一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒：試劑R1：緩沖液、無機(jī)鹽離子、加速劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、螯合劑、殺菌劑、抗氧化劑、防腐劑、抗免疫球蛋白G抗體，試劑R2：緩沖液、無機(jī)鹽離子、穩(wěn)定劑、助懸劑、表面活性劑、抗氧化劑、殺菌劑、防腐劑、膠乳包被抗AKA抗體，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)；用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。本發(fā)明具有準(zhǔn)確度高等優(yōu)點。
【專利說明】
一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種測定抗角蛋白抗體的試劑 盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗角蛋白抗體(AKA)，1979年Young等發(fā)現(xiàn)RA血清中有一種能與鼠食管角質(zhì)層反應(yīng) 的抗體，并對RA具有特異性，命名為AKA。
[0003] 抗角蛋白抗體(AKA)與類風(fēng)濕因子在診斷類風(fēng)濕(RA)時具有顯著的相關(guān)性，抗角 蛋白抗體(AKA)是判斷類風(fēng)濕預(yù)后的一種標(biāo)志性抗體，特別是高濃度的抗角蛋白抗體(AKA) 的類風(fēng)濕患者，常提示預(yù)后不佳，同時抗角蛋白抗體(AKA)可出現(xiàn)在診斷未確診的關(guān)節(jié)炎病 人中，但隨后確診為類風(fēng)濕患者，因此抗角蛋白抗體對類風(fēng)濕患者早期診斷亦有一定的價 值。
[0004] 目前檢測抗角蛋白抗體(AKA)的方法主要為間接免疫熒光分析法，但此法檢測復(fù) 雜，對結(jié)果的判讀需要專業(yè)人士進(jìn)行，且會造成熒光劑的污染，而且市場上的一些其它的方 法也存在準(zhǔn)確度不準(zhǔn)的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在污染以及測定準(zhǔn)確度低的 缺陷，而提供一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開了一種測定抗角蛋白抗 體的試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng) 含量為： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機(jī)鹽離子 15CK450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩(wěn)定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 35~165 mmol/L 穩(wěn)定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水。
[0007] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，包括彼此獨立的試劑 R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 250 mmol/L 加速劑 10 g/L 表面活性劑 2.0 mL/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 整合劑 45 mmol/L 殺菌劑 1.5 g/L 抗氧化劑 15 g/L 防腐劑 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 100 mmol/L 穩(wěn)定劑 13 g/L 助懸劑 25 mmol/L 表面活性劑 2.0 mL/L 抗氧化劑 15g/L 殺菌劑 15g/L 防腐劑 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。
[0008] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩 沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯 化鉀、氯化鎂中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、 聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、 聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種 的組合，所述的螯合劑采用乙二胺四乙酸、雙硫腙、酒石酸鉀鈉、8-羥基喹啉中的一種或多 種的組合，所述的殺菌劑采用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、土霉素中的一種或多種的 組合，所述的抗氧化劑采用苯多酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂 酯中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組 合。
[0009]作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖 液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化 鉀、氯化鎂中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一 種或者多種的組合，所述的助懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠體二氧化硅、甘油中的一種 或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的抗氧化 劑采用苯多酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的 組合，所述的殺菌劑采用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、土霉素中的一種或多種的組 合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。
[0010]作為優(yōu)選，所述的膠乳包被抗AKA抗體的制備方法為：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖 液將粒徑為40-500nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的 溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽， 在20°C_37°C的條件下反應(yīng)6小時，使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去 上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶 液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖液，混合攪拌，在20°C_37°C的條件下反應(yīng)2小時，使得聚 苯乙稀微球最終質(zhì)量濃度為1.5%，使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去 上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血 清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下封閉8-16小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗 體。
[0011]作為優(yōu)選，所述的抗抗角蛋白抗體為含有能與人抗角蛋白抗體特異性結(jié)合的Fab 功能部位的單克隆完整抗體或抗體片段。
[0012]作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方 法，包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機(jī)鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩(wěn)定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 35~165 mmol/L 穩(wěn)定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。
[0013] 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。
[0014] 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1:60之間。
[0015]本發(fā)明的檢測原理是:先將含有抗免疫球蛋白G抗體的試劑R1與樣本相混合，在37 °C下孵育5分鐘，使得樣本中的免疫球蛋白G與試劑R1中的抗免疫球蛋白G抗體結(jié)合形成抗 原抗體復(fù)合物，并凝集成大顆粒，以達(dá)到將有交叉反應(yīng)的免疫球蛋白G清除的目的，再將含 有包被了高特異性的抗AKA抗體的聚苯乙烯微球的緩沖液即試劑R2與上述中去除過免疫球 蛋白G的樣本中相應(yīng)的抗角蛋白抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在促凝劑作用下形成不溶性的聚苯 乙烯微球-抗原-聚苯乙烯微球顆粒復(fù)合物乳濁液，產(chǎn)生一定的濁度，其濁度高低與樣本中 的抗角蛋白抗體抗原濃度成正比關(guān)系，在一定波長下進(jìn)行濁度測定，即可測得樣本中被檢 測抗角蛋白抗體的含量。
式中：ΔΑτ/min以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值 Δ As/min以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值 Cs校準(zhǔn)液中AKA的濃度。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點：本發(fā)明在試劑R1和試劑R2中添加了 新型穩(wěn)定劑海藻糖，在和抑菌劑青霉素，抗氧化劑丁基羥基茴香醚的協(xié)同作用下，大大提高 了試劑中其它成分的穩(wěn)定性，使得試劑整體的穩(wěn)定性大大提升，試劑R1中添加了金屬離子 螯合劑，在樣本的孵育中去除了金屬離子的干擾，且添加了抗免疫球蛋白G抗體，在加速劑 的作用下，可特異性的去除類風(fēng)濕因子一類的免疫球蛋白G類抗體的干擾，使得結(jié)果更加準(zhǔn) 確，而且本發(fā)明所制得試劑盒無污染，操作方便。
【具體實施方式】
[0018] 以下結(jié)合具體實施例進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于這些實施例。
[0019] 實施例1 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 250 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 吐溫-80 2.0 mL/L 海藻糖 20 g/L 乙二胺四乙酸 45 mmol/L 慶大霉素 1.5 g/L 二丁基羥基甲苯 15 g/L 苯甲酸鈉 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 海藻糖 13 g/L 海藻酸鈉 25 mmol/L 聚氧乙稀苯基醚 2.0 mL/L 二丁基羥基甲苯 15g/L 慶大霉素 15g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。
[0020] 實施例2 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MES緩沖液 185 mmol/L 氯化鎂 150 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 聚氧乙稀苯基醚 3.0 mL/L 牛血清白蛋白 15 g/L 乙二胺四乙酸 28 mmol/L 鏈霉素 3 g/L 二丁基羥基甲苯 1 g/L 苯甲酸鈉 9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 〇. 2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 150 mmol/L 氯化鈉 165 mmol/L 牛血清白蛋白 6 g/L 海藻酸鈉 45 mmol/L 吐溫-80 0.5 mL/L 丁基羥基茴香醚 24g/L 慶大霉素 24g/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 lg/L 其溶劑為純化水。
[0021] 實施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗AKA抗體的制備：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為120nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在28°C的條件下反應(yīng)6小時，使 用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的 甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上 清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃 度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖 液，混合攪拌，在28°C的條件下反應(yīng)2小時，使得聚苯乙烯微球最終質(zhì)量濃度為1.5%，使用離 心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩 沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下 封閉10小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 250 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 吐溫-80 2.0 mL/L 海藻糖 20 g/L 乙二胺四乙酸 45 mmol/L 慶大霉素 1.5 g/L 二丁基羥基甲苯 15 g/L 苯甲酸鈉 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 海藻糖 13 g/L 海藻酸鈉 25 mmol/L 聚氧乙稀苯基醚 2.0 mL/L 二丁基羥基甲苯 15g/L 慶大霉素 15g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長546nm，副波長800nm; (c) 反應(yīng)時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測步驟 (a) 取210μ1試劑R1與5μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min;
(c) 加入70μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中抗角蛋白抗體(AKA)的活性 計算出樣本中 的抗角蛋白抗體的濃度。
[0022] 實施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、膠乳包被抗AKA抗體的制備：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為100nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在28°C的條件下反應(yīng)6小時，使 用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的 甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上 清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃 度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘氨酸緩沖 液，混合攪拌，在28°C的條件下反應(yīng)2小時，使得聚苯乙烯微球最終質(zhì)量濃度為1.5%，使用離 心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩 沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/L，在4°C的條件下 封閉10小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MES緩沖液 185 mmol/L 氯化鎂 150 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 聚氧乙稀苯基醚 3.0 mL/L 牛血清白蛋白 15 g/L 乙二胺四乙酸 28 mmol/L 鏈霉素 3 g/L 二丁基羥基甲苯 1 g/L 苯甲酸鈉 9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 〇. 2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 150 mmol/L 氯化鈉 165 mmol/L 牛血清白蛋白 6 g/L 海藻酸鈉 45 mmol/L 吐溫-80 0.5 mL/L 丁基羥基茴香醚 24g/L 慶大霉素 24g/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 lg/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長546nm，副波長800nm; (c) 反應(yīng)時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測步驟 (a) 取210μ1試劑R1與5μ1待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入70μ1試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1;
(d)根據(jù)樣本中抗角蛋白抗體(AKA)的活性 計算出樣本 中的抗角蛋白抗體的濃度。
[0023]表1為實施例1所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒以及實施例2所制得的測定抗 由表1可知，本發(fā)明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對質(zhì)控品1的測定結(jié)果偏差較 小，因此測定準(zhǔn)確度高，而且實施例1為最優(yōu)的選擇。
[0024] 表2為實施例1所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒以及實施例2所制得的測定抗角蛋 白抗體的試劑盒分別對質(zhì)控品2進(jìn)行測定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的抗角蛋白抗體的濃度為 76 U/mL，測定結(jié)果見表2:
角蛋白抗體的試劑盒分別對質(zhì)控品1進(jìn)行測定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的抗角蛋白抗體的濃 度為48 U/mL，測定結(jié)果見表1:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對質(zhì)控品2的測定結(jié)果偏差較 小，因此測定準(zhǔn)確度高，而且實施例1為最優(yōu)的選擇。
[0025] 表3為實施例3所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對同一待測樣本進(jìn)行的多次 反復(fù)測定以及實施例4所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒對同一待測樣本進(jìn)行的多次反 復(fù)測定，對所得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計算，結(jié)果如下： 表3
由表3可知本發(fā)明所制得的測定抗角蛋白抗體的試劑盒的精密度比較好，而且由表1可 知，實施例3為最優(yōu)的選擇。
[0026] 上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項】
1. 一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙 液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機(jī)鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩(wěn)定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 35~165 mmol/L 穩(wěn)定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨立 的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 250 mmol/L 加速劑 10 g/L 表面活性劑 2.0 mL/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 整合劑 45 mmol/L 殺菌劑 1.5 g/L 抗氧化劑 15 g/L 防腐劑 5 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 1.0 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 100 mmol/L 穩(wěn)定劑 13 g/L 助懸劑 25 mmol/L 表面活性劑 2.0 mL/L 抗氧化劑 15g/L 殺菌劑 15g/L 防腐劑 0.5 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 4g/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的試 劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液 中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的一種或多種的 組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮 中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述 的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種的組合，所述的螯合劑采用乙二 胺四乙酸、雙硫腙、酒石酸鉀鈉、8-羥基喹啉中的一種或多種的組合，所述的殺菌劑采用青 霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、土霉素中的一種或多種的組合，所述的抗氧化劑采用苯多 酚、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的組合，所述 的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的試 劑R2中，所述的緩沖液采用Tri s緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液 中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的一種或多種的 組合，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或者多種的組合，所述的助 懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠體二氧化硅、甘油中的一種或多種的組合，所述的表面活 性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的抗氧化劑采用苯多酚、二丁基羥基甲 苯、丁基羥基茴香醚、硫代二丙酸二月桂酯中的一種或多種的組合，所述的殺菌劑采用青霉 素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、土霉素中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯 甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的膠 乳包被抗AKA抗體的制備方法為：用60 mmol/L的甘氨酸緩沖液將粒徑為40-500nm的聚苯乙 烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在20°C_37°C的條件下反應(yīng)6小 時，使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分 鐘，去上清，將沉淀懸浮于60 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最 終質(zhì)量濃度為3%，超聲分散，然后邊攪拌邊加入等體積的含8mg/ml的抗抗角蛋白抗體的甘 氨酸緩沖液，混合攪拌，在20 °C_37°C的條件下反應(yīng)2小時，使得聚苯乙烯微球最終質(zhì)量濃度 為1.5%，使用離心機(jī)，在15000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，將沉淀懸浮于50 mmol/L的甘氨酸緩沖液中，超聲分散，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的濃度為15g/ L，在4°C的條件下封閉8-16小時，即可制備得到膠乳包被抗AKA抗體。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于:所述的抗抗角 蛋白抗體為含有能與人抗角蛋白抗體特異性結(jié)合的Fab功能部位的單克隆完整抗體或抗體 片段。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法， 其特征在于:包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 無機(jī)鹽離子 150~450 mmol/L 加速劑 5~25 g/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 穩(wěn)定劑 15~25 g/L 螯合劑 28~62 mmol/L 殺菌劑 0.1~3 g/L 抗氧化劑 1~24 g/L 防腐劑 1~9 g/L 抗免疫球蛋白G抗體 0.2~2.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 35~165 mmol/L 穩(wěn)定劑 6~20 g/L 助懸劑 5~45 mmol/L 表面活性劑 0.5~3.0 mL/L 抗氧化劑 1~24g/L 殺菌劑 1~24g/L 防腐劑 0.1~0.9 g/L 膠乳包被抗AKA抗體 1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的抗角蛋白抗體的濃度。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法，其 特征在于:步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種測定抗角蛋白抗體的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:5到1:60之間。
【文檔編號】G01N33/68GK106093425SQ201610376093
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司