一種PtCu@g?C₃N₄/rGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種PtCu@g?C3N4/rGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。采用PtCu@g?C3N4/rGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了胰腺癌腫瘤標(biāo)記物CA724、CA242、CEA的定量檢測，具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，檢測限低，對腫瘤的早期檢測具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】
一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于新型功能納米材料、免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種PtCuOg-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤的發(fā)病率高，不易察覺，我國病例數(shù)相當(dāng)龐大，對人類的健康產(chǎn)生極大危害。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產(chǎn)物存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或宿主體液中，其在臨床上對于原發(fā)腫瘤的發(fā)現(xiàn)，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發(fā)展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價(jià)及腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測產(chǎn)生極大的影響，引起人們的廣泛關(guān)注。
[0003]CA724、CA242、CEA等常見的胰腺癌腫瘤標(biāo)志物，對于胰腺癌的診斷都能起到一定的作用。夾心型電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了高特異性的免疫分析技術(shù)和高靈敏的電化學(xué)分析技術(shù)，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測、食品安全控制、生物監(jiān)測等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0004]氧化石墨烯表面有大量的羧基官能團(tuán)，使得它更容易與有機(jī)物結(jié)合。且具有大的比表面積，良好的電子傳遞能力和催化性能，能有效固載抗體。g-C3N4作為一種非金屬半導(dǎo)體材料，由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特性、比表面積高、化學(xué)穩(wěn)定性好、熱穩(wěn)定性好、同時(shí)具有最小的能帶隙寬度，環(huán)保無不良和毒性作用，作為一個不含金屬的催化劑具有良好的生物相容性。g-C3N4和rGO的耦合能顯著提高g-C3N4/rG0合成材料的比表面積和導(dǎo)電率、增加其生物相容性。將PtCu合金雜化到g-C3N4/rG0，大大提高了材料的熱穩(wěn)定性，導(dǎo)電性，催化性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤標(biāo)志物的超靈敏檢測。
[0006]本發(fā)明的目的之一是提供一種PtCu@g_C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的之二是將所制備的PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測腫瘤標(biāo)志物。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟
1.一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟:
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6yL、1.0?2.0 mg/mL的納米金硫堇修飾的還原石墨稀滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6tiL、8.0?12.0 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1-加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥； (4)繼續(xù)將3pL.l.0?3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干;滴加6汕、1 fg/mL?10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 0C冰箱中干燥；
(5)將6uL、2.0?3.0 mg/mL的PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 0C冰箱中晾干，制得一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器。
[0009]2.納米金硫堇修飾的還原石墨稀的制備，步驟如下:
稱取60?100 mg的氧化石墨烯加入到80 mL超純水中，超聲溶解，與3?5 mL、0.5mol/mL的硫堇溶液混合，磁力攪拌6 ~7 h后，加入25?35 mg硼氫化鈉，磁力攪拌4?5 h，離心分離，超純水洗滌三次，制得納米金硫堇修飾的還原石墨稀。
[0010]3.PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，包括以下步驟: (Dg-C3NVrGO 的合成
稱取120?130 mg GO和190?210 mg g_C3N4加入到100 mL超純水中，超聲溶解;將1.5?2.5 mL聚二烯丙基二甲基氯化銨PDDA加入到上述溶液，超聲分散30 min，再加入I?2 mL水合肼，90 °C下反應(yīng)24 h，離心分離，依次用超純水、無水乙醇洗滌三次，得到g-C3N4/rGO；
(2)PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記物的合成
0.015?0.025 g聚乙烯吡咯烷酮溶于40 mL水中，與5?7 mL、6.75 mg/mL的g-C3N4/rG0混合，超聲30 min，再依次加入3 mL、18.8 mmol/mL的CuSCU; 2.7 mL、10 mmol/mL的H2PtCI6.6H20; 5 mL、2.64 mol/L的硼氫化鈉，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次，35 °C下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0檢測抗體標(biāo)記物；
(3 )PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 mg的PtCuOg-C3NVrGO檢測抗體標(biāo)記物分散到I mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入I mL 20 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0011]4.腫瘤標(biāo)志物的檢測，檢測步驟如下:
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?8.10磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
(2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間400 s ；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 tiL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
[0012]上述所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一:CA724、CA242、CEA。
[0013]本發(fā)明所用原材料均可在化學(xué)試劑公司或生物制藥公司購買。
[0014]本發(fā)明的有益成果
(I)本發(fā)明使用了納米金硫堇修飾的還原石墨烯作為基底材料，石墨烯有大的比表面積，可提供更多抗體的結(jié)合位點(diǎn)，還原石墨烯，是親水性物質(zhì)，且能與抗體上的氨基有效結(jié)合，納米金及硫堇的修飾提高了還原石墨烯的導(dǎo)電性，加快了電子的傳遞，能夠提高檢測的靈敏度。
[0015](2)采用？比11崦-(^4/^0作為檢測抗體標(biāo)記物，g_C3N4和rGO耦合是很好的選擇，因?yàn)間-C3N4和石墨烯都是二維材料，能顯著提高g_C3N4/rG0合成材料的比表面積和導(dǎo)電率、增加其生物相容性，且對過氧化氫有催化作用，Pt和Cu對過氧化氫也有催化作用，將PtCu合金雜化到g_C3N4/rG0上，大大提高了材料的熱穩(wěn)定性，導(dǎo)電性，催化性，因此，PtCuOg-C3N4/rGO對過氧化氫的催化作用呈多重放大，從而提高了傳感器的靈敏度，降低了檢測限；
(3)—種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器對腫瘤標(biāo)志物CA724、CA242、CEA的檢測，其線性范圍I fg/mL?10 ng/mL，檢測限最低0.33 fg/mL，表明一種PtCu@g_C3N4/rGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器可以達(dá)到準(zhǔn)確測定的目的。
【具體實(shí)施方式】
[0016]現(xiàn)將本發(fā)明通過【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明，但不限于此。
[0017]實(shí)施例1 一種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備，步驟如下:
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6yL、1.0 mg/mL的納米金硫堇修飾的還原石墨稀滴加到電極表面，室溫下瞭干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6yL、8.0 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Abi滴加到電極表面，超純水沖洗，4°C冰箱中干燥；
(4)繼續(xù)將3μ?α.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干;滴加6汕、1 fg/mL?10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6燦、2.0mg/mL的PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器。。
[0018]實(shí)施例2—種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備，步驟如下:
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6yL、1.5 mg/mL的納米金硫堇修飾的還原石墨稀滴加到電極表面，室溫下瞭干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6uL、10.0 ug/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1-加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥；
(4)繼續(xù)將3tiL、2.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干;滴加6汕、1 fg/mL?10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6燦、2.5mg/mL的PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 0C冰箱中晾干，制得一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器。
[0019]實(shí)施例3—種PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備，步驟如下:
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6yL、2.0 mg/mL的納米金硫堇修飾的還原石墨稀滴加到電極表面，室溫下瞭干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6uL、12.0 ug/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1-加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥； (4)繼續(xù)將3tiL、3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干;滴加6汕、1 fg/mL?10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6燦、3.0mg/mL的PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 0C冰箱中晾干，制得一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器。
[0020]實(shí)施例4納米金硫堇修飾的還原石墨稀的制備，步驟如下:
稱取60 mg的氧化石墨稀加入到80 mL超純水中，超聲溶解，與3 mL、0.5 mol/mL的硫堇溶液混合，磁力攪拌6 h后，加入25 mg硼氫化鈉，磁力攪拌4 h，離心分離，超純水洗滌三次，制得納米金硫堇修飾的還原石墨稀。
[0021]實(shí)施例5納米金硫堇修飾的還原石墨稀的制備，步驟如下:
稱取80 mg的氧化石墨稀加入到80 mL超純水中，超聲溶解，與4 mL、0.5 mol/mL的硫堇溶液混合，磁力攪拌6.5 h后，加入30 mg硼氫化鈉，磁力攪拌4.5 h，離心分離，超純水洗滌三次，制得納米金硫堇修飾的還原石墨稀。
[0022]實(shí)施例6納米金硫堇修飾的還原石墨稀的制備，步驟如下:
稱取100 mg的氧化石墨稀加入到80 mL超純水中，超聲溶解，與5 mL、0.5 mol/mL的硫堇溶液混合，磁力攪拌7 h后，加入35 mg硼氫化鈉，磁力攪拌5 h，離心分離，超純水洗滌三次，制得納米金硫堇修飾的還原石墨稀。
[0023]實(shí)施例7 PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，包括以下步驟: (Dg-C3NVrGO 的合成
稱取120 mg GO和190 mg g_C3N4加入到100 mL超純水中，超聲溶解;將1.5 mL聚二烯丙基二甲基氯化銨PDDA加入到上述溶液，超聲分散30 min，再加入I mL水合肼，90 °C下反應(yīng)24 h，離心分離，依次用超純水、無水乙醇洗滌三次，得到g_C3N4/rG0;
(2)PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記物的合成
0.015 g聚乙稀卩比略燒酮溶于40 mL水中，與5 mL、6.75 mg/mL的g_C3N4/rG0混合，超聲30 min，再依次加入 3 mL、18.8 mmol/mL 的C11SO4; 2.7 mL、10 mmol/mL 的 H2PtCl6.6H2O； 5 mL、2.64 mol/L的硼氫化鈉，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次，35 °C下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C3N4/rGO檢測抗體標(biāo)記物；
(3 )PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 mg的PtCuOg-C3NVrGO檢測抗體標(biāo)記物分散到I mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入I mL 20 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0024]實(shí)施例8 PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，包括以下步驟: (Dg-C3NVrGO 的合成
稱取125 mg GO和200 mg g_C3N4加入到100 mL超純水中，超聲溶解;將2.0 mL聚二烯丙基二甲基氯化銨PDDA加入到上述溶液，超聲分散30 !^1!，再加入1.5 mL水合肼，90 °(:下反應(yīng)24 h，離心分離，依次用超純水、無水乙醇洗滌三次，得到g_C3N4/rG0;
(2)PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記物的合成
0.020 g聚乙烯吡咯烷酮溶于40 mL水中，與6 mL、6.75 mg/mL的g_C3N4/rG0混合，超聲30 min，再依次加入 3 mL、18.8 mmol/mL 的C11SO4; 2.7 mL、10 mmol/mL 的 H2PtCl6.6H20； 5 mL、2.64 mol/L的硼氫化鈉，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次，35 °C下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C3N4/rGO檢測抗體標(biāo)記物；
(3 )PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 mg的PtCuOg-C3NVrGO檢測抗體標(biāo)記物分散到I mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入I mL 20 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0025]實(shí)施例9 PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，包括以下步驟: (Dg-C3NVrGO 的合成
稱取130 mg GO和210 mg g_C3N4加入到100 mL超純水中，超聲溶解;將2.5 mL聚二烯丙基二甲基氯化銨PDDA加入到上述溶液，超聲分散30 min，再加入2 mL水合肼，90 °C下反應(yīng)24 h，離心分離，依次用超純水、無水乙醇洗滌三次，得到g_C3N4/rG0;
(2)PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記物的合成
0.025 g聚乙烯吡咯烷酮溶于40 mL水中，與7 mL、6.75 mg/mL的g_C3N4/rG0混合，超聲30 min，再依次加入 3 mL、18.8 mmol/mL 的C11SO4; 2.7 mL、10 mmol/mL 的 H2PtCl6.6H2O； 5 mL、2.64 mol/L的硼氫化鈉，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次，35 °C下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C3N4/rGO檢測抗體標(biāo)記物；
(3 )PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 mg的PtCuOg-C3NVrGO檢測抗體標(biāo)記物分散到I mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入I mL 20 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0026]實(shí)施例10腫瘤標(biāo)志物CA724的檢測
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?7.98磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
(2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間400 s ；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 tiL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化；
(4)測定樣品中CA724的線性范圍為Ifg/mL?10 ng/mL，檢測限為0.33 fg/mL。
[0027]實(shí)施例11腫瘤標(biāo)志物CA242的檢測
按照實(shí)施例10的方法對樣品中CA242進(jìn)行檢測，其線性范圍為I fg/mL?10 ng/mL，檢測限為 0.33 fg/mL ο
[0028]實(shí)施例12腫瘤標(biāo)志物CEA的檢測
按照實(shí)施例10的方法對樣品中CEA進(jìn)行檢測，其線性范圍為I fg/mL?10 ng/mL，檢測限為0.33 fg/mLο
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈； (2)取6yL、1.0?2.0 mg/mL的納米金硫堇修飾的還原石墨稀滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干； (3)繼續(xù)將6tiL、8.0?12.0 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1-加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥； (4)繼續(xù)將3pL.l.0?3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干;滴加6汕、1 fg/mL?10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 0C冰箱中干燥； (5)將6uL、2.0?3.0 mg/mL的PtCuOg-C3NVrGO-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 0C冰箱中晾干，制得一種PtCU@g-C3N4/rG0標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器。2.如權(quán)利要求1所述的一種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，所述納米金硫堇修飾的還原石墨稀的制備，步驟如下: 稱取60?100 mg的氧化石墨烯加入到80 mL超純水中，超聲溶解，與3?5 mL、0.5mol/mL的硫堇溶液混合，磁力攪拌6 ~7 h后，加入25?35 mg硼氫化鈉，磁力攪拌4?5 h，離心分離，超純水洗滌三次，制得納米金硫堇修飾的還原石墨稀。3.如權(quán)利要求1所述的一種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，所述PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，包括以下步驟: (1)g-C3N4/rG0的合成 稱取120?130 mg GO和190?210 mg g_C3N4加入到100 mL超純水中，超聲溶解;將1.5?2.5 mL聚二烯丙基二甲基氯化銨PDDA加入到上述溶液，超聲分散30 min，再加入I?2mL水合肼，90 °C下反應(yīng)24 h，離心分離，依次用超純水、無水乙醇洗滌三次，得到g-C3N4/rGO； (2)PtCu@g-C3N4/rG0標(biāo)記物的合成 0.015?0.025 g聚乙烯吡咯烷酮溶于40 mL水中，與5?7 mL、6.75 mg/mL的g_C3N4/rGO混合，超聲30 min，再依次加入3 mL、18.8 mmol/mL的C11SO4; 2.7 mL、10 mmol/mL 的H2PtCI6.6H20； 5 mL、2.64 moVL的硼氫化鈉，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次，35 °C下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0檢測抗體標(biāo)記物； (3 )PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備 將4 mg的PtCuOg-C3NVrGO檢測抗體標(biāo)記物分散到I mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入ImL 20 yg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得PtCu@g-C3N4/rG0-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種PtCuOg-C3NVrGO標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物的檢測，檢測步驟如下: (1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?8.10磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試； (2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間400 s ； (3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 tiL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。5.如權(quán)利要求1、3和4所述的腫瘤標(biāo)志物，其特征在于，所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一:CA724、CA242、CEA0
【文檔編號】G01N27/327GK106093390SQ201610381476
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月1日
【發(fā)明人】李月云, 馮金慧, 劉青, 劉會, 王平, 董云會, 陳磊
【申請人】山東理工大學(xué)