專利名稱：用檢查母體血液的非侵入性方法發(fā)現(xiàn)唐氏綜合癥的方法和設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在產(chǎn)前檢査中發(fā)現(xiàn)胎兒唐ft錄合癥(2 1三染色 體)的方法.i^M涉及到其它罕見詢、但可檢擁到的染色體的三 染色體如2 3三染色體和J S三染色體，更具#^說，本發(fā)明涉及一 種通過測(cè)量孕婦血液中人絨毛胰促性腺激棄(H 0 CT)'的游離e —亞 單位的舍量來提離檢査唐氏錄合癥中的發(fā)現(xiàn)率的方法.背景技術(shù)唐氏綜#,亦稱2 2三染色傲AT重精神發(fā)有遲緩的最fii 的先夭性原因，唐氏錄余fe通常釆用一種包括羊腆穿刺術(shù)和染色質(zhì)組 型的滲斷方法來確定.但這種診斷方法是便入性的，會(huì)對(duì)孕婦和胎兒 帶來危險(xiǎn).羊胰穿刺術(shù)和染色質(zhì)組型不作為對(duì)所有孕婦進(jìn)行常規(guī)檢査 的方法，當(dāng)使用這糊入性診斷方艦明錯(cuò)孕婦帶來危險(xiǎn)時(shí)，可以 ^ 一種戚多種檢査方法代替逸種ftA性方法進(jìn)行診斷，唐氏綜^€的發(fā)生率隨母親年齡的增加而急速增加.以往對(duì)于唐 氏錄錄的產(chǎn)前研究一直集中于年齡在3 S歲以上的孕婦，趙傳齡段，唐氏綜余昆的危險(xiǎn)接近lfefe過用于發(fā)M氏綜a的滲斷方法所帶來的危險(xiǎn)，因此,產(chǎn)前檢査的標(biāo)準(zhǔn)方法一直包括以孕婦年齡為基準(zhǔn)挑選出作舉M刺滲斷的孕婦，但年餘並不絲分的檢錄振，因 為對(duì)S《的聚可能處于危險(xiǎn)中的孕婦、即年齡為3 5歲或更大的孕婦進(jìn)行羊膜穿刺和染色質(zhì)組型只t^l^有唐氏練咖昆妊拔的2 O多左右，生&由于IE^際臨床實(shí)踐中，只有大約一半的年齡在3 5歲戎以 上的孕婦辨膽刺和染色質(zhì)組齓所以在j^t發(fā)現(xiàn)的唐絲械妊拔低于1"，! 9 4年,有人發(fā)現(xiàn)了母體血液中低的a —胎兒蛋自(A y !> ) 襯與胎JUI氏錄^t坷的絲.例如參見"An assooiatioii Detween low maternal seru邊aipba—fe七oproi;ein and fetal Chromosomal al3Zioriaaii ties " t (母體血 清e(cuò)x —胎兒蛋白的低會(huì)dt與胎兒染色體異常之問的伴隨關(guān)系)豕 MerKatz ，他cri等A4h Am,J。0》stet,Gyneo01, J" :多S 6, 19 8 4,該公開內(nèi)容afiit引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中，該文 中記載了其它一些三染色仏特別是！3三汆色體和1 S三染色體,也與母體血液中A;p:p舍量低有關(guān)，這些其它的染色體中的三染色體 的發(fā)生率(分別為五千分之一和六千六百分之—)逸低于2 i三染色體(麿氏錄合癥)一般的先驗(yàn)患病率，伹由于這些其它的染色體中的三染色倆毗ATP討低有關(guān)，因此，這些染色體的異常也可利用 本文所描述的母體血液A P P和H C G的游離e —亞單位和可能的其 它指標(biāo)的檢查方案被發(fā)現(xiàn)，本領(lǐng)械的專業(yè)人員顯然也可以用這里描述 的用于2 J三染色體的方案用于發(fā)現(xiàn)J 3三染色體和1 S三染色體，母體血液中a t :p舍量低與胎AJf氏錄合癥有關(guān)]^一發(fā)現(xiàn)使我們有 可能在那M氏錄械發(fā)痏率約為s o多的年輕的、看^(乎不患辨 的家庭中采用非^A性的血液檢査試驗(yàn)來發(fā)現(xiàn)康氏錄^fe病例. 計(jì)，糊以母體血液A P P (作為一個(gè)松査指標(biāo))1媯基礎(chǔ)的檢賦 驗(yàn)^ft胎JUIf氏練余fe的產(chǎn)前發(fā)現(xiàn)豐達(dá)到總病例的2 0 %左右 另一種檢主方:^fe括測(cè)量母體血液中非錄合的鯔三酵(u 3C )的例如參見"MaternalDiood soTeening for Down syndrome in early pregnancy"(母親血濃檢査在早期妊效對(duì)發(fā)鄉(xiāng)氏錄械)，節(jié)a"等AiP， British jo訓(xùn)ai 0f 0*b si;,i;rios and 0yao001 Qg7 ( BMJ* )/Voluna 9 5, April 1夕S S,其公開內(nèi)容^it專l用被結(jié)合到本申請(qǐng)中，但對(duì) P 2!的《 值^*檢來提#""個(gè)粗劣的基準(zhǔn). 近，發(fā)瑰母體血液中E 0 S貪it的提離、B 0 G的a—亞舉位 含量的提離(BOG由兩個(gè)亞單位組成，以下分別稱a —E G a和p 一H P G)與胎A^氏錄^之問的關(guān)聯(lián)性，例如參見"Abnormal Maternal Seru邁 Chorionic Gonadotropin Levels in Pregnancies With 7et"l Ohromosome ADnor邊ali七ies "(胎兒染色體異常妊娠中母體血清的絨毛胰促 錄激素討異常)豕B gart Pandian和Jtmes Prenatal Diagnosis , "Vol 7, 6 2 3 — 6 3( (! 9 S 7 〉，其^^的內(nèi)容艦引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中，在 Bogart的文章中，糾了利用毋體血液中EC (J和HO CJ的a —亞單位合Jt的提離絲現(xiàn)大約6 8多的染色體異常的胎兒，而這些結(jié) 論是通aW懷孕:t s—2 5周6We拔進(jìn)行研究而得到的，而且這些患病病辨似乎是那些事先6被識(shí)別為可能悉唐氏錄合&的婦章.如，逸"^說，艦鵬母體血液中的BO G值的檢炒 法通常旨及對(duì)EO G的測(cè)it,附加i&^^ta — H0 a的測(cè)量.雖^at些檢査方法確能發(fā)現(xiàn)康氏錄a,伹是還贅要和希望一種發(fā)現(xiàn)更離百分比的胎JUt氏錄^fe病例的方法.本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了先前^道的母體血液中游離e—B 0 G含量的提離與胎A^氏錄4^之間的關(guān)聯(lián)性.還發(fā)現(xiàn)了先前不知道的母體血液糊商e —H fl ^Ht及A s^t與膽jUt氏錄4^t問的關(guān)聯(lián)性，本發(fā)明A^發(fā)現(xiàn)了先前不知道瞬體血液中游離e—Ho CJ討 ;^體血液中未受鎖的Ho 0^M之比與胎AJt氏綜^昆之間的 關(guān)聯(lián)性，我還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了采用一種多變景判別式分析法可以提離下 面所說檢査方法在一選定的患病* 止值下的發(fā)現(xiàn)率，這種方法利用 母體血液中游離e—HcG舍量，或利用母體血液中游離的e —ec 9^t和af、含4,成二者中任付一個(gè)的對(duì)數(shù)，戎兩者的對(duì)數(shù),特別是在孕齡也被當(dāng)作一個(gè)變量加入到判別式分析法中，發(fā)現(xiàn)率的提 離更明顯，孕齡指孕婦懷胎兒的周數(shù)，發(fā)現(xiàn)率是指在一^定的患病率截止偟下正確:l^現(xiàn)為唐^合癥病例的百分比，患病率截止值將在后面更詳細(xì)觸以說明.判別式分析法總的來iJL^/^的，種多變 量分析方法，涉及到用單一變i的患病率(J^l;險(xiǎn)率)估計(jì)法橋聽究 對(duì)象分為二個(gè)或更多個(gè)小組，判別式分析法有時(shí)也被描a^是一種構(gòu) 成獨(dú)立變量線性組合的方法，鄰將衡ft夸小組差異的問超簡(jiǎn)化成一個(gè) 單變量問趙，當(dāng)某個(gè)問趙中僅包含一個(gè)變量時(shí)也能運(yùn)用判別式分析法.關(guān)于判別式分析法的一般性討論可見"Marketing Re search " (銷H研究h OHurcHiil , G,A., uryaen, "7 6,笫 ;t 5聿P, 5 3 0 S4 3,該公開內(nèi)容通過引用被結(jié)舍到本申清中, 我發(fā)現(xiàn)M體血液中游離e — HO G的舍4、未受損的HO G含4、 ，離e—HO G對(duì)未受,HO G襯的比值、ATS合量、UE舍量唐氏綜合癥的檢査方法相t發(fā)現(xiàn)胎^yr氏錄合癥的百分比更高，假陽(yáng)性率更低.^it現(xiàn)，敏僅僅瀏妙體血液中游離e —b c cj的^ft和atp含4,並將r^各自的對(duì)數(shù)與孕齡經(jīng)過多變量判別式分 浙法進(jìn)行m,仍可發(fā)現(xiàn)更多數(shù)目的胎AJt氏錄*病例.這些及其明的概述部^詳細(xì)裙述部分中將^分Jtt 以說明.發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)貝的是l^4與其它B知的產(chǎn)前檢耷方法相比, ^^定假陽(yáng)性率的憤況下能發(fā)現(xiàn)更離百分比的胎兒唐氏錄^fe的檢耷 方法和步樣，本發(fā)明另一個(gè)目的是，一種^^定的發(fā)現(xiàn)率條件下比其它 方法M更低假陽(yáng)性率的檢査胎兒唐氏綜^fe的方法和步猓，本發(fā)明的一個(gè)更進(jìn)一步的目的是將多變Jt判別式分析M用于檢 査唐氏練舍癥的方法中，以使胎兒唐氏綜合癥的發(fā)現(xiàn)率更高,假陽(yáng)性 率更低，本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一種 測(cè)**體血液中游離3 —H 0 G的含量來檢查胎兒唐氏綜合癥的方法和步驟，本發(fā)明還有一個(gè)it^一步的目的就是提供一種aat^W:體血液申Ar:o含量及游離e—HO G的含量來檢査胎JLt氐綜^的方法和步槺，本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點(diǎn)掩在下面對(duì)本發(fā)明的描述中變得顯而易見.為了達(dá)到上述目的，按照本發(fā)明，孕婦(以下稱瘸人)的母體血清中游離e—Ho G的^t采用常規(guī)的免疫學(xué)方法測(cè)jt ^"法包括 免疫測(cè)定法,如上a^t章中提到的那些方法以及，械內(nèi)a知的其它方法，然后，將游離e—ao (J的含;t與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較以確定，人懷有患唐氏綜^i胎兒的患病率.為了提離發(fā)現(xiàn)豐，將游離，一Haa的^i^孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)振比較，為進(jìn)一步提離發(fā)現(xiàn)率, 釆用紫規(guī)的免疫學(xué);T^包括上述論文中提到的在;Wt術(shù)鄰域中么A8的鵬方法，擁量病人母體血液中游宵的e—H C (J和A T G (以下 稱"指標(biāo)")合量,,然后##項(xiàng)指標(biāo)值與一《 準(zhǔn)數(shù)拔比私以^ 該病人懷有患唐長(zhǎng)錄余^^兒的危險(xiǎn)率.采鄰多變量判別式分析法將這些指樹與一絲準(zhǔn)歎辦比較.更詳細(xì)地^ :^用JW斯定 律，諒病人先驗(yàn)的危除卒以及通過將絲人每項(xiàng)指標(biāo)的定i:數(shù)值的對(duì) 數(shù)^到利用多變量判別式分析法展開的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)的概豐密度函數(shù)中 而確定出來未悉病和患病妊拔的相對(duì)發(fā)生率來計(jì)算出每^人兵體的 危險(xiǎn)率.若該病人懷有唐氏錄^&胎兒的危除率大^f^定的危險(xiǎn)率截 止值，則應(yīng)勸說諒滴人作進(jìn)一步的診斷試驗(yàn),以便確iibl否患有唐氏綜合癥，除了母體血液中游離e—HC (J和ATP^t外，加入孕齡作為一個(gè)撫將絲一步提離發(fā)現(xiàn)率.由H餅本的母體血液柳 離P—HO (j合量和Ayp付趨于按對(duì)數(shù)一離斯^ir曲線^,因此，通過將病人各項(xiàng)指標(biāo)定量值的對(duì)數(shù)和孕齡代入用多變量判別式分 析法展開的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的概率密度函數(shù)中能達(dá)到聚商發(fā)現(xiàn)率.本發(fā)明的方法和步稞的優(yōu)點(diǎn)之一:8lA與其它5知的方*步取相 比，可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)胎AJt氏錄M病例的百分率更高，假陽(yáng)性率更低.本發(fā)明的其它一些優(yōu)點(diǎn)在下面更詳細(xì)的描述和實(shí)例中將J5^^T楚，


圖l是例2中提到的一M格，表示了 ( 2 1三染色體)各個(gè)指標(biāo)的有g(shù).圖2是樹2中提到的一M格，表示了M指標(biāo)的唐氏綜"^的 檢査效率.田3'是例2中提到的一4*格，表示了組舍指標(biāo)的唐氏錄^fe的 檢査效豐，田4是樹2中提到的一^ft格，表示了&^悉病妊拔中離于誇爽的游離h c (j的e —亞單位分市的百分率的麼沃錄^&病例部分，田5是例2中提到的一/Hft格，表示各個(gè)指橋的唐氏沐^&率， 田《是例2中提到的一4*格，表示在不兩的孕齡范圍內(nèi)，以 a t :p詢對(duì)數(shù)和游離的e—s 0 &亞單位的對(duì)數(shù)作為一個(gè)組合指標(biāo)時(shí)的唐氏錄^&的檢査效率.困7是例2中提到的一/Hft格，表示預(yù)計(jì)的在美頃各地由游離的 e—狂C G和母親年齡將出的唐氏錄^&檢出率，田s,在例2中被提到，表示了在2 i三染色體病例中，游離e—e 0 G亞單位相對(duì)于未患癀妊嫌的各種百分比合景.西9,在例2中被提到，表示了游離e—HC G亞單位舍量的分布，田J 0是樹3中提到的一個(gè)表格，表示由一些指標(biāo)的各種組合得 到的唐氏綜合度的檢出率.田H表示本發(fā)明的用于執(zhí)行檢査麿氏錄^方法所使用的設(shè)備. 田i 2和J 3表^t算用于確定"H^人懷有患病胎兒的危險(xiǎn)率有關(guān)的基準(zhǔn)參數(shù)的計(jì)Wl^沐程田.田:I4表示利用田1 2和i 3所示程序中計(jì)算出的基準(zhǔn)參數(shù)^，人懷有患病胎兒的危險(xiǎn)率的計(jì)算機(jī)^^田，具體實(shí)施方式
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，從病人獲^#體血樣，然后釆用常 規(guī)的分析方法，如本領(lǐng)域內(nèi)^ 的絲學(xué)方法，測(cè)出母體血液帽離 e—狂oa的^.然后，將該值與一組基準(zhǔn)數(shù)扭比較以^該病人好處于懷有患唐錄^&兒的危險(xiǎn)中.為了提商發(fā)現(xiàn)來將孕幹 及母體血液中游離e —H 0 <*的**值與一一準(zhǔn)數(shù)銀進(jìn)行比乾以確定糊A^否懷有悉唐氏錄^I&兒，盡營(yíng)如聞本領(lǐng)域?qū)?1LA員顯見的那樣，在本發(fā)明中運(yùn)用鄉(xiāng)E^ 的分析方法瀏賴體中游離e—Ho G的討都行,狄用預(yù)離e—Hc^的分折方法必須與產(chǎn)生游離e—Ho (J基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的方法是—樣的，如果用了一種新的分析方法測(cè):t游離e—Bo 則必須產(chǎn) 生一組以M法形成的數(shù)拔為基袖的新的基準(zhǔn)數(shù)振，不難理解，在形成對(duì)HO 0的^##的單克隆體的過程中，一些抗體對(duì)該蛋白質(zhì)將M特弁的，而另一些對(duì)與抗體部位關(guān)聯(lián)的裙將是特異的.在本發(fā)明的說明H^中提到的e—EC G合景的測(cè)囊值 包含了雌離HO G朋不論耿說蛋白質(zhì)特異的、缺;^離e — H0 G上^部位成其它任何部位有關(guān)聯(lián)的糖特異的抗體，對(duì)于本領(lǐng)域中的專業(yè)人員來說，不難理^雖然游離的d —ho a亞單位被單獨(dú)"個(gè)基因編碼，但是游離的e—HO G則被至少七^^常相似的基因成偽基因的復(fù)合族,，例如參見"H，an Ohorionic gonadotropin 1)eta—sul)unii; is encoded at least eight genes arranged in tande邁and inverted pairs ，, Boorstein , "7amvakopOules , & IFiades ， Mature Vol 30 0, J982年J2月2日，其中的教導(dǎo)itat引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中.6知七個(gè)游離e—B0 CJ基因中僅有三個(gè)在游離P—HO CJ購(gòu)正常胎盎形成過程中被表達(dá)，例如參見 "fragmentation of "fcli— Bal;a一Sul)un.,it of' hunan Chorionic Gonadotropin produced ^7 0hroriocaroino邊a ", Hishiiaura ,工de , Ul;suno邊iyay K""i邊a * Yuki , and Moohi.z'Ulci ， Endocrizioiogy,Vol. 12 3, HO."9# S豕其中的教導(dǎo)aat引用被結(jié)舍到 本申請(qǐng)中.這三個(gè)閎樣的基因是否在疾病狀態(tài)下、如應(yīng)有胎兒唐氏錄 #時(shí)^達(dá)一直沒有肯定的答案，因此,有可能合成&在氛基酸排列順序上或其它:OT有維小差別的多種形式的游離e—Ho a.還有 可能在唐氏錄^&辨例中， 一個(gè)或多個(gè)游離e—且c g的基因^^，因此，產(chǎn)生游離e—HP G的一個(gè)獨(dú)特的變種戲多個(gè)變異種，根據(jù)本發(fā)明,如瓶些變異種樹的話，那么它們可敏常規(guī)的測(cè)量游離e一HP G的免疫學(xué)方法被溯量出來，如果能有一種擲景與唐氏錄^fe有關(guān)的特定的游離日一HO G變異種的溯定法，可以更進(jìn)一步提高發(fā)現(xiàn)率，事實(shí)厶我們S有效地鄉(xiāng)了單克隆抗體測(cè)餘艦H 0 (J游離的e —亞單位以區(qū)分悉2 j[三染色體妊嫌和未患病的妊嬤，2 i三染 色體的發(fā)現(xiàn)率離達(dá)s 3如本領(lǐng)域?qū)LA員都知道的那樣,利用抗體M量說明特定的分析對(duì)象會(huì)浮到與 一個(gè)有區(qū)別但又相似物質(zhì)的交 又活性的程度.所以患瘸和未悉病病例之同的差別可能是由于存在不同形式的EO G的游離e亞單位所致，這些亞單位由于與所利用的抗 #*某種程度的交又活性而被檢測(cè)出來，如果游離e —H C G亞單位 的這種異常形式被鑒別出來，則它將M為一種新的生物化學(xué)物質(zhì)，實(shí)際± 科學(xué)娥中的資料表明，已經(jīng)識(shí)別出e—so G的這種異常形式(例如參見Bis"nmra等著的文聿)患2 jt三染色體的病例也會(huì)以游離e —H 0、亞單位的異常形式為特征.如采2 i三染色體是以游離e—H 0 G的異常形^/特征的話，則;^[械專ikA員將能夠發(fā)展出;^些異常形式特異的抗體，這 樣可以ftJt氏錄錄的發(fā)現(xiàn)率進(jìn)一提商.12基準(zhǔn)數(shù)據(jù)反映了懷有患唐氏錄舍^^兒孕婦血濃中游離e —tt n aMt<4 f Jll必Mi ,， 、4ib /^好睡ii!n3drTP世脇ll.及切鈦內(nèi)血液中游離e —b o (J的食i:(也稱"未患病的") 對(duì)于本領(lǐng)域?qū)?ikA員來禮不難理解，用于檢査胎A^氏綜a的方法WS:3iii比 較作出決策的過程，；^任何決策過程，裔要有以患有此病戎我們所 關(guān)心的條件的病人和/'戎不患此病成我們所為々條件的病人為基準(zhǔn)的 基準(zhǔn)參數(shù)，本發(fā)明中，基準(zhǔn)缺母體絲中被測(cè)指標(biāo)的 ,如懷有 患唐g錄^&雄兒的孕婦和懷有正常胎兒孕婦的游離e—bq g,通過集中大豫樣本的基準(zhǔn)值而建立一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，對(duì)本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來 說，顯然這組基準(zhǔn)數(shù)，可通過增加基準(zhǔn)偟樣本的數(shù)量進(jìn)一步改獸， 為了確定病A^否處在懷有悉唐氏錄合癥胎兒的危險(xiǎn)中，必須建 立一個(gè)裁止值.對(duì)本領(lǐng)域?qū)＜藛T來說,顯然，建立一個(gè)縱病人是吝懷有患J 3三染色體戎ji S三染色，兒的截止值在辨識(shí)2 i三染色體病例中也^A有效的，這一截止值可由實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)生威基于每個(gè) 病人的病例而建立.截止值也可以以幾個(gè)判別標(biāo)準(zhǔn)為基袖，包括裔要繼續(xù)作進(jìn)一M入性診HW驗(yàn)的婦女的數(shù)目，所有作進(jìn)一步的ftA性辦試驗(yàn)的婦女絲唐氏錄合癥胎兒的平均危險(xiǎn)^和鄉(xiāng)一個(gè)婦女^#定的患病危除率大于一個(gè):*#的危險(xiǎn)率值如0 0耽應(yīng)當(dāng)繼續(xù)作進(jìn)一步的ftA性診斷試驗(yàn)或本領(lǐng)域?qū):A員Ei知的其它判別標(biāo)準(zhǔn) 的決策，截止值能夠通過一些方法*±^包括，百^:,平均正 負(fù)標(biāo)準(zhǔn)偏差，中問值的倍數(shù),病A^體的悉痏危險(xiǎn)率戲那些，械專業(yè)人員a知的其它方法，在本發(fā)明的另"H^可以發(fā)現(xiàn)更多數(shù)目胎JUt fc^合癥的實(shí)施^！ 中-從病人體內(nèi)取出母體血液樣^然后，敏常規(guī)的分析法，如*領(lǐng)域公知的M^法測(cè)出母體血液中未受執(zhí)的bo g分子、游離的 e—hocj、 ue和ape (以下稱"指標(biāo)，，)的合ft,盡夢(mèng)如本領(lǐng)域?qū)iA員顯見的那樣，在本發(fā)明中逸審鄉(xiāng)a^的分析方法來測(cè)量 母體血液中上述指標(biāo)的含囊都行，伹用于每項(xiàng)指標(biāo)的分析方法與形成 該特定指標(biāo)的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的方法必須是相同的，如果對(duì)某一指標(biāo)采用一 種新的分析方法，則必須產(chǎn)生一組以該方法產(chǎn)生的數(shù)據(jù)為基rt的基準(zhǔn) 數(shù)據(jù)，然后、采用貝葉斯定律、鶴人的先驗(yàn)危險(xiǎn)率^i過將病人每項(xiàng)指標(biāo)(未受損的ec g^、游離e—hc o, u:e和app)的定 :ft值和游離P — h c g對(duì)未受損h c g分:^量的比值以及病人的孕齡代入用多變4判別式展開的基準(zhǔn)參數(shù)的概率密度函數(shù)中確定出的未 危險(xiǎn)率.、 、 、多變量判別式分析法可以在市場(chǎng)上有的計(jì)算機(jī)程序統(tǒng)計(jì)軟1Hi"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(由s a s研究所公司生產(chǎn)和銷售)上計(jì)算，戎采用其它多變景統(tǒng)計(jì)分析法或本領(lǐng)域?qū)L人員公如的其它統(tǒng)計(jì)軟件包計(jì)算.概率密度函M把病人每項(xiàng)指標(biāo)值與基準(zhǔn)參數(shù)比較提供了一個(gè)方 法，雖然，如本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員顯然了解的那樣，也可以類似地使用其 它概率密度函私下面具體指出了一種型式的概率密度函化並能充:M^I于本發(fā)明中.用于唐氏錄舍癥危險(xiǎn)率的公^,((1 //7 5^T)EXP(-， 5 (Xa-Ma〉T00V-i (Xar"^a) J箭先驗(yàn) 危險(xiǎn)率+ ( 1/ /1 )IXP(-. 5 (Xu-Mu)TOO，l (3Cu-Mu))*(1一先驗(yàn)危險(xiǎn)率)〕 ，(1 )'下標(biāo)"a"表示鷹辨的痏例下標(biāo)《 u"表示未患病的病例(x — m )表示一個(gè)向Jt其中每個(gè)元棄是每個(gè)變:l:減去變Jt平均值 的值，oov-i是該棋型中所有變景的悉病和未悉病病例的J^方差矩陣 的逆《(X—M)I是向Jt(X — M)的轉(zhuǎn)置. 2XP表示指數(shù)函數(shù).1 oo"v l表示該煤型中作為基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的所有變4的協(xié)方差矩陣的行列式.本領(lǐng)域?qū)kA員顯餘道，患病妊娠和未患病:ttit各自的協(xié)方差 矩陣可以代替聯(lián)合協(xié)方盡矩陣.用于患唐氏雄舍癥危險(xiǎn)率的公式就成 為， _(!//|00" a)XEXP(—， S(Xa—Ma)To0(3Ca-Ma))*先i^fc險(xiǎn)率____■ ( 2 )l〔"http://|0OV|a )箭E3C:P (- S (Xa-Ma ) T(J 0 Va-1 (Xa-Ma ) ) * ^驗(yàn)危險(xiǎn)率十(1 //|。OV| u) EXP (- 5 (Xu-Mu)TO0Vu-i (Xu-Mu)"(l-先驗(yàn)危險(xiǎn)率)〕I cov I來示該鄉(xiāng)中作為基準(zhǔn)參數(shù)的所有變量的協(xié)方差矩陣的 行列式.可能悉唐氏綜舍癥的先驗(yàn)概率的假設(shè).該先驗(yàn)概率一般約為i/soo.i為了實(shí)行多變量判別式分析法，還要作一個(gè)關(guān)于什么樣的危險(xiǎn)率截止 值能夠構(gòu)成一個(gè)陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果的決策.例如，如果希望一個(gè)懷有患有唐氏綜合^^兒的概率等于戎大于1/400的孕婦進(jìn)行進(jìn)一步的診斷試驗(yàn),則當(dāng)多變4分析的結(jié);^以孕婦懷有患唐氏綜舍癥胎兒 率等于或大于i/4 0 0時(shí)，該孕婦被認(rèn)為兵有一個(gè)陽(yáng)性 結(jié)果，如果得出陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)恭應(yīng)勸，人作^-步的診斷 以確^否患有唐氏練合癥，參照困U至J4,圖中顯示了用，算基準(zhǔn)數(shù)插和兵體的危險(xiǎn) 率的設(shè)備及計(jì)算機(jī)程序的流程田，如田l J所示，為建立基準(zhǔn)數(shù)據(jù),在患病和未患病妊錄的病例中,采用常M^T法確定出孕齡GA, Ayp^B:和游離p—狂o a的討， 為提高可靠性選擇了大量樣本.用于建i^準(zhǔn)數(shù)據(jù)的測(cè)童值被示意地 用io表示.一旦經(jīng)由適當(dāng)?shù)妮斎胙b置i S進(jìn)入后由處理單元2 o計(jì)算出基準(zhǔn)參數(shù)2 2,作為某^人具體的危險(xiǎn)率2 S可以根據(jù)該病人被測(cè)出的 具體的指標(biāo)數(shù)值(用3 O表示)計(jì)算出來.圖i 2和J 3表示^基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的程序框田，圖！ 4表示計(jì)算具體的危險(xiǎn)率的程序框圖.現(xiàn)參照閨J 2和J 3 ,在第一個(gè)循環(huán)i 0 0中，程序從一個(gè)參照 組讀入識(shí)別參數(shù)13),孕齡GA, APP和游離e—HO G的定量值及一個(gè)妊i^:否患2 J三染色體的代碼.見步稞i o 2,在流程田中，如步稞l 0 4所示，孕齡GA用變量3^表示，A3":P的對(duì)數(shù)用X, 表示,游離e—HO G的對(duì)數(shù)用X，表示，然后,在Xi , X，和X，錄據(jù)的基硇上確定戎計(jì)算扭和矩陣及和一積矩陣，見步猓10 6 .用 來對(duì)參照組中患癤和未患瘸病例計(jì)數(shù)的變4Moog,然后增加！ 一旦循環(huán)結(jié)束,如由鄉(xiāng)幾l 1 0所示，敏如"標(biāo)號(hào)！ J 2淋的 由量I、 J、 K所定義的一系列循環(huán)計(jì)算出,平均值，在這些循環(huán)中，運(yùn)用循環(huán)J 0 O定義的和矩陣和在循環(huán)J 0 0中計(jì)算出的和一積矩陣 計(jì)算扭協(xié)方差矩陣，這些循環(huán)鍤束后，要對(duì)是否將應(yīng)瘸和未患病病例 的協(xié)方差矩陣組舍起來作出選擇.這種選擇在步稞U 4 , H (i和:t 1 S中彼輸入.如果選擇組合，則協(xié)方差矩陣就被組合成一個(gè)由步 稞2 2 0給出的聯(lián)^方差矩陣.如步樣！ 2 2所示，該聯(lián)合協(xié)方差 矩,取逆，得到逆聯(lián)合協(xié)方差矩陣I^CM,該逆聯(lián)^方差矩陣被 存入文件中，並在步據(jù)1 2 4和J 2 6中被打印出來，如*4擇不組 合，則在步艱！ 2 3和i 2 5中對(duì)^協(xié)方差矩陣的4^個(gè)取逆，且 將平均值和逆協(xié)方差矩陣存入文件並在步猓i 2 5和2 2 7中打印出 來.這些IWt包括用于計(jì)算特定個(gè)人懷有悉病胎兒危險(xiǎn)率的基準(zhǔn)參數(shù).參見田J 4 ,通過執(zhí)行田J 2和i 3所示程序計(jì)算出來的基準(zhǔn)參 數(shù)在步驟i 3 0中被泉、，基準(zhǔn)參數(shù)包括平均值和遮#協(xié)方差矩陣, 在步驟13 2讀入具體的病例記錄，包括病人識(shí)別標(biāo)記，孕齡GA, ArP和游離e—EO & 在步驟J 3 4中更準(zhǔn)確地計(jì)算孕齡，在步 猓"6中計(jì)算孕婦的年齡.在2 3 S中，在孕婦##和發(fā)生率參數(shù) 的基袖上確定先驗(yàn)危險(xiǎn)牟，在下面討論的實(shí)例中，這一計(jì)算結(jié)果為J/S 0 0,是一個(gè)典型的lfctt.在1 4 0中，確定該先睡危險(xiǎn)豐與懷有悉病胎兒(A B T )的相 對(duì)頻率的乘積,即上述等式(i ) 、 ( 2 )的分子，在1 4 2中，計(jì) 算出懷有患病胎兒的相對(duì)頻率與(J 一M危險(xiǎn)豐)的乘積(B T ),即上述等式(J ) , ( 2 )分母中辨笫二個(gè)因子，在！ 4 4中，利用 貝葉斯定律確定具體的危除率，即ABU-ABT/(ABT + ]i:r) (等式(i ), (2)),在24 6中,打印出結(jié)果即打印出病人 特定的危險(xiǎn)率A B B和病人識(shí)別號(hào)，對(duì)于本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員，易然還可以釆用不同于線性判別式分析法 的其它統(tǒng)計(jì)學(xué)或數(shù)學(xué)方法來計(jì)算基準(zhǔn)參數(shù)，根據(jù)秋明一4^的實(shí)施方案，從病人獲得母體血液樣本然后采用常規(guī)的分析方法、包括本領(lǐng)域公知的免疫學(xué)方法來測(cè)**體血 液中游離e—HO G及APP (下面稱"指標(biāo)，，)的合i.盡營(yíng)如本領(lǐng)域?qū)kA員^^的那樣，在本發(fā)明中用做^^的分析方法測(cè)妙體血液中上述指標(biāo)的合量都行，但用于每項(xiàng)指標(biāo)的分析方法必須與形 成各指絲準(zhǔn)參數(shù)的方缺一樣的.如果對(duì)某一指標(biāo)賴一種新的分 析方法，則必須在用該方法形成的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上產(chǎn)生出一組新的基準(zhǔn)參 數(shù)，然后,鄉(xiāng)貝葉斯定律，病人先驗(yàn)的她率、及通過絲人每項(xiàng) 指標(biāo)的定量值和孕齡一起代入用多變4判別式展開的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的,氏錄^g^兒的危險(xiǎn)率.為進(jìn)一步提離發(fā)辦,將病人游離e — H 0 G和A I" P定4值的對(duì)數(shù)值和孕齡一起f^A用多變量判別式展開 的基準(zhǔn)參數(shù)的概率密度函數(shù)中，多變囊判別式i^f法可以在巿場(chǎng)上有 的計(jì)算機(jī)程序統(tǒng)計(jì)軟件包"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(由S A S研究所公司生 產(chǎn)和銷1I)上運(yùn)算，成,本領(lǐng)域?qū)I(yè)AM公知的其它多變量統(tǒng)計(jì)分 析方法J^它統(tǒng)計(jì)軟M,為逮:行判別式M^見,先在通常未)Ml擇的^對(duì)象中對(duì)悉有1唐氏沐錄的^&概率作出一個(gè)僻私^2:來^該先勝概*1￡似為 i/s o o,為了進(jìn)行多變量判別式分析法，還要作出什么樣的危險(xiǎn) 牟截止值構(gòu)成陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)呆的決策，例沐希望一W有患唐氏錄合 癥胎兒概率等于駄于i/4 oo的孕婦作進(jìn)一步飾試私則當(dāng)多 變4分析的結(jié)果農(nóng)明一個(gè)孕婦懷有患唐氏錄舍^tt的輛率等于J^ 于i/、 oo時(shí),該孕婦被iMf兵有一個(gè)陽(yáng)性，結(jié)呆，著顯示出陽(yáng) 性試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)勸說⑩人作進(jìn)一步的診斷試驗(yàn)以確^否患有唐氏 綜緣對(duì)于本領(lǐng)域?qū)Ｃ馊藛T^說，顯然，在上面i^的所有實(shí);^r案中, 改變陽(yáng)性的危險(xiǎn)率截止值成在研究對(duì)象中對(duì)不同的小組釆用不同的先 驗(yàn)危險(xiǎn)豐,將會(huì)改變對(duì)每個(gè)癤人作判別式^f的結(jié)呆，本發(fā)明不僅局限于上^施方案,還包括所有可能的實(shí)施方案以 及在下面例子中所公開的M指標(biāo)的組合.例；采用4 0 0以上病例樣*#究膽兒唐氏錄舍癥與母體血液中游離 e —且c g含量以及母體血清中a i" :p討(msa3pp ) 、 u e和未 受損eo g之間的關(guān)系，這些樣本包括2 s例從E^懷有應(yīng)唐氏錄合錢兒的孕婦體內(nèi)得到的樣擬與患瘸病例對(duì)照的對(duì)照樣衣對(duì)*血液樣本a:pp、未受損邁c (j分子、游離p—HO g及u e (以下稱"指標(biāo)")的含量值由下列m方法測(cè)定，指標(biāo) 3!^法"^Xw 雑接的絲吸附m法(孤ISA )U E 放針免疫瀏定法未受損EOG 小珠型ELISA游商e—加9 BiaSA每項(xiàng)指標(biāo)的值成為在巿場(chǎng)上有的計(jì)算機(jī)軟件統(tǒng)計(jì)軟件包的統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)(s a s研究所公司)上進(jìn)行敏判別艘和線性判別式處理中的一M4,用于建立一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù).游商P—邁o g與未受禍h0 G分子之比^人的雜也被S作變妙入.i^t判別處理?xiàng)l所有變量能 入到線性判別式處理中.然后^!!對(duì)#^變量及各變Jt的不同組M行線性判別式處理，這些判別式分析法的結(jié)果歸納在 下表中.'炎敏jti:指測(cè)^呆顯示陽(yáng)性的胎^ur氏錄a病例的百分 比，假陽(yáng)性豐指測(cè)試結(jié)果為陽(yáng)性的正常胎兒的百分比， 變量 n敏度 假陽(yáng)性率4夷4 *2%4《2,8多37《8*"msa;f;p, u:e未受損ho(jso.0多7.2多游離卜hc(j+未受損訓(xùn)60.o多8*5%復(fù)舍w/0,比值76夷5.3多765,復(fù)合多"3多復(fù)合w/0游離e—hcg60.o實(shí)5.3多*未受損30&對(duì)數(shù)+ (游離p一HOG對(duì)數(shù)十未受禍HOG)7.",未受損hc0"對(duì)數(shù)、MSAyP對(duì)數(shù)十(游離e —邁og對(duì)數(shù)+未受損bc(j )￡多多7.4多復(fù)—,MSAP:P+游離p—BOG+未受損H^G + ue +比值每項(xiàng)變Jt中都包括^^,危險(xiǎn)W:值- J /4 o 0, ( * )為！ /3 - 5外，對(duì)本領(lǐng)域?qū):A員來說，顯然，改變確定陽(yáng)性的危險(xiǎn)豐Hit仏戎對(duì)研究對(duì)象不同小組采用不周的先驗(yàn)危險(xiǎn)豐將會(huì)改變對(duì)某病A^f傲的判別式處理的結(jié)呆， 例2用$ s o例以上的病人樣本來研究胎JUt氏練合癥與母體血液中 游爽e—HO G舍量之問的關(guān)系，首先對(duì)2 9例S知懷有應(yīng)奢氏錄合癥胎兒的孕婦獲得的血液樣本以及用于對(duì)照孕齡(周數(shù)相同)、母親年齡(相差3年以內(nèi))和冷凍^存時(shí)坷(相差在一個(gè)月之內(nèi))的 5 2 O例未悤病的樣本進(jìn)行分析，所有樣本都取自于未患搶舉病的懷單胎的白人孕婦. 為了a估計(jì)檢出率中有一定傾向的固定偏差-采用了有效組的概念，有效^UL—組獨(dú)立于基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù).有效組中由病人得到 的結(jié)絲用于建iJI準(zhǔn)數(shù)私而朋來與基準(zhǔn)數(shù)振機(jī)以被檢出率.這另一個(gè)有效組包括2 6個(gè)附加的被確定為2 1三染色體的病例(總 共5 5個(gè)病例)和隨機(jī)選取的由J 5 9個(gè)對(duì)照樣^fi成的組，對(duì)照樣**似地也取自未患糖尿病的懷單胎的白人孕婦.所有的研究包括;^體血液中下列^ 標(biāo)值購(gòu)七個(gè)不閎的測(cè)定方法的4 3 8 8個(gè)判定，指標(biāo) 測(cè)定方法 站A3T 雜接5i^S^法(ELISA)未受禍加G ELISA 未受禍H0G+游爽曰一訓(xùn) EUSA 游離P ^免疫皿法(R工A )游離a — ECCJ RIAU E 二種方法,誨免疫m法和R工A每項(xiàng)指標(biāo)偟均成為在市場(chǎng)上可得到的計(jì)算機(jī)軟件統(tǒng)計(jì)軟件包 "統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(S A S研究所公司)J^行g(shù)判別處理和線性 判別式處理中的一核景，以妙一絲準(zhǔn)數(shù)據(jù)，病人的孕齡敏當(dāng) f變J:加入.然后分別對(duì)每個(gè)單獨(dú)的變*和各變#不同的組械，線 性判別式處理.以J/3 6 S為患唐氏錄^危險(xiǎn)率的截止值將病k分為患病或未患病病例.把劃為患病的未患病病例考慮是假陽(yáng)性率， 每個(gè)病人患唐氏錄合癥的危險(xiǎn)率采用貝葉斯定朱患病和未患病病例 的多變，IE^概率密度函數(shù)以及通常以i/8 0 O作為先敗危險(xiǎn)率來計(jì)算.聯(lián)合協(xié)方差矩l^于每個(gè)概率密度函數(shù).有關(guān)初始研究組的結(jié)呆顯示在田J至3的表i 3中，田S至7 的表5 — 7是根據(jù)對(duì)有效組中病人的分類將到的結(jié)采，.田4所示的表 4 、田S和田9是根裙初始研究組和所有悉病病例得出的，由測(cè)^T法彈到的結(jié)果拔分析，以確定患瘌和未患病病例之間各初指標(biāo)值之間是否存在明顯的差異，表J (田l )表示患病病例與未 患病病例之問除UE外的所有指標(biāo)都表現(xiàn)出明顯的差別，此外，確定了各項(xiàng)指標(biāo)的假陽(yáng)性豐和發(fā)現(xiàn)豐，見表2 (田2 ),3ftJt溷量未受損 耳0 G及游離P—HO CJ亞單位的BO G測(cè)定法得到最離的發(fā)現(xiàn)率，可以aiat將^^單獨(dú)的指標(biāo)組合成復(fù)合指標(biāo)M—步提高發(fā)現(xiàn)率,其中一種復(fù)^括測(cè)量未受損HC G分子和游離e—B C G亞單位的HC CJ^法，它在表3 (田3 )所示的復(fù)合中產(chǎn)生最離的發(fā)現(xiàn)率.單獨(dú)對(duì)H C (J的p和a亞年位的評(píng)估表明a—亞單位在悉病和未 患病病例之岡沒有明顯盡異(P = 0 , 2 3 )而e —亞單位在患病病 例中有明顯增加(P = 0 0 0 5).正如本領(lǐng)域?qū)lA員所絲的,概率:p通過表明一#觀察到的結(jié)果以至少這樣的極大值的可能性是 偶然發(fā)生的來衡量科學(xué)研究中證據(jù)的強(qiáng)弱，p值趄小，,說明觀察不是 偶然出現(xiàn)的證據(jù)越強(qiáng)，圖s表示:to55、 5 o多和9 o突游離e—EC奪隨孕齡的曲線.發(fā)現(xiàn)在未患病妊拔中，隨著孕齡増加有連續(xù)下降的趨勢(shì)，對(duì)胎兒唐氏綜合&瘸例中游離e—Ho G舍量的分析揭示了s (5《下降到未 悉病病人;的乎均值之上，悉病和未患病病例中游離e—Hc (}的^*都遵循對(duì)數(shù)高斯*(P-O 7 '和0 . S 6)，田9畫出了這種^.表5 (困S ) 給出了單獨(dú)依靠游離e—HO G亞單位和游離a—EO G亞單位的發(fā) ^率數(shù)據(jù).表S中顯示了游離e—HC G有離的發(fā)現(xiàn)率.用AI":P和游離e—HO G的組^行分析可得到更離的發(fā)現(xiàn)率, 通過將游離3 — B 0 G的對(duì)數(shù)和MSAI"P的對(duì)數(shù)結(jié)合到上述軟件包 "統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(S A S研究所公司)的線性判別式處理中，可得 到如表6 (田6)所示的更優(yōu)趙的發(fā)現(xiàn)率.與其對(duì)數(shù)相反，用游離e—HC G含景和ATP合i也可得到高的發(fā)現(xiàn)率，對(duì)數(shù)據(jù)的進(jìn)一步分析表明A I1 P和游離e —B 0 G都與年齡無(wú)關(guān)(T- 0 S3 9 4和1 - 0 5 2 K,對(duì)四個(gè)不兩年齡組的 P和游離p—H 0 G賴作Kruslc,Hallis試驗(yàn)(年齡-30, 31 35， 3 6 4 0和4 0 )),此外,游離P—亞單位 合量和A r P^t的相關(guān)系數(shù)(r)與零沒有顯箸差別(未患病和患 病辨例^!l為r-0 0" E= 0 , 3 9, r - - 0 . 0 6 ,P- 0 . 8 1 ),在我們的數(shù)據(jù)中,發(fā)現(xiàn)的基*^果肯定了這#-個(gè)事實(shí)，即游離的e—亞單位儲(chǔ)氏綜合癥的發(fā)現(xiàn)率達(dá)到最高有幫助，實(shí)際J^采用只測(cè)量游離e—B C G的^法所產(chǎn)生的發(fā)現(xiàn)率和假陽(yáng)性率分別為 6 5 4 5S和S 。 2多.這些比率與其它人利用三種M^法的組合的 報(bào)導(dǎo)相差不大.因此，如前面指出過的那樣，^測(cè)定數(shù)貝是本發(fā)明我們關(guān)于游離e—HOG作用的發(fā),據(jù)如下，(a)單獨(dú)看對(duì)唐氏綜械發(fā)現(xiàn)率微最大的是游離e — E 0 0敝法,(D )對(duì)未損H 0 (J分子的測(cè)定得到更低的發(fā)現(xiàn)豐,(C )淵4未受損S 0 G分 子與游離e—HO &組合的測(cè)定^到一個(gè)比只測(cè)量未受損3(3 G分子擁定法更離的發(fā)現(xiàn)率.已經(jīng)證實(shí)，胎碧氏錄舍癥的患病率隨母解齡而増加，因此，如前所逸為了用本發(fā)明在臨床應(yīng)用中得到病人兵體的患病危姊，.將隨母體年齡而異的先勝危險(xiǎn)率代入到多變量判別式分析處理中，由 于ATP攤離P—HC &的討均與##年齡無(wú)關(guān)，因此，我們對(duì)我們的數(shù)據(jù)作了分析,以找出有多少未患病和患病的婦女在對(duì)每個(gè)不 筒的年齡給定一個(gè)先驗(yàn)危險(xiǎn)率賊下具有陽(yáng)性的結(jié)果.J^倌應(yīng)根據(jù) 夷^分詵話耍孕婦年餘M為基袖、來糾在美頃進(jìn)行廣泛的全面性普査中的假陽(yáng)性豐和炅敏度，如表7 (田7 )所示，這種"t^表明有 可能達(dá)到《 0多的發(fā)現(xiàn)率和S多的假陽(yáng)性率.對(duì)fj 2所描述的樣本作進(jìn)一步分析以發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)的其它組合的發(fā) 現(xiàn)率.3U體地說，以閎樣的危險(xiǎn)* 止值和先驗(yàn)的危險(xiǎn)率對(duì)各指標(biāo)的不聞組合(指標(biāo)中值的倍數(shù)及;g^標(biāo)的對(duì)^話入稱加入孕齡下)進(jìn)行例2的線性判別式處理，利用基準(zhǔn)數(shù)據(jù)和有效數(shù)^行線性 判別式g結(jié)果歸納于田J o的表s中. 例3下例說明游離P—HO G的一步測(cè)定法和二步測(cè)定法的準(zhǔn)備工作以及它們?cè)诒景l(fā)明方法中的應(yīng)用.游離e—HC G—步測(cè)定法的準(zhǔn)備工作1. 在具有9 6井的傲滴定平皿上褒蒹一層對(duì)人絨毛胰促性腺激 素(BL C G ) ^的游離P亞單位特異的"捕獲"抗體，抗體可以是 單克隆或多克隆抗體.用來IUI平皿的抗體濃/I^4H^井0 . 但如需要，也可以不周，乎皿在4 t 下培養(yǎng)至少J 6小時(shí).2. 用合o oS劣吐溫2o的:ea7 2的磷諛鹽鍵沖液沖洗 平皿，也可用其它合適的^鍵沖液，然后用含3劣;^f動(dòng)物蛋白和 0 0 S5S吐溫2 O的PH 7 2的璘酸鹽鐵沖液將平皿"阻隔"， 也可使用本領(lǐng)械專JL人員所熟悉的其它溶濃，如J多的牛血清蛋白溶 液，將3 0 0#^的,溶 到每^#中，讓平皿在室溫下培養(yǎng)！ 小時(shí).也可用另外的阻痛方法，如"涂釉法".3. 然后如前所述地清洗平皿，將"o辦含有麟臠e —H 0 &亞單特異的生物素化的抗體測(cè)試疑沖凍加到每^#中6所用的 測(cè)試疑沖^t舍有3多;^動(dòng)物蛋白和合有D 0 5夷吐溫2 0的PH7 2的磷妙疑沖液，但也可用本領(lǐng)域?qū)LA員^^的鄉(xiāng)一 些舍適的溶液.抗體汰據(jù)操作者的吝歡可以是單充隆、也可以是多克 隆的，可以是與,iW^t氣化物聘成堿性褲酸一這樣的生物素外 的一種物質(zhì)結(jié)合了的抗體.測(cè)試緩沖液中抗員濃度被辨整到達(dá)到條 隹吸收率.4.取2 0録的樣品本加入每付中，祥本可以是，測(cè)試鏡沖 艱，作為證實(shí)測(cè)試性能的空白， 一種用于標(biāo)準(zhǔn)化未知樣品值的游離— HCO溶液，或由懷孕到中期三個(gè)月的孕婦體內(nèi)取出的血清樣本.將平皿 渦旋30秒鐘,然后放在P為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上,在室溫下培養(yǎng)30分鐘，S 然后如前所述地清洗平皿，將舍有結(jié)合了辣根過氣化物聘的 鏈球窗抗生物柰蛋白的i 0 0#^測(cè)試緩沖^ 入#4^中.如;^f 用的第二種抗體與除生物素以外的一種物質(zhì)結(jié)合的,則不裔這一步驟. 測(cè)試緩沖液中的鏈球菌抗生物柰蛋自一過氣化物錄的濃^#^ 2 O傲充，將平Jfl^E室溫下放置在P為2 0 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上S 線6. 如前所述地清洗乎JL.將一種i 0 0微升的鄰一次^1^質(zhì)溶紗入每錯(cuò)中，這種基質(zhì)溶液也可用本領(lǐng)域內(nèi)專鼓員^^的一些適,當(dāng)辨染劑中的任一種代替，並取決于與第二種抗絲合的物質(zhì)是什么.k后將平皿放在P:為2 0 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器± 在窒溫下置 于暗處培養(yǎng)87. 然后，將〗0 0#^的稀疣酸(1 OH)加入每個(gè)井中以 中止該基質(zhì)的反應(yīng).s 在4 9 2 n邊下aat分光光度a^^定每+井的吸收卒，e —B 0 O的二步灘定法的準(zhǔn)備工作i 在M 9《井詢賴滴定平4上覆盡一層對(duì)AM4M促性腺激素(H 0 G ) ^的游離P —亞單位特異的" "抗體，抗體玩可以是單克隆的，也可以是多克隆的，用于《盡平皿的抗體密&€*0 . S傲充，伹如需要，也可不同.平M在4 t!下至少培養(yǎng)l 6小時(shí).2. 用合O ( 5夷吐濕20的P丑7 ， 2的璘酸鹽疑沖歡潰洗平皿，也可用其t;適當(dāng)?shù)那逑匆蓻_液，然后，用含3多水解動(dòng)物蛋白和0 , 0多多吐溫2 0的TH7 , 2的磷fta疑沖濃將平皿"阻隔"， 也可^本領(lǐng)域技術(shù)人員所M的其它溶私如l多的牛血清蛋白溶 液，將3 0 0#^的阻隔溶難加到每個(gè)井中，讓平皿在室溫下培養(yǎng)J 小時(shí),也可用其它阻隔方法,如"涂釉法"，3. 然后，贈(zèng)所艦清洗平皿，F(xiàn)種！ 0 O做的測(cè)試緩沖 #入每#中，所用的測(cè)試鍵沖5fc&合3夷水解動(dòng)物蛋白和 0.05多吐溫20的PH7.2的磷酸鹽緩沖私也可用本領(lǐng)域?qū)?業(yè)人員所公知的一些合適溶液中的任何一種.4 然后將2 0辦樣插入每錯(cuò)中,樣本可以是，作為證實(shí)測(cè)試性能的空白的測(cè)試鐵沖私 一種用于標(biāo)準(zhǔn)化未知樣本值的游離e一Hoa溶私^W孕到中期三個(gè)月的婦女體內(nèi)取出的血清樣本.將平皿渦旋3 0秒鐘，然后放在P,為2 0 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上在寞溫5 然后，如前所述地清洗平皿，將！ 0 0^含有，離e — HC3 &亞單位特異的生物素化辨抗體的測(cè)試鍵沖#入4^井中*根 據(jù)操作者的吝〗fc抗體可以是單充隆的或多充隆的，也可以是與BH(P 辣M氧化物^械性褲酸im這樣的生物素外的物質(zhì)結(jié)合了的'一 "調(diào)節(jié)抗體的濃A以達(dá)到lt佳吸收率.將平 旋3 O秒鐘,然后放在P為多p 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上在宜濕下培養(yǎng)3 06, 然后如前所^ft清洗平皿，將i o t> t^含有結(jié)合了辣^ai 氣化物癉的^t苗^^物素蛋白的測(cè)試疑沖ifc&p入到每錯(cuò)中，如果 所用的笫二種抗#^除生物素以外的一種物質(zhì)結(jié)合了的，則不怖逸一 步驟，測(cè)試疑沖液中m苗M物素姿白一過栽M聘6^^^i:升2 O傲克，將平皿在皇濕下置于P為2 0 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上5分鐘，7. 然后如前所^k清洗平皿，將i o o微升的一種鄰一次^氣基質(zhì)溶紗入每錯(cuò)中*這種基質(zhì)溶液也可以用本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人 員么^ 的一些適當(dāng)染剤中的鄉(xiāng)一種代替，並職于與笫二種抗體相結(jié)合的物質(zhì).然后將平皿放在P為2 0 0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上.在宜溫下置于暗處培養(yǎng)《^41 ,s 然后，將i o o傲升的稀珠酸(i o h 〉加入每4井中以 中止i^質(zhì)的反應(yīng).9,在4 9 2 n邊下aiit^i光度測(cè)量^定4H^的吸收率，這兩種a^法用來執(zhí)行本發(fā)明的方法，用了l "例病人樣本來^究胎A^氏錄余fe與母體血液中游離e—bc g^t之問的關(guān)系.對(duì)從己知懷有患唐氏錄^fe胎兒的孕婦體內(nèi)取將的2i S 2例H^的、未患病樣本進(jìn)行了分析.所有樣本均取自懷單胎的未患糖尿病的白人孕婦.然后，我們用虹isa測(cè)定法械病人樣本以得到msapp的定*仏鮮獨(dú)地用一步艦法和二步艦法將出游臠e—Ho g的含量，由輛測(cè)定^H^到的MSA3^值和游離e—hc a值成為在巿場(chǎng) 上可得到詢計(jì)算^c件統(tǒng)計(jì)軟伴扭"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"上進(jìn)行的線性判別式處理中的一M量以妙一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù).病人的孕齡也作為一個(gè)變4^P入判別式處理中.對(duì)一切孕齡及孕齡在l 4至1 6周之間的判別式分析結(jié)果歸納如下，一切孕齡很陽(yáng)性率發(fā)現(xiàn)率對(duì)照應(yīng)病-o6"《25226-"+:Log(A:FP)IS225-2)8 ，2多33 ,3劣"Log(e-l多"s33 ,3多23628"6i72 4至26周假陽(yáng)性率發(fā)現(xiàn)率對(duì)照患病-！)2 04"多73 *7爽104:Log(e-國(guó)2)7.!《9SLOg(曰-9. 2多6多IiOg(P-54 (6秀968, 3秀63參6多96注》所有分析均包括孕餘.*在后面帶*的分析中，另外兩組樣本值為2 6 0和3 J 6的結(jié)果j^2^h步法處理,一2表示二步法處理. 發(fā)現(xiàn)豐指顯示陽(yáng)性測(cè)試結(jié)果的舶兒唐氏雄合癥的百分率.29假陽(yáng)性豐指顯示陽(yáng)性擁試結(jié)采的正常胎兒的百分比.^S5^析的未患辨樣本的數(shù)貝， ^指被分析的患痏樣本的數(shù)貝,~Xt—切懷孕周^tX懷孕J 4至1 6周孕婦利用游離P的一步M^ 法和A P P的組舍可得到最離的發(fā)現(xiàn)豐和傲低的假陽(yáng)性率，我們的結(jié)果進(jìn)一步支持了在孕婦血清檢査方案中以可行而有效的 方M行唐氏錄^檢査的良好效能，該良好效能包括，(a)#ft 入性方法,(")低假陽(yáng)性率和離發(fā)現(xiàn)率,(0)朋ttjjJ^賴立 的指標(biāo)，(a )對(duì)血樣無(wú)苛剁限制(一夭的什么時(shí)侯,進(jìn)食辨禮個(gè) 人習(xí)憤等)及(e )與其^前檢査方法的相容性，我們的結(jié)來表明，雖然^比其它方法R^的生物化學(xué)分析法， 在唐氏綜^&的檢査中有可能得到更離的發(fā)現(xiàn)率，在唐氏錄合&檢査 中，僅僅使用最有效的指標(biāo)就能對(duì)絕大部分悉嚴(yán)重精神發(fā)育遲緩的條 脊逸原因的家庭在早期妊嫌中提供非便入性檢査倌患.對(duì)于本領(lǐng)械的專JiA員來說，顯然，改變判斷陽(yáng)性結(jié)果的為臉率 截止值，或?qū)ρ芯繉?duì)象的不同小組采用不詞的先iWi險(xiǎn)率，將改變對(duì) 病人進(jìn)行判別式處理的結(jié)果，因此，應(yīng)當(dāng)明確，本發(fā)明包括了所有落在下列農(nóng)利要求書范圍之 內(nèi)的改進(jìn).特別地，本發(fā)明涉及如下實(shí)施方案h —種確定孕婦是否處在懷有患唐氏缽合慰臺(tái)兒明顯危險(xiǎn)中的 方法,包括，瀏囊孕婦母體血液中A^^促性腺激素的游臠e亞單位的^Hk,的孕齡代入-HHR率密度函數(shù)中，由此將所說的孕婦的所說游離P亞 單位含量和所說的孕婦孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比私以確^/犬說孕婦懷 有患唐氏錄合ik^兒的危險(xiǎn)率.2 —種確定孕婦是否處亍懷有患唐氏綜合aSJ^兒明顯危險(xiǎn)中的 方法，包仏敝孕婦母體血液中A^頓促性鵬素的游離e亞單 位，測(cè)定結(jié)絲胎JU^氏綜械危險(xiǎn)率增加的征兆，3.如實(shí)施方案2所述的方法，其中還包括，測(cè)定孕婦血液中的 a —胎兒蛋白，人絨頓促歸激素中游離e亞單似d —胎兒蛋白 的測(cè)J:結(jié)果;U^Ut氏錄合癥危險(xiǎn)率增加的征兆.4 —種確定孕婦是否觸懷有患唐氏錄合慰&兒明顯危險(xiǎn)中的方法，包括，測(cè)量孕婦母體血液中AM鎖促性腺激素中游離e亞單 位的合量，並將該測(cè)量值與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確定孕婦旨患唐氏 綜合癥胎兒的危險(xiǎn)率.5. —種確定孕婦是否處于懷有^f氏綜合慰&兒明顯危除中的方法，包括，用3a^A絨4^促性腺激素中游離e亞單位的測(cè)定法測(cè)量孕婦母體血液中一種被分析物的舍量，並將對(duì)該被分析物的測(cè):ft結(jié)果與 一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確定孕婦懷有悤唐氏錄*胎兒的危險(xiǎn)率，6. 如實(shí)施方案4戎5所述的方法，其中還包括,測(cè)量孕婦母體血液中or-胎兒蛋白6WHt,並將這一《 結(jié)^孕婦的孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比IIU7 *如實(shí)施方案4 、 5或6所述的方法，其中比較步驟包括將測(cè):ft結(jié)呆^X到由線性判別式^l的由一組基準(zhǔn)數(shù)振產(chǎn)生的一個(gè)概率密 度函數(shù)中.如實(shí)施方案4、 5、 6或7所述的方法，其中比f(wàn)e^猓包括將測(cè)4結(jié)果的對(duì)數(shù)與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較，9. 一個(gè)用于執(zhí)行實(shí)施方案J至8中任一個(gè)用于確定朔是否處于懷有悉唐氏綜舍&^;utt^法的測(cè)^法，*，用于測(cè)試孕婦血液中A^，促性腺激素中游商e亞單位的手段. J o. —種測(cè)量人體血液中人絨毛胰促性腺激素的游離e亞單位含*的測(cè)定法.J 1 "^"設(shè)備，包括，^于接收孕婦母體血液中A^4)t促性腺激柰的游離e亞單位 含量的測(cè)試結(jié)果的裝置和用于將測(cè)試結(jié)果與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)^行比較以 確^兒染色##常的計(jì)算機(jī)裝置.13.用來確定孕婦是否處在懷有患唐氏錄^&兒明顯危險(xiǎn)中 的設(shè)備，包括適用于接收孕婦母體血液中AM，促性腺激素的游離P亞單位含4的測(cè)試結(jié);^f裝置，及計(jì)算^L^置,用來計(jì)算一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，和用于將所說的人絨^1促性腺激素的游離P亞單位的測(cè)量結(jié)^P所說 的孕婦的孕齡^A—偉率密度函數(shù)中，由此將所說孕婦的游離e —亞單扭值和所說孕婦的孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確^說孕婦懷有應(yīng)唐氏錚^Ji兒的危除率，J 4 ,用來^孕婦是否處在懷有悉麿氏綜^^兒明顯危險(xiǎn)的設(shè)條,包括，適用于接收用一種A^毛胰促性腺激素的游離e亞單位測(cè)定^fl 到的孕婦母體血液中某一被分析物詢?yōu)┝恐档你昳及計(jì)算機(jī)裝置，用來計(jì)算一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)^用于將所說的被分析物舍 *的敝值和所說孕婦的孕齡代入—概率密度函數(shù)中，由此將所說 孕婦的游離p亞單位的合景和所說孕婦的孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比私 以確定孕婦懷有患唐氏綜a胎兒的危險(xiǎn)率.J( S 如實(shí)施方案l 3戎1 4所述的設(shè)備，其中還包括，適用于接收孕婦母體血液中a—胎兒蛋白合量的測(cè)量值的裴置，其中的計(jì)算^S還將a—胎兒蛋白的測(cè)試結(jié)果代入該概率密度 函數(shù)中，由此將該孕婦的a—胎兒蛋白值與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)相比釔 1 6.如實(shí)施方案i 3、 1 4成J S所說的設(shè)備，其中該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)是由4^l,值的對(duì)數(shù)計(jì)算得到的，及這些測(cè)囊結(jié)果的對(duì)^于將孕婦^^標(biāo)的合ft與該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較，
權(quán)利要求
1.一種使用以確定孕婦是否應(yīng)該接受診斷試驗(yàn)的測(cè)定的方法，包括如下步驟提供特定地針對(duì)人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位的測(cè)定法；從孕婦得到母體血液；和用所述測(cè)定法來測(cè)定所述母體血液，以測(cè)量所述母體血液中的人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位含量。
2. 權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括將所說人絨毛膜促性腺激 素的游離P亞單位含量與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較的步驟。
3. 權(quán)利要求1或2的方法，進(jìn)一步包括將所說孕婦的孕齡與 一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較的步驟。
4. 權(quán)利要求1、 2或3的方法，進(jìn)一步包括測(cè)量所說母體血液 中的a-胎兒蛋白含量以及將所說的oc-胎兒蛋白含量與一組基準(zhǔn)數(shù) 據(jù)比較的步驟。
5. 權(quán)利要求1、 2、 3或4的方法，其中所說的比較步驟包括 將測(cè)量結(jié)果代入到通過線性判別分析法由該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生的一 個(gè)概率密度函數(shù)中。
6. 權(quán)利要求l、 2、 3、 4或5所述的方法，其中所說的比較步 驟包括將測(cè)量結(jié)果的對(duì)數(shù)與該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較。
7. 權(quán)利要求l、 2、 3、 4、 5或6所述的方法，進(jìn)一步包括如 下步驟由懷有已知患有唐氏綜合癥的胎兒的已知孕齡孕婦的母體 血液中的人絨毛膜促性腺激素的游離P亞單位含量以及懷有已知 未患有唐氏綜合癥的胎兒的已知孕齡孕婦的母體血液中的人絨毛膜促性腺激素的游離P亞單位含量計(jì)算得到一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)。
8.權(quán)利要求1、 2、 3、 4、 5、 6或7所述的方法，進(jìn)一步包 括如下步驟由懷有已知患有唐氏綜合癥的胎兒的已知孕齡孕婦的 母體血液中的oc -胎兒蛋白含量以及懷有已知未患有唐氏綜合癥的 胎兒的已知孕齡孕婦的母體血液中的oc-胎兒蛋白含量計(jì)算得到一 組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)。
全文摘要
一種用于確定孕婦是否處于懷有患唐氏綜合癥胎兒明顯危險(xiǎn)的方法和設(shè)備。該方法包括測(cè)量孕婦母體血液中人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位的含量。將人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位含量單獨(dú)地或與其它指標(biāo)一起地與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。一個(gè)計(jì)算機(jī)化的設(shè)備、最好用由一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)通過線性判別分析處理得到的一個(gè)概率密度函數(shù)、來進(jìn)行判斷。
文檔編號(hào)G06F19/00GK101329353SQ20081008124
公開日2008年12月24日 申請(qǐng)日期1990年1月17日 優(yōu)先權(quán)日1989年1月17日
發(fā)明者詹姆斯·尼古拉斯·馬克里 申請(qǐng)人:Jn馬克里技術(shù)有限責(zé)任公司