用于量化分析物的方法以及配置成實施該方法的自動分析裝置的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于確定樣品中的分析物的量的新穎方法，該方法包括：初始純化步驟，該純化步驟在第一容器內(nèi)發(fā)生，所述純化步驟包括以下步驟：在第一容器內(nèi)使樣品、脫脂劑以及涂覆有第一分析物結(jié)合配偶體的磁性顆粒混合、溫育混合物、從混合物中除去未結(jié)合的試劑，以及將在洗脫溶液中結(jié)合的分析物洗脫；轉(zhuǎn)移步驟，包括將一定體積的包括分析物的洗脫溶液從第一容器轉(zhuǎn)移至第二容器；以及量化步驟，量化步驟在第二容器內(nèi)發(fā)生，該量化步驟由量化所述洗脫溶液中的分析物的步驟組成。
【專利說明】
用于量化分析物的方法以及配置成實施該方法的自動分析 裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于確定樣品中的分析物的量的新穎方法，更具體地涉及一種利 用免疫測定的方法和配置成實施該方法的自動分析裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 本發(fā)明涉及一種用于量化樣品中存在的分析物的量的方法，特別是使得能夠量化 分析物而無需預(yù)先進行復(fù)雜費力的樣品純化分析前階段的方法。
[0003] 本發(fā)明還涉及確定用于診斷疾病的分析物的量的方法。
[0004] 簡化提取和分離方法是改進方法的關(guān)鍵特征。要求單獨進行純化步驟會顯著延長 該方法的時間，且由于存在至少一個手動操作樣品的步驟，因此不僅可能在確定濃度時引 入潛在誤差，而且可能使樣品的可跟蹤性產(chǎn)生潛在誤差。
[0005] 從樣品中除去化合物(例如，脂類)常常需要沉淀步驟，沉淀步驟需要許多手動操 作和離心分離。量化之前進行的分析物純化步驟中的一個步驟可能需要使用有機溶劑，有 機溶劑可有毒且可能需要蒸發(fā)設(shè)備，蒸發(fā)設(shè)備在臨床生化實驗室中使用起來很不方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明旨在克服與現(xiàn)有方法關(guān)聯(lián)的問題。
[0007] 因此，本發(fā)明滿足對用于量化樣品中的分析物的一種簡單有效的方法的需求。其 基于消除了脫脂-提取-純化的復(fù)雜手動操縱。本發(fā)明已實現(xiàn)了使得能夠大大降低完成時間 的方法，該方法比之前的方法更有效，因此更具成本效益，且允許完全追蹤所有操作，因此 更適于臨床實驗室的常規(guī)使用。
[0008] 本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)，即一步式純化(其中，在同一容器內(nèi)混合樣品、脫脂劑和分 析物結(jié)合配偶體)有效地工作。
[0009]如此，在第一方面，本發(fā)明涉及一種用于量化樣品中的分析物的方法，包括：
[0010] -初始純化步驟，在第一容器內(nèi)發(fā)生，包括以下步驟：
[0011] a)在第一容器內(nèi)混合樣品、脫脂劑和涂覆有第一分析物結(jié)合配偶體的第一磁性顆 粒，
[0012] b)溫育容納第一容器內(nèi)的混合物，以沉淀樣品中所包含的脂類并使樣品中包含的 分析物結(jié)合至第一分析物結(jié)合配偶體，
[0013] c)將第一容器置于磁場中，以通過磁力將第一磁性顆粒吸引至第一容器的內(nèi)壁部 分，
[0014] d)從第一容器中容納的混合物中除去未結(jié)合的試劑，
[0015] e)在洗脫溶液中洗脫結(jié)合的分析物以將分析物與第一分析物結(jié)合配偶體分離，
[0016] -轉(zhuǎn)移步驟，包括以下步驟：
[0017] f)將第一容器置于磁場中，以通過磁力將第一磁性顆粒吸引至第一容器的內(nèi)壁部 分，
[0018] g)將一定體積的包括分析物的洗脫溶液從第一容器轉(zhuǎn)移至第二容器，以及
[0019] -量化步驟，該步驟在第二容器內(nèi)發(fā)生，由量化所述洗脫溶液中的分析物的步驟組 成。
[0020] 本發(fā)明可用于任何人類含水生物介質(zhì)，例如血液、血清或血漿。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的方面，第一容器和第二容器中的至少之一為透明小容器(cuvette， 小玻璃管）、試管或類似的器皿。第一容器和第二容器中的每一個都可以是透明小容器、試 管或類似的器皿。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的方面，第一容器和第二容器中的至少一個由玻璃或塑料制成。第一 容器和第二容器中的每一個均可由玻璃或塑料制成。
[0023] 所述轉(zhuǎn)移步驟可使用諸如采樣和移液裝置(pipetting device，吸液裝置）的工具 進行。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，溫育步驟包括樣品脫脂步驟。
[0025] 應(yīng)注意，有利的是，脫脂劑有利地配置成有利于樣品中所包含的脂類沉淀。
[0026] 脫脂劑可以是聚陰離子分析物，例如硫酸葡聚糖、磷鎢酸，或肝素(在存在II族陽 離子的情況下，例如鎂、錳或鈣）。
[0027] 這種與脫脂劑的溫育允許脂類沉淀（由于脫脂劑），并允許分析物與磁性顆粒上涂 覆的第一分析物結(jié)合配偶體結(jié)合。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明的方面，除去步驟包括洗滌步驟，洗滌步驟包括利用洗滌溶液洗滌第 一磁性顆粒。
[0029] 在本發(fā)明的特定方面，由將堿性溶液(basic solution)(例如NaOH，例如0.3N至 0.6N NaOH)加入包括結(jié)合的分析物的第一容器而形成洗脫溶液。然后，將中和溶液(例如， 檸檬酸，更具體地說是〇. 3至0.6M梓檬酸)和方法緩沖液加入第一容器內(nèi)。
[0030] 在本發(fā)明的更特定的方面，方法緩沖液包括在MOPS緩沖液中的BSA、p〇lypep、甘露 醇、蔗糖、氚核-抗氧化劑混合物、抗壞血酸鈉 、tro Iox以及碳酸氫鈉。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的方面，可使用移液工具向第一容器和第二容器內(nèi)加入以及從第一容 器和第二容器除去任何液體(溶液、緩沖液、洗滌溶液等中的試劑）。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的一個方面，分析物可以是任何維生素 D代謝物，更優(yōu)選是1，25_二羥 基維生素 D(1，25D)，或類固醇(例如醛固酮、雄激素、雌激素、孕激素或膽固醇）。維生素 D代 謝物也可以是25-羥基維生素 D，例如25-羥基維生素02或25_羥基維生素 D3。
[0033]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，分析物為1，25_二羥基維生素 D(1，25D)。該分析物在血液 中的濃度非常低，且由于其標準濃度是10至100微微克/毫升（picogrammes/ml (皮克/毫 升）），因此其測定很具挑戰(zhàn)性。
[0034]人類血液中的1，25D的濃度可非常好地指示人體維生素 D新陳代謝的有效性，并且 可很好地指示慢性腎病。
[0035]已經(jīng)很難開發(fā)用于確定1，2?水平的方法，這主要是因為血液中的1，2?的濃度非 常低。
[0036]眾所周知，在自動化系統(tǒng)上或利用手動方法進行分析之前，需要費力進行多次提 取步驟來測量1，25D。如今市場上可用的現(xiàn)有提取方法需要大量設(shè)備，包括純化柱、旋轉(zhuǎn)器、 離心分離機和氮蒸發(fā)器。常常需要溶劑。樣品的陽性鑒定會受損。
[0037] 分析物的量化可通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的任何技術(shù)進行。本發(fā)明總體上涉 及以下用于量化分析物的技術(shù)：
[0038] -臨床化學或生物化學測試，該測試使用血清或其它含水生物介質(zhì)進行，且其中利 用的測量原理基本上是分光光度法；
[0039 ]-免疫測定，根據(jù)不同的技術(shù)方法(例如，ELI SA、EIA)進行，測量通過分光光度法、 熒光或CLIA(通過發(fā)光)進行。
[0040] 在本發(fā)明的特定方面，通過免疫測定來量化分析物，利用第二分析物結(jié)合配偶體 來進行所述免疫測定。
[0041] 在本發(fā)明的特定方面，第一分析物結(jié)合配偶體和第二分析物結(jié)合配偶體中的至少 一種（以及例如第一分析物結(jié)合配偶體和第二分析物結(jié)合配偶體中的每一個)可以是多克 隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、工程化或人源化抗體、scFV或Fab片段。
[0042] 在本發(fā)明的特定方面，第一分析物結(jié)合配偶體和第二分析物結(jié)合配偶體是相同的 或不同的。
[0043] 用于量化低濃度樣品中存在的分析物的優(yōu)選方法之一是通過競爭結(jié)合方法。當分 析物為小分子且不會有多種結(jié)合的可能性時，需要該競爭結(jié)合方法。合適的競爭結(jié)合方法 采用多種形式，且為本領(lǐng)域中的技術(shù)人員所熟知。典型的競爭結(jié)合方法將包括使分析物結(jié) 合配偶體與分析物的標記形式和懷疑包含相同分析物的未標記形式的樣品接觸。
[0044] 被發(fā)現(xiàn)的與分析物結(jié)合配偶體結(jié)合的標記分析物的量指示樣品中的未標記分析 物的比例。替代地，競爭結(jié)合方法可包括提供與分析物的標記形式結(jié)合的分析物結(jié)合配偶 體，將懷疑包含未標記形式的分析物的樣品添加至分析物結(jié)合配偶體，并測量指示存在的 未標記分析物的量的被取代標記分析物的量。
[0045] 在更具體和優(yōu)選的方面，本發(fā)明的方法能夠以完全自動化的方式進行。根據(jù)本發(fā) 明的更優(yōu)選的方面，方法通過自動分析裝置進行，例如自動免疫測定分析儀。
[0046] 該方法固有的創(chuàng)新在于分析前階段在相同儀器上完全自動化，而非手動進行或在 分離的設(shè)備上進行。
[0047] 在本發(fā)明的一個方面，提供、移液、溫育和混合步驟均由自動分析裝置管控。
[0048] 本發(fā)明進一步涉及一種配置成實施根據(jù)本發(fā)明的方法的自動分析裝置，更具體地 涉及一種自動分析裝置，其包括：
[0049] -多個容器，
[0050] -轉(zhuǎn)子，具有基本豎直的旋轉(zhuǎn)軸線并繞其旋轉(zhuǎn)軸線可旋轉(zhuǎn)地受驅(qū)動，該轉(zhuǎn)子界定了 徑向向外開口的腔，
[0051] -裝載裝置，其適于將容器裝載在轉(zhuǎn)子的腔內(nèi)，
[0052] -至少一個采樣和移液裝置，適于向容置在轉(zhuǎn)子的腔內(nèi)的容器提供試劑和樣品， [0053]-磁性沉降和洗滌模塊，適于容置從轉(zhuǎn)子內(nèi)取出的容器并生成磁場，磁性沉降和洗 滌模塊包括適于從容置在磁性沉降和洗滌模塊內(nèi)的容器吸取流體的移液器具，
[0054]-磁性吸引模塊，也稱為磁性分離模塊，包括適于容置從轉(zhuǎn)子內(nèi)取出的容器的向上 開口外殼，以及位于向上開口外殼附近的第一磁場發(fā)生器，以及
[0055]-量化裝置，適于容置從轉(zhuǎn)子內(nèi)取出的容器并對所述取出的容器內(nèi)容納的分析物 進行量化，
[0056]其中，采樣和移液裝置適于將一定體積的溶液從容置在磁性吸引模塊內(nèi)的容器轉(zhuǎn) 移至容置在轉(zhuǎn)子內(nèi)的其它容器。
[0057]因此，一旦已利用洗脫溶液使第一容器內(nèi)容納的分析物與磁性顆粒分離，轉(zhuǎn)子便 將第一容器移動入磁性吸引模塊，磁性吸引模塊將第一容器內(nèi)容納的磁性顆粒吸引至第一 容器的內(nèi)壁。然后，采樣和移液裝置從第一容器吸取一定體積的無磁性顆粒的洗脫溶液，并 將該體積的洗脫溶液分配入容置在轉(zhuǎn)子內(nèi)的第二容器。
[0058] 該第二容器專門用于量化溶液中的分析物。洗脫溶液中的分析物的濃度通過本領(lǐng) 域的技術(shù)人員所熟知的方法(例如，競爭結(jié)合方法)來測量，當分析物的分子很小且無多種 結(jié)合的可能性時，需要用競爭結(jié)合方法。合適的競爭結(jié)合方法采用多種形式，且為本領(lǐng)域中 的技術(shù)人員所熟知。
[0059] 在本發(fā)明的一個方面自動分析裝置包括配置成控制自動分析裝置的若干裝置和 模塊以實施根據(jù)本發(fā)明的方法的控制單元。
[0060] 在本發(fā)明的一個方面，第一磁場發(fā)生器位于向上開口外殼的旁邊。
[0061] 在本發(fā)明的一個方面，第一磁場發(fā)生器配置成沿容置在向上開口外殼內(nèi)的容器的 側(cè)壁部分延伸。
[0062] 在本發(fā)明的一個方面，第一磁場發(fā)生器配置成將容置在向上開口外殼內(nèi)的容器所 容納的磁性顆粒吸引至所述容器的內(nèi)壁部分，且有利地的是吸引至容器的內(nèi)側(cè)壁部分。
[0063] 在本發(fā)明的一個方面，磁性沉降和洗滌模塊包括設(shè)置成產(chǎn)生磁場的第二磁場發(fā)生 器。
[0064] 在本發(fā)明的一個方面，移液器具適于向容置在磁性沉降和洗滌模塊內(nèi)的容器提供 洗滌溶液。
[0065] 在本發(fā)明的一個方面，至少一個采樣和移液裝置適于為容置在轉(zhuǎn)子內(nèi)的容器提供 堿性溶液以及方法緩沖液和中和溶液。
[0066] 在本發(fā)明的一個方面，至少一個采樣和移液裝置適于從容置在磁性吸引模塊內(nèi)的 容器吸取一定體積的包含分析物的洗脫溶液，并將該體積的洗脫溶液分配入容置在轉(zhuǎn)子內(nèi) 的其它容器。
[0067] 在本發(fā)明的一個方面，至少一個采樣和移液裝置適于從第一存儲區(qū)域和第二存儲 區(qū)域采樣待分析樣品和試劑，并將所得采樣轉(zhuǎn)移入位于轉(zhuǎn)子的腔內(nèi)的容器。
[0068] 在本發(fā)明的一個方面，磁性吸引模塊位于廢物容器上方。
[0069] 在本發(fā)明的一個方面，向上開口外殼向外并向內(nèi)開口，且尤其是徑向向外和向內(nèi) 開口。
[0070] 在本發(fā)明的一個方面，量化裝置配置成測量或確定取出的容器內(nèi)容納的分析物的 量，例如濃度。
[0071] 在本發(fā)明的一個方面，量化裝置配置成通過結(jié)合測定(例如，免疫測定或競爭結(jié)合 測定)測量或確定分析物的量，例如濃度。
[0072] 在本發(fā)明的一個方面，量化裝置為用于顯影并讀取發(fā)光的發(fā)光計。量化裝置可包 括適于容置從轉(zhuǎn)子中取出的容器的不透光室，和適于量化產(chǎn)生的發(fā)光的光電倍增管。
【附圖說明】
[0073] 現(xiàn)在將參考附圖進一步對本發(fā)明進行詳細說明，在附圖中：
[0074] 圖1是根據(jù)本發(fā)明的自動分析裝置的透視圖。
[0075] 圖2是圖1中的自動分析裝置的局部透視圖。
[0076] 圖3是圖1中的自動分析裝置的局部透視圖。
[0077] 圖4是示出根據(jù)本發(fā)明的用于確定樣品中的分析物的量的方法的圖示。
【具體實施方式】
[0078] 圖1至3描繪了根據(jù)本發(fā)明的用于確定樣品中的分析物的量的自動分析裝置2。
[0079] 自動分析裝置2包括用于存儲試劑和待分析樣品的第一部分3,和用于進行測量和 分析的第二部分4。第一部分3包括第一存儲區(qū)域3a，其適于容置樣品盒5,每一個樣品盒均 包括樣品載體5a和定位在樣品載體5a上的樣品貯存器5b;和第二存儲區(qū)域3b，其適于容置 試劑盒6,每一個試劑盒均包括試劑載體6a和定位在試劑載體6a上的試劑貯存器6b。樣品貯 存器內(nèi)容納的樣品可以是血液樣品、血清或血漿。試劑貯存器內(nèi)容納的試劑可以是洗脫溶 液、中和溶液、緩沖液、脫脂劑，或包含枝接(grafted，接枝)或涂覆有分析物結(jié)合配偶體的 磁性顆粒的溶液，例如包含用與待量化的分析物對應(yīng)的抗體官能化的磁性納米顆粒的溶 液。
[0080] 自動分析裝置2進一步包括轉(zhuǎn)子或傳送帶7,轉(zhuǎn)子或傳送帶具有基本豎直的旋轉(zhuǎn)軸 線且可繞其旋轉(zhuǎn)軸線旋轉(zhuǎn)地受電機(未示出)驅(qū)動。轉(zhuǎn)子7界定了徑向向外開口的腔8。
[0081] 自動分析裝置2進一步包括裝載裝置9,裝載裝置適于存儲透明反應(yīng)小容器11并將 所述透明反應(yīng)小容器11裝載在轉(zhuǎn)子7的腔8內(nèi)。
[0082] 自動分析裝置2還包括采樣和移液裝置13,采樣和移液裝置適于從容置在第一存 儲區(qū)域3a內(nèi)的樣品盒5中采樣樣品，并從容置在第二存儲區(qū)域3b內(nèi)的試劑盒6內(nèi)采樣試劑。 采樣和移液裝置13還適于將采樣的樣品和試劑分配在容置在轉(zhuǎn)子7的腔8內(nèi)的透明反應(yīng)小 容器11內(nèi)。
[0083]具體地，采樣和移液裝置13包括具有采樣針15的采樣頭部14。采樣和移液裝置13 進一步包括可相對于自動分析裝置2的殼體沿第一水平方向Dl移動的第一支撐構(gòu)件16,以 及由第一支撐構(gòu)件16支撐且可相對于第一支撐構(gòu)件16沿與第一水平方向Dl正交的第二水 平方向D2移動的第二支撐構(gòu)件17。采樣頭部14由第二支撐構(gòu)件17支撐，且可相對于第二支 撐構(gòu)件17沿豎直方向D3移動。
[0084] 采樣和移液裝置13進一步包括適于使第一支撐構(gòu)件16沿第一水平方向Dl移位的 第一移位工具18、適于使第二支撐構(gòu)件17沿第二水平方向D2移位的第二移位工具19,以及 適于使采樣頭部14沿豎直方向D3移位的第三移位工具21。
[0085] 有利的是，采樣頭部14適于使采樣針15擺動。這使得當采樣針15位于透明反應(yīng)小 容器11內(nèi)時能夠混合透明反應(yīng)小容器11的內(nèi)容物。
[0086] 自動分析裝置2進一步包括至少一個或多個相對于轉(zhuǎn)子7徑向定向的磁性沉降和 洗滌模塊23。每一個磁性沉降和洗滌模塊23均包括沉降部分24,其具有設(shè)置成用于生成磁 場的磁場發(fā)生器，例如永久磁鐵或電磁鐵；以及移液器具25,設(shè)置為用于從定位在沉降部分 24內(nèi)的透明反應(yīng)小容器11中移出液體內(nèi)容物，并將洗滌溶液引入所述透明反應(yīng)小容器11 內(nèi)。
[0087] 自動分析裝置2還包括第一線性致動器(未示出），每一個第一線性致動器均與磁 性沉降和洗滌模塊23關(guān)聯(lián)。每一個第一線性致動器均適于在離心徑向運動中從轉(zhuǎn)子7中取 出透明反應(yīng)小容器11，并將取出的透明反應(yīng)小容器11定位在相應(yīng)磁性沉降和洗滌模塊23的 磁場發(fā)生器旁邊。
[0088] 因此，當將包含涂覆有分析物結(jié)合配偶體的磁性顆粒的透明反應(yīng)小容器11定位在 磁性沉降和洗滌工位23中時，相應(yīng)的磁場發(fā)生器將所述透明反應(yīng)小容器11內(nèi)容納的磁性顆 粒吸引至透明反應(yīng)小容器11的內(nèi)壁部分，且除了磁性顆粒和與所述磁性顆粒結(jié)合的分析物 之外，透明反應(yīng)小容器11的其它內(nèi)容物可被移液器具25抽吸至所述磁性沉降和洗滌工位23 的外部。然后，移液器具將洗滌溶液引入透明反應(yīng)小容器11內(nèi)以洗滌磁性顆粒。一預(yù)定時間 后，所述洗滌溶液被移液器具25抽吸至外部。一旦透明反應(yīng)小容器11已經(jīng)過處理，其便通過 與所述磁性沉降和洗滌模塊關(guān)聯(lián)的第一線性致動器的向心運動被再次引到轉(zhuǎn)子7上。
[0089]自動分析裝置2進一步包括磁性吸引模塊26，也稱為磁性分離模塊，其相對于轉(zhuǎn)子 7徑向定向并位于采樣和移液裝置13附近。磁性吸引模塊26包括:殼體，其界定了適于容置 從轉(zhuǎn)子7取出的透明反應(yīng)小容器11的向上開口外殼27;以及磁場發(fā)生器28，例如永久磁鐵或 電磁鐵，安裝在殼體上并位于向上開口外殼27附近。自動分析裝置2包括第二線性致動器 (未示出）與磁性吸引模塊26關(guān)聯(lián)，并適于在離心徑向運動中將透明反應(yīng)小容器11從轉(zhuǎn)子7 中取出并將取出的透明反應(yīng)小容器11定位在向上開口外殼27內(nèi)，即磁場發(fā)生器28附近。有 利的是，向上開口外殼27也是徑向向外和向內(nèi)開口。
[0090] 應(yīng)注意，采樣和移液裝置13適于從容置在磁性吸引模塊26的向上開口外殼27內(nèi)的 透明反應(yīng)小容器11中采樣一定體積的內(nèi)容物，并將所述體積的內(nèi)容物分配在容置在轉(zhuǎn)子7 內(nèi)的透明反應(yīng)小容器內(nèi)。
[0091] 因此，當將包含洗脫溶液、分析物和磁性顆粒的透明反應(yīng)小容器11定位在磁性吸 弓丨模塊26中時，相應(yīng)的磁場發(fā)生器28將所述透明反應(yīng)小容器11內(nèi)容納的磁性顆粒吸引至透 明反應(yīng)小容器11的內(nèi)壁部分，且除了磁性顆粒之外，透明反應(yīng)小容器11的其它內(nèi)容物被采 樣和移液裝置13抽吸并分配至容置在轉(zhuǎn)子7內(nèi)的其它的透明反應(yīng)小容器11中。
[0092] 優(yōu)選地，磁性吸引模塊26位于廢物容器上方，并配置成使得當有透明反應(yīng)小容器 11被新引入向上開口外殼27內(nèi)時，所述新引入的透明反應(yīng)小容器11將之前引入的透明反應(yīng) 小容器11推至向上開口外殼27外部。然后，所述被推動的透明反應(yīng)小容器11在重力作用下 落入廢物容器內(nèi)。
[0093] 自動分析裝置2進一步包括適于量化透明反應(yīng)小容器11內(nèi)容納的分析物的量化裝 置29。量化裝置29優(yōu)選為用于顯影并讀取發(fā)光的發(fā)光計。值得注意的是，量化裝置29可包括 適于容置從轉(zhuǎn)子7中取出的透明反應(yīng)小容器11的不透光室31，以及已知的適于量化產(chǎn)生的 發(fā)光量的光電倍增管(未示出）。該測量取決于待測量分析物的濃度。一旦完成測量，透明反 應(yīng)小容器11便通過量化裝置29所配備的線性致動器的運動從量化裝置29中被取出，并被搬 移至廢物容器內(nèi)。
[0094]自動分析裝置2還包括配置成控制自動分析裝置2的上述裝置和模塊的控制單元 31〇
[0095] 自動分析裝置2進一步包括沖洗和凈化系統(tǒng)(未示出），其適于沖洗和凈化采樣和 移液裝置13的采樣針15。
[0096] 圖4描繪了根據(jù)本發(fā)明的用于確定樣品中的分析物的量的方法。所述方法由根據(jù) 本發(fā)明的自動分析裝置2進行。
[0097] 根據(jù)本發(fā)明的用于確定樣品中的分析物的量的方法包括以下步驟：
[0098] -利用采樣和移液裝置13在容置在轉(zhuǎn)子7內(nèi)的第一透明反應(yīng)小容器11內(nèi)混合包含 待量化的分析物33的樣品、脫脂劑34和涂覆有第一分析物結(jié)合配偶體36的磁性顆粒35的第 一溶液(步驟SI);
[0099] -利用轉(zhuǎn)子7溫育第一透明反應(yīng)小容器11內(nèi)容納的混合物以便脂類因脫脂劑34而 沉淀，且分析物33與第一分析物結(jié)合配偶體36結(jié)合(步驟S2);
[0100] -利用轉(zhuǎn)子7將第一透明小容器11輸送在磁性沉降和洗滌模塊23的前面；
[0101] -從轉(zhuǎn)子7中取出第一透明反應(yīng)小容器11并將所述第一透明反應(yīng)小容器11定位在 所述磁性沉降和洗滌模塊23的磁場發(fā)生器附近，以便其磁場發(fā)生器將磁性顆粒35吸引至第 一透明反應(yīng)小容器11的內(nèi)壁部分；
[0102] -利用磁性沉降和洗滌模塊23的移液器具25從第一透明小容器11中抽吸未結(jié)合的 試劑(步驟S3);
[0103]-利用移液器具25將洗滌溶液引入透明反應(yīng)小容器11內(nèi)，以洗滌磁性顆粒；
[0104] -利用移液器具25從第一透明小容器11中抽吸洗滌溶液；
[0105] -將已經(jīng)洗滌的第一透明反應(yīng)小容器11重新裝載在轉(zhuǎn)子7中；
[0106] -利用采樣和移液裝置13向第一透明反應(yīng)小容器11內(nèi)提供洗脫溶液，以洗脫結(jié)合 的分析物，即將分析物33與磁性顆粒35分離(步驟S4);
[0107] -利用轉(zhuǎn)子7將第一透明小容器11輸送磁性吸引模塊26的前面；
[0108] -從轉(zhuǎn)子7中取出第一透明反應(yīng)小容器11并將所述第一透明反應(yīng)小容器11定位在 磁性吸引模塊26內(nèi)，使得其磁場發(fā)生器28將磁性顆粒35吸引至第一透明反應(yīng)小容器11的內(nèi) 壁部分；
[0109] -利用采樣和移液裝置13從第一透明反應(yīng)小容器11中抽吸洗脫溶液和分析物(步 驟 S5);
[0110] -利用采樣和移液裝置13將洗脫溶液和分析物33分配至容置在轉(zhuǎn)子7內(nèi)的第二空 透明反應(yīng)小容器11'內(nèi)（步驟S6);
[0111] -利用采樣和移液裝置13向第二透明反應(yīng)小容器11'提供包含涂覆有第二分析物 結(jié)合配偶體38的磁性顆粒37的第二溶液(步驟S7);以及
[0112]-量化第二透明反應(yīng)小容器11'內(nèi)容納的洗脫溶液中的分析物。
[0113]將參考以下非限制性且非窮舉的實例對本發(fā)明進行說明：
[0114] 實例：
[0115] 實例1:根據(jù)本發(fā)明測量樣品中的1.2?濃度的量
[0116] 對人類血液中的1，2?的測定可非常好地指示身體維生素 D新陳代謝的有效性。
[0117] 已經(jīng)很難開發(fā)用于確定1，2?水平的測定方法，這主要是因為血液中的1，2?的濃 度非常低。
[0118]眾所周知，在自動化系統(tǒng)上或利用手動方法進行分析之前，需要費力進行多次提 取步驟來測量I，25D。如今市場上可用的現(xiàn)有提取方法需要大量設(shè)備，包括純化柱、旋轉(zhuǎn)器、 離心分離機和氮蒸發(fā)器。常常需要溶劑。樣品的陽性鑒定會受損。
[0119]根據(jù)本發(fā)明對樣品中的1，25D進行測量首先從在第一透明小容器內(nèi)進行樣品脫脂 的為I，25D進行樣品預(yù)處理開始。利用來自西格瑪（Sigma)目錄編號為D8787的22yL、IOg硫 酸葡聚糖(50k)在一升0.5M氯化鎂和218yL樣品中進行脫脂。
[0120]之后，1，2?立即被捕獲到與314yL優(yōu)化取代劑溶液結(jié)合的46yL涂覆有抗-I，25D抗 體的磁性顆粒(MP)上。取代劑試劑由1升中的4.035g三水合磷酸氫二鉀、0.489g磷酸二氫 鉀、19.5g氯化鈉、4.19gANSA、0.209g華法林和104.7mL甲醇構(gòu)成。通過以每1克Sera-Mag? Speedbeads羧酸鹽改性顆粒36-144mg抗體親合抗-I，25D抗體制成涂覆抗-I，25D的MPc3W Thermo Scientific目錄編號45152105050350獲得的MP直徑為0·8μπι。已發(fā)現(xiàn)，使脫脂樣品 與MP在37°C的溫度下溫育十分鐘足以將1，2?捕獲到顆粒上。
[0121] 利用由0.6g三水合磷酸氫二鉀、0.97g磷酸二氫鉀、1.0 g氯化鈉、1.0 g吐溫-20、 I .Og Proclin-300和0.1 g氮化鈉（IDS目錄編號為IS-CW100)溶于1升水組成的洗滌溶液來 洗滌MP。至少需要對MP進行4次單獨洗滌，之后還需用MOPS緩沖液(包括231mg MOPS鈉鹽、 209mg MOPS和0.9g疊氮化鈉)洗滌，以除去反應(yīng)混合物中的未結(jié)合物和沉淀。
[0122] 利用75μ1的0.4N氫氧化鈉對MP上捕獲的I，25D進行6分鐘的洗脫。接著，利用25yL 的0.4M梓檬酸和IOOyL的測定緩沖液進行中和步驟，以產(chǎn)生與測定校準物相同的基本成分。 將120yL洗出液從第一透明小容器轉(zhuǎn)移至第二透明小容器進行1，2?測量。
[0123] 利用1，25_二羥基維生素 D測定試劑（IDS目錄編號為IS-2400)來測量1，25D。將120 yL包含提取的I，25D的洗出液與生物素化羊抗-I，2?抗體溫育。然后，添加 I，25D-吖啶共輒 物，共輒物會爭奪抗體結(jié)合位點。然后，添加涂覆抗生蛋白鏈菌素的磁性顆粒，且在進一步 的溫育步驟之后，洗滌磁性顆粒以除去未結(jié)合的材料。添加觸發(fā)試劑之后，閃光型化學發(fā)光 反應(yīng)開始。通過作為相對光單元(RLU)的光電倍增管測量光信號，光信號與樣品中存在的1， 2?的量成反比。
[0124] 該方法能夠處理達3g/dL甘油三酯、300mg/dL膽固醇和7.55g/dL蛋白質(zhì)的高脂類 樣品。觀察到，完全自動化的方法與實例2中的IDS-iSYSl，25D免疫膠囊提取方法具有很好 的相關(guān)性。
[0125] 此處發(fā)現(xiàn)，可以利用涂覆抗_1，25D抗體的磁性顆粒和優(yōu)化提取試劑直接從人類血 清中提取1，25D，除了使用磁力分離器來洗滌MP之外，無需使用多項設(shè)備，且可以從MP中收 集洗出液。整個提取過程需要大約21分鐘。得出第一結(jié)果的時間為93分鐘。
[0126] 實例2:根據(jù)之前已知的方法測量樣品中的1.25D濃度的量
[0127] 通過向帶標記的玻璃或塑料試管內(nèi)添加500yL樣品，之后添加50yL脫脂劑(包括一 升0.5M氯化鎂中的10克硫酸葡聚糖(501〇^8111 &目錄編號為08787)，在試管中對樣品進行 脫脂。混合并以2000g離心15分鐘。
[0128] 對膠囊貼標簽。除去膠囊螺帽。向包含固相懸浮液的膠囊內(nèi)添加150yL脫脂樣品， 固相附著有對I，25D高度特異的單克隆抗體。安全地使螺帽回位。在室溫下將膠囊上下轉(zhuǎn)動 90分鐘以使I，2?與單克隆抗體結(jié)合。
[0129] 使膠囊直立3至5分鐘以使凝膠沉淀。移除螺帽并使底塞脫離膠囊。將每一個膠囊 放置在玻璃或塑料試管內(nèi)以500至1000 g離心1分鐘。
[0130] 用水洗滌膠囊3次，每次進行1分鐘溫育，之后以500_1000g進行離心1分鐘，以除去 可能的干擾物質(zhì)。
[0131] 將膠囊轉(zhuǎn)移至適當標記的2mL聚丙烯錐形有緣基管。利用150yL的乙醇洗脫捕獲的 1,2?三次，每次進行1至2分鐘溫育，之后以500-1000g離心1分鐘。
[0132] 丟棄膠囊。將容納洗出液的微量試管放置在加熱塊或水浴中以40°C的溫度在溫和 的氮氣流下蒸發(fā)45至60分鐘。用200yL的測定緩沖液重構(gòu)每一個微量試管。
[0133] 利用1，25_二羥基維生素 D測定試劑（IDS目錄編號為IS-2400)來測量重構(gòu)的免疫 純化樣品，如實例1所描述的那樣。
[0134] 整個提取過程需要大約4個小時。得出第一結(jié)果的時間為大約5小時。
[0135] 當然，本發(fā)明并不限于以上通過非限制性實例描述的實施方式，相反，本發(fā)明包含 其所有實施方式。
【主權(quán)項】
1. 一種用于確定樣品中的分析物的量的方法，包括： -純化步驟，包括以下步驟： a) 將樣品、脫脂劑以及涂覆有第一分析物結(jié)合配偶體的第一磁性顆粒在第一容器內(nèi)混 合， b) 溫育所述第一容器內(nèi)容納的混合物，以沉淀所述樣品中包含的脂類并使所述樣品中 包含的分析物與所述第一分析物結(jié)合配偶體結(jié)合， c) 將所述第一容器置于磁場中，以通過磁力將所述第一磁性顆粒吸引至所述第一容器 的內(nèi)壁部分， d) 從所述第一容器中容納的所述混合物中除去未結(jié)合的試劑， e) 在洗脫溶液中洗脫結(jié)合的分析物，以使所述分析物與所述第一分析物結(jié)合配偶體分 離， -轉(zhuǎn)移步驟，包括以下步驟： f) 將所述第一容器置于磁場中，以通過磁力將所述第一磁性顆粒吸引至所述第一容器 的內(nèi)壁部分， g) 將一體積的包括所述分析物的所述洗脫溶液從所述第一容器轉(zhuǎn)移至第二容器，以及 -量化步驟，所述量化步驟發(fā)生在所述第二容器內(nèi)，所述量化步驟由量化所述分析物的 步驟組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述分析物為維生素 D代謝物或類固醇。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述分析物為1，25_二羥基維生素 D(1，25D)或25- 羥基維生素 D。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述分析物為從由醛固酮、雄激素、雌激素、孕激 素和膽固醇組成的組中選擇的類固醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中，所述樣品為含水生物介質(zhì)。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其中，利用免疫測定來完成所述分析物的 量化。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，利用涂覆有第二分析物結(jié)合配偶體的第二磁性顆 粒來進行所述免疫測定。8. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，所述第一分析物結(jié)合配偶體和所述 第二分析物結(jié)合配偶體中的至少一個為多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、工程化或人源 化抗體、scFV或Fab片段。9. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，所述脫脂劑為聚陰離子分析物。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，在存在II族陽離子的情況下，所述脫脂劑為從由 硫酸葡聚糖、磷鎢酸和肝素組成的組中選擇的聚陰離子分析物。11. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，所述除去的步驟包括洗滌步驟，所 述洗滌步驟包括利用洗滌溶液洗滌所述第一磁性顆粒。12. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，通過在方法緩沖液中添加堿性溶 液，隨后添加中和溶液來獲得所述洗脫溶液。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述堿性溶液為0.3N至0.6N的NaOH。14. 根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其中，所述中和溶液為0.3至0.6M的檸檬酸。15. 根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項所述的方法，其中，所述方法緩沖液包括在MOPS緩沖 液中的BSA、p〇lypep、甘露醇、蔗糖、氚核-抗氧化劑混合物、抗壞血酸鈉、trolox以及碳酸氫 鈉。16. 根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項所述的方法，其中，所述純化步驟、所述轉(zhuǎn)移步驟和所 述量化步驟由自動分析裝置實施，例如由自動免疫測定分析儀實施。17. -種自動分析裝置，包括： -多個容器(11)， -轉(zhuǎn)子(7)，具有基本豎直的旋轉(zhuǎn)軸線并繞其旋轉(zhuǎn)軸線能旋轉(zhuǎn)地受驅(qū)動，所述轉(zhuǎn)子(7)界 定了徑向向外打開的腔(8)， -裝載裝置(9 )，適于將所述容器(11)裝載在所述轉(zhuǎn)子(7)的所述腔(8)內(nèi)， -至少一個采樣和移液裝置（13)，適于向容置在所述轉(zhuǎn)子（7)的所述腔（8)內(nèi)的容器 (11)提供試劑和樣品， -磁性沉降和洗滌模塊(23)，適于容置從所述轉(zhuǎn)子(7)中取出的容器（11)并適于生成磁 場，所述磁性沉降和洗滌模塊(23)包括適于從容置在所述磁性沉降和洗滌模塊內(nèi)的容器吸 移流體的移液器具(25)， -磁性吸引模塊(26)，包括適于容置從所述轉(zhuǎn)子(7)中取出的容器（11)的向上開口外殼 (27)，以及位于所述向上開口外殼(27)附近的第一磁場發(fā)生器(28)，以及 -量化裝置(29)，適于容置從所述轉(zhuǎn)子(7)中取出的容器（11)并量化該取出的容器（11) 中容納的分析物， 其中，所述采樣和移液裝置(13)適于從容置在所述磁性吸引模塊(26)內(nèi)的容器（11)將 一體積的溶液轉(zhuǎn)移至容置在所述轉(zhuǎn)子(7)內(nèi)的另一容器(11)。18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的自動分析裝置，其中，所述量化裝置(29)配置成通過免疫測 定或競爭結(jié)合測定來測量或確定所述分析物的量。
【文檔編號】G01N33/74GK106062564SQ201480070207
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2014年12月3日
【發(fā)明人】杰奎琳·特蘭, 諾貝特·布呂特, 洛伊克·科爾諾
【申請人】因慕勒代格諾斯迪克系統(tǒng)有限公司