一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，屬于新型生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。石墨炔的sp雜化結(jié)構(gòu)，使其具有無順反異構(gòu)體和高共軛等優(yōu)點(diǎn)。同時利用甲苯胺藍(lán)與石墨炔良好的π?π共軛作用，實(shí)現(xiàn)了信號分子的牢固固定，減少了因結(jié)合不穩(wěn)定造成的信號誤差。因此，基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器實(shí)現(xiàn)了對真菌毒素的靈敏檢測。
【專利說明】
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種基于石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，采用石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料作為檢測基底材料，增強(qiáng)導(dǎo)電性的同時，又使得信號分子甲苯胺藍(lán)成功固定在傳感表面上。羥丙基殼聚糖的使用，既穩(wěn)固了基底材料，又使得抗體分子通過戊二醛成功交聯(lián)在傳感表面上，實(shí)現(xiàn)了真菌毒素免疫傳感器的構(gòu)建，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]真菌毒素是真菌在食品或飼料里生長所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，對人類和動物都有害。食用真菌毒素污染的食品，會導(dǎo)致白細(xì)胞缺乏病，嚴(yán)重者會導(dǎo)致癌變。所以，對于食品中真菌毒素的檢測，刻不容緩。
[0003]目前已有的真菌毒素的檢測方法很多，但是大多都是需要大型設(shè)備和專業(yè)的操作人員。電化學(xué)免疫傳感器，因其操作方便，簡單易行，可以實(shí)施在線檢測等特點(diǎn)，能夠適用于食品藥品中真菌毒素的測試。
[0004]本發(fā)明采用石墨炔與甲苯胺藍(lán)良好的31-31共軛作用形成的復(fù)合材料為基底材料，實(shí)現(xiàn)了信號分子的高通量負(fù)載，通過羥丙基殼聚糖的修飾，減少了因結(jié)合不穩(wěn)定造成的信號誤差。實(shí)現(xiàn)了對真菌毒素的靈敏檢測。該方法具有成本低、特異性好、操作方便、檢測快速等優(yōu)點(diǎn)，而且制備過程較為簡單，有效克服了目前真菌毒素檢測方法的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的之一是基于石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料為基底材料，構(gòu)建了一種無酶無標(biāo)記，超靈敏的電化學(xué)免疫傳感器。
[0006]本發(fā)明的目的之二是將所構(gòu)建的傳感器用于真菌毒素的檢測，實(shí)現(xiàn)了對多種真菌毒素的超靈敏檢測。
[0007]本發(fā)明的目的之三是將所構(gòu)建的傳感器用于食品藥品等實(shí)際樣品中真菌毒素的檢測，實(shí)現(xiàn)了靈敏檢測。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
1.一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用(I)用Al2O3拋光粉將直徑4 mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈；將5?8 yU0.4?4mg/mL石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加3?8uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%?5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加I?5uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%?1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗體，5?8 UL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干；
(5)滴加5?8 yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。
[0009]2.石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的制備
將I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺藍(lán)TB加入0.5 ~ 5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復(fù)合材料石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB。
[0010]3.一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的真菌毒素，選自下列之一:嘔吐霉素，玉米赤霉稀酮，伏馬毒素，黃曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
[0011]本發(fā)明的有益成果
(I)石墨炔的使用，實(shí)現(xiàn)了對傳感器底層比表面積成功放大，同時能夠很好的促進(jìn)電極表面的電子傳遞。
[0012](2)石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的使用，使得信號分子得以增加，擴(kuò)展了傳感器的線性范圍，降低了檢出限。
[0013](3)羥丙基殼聚糖的使用，增強(qiáng)了傳感器表面GyOTB復(fù)合材料的牢固固載，同時實(shí)現(xiàn)了對抗體的化學(xué)鍵連接，實(shí)現(xiàn)了超靈敏穩(wěn)定檢測。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈；將5 yU0.4mg/mL石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加3nL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加IuL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加5UL真菌毒素抗體，5 uL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加5yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0015]實(shí)施例2
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將7 pL,3 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加6nL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加4uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.7%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加7yL真菌毒素抗體，7 yL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加7yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0016]實(shí)施例3 一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
(1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將8 pL,4 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；
(2)滴加8nL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(3)滴加5uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；
(4)依次滴加8yL真菌毒素抗體，8 yL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干。
[0017]實(shí)施例4
石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的制備
將I mg的石墨炔Gy和0.5 mg的甲苯胺藍(lán)TB加入0.5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復(fù)合材料石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB。
[0018]實(shí)施例5
石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的制備
將5 mg的石墨炔Gy和2 mg的甲苯胺藍(lán)TB加入3 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復(fù)合材料石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB。
[0019]實(shí)施例6
石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料的制備
將10 mg的石墨炔Gy和5 mg的甲苯胺藍(lán)TB加入5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復(fù)合材料石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB。
[0020]實(shí)施例7
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的真菌毒素為嘔吐霉素。
[0021 ] 實(shí)施例8
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的真菌毒素為伏馬毒素。
[0022]實(shí)施例9
一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的真菌毒素為赭曲霉毒素。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟: (1)用Al2O3拋光粉將直徑4mm的玻碳電極打磨平滑，超純水清洗干凈;將5?8汕、0.4?4 mg/mL石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜； (2)滴加3?8uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%?5%的羥丙基殼聚糖在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干； (3)滴加I?5uL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%?1%的戊二醛水溶液在電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干； (4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗體，5?8 uL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4 0C冰箱中晾干； (5)滴加5?8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同濃度的真菌毒素抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中晾干。2.如權(quán)利要求1所述的一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的石墨炔@甲苯胺藍(lán)GyOTB復(fù)合材料，其特征在于，包括以下步驟: 將I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺藍(lán)TB加入0.5 ~ 5 mL的超純水中，室溫振蕩24 h，得到復(fù)合材料石墨炔O甲苯胺藍(lán)GyOTB。3.如權(quán)利要求1所述的一種基于石墨炔甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料的真菌毒素免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的真菌毒素，選自下列之一:嘔吐霉素，玉米赤霉烯酮，伏馬毒素，黃曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
【文檔編號】G01N33/543GK106053789SQ201610342904
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】任祥, 魏琴, 杜斌, 王耀光, 張勇, 孫旭, 范大偉
【申請人】濟(jì)南大學(xué)