0021] 在上述技術方案基礎上，所述的檢測波長為225nm，供試品溶液含甲磺酸非諾多泮 為0.3mg/ml，進樣體積為20yl，流動相流速為lml/min，三乙胺在磷酸鹽溶液中所含體積比 例范圍為0.1%。
[0022] 有益效果:本發(fā)明提供的甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量檢測方法和現(xiàn)有檢測方 法相比具有以下優(yōu)點。
[0023] 本發(fā)明根據(jù)甲磺酸非諾多泮中活性成分和雜質成分的結構性質特點，通過大量實 驗篩選出最佳的流動相組成、流速、檢測波長、色譜柱、拖尾劑的使用量等分析條件，經多次 實驗驗證表明，本發(fā)明提供的甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量檢測方法可以靈敏、準確的 檢測活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服現(xiàn)有檢測方法中檢測時間長、雜質個數(shù) 檢測少等缺點，且本發(fā)明提供的質量檢測方法穩(wěn)定性好、對各分析成分的分離度好，可定 性、定量檢測分析各化合物；雜質的最低檢出量為〇.17ng，相當于供試品溶液的濃度為 0.0028%。因此，本發(fā)明提供的甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量檢測方法可以客觀、全面、準 確的評價甲磺酸非諾多泮及其制劑的質量，對控制甲磺酸非諾多泮注射液的質量和保證臨 床療效具有重要意義。
【附圖說明】
[0024]圖1為色譜條件下樣品的色譜圖。
[0025] 圖2為色譜條件下系統(tǒng)適用性的色譜圖。
【具體實施方式】
[0026] 儀器:一套簡單高效液相色譜儀，包括液相栗、紫外檢測器、進樣器 試劑:磷酸二氫鉀(分析純）、甲醇(色譜純）、三乙胺(色譜純） 色譜柱:十八烷基鍵合硅膠色譜柱 檢測波長：225nm 以下實施說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明 實施例1:有關物質 照高效液相色譜法（中國藥典2015版通則0512 )測定。
[0027] 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相A為 0.03mol/L的磷酸二氫鉀溶液(每1000ml含lml三乙胺，用磷酸調pH值至3.5);流動相B為甲 醇，梯度洗脫，檢測波長為225nm。取甲磺酸非諾多泮對照品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶 中，加稀釋液(流動相A:流動相B=76:24,下同）稀釋至刻度，搖勻，即得系統(tǒng)適用性原液。再 取非諾多泮-雜質A、非諾多泮-雜質B、非諾多泮-環(huán)合物各5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加 入約25mL稀釋液稀釋，溶解，再加入5mL的系統(tǒng)適用性原液，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻，即 得系統(tǒng)適用性溶液。非諾多泮-雜質A峰與非諾多泮峰的分離度應大于1.5,理論塔板數(shù)按非 諾多泮峰計算應不低于2000。
[0028] 測定法取本品約30mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作 為供試品溶液。精密量取供試品溶液lml，置100ml的量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作 為對照溶液。取對照溶液20yl注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約 為滿量程的15%~20%;取供試品溶液20yl，注入液相色譜儀，供試品溶液的色譜圖中如顯雜 質峰，非諾多泮雜質A的峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.3倍(0.3%)，非諾多泮雜質B 的校正后的峰面積(校正因子為1.3)不得大于對照溶液主峰面積的0.1倍(0.1%)，其他單個 雜質的峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.1倍(0.1%)，校正后的所有雜質峰面積的和 不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。
[0029]實施例2:方法比較 照高效液相色譜法（中國藥典2015版通則0512 )測定。
[0030] 用實施例1中系統(tǒng)適用性溶液，采用美國藥典原料有關物質檢測方法和本發(fā)明的 方法進行檢測。
[0031] 如圖1和圖2所示；圖1為本說明方法，圖2為美國藥典原料有關物質檢測方法?？梢?看出：圖1中的出峰順序為非諾多泮-雜質B(5.231min)、非諾多泮-雜質A(9.879min)、非諾 多泮（10.801min)、非諾多泮-環(huán)合物（21.447min);圖2中的出峰順序為非諾多泮-雜質B (7.501min)、非諾多泮(20.252min)、非諾多泮-雜質A(27.778min)。本方法相比于美國藥典 方法，能有效檢出非諾多泮-環(huán)合物雜質，且主峰非出峰時間早，跑樣的時間短，可以節(jié)省流 動相及時間，減少環(huán)境污染。
【主權項】
1. 甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在于：將甲磺酸非諾多 泮及其制劑用流動相溶解稀釋成每lml中含甲磺酸非諾多泮0.02mg~0.5mg的溶液作為供試 品溶液，注入高效液相色譜儀，進樣體積為5~100μΙ，利用紫外檢測器，檢測波長為220~ 240nm，甲醇-磷酸鹽溶液作為流動相，流動相中含甲醇的比例范圍為20%~70%，含磷酸鹽溶 液的體積比例范圍為30%~80%，磷酸鹽溶液中加入拖尾劑，拖尾劑為三乙胺，在磷酸鹽溶液 中所含的體積比例范圍為〇. 05%~0.5%，流動相流速為0.5~2.0ml /min，采用固定相烷基鍵合 硅膠色譜柱，對甲磺酸非諾多泮及其制劑的有關物質和含量進行測定。2. 按照權利要求1所述，甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在 于:紫外檢測器的檢測波長為225nm，供試品溶液含甲磺酸非諾多泮為0.3mg/ml，進樣體積 為20μ1，流動相流速為lml/min，三乙胺在磷酸鹽溶液中所含體積比例范圍為0.1%。3. 按照權利要求1所述，甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在 于:所述的固定相烷基鍵合硅膠為十八烷基鍵合硅膠。4. 按照權利要求1所述，甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在 于：甲醇-磷酸鹽溶液作為流動相，所述的磷酸鹽溶液為磷酸二氫鉀溶液。5. 按照權利要求4所述，甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在 于：甲醇-磷酸鹽溶液作為流動相，所述的磷酸鹽溶液為磷酸二氫鉀溶液，其中磷酸二氫鉀 溶液的摩爾濃度為〇. 01~〇. 〇5mol/l。6. 按照權利要求5所述，甲磺酸非諾多泮及其制劑的一種高效液相分析方法，其特征在 于，所述磷酸二氫鉀溶液的摩爾濃度為〇. 〇3mol/l。
【文檔編號】G01N30/02GK106053639SQ201610358810
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】施猛, 任亞東, 夏春森, 肖艷, 劉恩桂
【申請人】揚子江藥業(yè)集團廣州海瑞藥業(yè)有限公司