一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙及其試紙筆的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙及其試紙筆，屬于試紙檢測分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]克百威，是氨基甲酸酷類殺蟲劑的主要品種之一，其能有效防治多種農(nóng)作物和觀賞植物上的多種害蟲和線蟲。克百威在酸性土壤中不易降解，且屬于高毒農(nóng)藥。美國等地區(qū)已經(jīng)明確指出不得在相關(guān)產(chǎn)品中檢出含有殘留的克百威農(nóng)藥制劑，但是目前對于克百威農(nóng)藥，我國有些人卻還在偷偷使用，因此造成我國農(nóng)產(chǎn)品出口的嚴(yán)重?fù)p失。同時，農(nóng)藥的不合理使用已給人類及生態(tài)環(huán)境造成了越來越嚴(yán)重的不良后果，農(nóng)藥的污染問題已成為全球關(guān)注的熱點。
[0003]檢測克百威殘留的常規(guī)的分析技術(shù)有氣相色譜、液相色譜等。但是克百威是一種熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，在一般的氣相色譜操作條件下易降解成酚類，因此檢測時需要將克百威衍生化后再進(jìn)行分析?，F(xiàn)在最常用的方法，其靈敏度受到樣品的凈化、濃縮、衍生化等步驟影響很大，此外，這些分析方法還需要昂貴的精密儀器和熟練的操作人員，對于實驗室的要求很高，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了大批量樣品的初步篩選，尤其是現(xiàn)場檢測。
[0004]核酸適體是一種高特異性的配基，其優(yōu)點在于開發(fā)周期短、生產(chǎn)成本低、體外篩選、體外制備、使用方便，在檢測分析領(lǐng)域中的應(yīng)用已經(jīng)被廣泛認(rèn)可。因此，核酸適體在克百威的快速檢測中具有良好的應(yīng)用前景。
【實用新型內(nèi)容】
[0005]為了使克百威殘留能夠快速的被定量檢測分析，本實用新型提供了一種靈敏度高、操作簡便快速的熒光適體層析試紙及其試紙筆。
[0006]本實用新型采用的技術(shù)方案如下:
[0007]本實用新型公開了一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其包括底板，所述底板上依次順序粘貼有樣品吸液層、適體結(jié)合墊、NC膜和吸水墊，所述NC膜上噴涂有適體互補序列的檢測線和由生物素形成的質(zhì)控線；所述適體結(jié)合墊上噴涂有結(jié)合了克百威適體的稀土離子高分子納米微球。
[0008]所述適體結(jié)合墊上的稀土離子高分子納米微球直徑為lOOnm，且稀土離子高分子納米微球的涂層含有銪離子。
[0009]所述克百威適體以稀土離子高分子納米微球為載體并與其相結(jié)合，同時克百威適體上修飾有鏈霉素分子。
[0010]所述底板為長方形的平板。
[0011]本實用新型還公開了一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙筆，其包括上述方案中所述的試紙以及用于包覆所述試紙的外殼，所述外殼內(nèi)部設(shè)有用于安裝試紙的卡槽，外殼的正面設(shè)有觀察口，所述觀察口的位置與試紙上檢測線和質(zhì)控線位置對應(yīng)；所述試紙的吸液層作為檢測端位于所述外殼的一端，所述檢測端上設(shè)有檢測帽。
[0012]運用本實用新型進(jìn)行檢測的方法，包括以下步驟:
[0013](1)將檢測區(qū)得到檢測帽拔開，露出樣品吸液層，然后插入待測樣品液中，孵育5min后檢測；
[0014](2)熒光掃描，檢測線位置條帶熒光強度與樣品中克百威的濃度成反比；無論樣品中是否有克百威的存在，質(zhì)控線都會出現(xiàn)熒光條帶，作為對照線。
[0015]本實用新型的有益效果如下:
[0016]1、本實用新型中的熒光適體層析試紙以高親和力的適體為基礎(chǔ)制備而成，并結(jié)合時間分辨熒光技術(shù)進(jìn)行檢測，其檢測結(jié)果精確度高、誤差小，為大批量初步檢測使用提供了便利。
[0017]2、該試紙只需將試紙插入樣品液中，5分鐘左右就能顯示結(jié)果，檢測速度快。
[0018]3、顯示結(jié)果更加準(zhǔn)確，以熒光條帶為檢測結(jié)果。配用專門的熒光檢測儀樣品中，克百威含量越高，檢測線的熒光值越低。
[0019]4、操作簡單，能較好的滿足不同層次人員的需要，帶有外殼的試紙筆更便于存放和攜帶，使得該實用新型具有廣闊的市場前景和較大的社會、經(jīng)濟(jì)效益。
【附圖說明】
[0020]圖1是本實用新型中檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖2是實施例2中的檢測結(jié)果示意圖。
[0022]圖3是本實用新型中檢測克百威殘留量的試紙筆的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0023]其中:1-底板、2-吸水墊、3 -NC膜、4-適體結(jié)合墊、5-樣品吸液層、6-檢測線、7-質(zhì)控線、8-外殼、9-檢測帽、10-觀察口。
【具體實施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖和具體實施例對本實用新型進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0025]實施例1
[0026]如圖1所示，一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其包括依次順序粘貼在底板1上的吸水墊2、NC膜3、適體結(jié)合墊4和樣品吸液層5，NC膜3上的反應(yīng)區(qū)設(shè)有具有互補序列的檢測線6和由生物素形成的質(zhì)控線7。
[0027]所述適體結(jié)合墊4上噴涂有以稀土離子高分析納米微球為載體的克百威適體，其中，高分子納米微球的直徑為lOOnm，高分子納米微球涂層含有銪離子，提高了稀土離子發(fā)出的熒光強度，因此提高了檢測的精確度。
[0028]具體檢測時，把試紙的樣品吸液層5端插入果汁、蔬菜浸出液中，由于毛細(xì)作用進(jìn)行側(cè)向?qū)游觯?-10分鐘后觀察結(jié)果。
[0029]其中，將克百威適體固定在適體結(jié)合墊上，適體上修飾有鏈霉素可與質(zhì)控線上的生物素結(jié)合，其互補序列作為檢測線，生物素基團(tuán)作為質(zhì)控線；當(dāng)樣品中過量存在克百威時，適體不能與互補序列結(jié)合，則在檢測線處不顯示熒光條帶，而少量存在時，熒光條帶的熒光強度和濃度呈反比，不存在克百威時兩條線都顯示強熒光條帶，達(dá)到檢測的目的。
[0030]要制成檢測克百威殘留的適體熒光微球試紙首先需要運用SELEX方法篩選高親和力的適體，制備檢測線上的互補序列，制備熒光微球用于結(jié)合適體；整個制備過程中都不需要對克百威農(nóng)藥進(jìn)行改造和修飾，相比于免疫膠體金層析技術(shù)極大地簡化了制備過程。
[0031]實施例2
[0032]在實施例1的基礎(chǔ)上，本實施例進(jìn)一步提供檢測克百威殘留的熒光適體層析試紙的實施檢測原理:
[0033](1)把試紙的樣品吸液層端插入果汁、蔬菜浸出液中，由于毛細(xì)作用進(jìn)行側(cè)向?qū)游觯?-10min觀察；
[0034](2)Eu (III)離子可以產(chǎn)生熒光，利用時間分辨熒光速測儀，檢測熒光條帶的熒光強度；
[0035](3)如圖2所示，檢測的克百威濃度>50 μ g/mL時，NC膜上出現(xiàn)一條質(zhì)控線的熒光條帶為強陽性；在0.5-50 μ g/mL范圍內(nèi)時，檢測線的熒光強度和克百威的濃度呈反比，在0.5 μ g/mL以下時，出現(xiàn)雙熒光條帶為陰性。檢測濃度可以以克百威標(biāo)準(zhǔn)品配成相應(yīng)的溶液，測定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)樣品相應(yīng)的檢測值計算出待測樣中的克百威濃度。
[0036]實施例3
[0037]如圖3所不，在實施例1的基礎(chǔ)上，本實施例進(jìn)一步提供一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙筆，其包括實施例1中所述的試紙以及包覆所述試紙的外殼8 ;所述外殼內(nèi)部設(shè)有用于安裝試紙的卡槽，外殼8的正面設(shè)有觀察口 10，觀察口 10的位置與試紙上檢測線6和質(zhì)控線7位置對應(yīng)；所述試紙的吸液層5作為檢測端位于所述外殼8的一端，在檢測端上設(shè)有檢測帽9。
[0038]本實施例中，帶有外殼8的試紙筆不僅便于存放和攜帶，還便于檢測操作；且樣品吸液區(qū)有檢測帽9蓋住，取下檢測帽9直接浸入待測液，無需用滴管滴加樣品，所述觀察口10的設(shè)置便于觀察檢測結(jié)果。
[0039]對于所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，隨著技術(shù)的發(fā)展，本實用新型構(gòu)思可以不同方式實現(xiàn)。本實用新型的實施方式并不僅限于以上描述的實施例，而且可在權(quán)利要求的范圍內(nèi)進(jìn)行變化。
[0040]本實用新型未涉及部分均與現(xiàn)有技術(shù)相同或可采用現(xiàn)有技術(shù)加以實現(xiàn)。
【主權(quán)項】
1.一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其特征在于:包括底板(1)，所述底板(1)上依次順序粘貼有樣品吸液層(5 )、適體結(jié)合墊(4 )、NC膜(3 )和吸水墊(2 )，所述NC膜(3)上噴涂有適體互補序列的檢測線(6)和由生物素形成的質(zhì)控線(7);所述適體結(jié)合墊(4 )上噴涂有結(jié)合了克百威適體的稀土離子高分子納米微球。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其特征在于:所述適體結(jié)合墊(4)上的稀土離子高分子納米微球直徑為lOOnm，且稀土離子高分子納米微球的涂層含有銪離子。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其特征在于:所述克百威適體以稀土離子高分子納米微球為載體并與其相結(jié)合，同時克百威適體上修飾有鏈霉素分子。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙，其特征在于:所述底板為長方形的平板。5.一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙筆，其特征在于:包括權(quán)利要求1-4中所述的試紙以及用于包覆所述試紙的外殼(8)，所述外殼內(nèi)部設(shè)有用于安裝試紙的卡槽，夕卜殼的正面設(shè)有觀察口( 10)，所述觀察口( 10)的位置與試紙上檢測線(6)和質(zhì)控線(7)位置對應(yīng)；所述試紙的吸液層(5)作為檢測端位于所述外殼(8)的一端，所述檢測端上設(shè)有檢測帽(9)0
【專利摘要】本實用新型公開了一種檢測克百威殘留量的熒光適體層析試紙及其試紙筆，所述試紙包括底板，所述底板上依次順序粘貼有樣品吸液層、適體結(jié)合墊、NC膜和吸水墊，所述NC膜上噴涂有適體互補序列的檢測線和由生物素形成的質(zhì)控線；所述適體結(jié)合墊上噴涂有結(jié)合了克百威適體的稀土離子高分子納米微球；所述試紙筆包括試紙以及用于包覆所述試紙的外殼，所述外殼內(nèi)部設(shè)有用于安裝試紙的卡槽，外殼的正面設(shè)有觀察口，所述觀察口的位置與試紙上檢測線和質(zhì)控線位置對應(yīng)；所述試紙的吸液層作為檢測端位于所述外殼的一端，所述檢測端上設(shè)有檢測帽。本實用新型靈敏度高、操作簡便快速、顯示結(jié)果形象直觀準(zhǔn)確、成本低、易于大范圍推廣應(yīng)用。
【IPC分類】G01N33/558
【公開號】CN205003160
【申請?zhí)枴緾N201520639745
【發(fā)明人】王耘
【申請人】金陵科技學(xué)院
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年8月24日