專利名稱：：用檢查母體血液的非侵入性方法發(fā)現(xiàn)唐氏綜合癥的方法和設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種在產(chǎn)前檢査中發(fā)現(xiàn)胎兒唐ft錄^(2i三染色體)的方法.ifc^^涉及到其它罕見購(gòu)、但可檢擁到的染色體的三染色體如！3三染色體和1S三染色體.更兵#^說(shuō)，本發(fā)明涉及一種通過(guò)洲量孕婦血液中人絨毛腹使性腺激棄(BaG)'的游離e—亞單位的食量來(lái)提離檢査唐氏錄余危中的發(fā)現(xiàn)率的方法.
背景技術(shù)：
唐氏綜^&,亦稱2l三染色體；^重精神發(fā)有遲鐵的條f^的先天性原因.唐氏綜余fe通常釆用一種包括羊腆穿刺術(shù)和染色質(zhì)組型的診斷方法來(lái)確定.M種診斷方法是便入性的，會(huì)對(duì)孕婦和胎兒帶來(lái)危險(xiǎn).羊^刺術(shù)和染色質(zhì)組型不作為對(duì)所有孕婦進(jìn)行常皿査的方法，當(dāng)使用這靴入性診斷方誠(chéng)明錄孕婦帶來(lái)危險(xiǎn)時(shí)，可以^一種戎多種檢査方法代替這種ftA性方法進(jìn)旨斷..唐氏綜^&的發(fā)生率隨母親年齡的增加而悉速増加，以往對(duì)于唐氏綜余￡的產(chǎn)前研究一直集中于年餘在3S歲以上的孕婦，；&^y^齡段，唐氏錄余匿的危險(xiǎn)接近3ftfe過(guò)用于發(fā)IWP氏錄M的診斷方法所帶來(lái)的危險(xiǎn).因此,產(chǎn)前檢査的標(biāo)準(zhǔn)方法一塞包括以孕婦年齡為基準(zhǔn)挑選出作舉M刺診斷的孕婦，但年齡並不絲分的檢絲據(jù)，因?yàn)閷?duì)S《的最可能處于危險(xiǎn)中的孕婦、即年齡為3S歲或更大的孕婦進(jìn)行羊胰穿刺和染色質(zhì)組型只mt^有唐氏綜咖匿妊嫌的205左右.處由于錄際臨床實(shí)踐中，只有大約一半的年齡在35歲成以上的孕婦辨絲刺和染M扭私所以在^f發(fā)現(xiàn)的唐絲械妊拔低于io多，i9*4年,有人發(fā)現(xiàn)了母體血液中低的tx—胎兒蛋自(a:fp)襯與胎AlP氏練^&t問(wèn)的絲.例如參見"Anassooia"cm"betweenlownxaternaiserumalplifi—fotoproteiixandfetalGlxro邊osomaiabnormalities"，(母體血清a—胎兒蛋白的旨囊與胎A^色1^常之問(wèn)的伴隨關(guān)系),:多s"j9s4,該^f內(nèi)容5iai引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中，該文中記載7其它一些三染色仏特另談J3三染色體和JS三染色體,也與母體血液中AP:p舍量低有關(guān)，這些其它的染色體中的三染色體的發(fā)生率(射H為五千分之一和六千六百分之一)遠(yuǎn)低于;21三染色體(唐氏錄余fe)—般的先驗(yàn)患病率.但由于這些其它的染色體中的三染色^MSA7P討低有關(guān)，因此，這些染色體的異常也可利用本文所描述的母體血液AEP和Hoa的游離e—亞單位和可能的其它指標(biāo)的檢査方案M現(xiàn)，本領(lǐng)械的專業(yè)人員風(fēng)然也可以用這里描述的用于21三染色體的方案用于發(fā)現(xiàn)i3三染色體和S三染色體，母體血液中atp^Hk低與胎JUfr氏綜^&有關(guān)g—發(fā)現(xiàn)使我們有可能在那些唐氏錄械發(fā)癰豐灼為so多的年輕的、者絲乎不悉癬的家庭中采用非便入性的血液檢s試驗(yàn)來(lái)發(fā)現(xiàn)康氏錄含癥病樹，計(jì)，糊以母體血液ay:p(作為一個(gè)檢査指標(biāo))1狄基礎(chǔ)的檢査試驗(yàn)鍵胎A^氏綜錄的產(chǎn)前發(fā)現(xiàn)率達(dá)到總病例的2o多左右.另一種檢査方法包括測(cè)量母體血液中非結(jié)合的鯔三獰(uE)的^Jt,例如參見"MaternalDiooascTeeniixgforDownsyndromeinaarl7pregnano7""(母親血液檢査在早期妊4效對(duì)發(fā)鄉(xiāng)氐絲械〉，Wald等A^，BritishjcmrnalOfst,1;riosandOynoooiogT*(BUT)Volume9S,April19S其公開內(nèi)容通過(guò)引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中.伹對(duì)口B的瀏4值^檢來(lái)提^小祖劣的基準(zhǔn).近，發(fā)現(xiàn)母體血液中H0G含囊的提離、E0G的d—亞單位含Jt的提離(BCG由兩個(gè)亞單位組成，以下分別稱a—B0G和e一H口G)與胎兒唐氏錄錄之問(wèn)的關(guān)雜，例如參見"A》xxor邊aiMaternalSeru邊ChorionicGoxmdotropinlevelsinPregnanciesWitix7et&lOhromosomeAbnormalities"(胎兒染色體異常妊娠中母體血清的絨毛腹促艦激素討異常hBOgart:Pan(Uan和Jcmes:PrenatalDiagnosis,"Vo"7,623—630(29s7),其公開的內(nèi)容a^t引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中，在BOgarU的文章中，糾了利用毋體血液中HG(J和BO(J的a—亞卑位合H的提離M現(xiàn)大約68夷的染色體異常的胎兒，而這些結(jié)論^ai狄懷孕iS—25周瞎拔進(jìn)行研究而得到的，而且這些患病病辨似乎是那些事先6被識(shí)別為可能患唐氏錄^&的婦章,如JJ5f逸敏鵬母體血液中的BC&值的檢妙雖^些檢査方法確能發(fā)，氏綜a,但是還需要和希望一種發(fā)現(xiàn)更離百分比的胎A^氏錄械病例的方法.本發(fā)明A^現(xiàn)了先前不知道的母體血液中游離e—B0G舍Jk的提布與胎A^氏錄會(huì)癥之問(wèn)的關(guān)聯(lián)性.還發(fā)現(xiàn)了先前不知道的母體血液憤有$—Bfl^Ht及AP襯與胎At氏雄合^t問(wèn)的關(guān)聯(lián)性，本發(fā)明A^發(fā)現(xiàn)了先前不知道瞬體血液中游離P—BOCJ討;^體血液中未受損的Hccj^Hdfc之比與胎jut氏絲合癥之間的關(guān)聯(lián)性，我還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了采用一種多變量判別式分析法可以提商下面所說(shuō)檢奎方法在一選定的悉病*止值下的發(fā)現(xiàn)率，這種方法利用母體血液中游離e—HoG舍量，^N，母體血液中游離的e—HCQ^和APG舍t(yī),成二者中任付一個(gè)的對(duì)數(shù)，戎兩者的對(duì)數(shù).特別是在，也被當(dāng)作一個(gè)變i加入到判別式分析法中，發(fā)現(xiàn)率的提離更明顯，孕齡指孕婦懷胎兒的周數(shù)，發(fā)現(xiàn)率是指在一^定的悉病率截止值下正確M現(xiàn)為唐^合癥病例的百分比.患病率截止值將在后面更詳細(xì)地加以說(shuō)明.判別式分析法總的來(lái)iUt公如的"種多變景分析方法，涉及到用單一變4的患病率(J^險(xiǎn)率)估計(jì)法，究對(duì)象分為二個(gè)或更多個(gè)小組，判別式分祈法有時(shí)也被描^是一種構(gòu)成獨(dú)立變量線性組合的方法，即將衡量夸小組差異的問(wèn)題侑化成一個(gè)單變量問(wèn)題，當(dāng)某個(gè)問(wèn)題中僅包含一個(gè)變量時(shí)也能運(yùn)用判別式分析法.關(guān)于判別式分析法的H&4fe討論可見"MarketingResearch"(銷H研究)；CHurclxill,G.a.,Dryaeix,"76,笫15章p.530s43,該公開內(nèi)容alil引用被結(jié)舍到本申請(qǐng)中.我發(fā)現(xiàn)4^體血液中游離^一B0G的舍囊、未受損的HCG含i;、游離e—HCG對(duì)未受報(bào)EOG分子的比值、A:p:P合量、UE含Jfc以及孕齡經(jīng)過(guò)多變i判別式分析法處理后與其ti^己知的產(chǎn)前發(fā)現(xiàn)唐氏錄a的檢査方法相比，發(fā)現(xiàn)胎兒唐氏錄舍癥的百分比更高，假陽(yáng)性卒更低.^^現(xiàn)，敏僅僅測(cè)賴體血液中游離e—H0(J的^t和ATT含4,並將:i^各自的對(duì)數(shù)與孕齡經(jīng)過(guò)多變量判別式分折法進(jìn)行^S,仍可發(fā)現(xiàn)更多數(shù)目的胎JUt氏雄^&病例這些及其它的發(fā)現(xiàn)東下面對(duì)本發(fā)明的概述部*詳細(xì)裙述部分中將3^分以說(shuō)明.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)貝的是與其它S知的產(chǎn)前檢變方法相比,^^定假陽(yáng)性率的憒況下能發(fā)現(xiàn)更離百分比的胎兒唐氏錄#的檢來(lái)方法和步驟，本發(fā)明另一個(gè)目的是^一種^"定的發(fā)現(xiàn)率條件下比其它方法^更低假陽(yáng)性率的檢査胎兒唐氏綜^&的方法和步取，本發(fā)明的一個(gè)更進(jìn)一步的目的是將多變:i判別式分析^^用于檢査麿氏綜^的方法中,以似會(huì)兒唐氏綜M的發(fā)現(xiàn)糸更高,假陽(yáng)性率更低，本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一種3^灘*#體血液中游離戸一hco的合量來(lái)檢査胎兒麿氏綜a的^和步驟，本發(fā)明還有一個(gè)M—步的目的^1提供一種^:^*體血液中apd合4，離e—hog的合it來(lái)檢査胎^t氏錄^^的方法和步猓，本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點(diǎn)脊在下面對(duì)本發(fā)明的描述中變得顯而易見.為了達(dá)到上述目的，按照本發(fā)明，孕婦(以下稱病人)的母體血清中游離P—Bo(J的^4采用常規(guī)的;^學(xué)方法測(cè)JbM法包括免疫測(cè)定法,如上述文孝中提到的那些方法以及該領(lǐng)械內(nèi)5知的其它方法.然后，將游離e—HoG的合量與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較以確定^人懷有患唐氏綜4^胎兒的患痏率.為了提離發(fā)現(xiàn)率，將游離e—Haa的^t^孕餘與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較，為進(jìn)一步提商發(fā)現(xiàn)率,絲f規(guī)的免絲;^,包括上述論文中提到的在*^領(lǐng)域中^的辦方法，鄉(xiāng)病人母體血液糊商的e—EP(J和ApG(以下稱"指標(biāo)"然后絲項(xiàng)指,與一絲準(zhǔn)數(shù)據(jù)比私以航該病人懷有悉唐氏錄合慰會(huì)兒的危險(xiǎn)率.秀渴多變*判別式分析法將這些指樹與一絲準(zhǔn)數(shù)辦比較.更詳細(xì)地iL;a^用貝葉斯定律，*人先驗(yàn)的危除率以及^將，人每項(xiàng)指標(biāo)的定*數(shù)值的對(duì)數(shù)fix到利用多變量判別式分析法屣開的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)柵的概率密度函數(shù)中而確定出來(lái)未患病和悉病妊拔的相對(duì)發(fā)生率來(lái)計(jì)算出每個(gè)痏人具體的危險(xiǎn)率，若該病人懷有唐氏錄^Mi的危險(xiǎn)豐大f^定的危險(xiǎn)率截止值,則應(yīng)勸說(shuō)該病人作進(jìn)一步的診斷試驗(yàn),以便確iiA否悉有唐氏錄合癥，除了母體血液中游離e—hg(J和ayP^f:外，加入孕齡作為一個(gè)指標(biāo)將會(huì)進(jìn)一步提離發(fā)現(xiàn)率*由^*#本的母體血液，離曰一HOG合4和As:P^jt趨于按對(duì)數(shù)一高斯賄曲線^^,因此，^t將瘸人各項(xiàng)指標(biāo)定i:值的對(duì)數(shù)和孕齡fiA用多變量判別式分析法展開的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的概豐密度函數(shù)中能達(dá)到聚髙發(fā)現(xiàn)豐，本發(fā)明的方法和步猓的優(yōu)點(diǎn)之一M與其它己知的方法和步取相比，可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)胎AJt氏錄^&病例的百^更髙，假陽(yáng)性率更低，本發(fā)明的其它一些優(yōu)點(diǎn)在下面更詳細(xì)的描述和實(shí)例中將J^m^楚.田i是例2中提到的一M格，表示了(2J三染色體)M指標(biāo)的有效汰.田2是例2中提到的一^Mfc格，表示了4^指標(biāo)的麿氏錄余昆的檢査效豐.田3是例2中提到的一44t格，表示了組合指標(biāo)的唐fc練^&的檢査歡卑，困42中提到的一M格，表示了&*悉病妊效中于給卑的游離hocj的e—亞單位分市的百分率的康沃錄^fe病例n^,閨5是甸2中提到的一4^格，表泰各^Hf脊的唐^錄余昆率，田《是例2中提到的一*格,表示在不同的孕齡范圍內(nèi)，以ATS的對(duì)數(shù)和游離的e—B0G亞單位的對(duì)數(shù)作為一個(gè)組合指標(biāo)時(shí)的唐氏錄脊度的檢査效率，圖7是例2中提到的一個(gè)表格，表示預(yù)計(jì)的在美閨各地由游離的e—HCG和母親年齡得出的唐氏錄合癥檢出率.田s,在例2中被提到，表示了在2j三染色體病例中，游離e—:b0G亞單位相對(duì)于未悉病妊嫌的各種百分lb合量.困9,在例2中被提到，表示了游離e—HCG亞單位合量的分布，田J0是例3中提到的一^Nt格，表示由一些指標(biāo)的各種組M1田H表示本發(fā)明的用于執(zhí)行檢絲氏錄械方法所使用的設(shè)備.田12和J3表^算用于確定一^人懷有患病胎兒的危險(xiǎn)率有關(guān)的基準(zhǔn)參數(shù)的計(jì)JHL^汰程田.田i4表示利用田12和13所示程序中計(jì)算出的基準(zhǔn)參數(shù)^，人懷有患病胎兒的危險(xiǎn)率的計(jì)算機(jī)程序汰程田.具體實(shí)施方式在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，從病人獲4!#體血樣，然后采用常規(guī)的分析方法，如本領(lǐng)械內(nèi)^i^的被學(xué)方法，灘出母體血液帽離e—BCG的含量，然后，將該值與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以^該病人好處于懷有患唐錄^feJi兒的危險(xiǎn)中.為了提離發(fā)現(xiàn)來(lái)將孕齡及母體血液中游商e—HOQ的^1:值與一M^數(shù)銀進(jìn)行比乾以確定，人是否懷有患唐氏錄^&胎兒，盡管如聞本領(lǐng)械專iLA員顯見的那樣，在錄明中運(yùn)用鄉(xiāng)e^的分析方法測(cè)賴體中游離e—BO(J的討都行,狄用預(yù)離e—Hcg的分析方法必須與產(chǎn)生游離e—Bog基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的方法是—樣的，如呆用了一種新的分析方法測(cè)J:游離e—Hog,則必須產(chǎn)生一組以i^法形成的數(shù)振為基袖的新的基準(zhǔn)數(shù)振.不難理解，在形成對(duì)HoG的n特異的單克隆體的過(guò)程中，一些抗體對(duì)該蛋白質(zhì)將4bM^的，而另一些對(duì)與抗體員關(guān)聯(lián)的裙將是特異的.在本發(fā)明的說(shuō)明銀^中提到的P—ECG合t的測(cè)量值包含了對(duì)游臠EoG^不論是對(duì)說(shuō)蛋白質(zhì)特異的、M對(duì)游離e—EOG上鄉(xiāng)部位戎其它^^Jft有關(guān)聯(lián)的糖i^的抗體.對(duì)于本領(lǐng)域中的專業(yè)人員來(lái)說(shuō)，不難理l雖然游離的a—hgg亞單位被單獨(dú)^基因編碼，isA游離的e—hcg則被至少七^(guò)N1^常相似的基因成偽基因的復(fù)合族麟，例如參見"且u郵nOho;ricmicgonadotropinDeta—svlbunitisencodedatleasteiglil;genesarrangedintande邁andinvertedpairs，，Boorstein,"VamvalcopOuies,&yiides:UatureVol300,i982年t2月2日,其中的教導(dǎo)aiitl用被結(jié)合到本申請(qǐng)中.己知七個(gè)游離e—HCG基因中僅有三個(gè)在游離e—HOG辨正常胎盎形成過(guò)程中被表達(dá)，例如參見"Pragiaenl;a1;ionof"the!Beta一Su"bua丄tof'humanChorionicGonaaotropinproduce4"byOhroriocarcinoina":Uislii邁ura,工de*U1;suno邊iyajKita:UmaYuki,andMochiztiki，Endocrinology,Vol.J23,MO,^9#*，其中的教導(dǎo)魁引用被結(jié)合到本申請(qǐng)中.這三個(gè)同樣的基因是否在疾病狀態(tài)下、如悉有胎兒唐氏綜^時(shí)^達(dá)一直沒有肯定的答案.因此，有可能合成aj在u酸排列順序上或其它;m有鐓小差別的多種形式的游商e—Ho還有可能在唐氏綜^fe病例中，一個(gè)戎多個(gè)游離e—HcG的基因iyt^因此，產(chǎn)生游離P—HCG的一個(gè)獨(dú)特的變種或多+夾異種，根振本發(fā)明如絲些變異種絲的話,那么它們可敏常規(guī)的測(cè)量游離e一HPG的免疫學(xué)方法被測(cè)量出來(lái)，如果能有一種擲Jt與唐氏練^￡有關(guān)的特定的游離e—Hocj變異種的測(cè)定法，可以更進(jìn)一步提高發(fā)現(xiàn)率.事實(shí)A我們&有效地運(yùn)用了單克隆抗體測(cè)^測(cè)J:BOG游離的e—亞單位以區(qū)分悉21三染色體好慨和未患病的妊旅，2j三染色體的發(fā)現(xiàn)率離達(dá)s3如本領(lǐng)械專jkA員都知道的那樣,利用抗體絲量說(shuō)明特定的分析對(duì)象糾到與一個(gè)有區(qū)另他又她物質(zhì)的交又活性的程度.所以患病和未悉病病例之間的差別可lwt由于存在不同形式的hoG的游離e亞單位所fc這些亞單位由于與所利用的抗M某種程度的交又活性而被檢測(cè)&來(lái)，如果游離e—Ho&亞單位的這種異常形式被鑒別出來(lái)，則它將^為一種新的生物化學(xué)物質(zhì)，實(shí)際上科學(xué)娥中的資料表明，已經(jīng)識(shí)別出e—sca的這種異常形式<例如參見HisHi邊UTa等著的文聿)患2J(三染色體的病例也會(huì)以游離e—HO^亞單位的異常形式為特征，如呆21三染色體是以游離P—HCG的異常形^特征的話，則本鎮(zhèn)械專業(yè)人員將能夠發(fā)展出^些異常形式特異的抗體，這樣可以使麼氏錄*的發(fā)現(xiàn)率進(jìn)一步提離*基準(zhǔn)數(shù)扭反映了懷有患康氏錄舍^^兒孕婦血?dú)g中游離e—邁og的^Hfc(也稱"患病的")和/M映懷有正常胎兒孕婦體內(nèi)血液中游離e—hocj的食量(也稱"未悉病的")對(duì)于本領(lǐng)域?qū)kA員來(lái)禮不難理解，用于檢i胎jur氏綜余昆的方法就是^t比較作出決策的過(guò)程，；^任何決策過(guò)程，裔要有以患有此瘸戎我們所關(guān)心的條件的病人和/成不應(yīng)此病戎我們所為。條件的病人為基準(zhǔn)的基準(zhǔn)參數(shù)，本發(fā)明中，基準(zhǔn)AA母體血液中被測(cè)指標(biāo)的舍量，如懷有患唐^i錄^fe胎兒的孕婦和懷有正常胎兒孕婦的游商e—HCSg,通過(guò)集中大l:樣本的基準(zhǔn)值而建立一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，對(duì)本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來(lái)說(shuō)；顯然這組基準(zhǔn)數(shù)M可通過(guò)増加基準(zhǔn)值樣本的數(shù)量進(jìn)一步改獸.為了確定病A^否處在懷有患唐氏錄f癥胎兒的危險(xiǎn)中，必須建立一個(gè)截止值.對(duì)本領(lǐng)械專1A員來(lái)說(shuō),顯然，建立一個(gè)確定病人是否懷有患i3三染色體戎jis三染色Wi兒的截止值在^Ui三染色體病例中也^*有效的，這一截止值可由實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)生AH于每個(gè)病人的病例而建立，截止值也可以以幾個(gè)判別標(biāo)準(zhǔn)為基袖，包括裔要繼續(xù)作進(jìn)一i^入性診W^驗(yàn)的婦女的數(shù)目，所有作進(jìn)一步的便入性儲(chǔ)試驗(yàn)的婦女絲唐氏錄錄胎兒的平均危險(xiǎn)^和鄉(xiāng)一賴女^定的患病危險(xiǎn)率大于一個(gè)JW的危險(xiǎn)率值如J/4oo孰應(yīng)當(dāng)繼續(xù)作進(jìn)一步的便入性診斷，成本領(lǐng)械專iLA員己知的其它判剁#^的決策.截止值能夠^—些方法Mtofc包括，百分?jǐn)?shù)，平均正負(fù)標(biāo)準(zhǔn)傭差，中問(wèn)值的倍數(shù),辨AA體的患痏危險(xiǎn)率戎那些，械專業(yè)人員己知的其它方法，在本發(fā)明的另"H^可以發(fā)現(xiàn)更多數(shù)目胎X^ft^^&的實(shí)龍;^中，從禍人體內(nèi)取出母體血液樣*然后，敏常規(guī)的分祈法，如剩領(lǐng)域公知的J^m法測(cè)出母體血液中未受損的ECG分子、游離的e—HGG、UU和APy(以下稱"指標(biāo)，，)的含量，盡管如本領(lǐng)域?qū)kA員顯見的那樣，在本發(fā)明中^^TEc知的分析方法來(lái)測(cè)重母體血液中上述指標(biāo)的含量都行，伹用于每項(xiàng)指標(biāo)的分析方法與形成該特定指標(biāo)的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的方法必須是相同的，如果對(duì)某一指標(biāo)采用一種新的分析方法，則必須產(chǎn)生一組以該方法產(chǎn)生的數(shù)據(jù)為基*的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，然后、采用貝葉斯定律、該病人的先驗(yàn)危險(xiǎn)率及通過(guò)將病人每項(xiàng)指標(biāo)(未受損的sc&^、游離e—HOcj,u:e和a:p:f)的定重值和游離P—HOCJ對(duì)未受損HCG分^ft的比值以及病人的孕危險(xiǎn)率.多變量判別式分析法可以在巿場(chǎng)上有的計(jì)算機(jī)^統(tǒng)計(jì)軟#^"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(由sas研究所公司生產(chǎn)和銷售)上計(jì)算，j^r-算.概率密度函數(shù)為把病人每項(xiàng)指標(biāo)值與基準(zhǔn)參數(shù)比較提供了一個(gè)方法.雖然，如本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員顯然了解的鵬，也可以類似地飼其它概率密度函^下面具體指出了一種型式的概率密度函化並能充員^于本發(fā)明中，用于唐氏練合癥危險(xiǎn)率的公^,((J//j。OVl)EXP(—，5(Xa-Ma)TooV"(Xflr^a))*先驗(yàn)危險(xiǎn)舉+(!/71PO"VI)EXP(—S(Xu-Mu)To(Xu-Mu))*0—先驗(yàn)危險(xiǎn)率))、(1>'下標(biāo)"a"表示應(yīng)病的癇例下標(biāo)"u"表示未患病的病例(X—M)表示一個(gè)向Jb其中每個(gè)元紊是每個(gè)變t減去變量平均值的值，OO"V-i是該樸型中所有變囊的悤病和來(lái)悉病病例的聯(lián)#方差矩陣的逸.(X—M)T是向4(X—M)的轉(zhuǎn)置，HXP表示指數(shù)函數(shù)，ICO"表示該煤型中作為基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的所有變量的協(xié)方差矩陣的行列式，本領(lǐng)械專jkA員顯然知道，患病妊嫌和未患病ifiiS各自的協(xié)方差矩陣可以代替聯(lián)合協(xié)方差矩陣，用于患唐氏錄^&危險(xiǎn)豐的公式就成為_(1//|。0"a)XEX:p(—，S(3Ca—Ma)IcoVa"(Xa—Ma))箭先驗(yàn)危險(xiǎn)豐_(2)！〔(1/7100V|a)*EXP(—.S(Xa-Ma)TOoVa-i(Xa-Ma))*^驗(yàn)危險(xiǎn)豐+(//1。0"u)*EXP(—5(Xu—Mu)TOOVu-(DCu-Mn))吖l一先縫險(xiǎn)率)〕Ioov1來(lái)示該鄉(xiāng)中作為基準(zhǔn)參數(shù)的所有變4的協(xié)方差矩陣的行列式，為進(jìn)行判別式分^fe見，先在一般未挑逸的研究對(duì)象中作出一個(gè)14驗(yàn)概率的假設(shè).i^fc驗(yàn)概率一般約為！/sooJ為了實(shí)行多變貴判別式分祈法，還要作一個(gè)關(guān)于什么樣的危險(xiǎn)率截止值能夠構(gòu)成一個(gè)陽(yáng)性試睡結(jié)果的決策.例如，如果希望一個(gè)懷有患有唐氏綜合^^兒的概率等于戎大于Jf/4OO的孕婦進(jìn)行進(jìn)一步的診斷試驗(yàn)，則當(dāng)多變*分析的結(jié)*^以孕婦懷有患唐氏綜合癥胎兒率等于或大于i/400時(shí)，該孕婦被認(rèn)為具有一個(gè)陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果，如果得出陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)恭應(yīng)勸說(shuō)病人作進(jìn)一步的診斷試睡以確證是否患有唐氏練合癥，參照?qǐng)DU至l4,困中顯示了用于計(jì)算基準(zhǔn)數(shù)揭和具體的危險(xiǎn)率的設(shè)備及計(jì)算機(jī)程序的流程圍，如田fl所示，為建立基準(zhǔn)數(shù)據(jù),在患病和未患病妊娥的病例中,采用常財(cái)法確定出孕齡GA,APP^fi:和游離e—HOG的討.為提高可靠性選擇了大i:樣本.用于建i^準(zhǔn)數(shù)據(jù)的測(cè)i值被示意地用2o表示.一旦經(jīng)由適當(dāng)?shù)妮斎胙b置i5進(jìn)入后由處理單元2O計(jì)算出基準(zhǔn)參數(shù)22,作為某^人具體的危險(xiǎn)率2s可以根據(jù)該病人被測(cè)出的具體的指標(biāo)數(shù)值(用3o表示)計(jì)算出來(lái).圍12和J3表示確定基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的程序框困，田14表示計(jì)算具體的危險(xiǎn)率的程序框圖.現(xiàn)參照固！2和！3,在第一個(gè)循環(huán)200中,程序從一個(gè)參照組^A識(shí)別參數(shù)工D,孕齡GA,APP和游離e—HCCJ的定囊值及一個(gè)妊ifc^否患2l三染色體的代碼.見步艱J02,在流程田中，如步驟z04所示,孕齡GA用變4Xi表示，Ay;p的對(duì)數(shù)用x,表示，游離e—HCG的對(duì)數(shù)用X，表示，然后,在:^,3C，和X,敢據(jù)的基鈾上確定或計(jì)算出和矩陣及和一積矩陣，見步騍106.用來(lái)對(duì)參照組中患病和來(lái)患痏病伊j計(jì)數(shù)辨突董加嗜e然后増加j一旦循環(huán)結(jié)束,如由流程線J1O所示，itit如參考標(biāo)號(hào)JJ2所示的由il、J、K所定義的一系列循環(huán)計(jì)算祖平均值，在這些循環(huán)中，運(yùn)用循環(huán)Jtoo定義的和矩陣和在循環(huán)ioo中計(jì)算出的和一積矩陣計(jì)算出協(xié)方差矩陣，這些循環(huán)結(jié)束后，要對(duì)是否將患病和未悤病病例的協(xié)方差矩陣組合^e作出選擇，這種選擇在步猓mu(j和1!s中被輸入.如果選擇組合，則協(xié)方差矩陣就被組合成一個(gè)由步珠J2O給出的聯(lián)錯(cuò)方差矩陣，如步驟l22所示，該聯(lián)合協(xié)方差矩,取逆，得到逆聯(lián)合協(xié)方差矩陣工PCM,該逆聯(lián)合協(xié)方差矩陣被存入文件中，並在步驟124和J26中被打印出來(lái)，如^fe擇不組舍，則在步腺i23和i25中對(duì)r^協(xié)方差矩陣的^個(gè)取逆，且將平均值和逆協(xié)方差矩陣存入文件並在步取l2S和！27中打印出來(lái)，這些數(shù)值包括用于計(jì)算特定個(gè)人懷有悉病胎兒危險(xiǎn)率的基準(zhǔn)參數(shù).參見田i4,通過(guò)執(zhí)行田J2和i3所示程序計(jì)算出來(lái)的基準(zhǔn)參數(shù)在步狹J30中被讀入，基準(zhǔn)參數(shù)包括平均值和逆#協(xié)方差矩陣,在步樣l32^A具體的病例記錄，包括病人識(shí)別標(biāo)記，孕齡GA,AI"iP和游離e—HC在步稞34中更準(zhǔn)確地計(jì)算孕齡，在步猓i36中計(jì)算孕婦的年齡，在！38中，在孕婦年餘和發(fā)生率參數(shù)的基袖上確定先睡危險(xiǎn)率，在下面討論的實(shí)例中，這一計(jì)算結(jié)果為00,是一個(gè)典型的數(shù)汰.在J40中，確定該先敗危險(xiǎn)率與懷有應(yīng)病胎兒(ABT)的相對(duì)頻率的乘積,即上述等式()、(2)的分子.在142中，計(jì)算出懷有患病胎兒的相對(duì)頻率與(1一M危險(xiǎn)豐)的乘積(BT),即上述條《(j),(2)分餘中辨第二個(gè)因子.在144中，利用貝葉斯定律確定兵體的危險(xiǎn)率，即abh-abt/(abt+3jt)(等式(j),(2)).在146中,打印出結(jié)朱即打印出病人特定的危險(xiǎn)率abb和病人識(shí)別號(hào)，對(duì)于本領(lǐng)域?qū)U員，易然還可以釆用不同于線性判別式分析法的其它統(tǒng)計(jì)學(xué)戎?jǐn)?shù)學(xué)方M計(jì)算基準(zhǔn)參數(shù)，根據(jù)錄明一^Mfe^的實(shí)施方案，從病人獲得母體血液樣本然后采用常規(guī)的分析方法、包括本領(lǐng)域么>的免疫學(xué)方法來(lái)測(cè)**體血液中游離e—ho(j及ai"p(下面稱"指標(biāo)")的含量.盡管如本領(lǐng)域?qū)LA員么^P的那樣，在本發(fā)明中用鄉(xiāng)么^P的賴方法測(cè)妙體血液中上述指標(biāo)的含量都行，朋于每項(xiàng)指標(biāo)的蔣方法必須與形成各指標(biāo)基準(zhǔn)參數(shù)的方M—樣的*如果對(duì)某一指標(biāo)采用一種新的分析方法，則必須在用該方法形成的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上產(chǎn)生出一組新的基準(zhǔn)參數(shù)，然后,運(yùn)用貝葉斯定律，病人先驗(yàn)的危險(xiǎn)率、及iiit將病人每項(xiàng)指標(biāo)的定量值和孕齡一起代入用多變4判別式展開的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的l^密度,數(shù)中而得到的患辨和未患痏妊號(hào)的相對(duì)發(fā)生率來(lái)計(jì)算懷有患唐氏練^fe應(yīng)兒的危險(xiǎn)率.為進(jìn)一步提離發(fā)現(xiàn)率，將病人游離e—hog和arP定J:值的對(duì)數(shù)值和孕齡一起f^A用多變量判別式展開的基準(zhǔn)參數(shù)鈞概率密度函數(shù)中，多變t判別式^f法可以在巿場(chǎng)一有的計(jì)算機(jī)程序統(tǒng)計(jì)軟件包"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(由sas研究所公司生產(chǎn)和銷ll)上運(yùn)算，成^本領(lǐng)域?qū)I(yè)Ai公知的其它多變4統(tǒng)計(jì)分析方法*它統(tǒng)計(jì)牧#^,為進(jìn)行判別式M^見,先在通常未祭選擇的^對(duì)象中對(duì)患有唐氏錄被的^&概率作出一個(gè)僻私^!2:來(lái)^該先驗(yàn)概牟近似為2/so(，為了進(jìn)行多變量判別式分析法，還要作出什么樣的危險(xiǎn)率feih值構(gòu)成陽(yáng)性試敗結(jié)果的決策，例麵希望一^Hf有患唐氏綜合癥胎兒概率等于敗于i/4oo的孕婦作進(jìn)一步絲試私則當(dāng)多變量分析的結(jié)果農(nóng)明一個(gè)孕婦懷有悉唐氏雄合&^兒的概率等于J^于！Z4oo時(shí)，該孕婦被iU&具有一個(gè)陽(yáng)性微結(jié)果，若顯示出陽(yáng)性試睡結(jié)果,應(yīng)勸說(shuō)該病人作進(jìn)一步的診斷試驗(yàn)以確i2A否患有唐氏綜械，對(duì)于本領(lǐng)域?qū)L^員^說(shuō)，顯然，在上面她的所有實(shí)齢案中,驗(yàn)危險(xiǎn)豐,將會(huì)改變對(duì)每個(gè)病人作判別式分折辨結(jié)果,本發(fā)明不儲(chǔ)限于上敏駄案,還包括所何能的實(shí)施方案以及在下面例子中所公開的M指標(biāo)的組合，例？采用400以丄病例樣本研究胎兒唐氏錄^&與母體血液中游離e—H0G合量以及母體血清中AP;P討(MSAFP)、UE和未受損HOG之問(wèn)的關(guān)系.這些樣本包括2S例從E^懷有應(yīng)唐氏綜合録兒的孕婦體內(nèi)得到的樣擬與患病病例對(duì)照的對(duì)照樣朱對(duì)每個(gè)血液樣本APE、來(lái)受損HOCJ^、游離p一HOG及ue(以下稱"指標(biāo)")的含量值由下列m方法測(cè)定^指標(biāo)^法::pp^HI接的:fe&吸附皿法(el工sa)us;fclt免疫測(cè)定法未受擁EOa小珠型ELISA游商3—H0GBI4SA每項(xiàng)指標(biāo)的值成為在巿場(chǎng)上有的計(jì)算機(jī)軟件統(tǒng)計(jì)軟件包的統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)(SAS研究所公司)上進(jìn)行g(shù)判別^l和線性判剁式處理中的一4^ft,用于建立一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，游離e—hc(J與未受損hca分子之比絲人的辨也被S作變JbiP入.^t判別處理?xiàng)l所有變量能to入到線性判別式處理中，然后^3對(duì)每個(gè)變囊及各變量的不同組M行線性判別式處理.這些判別式分析法的結(jié)果歸納在下表中.、靈敏妙指測(cè)微果顯示陽(yáng)性的胎AJf氏錄械病例的百分比，假陽(yáng)性率指測(cè)試結(jié)果為陽(yáng)性的正常胎兒的百分比.變*爽敏度假陽(yáng)性率<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>每項(xiàng)變Jt中都包括^,危險(xiǎn)WtiL值-2/400-蜂(*)為J/3(S外,對(duì)本領(lǐng)械專:IbU來(lái)說(shuō)，顯然《改變確定陽(yáng)性的危險(xiǎn)卒^jHt爽對(duì)研究對(duì)象不簡(jiǎn)小組采用不，兩的先驗(yàn)危險(xiǎn)率將會(huì)改變對(duì)某病人所傲的判別式處理的結(jié)呆*例2用5so例以上的病人樣本來(lái)研究胎JUr氏錄會(huì)癥與母體血?dú)g中游爽e—HoG^t之同的關(guān)系，首先對(duì)29例a知懷有悉唐氏錄合癥胎兒的孕婦獲得的血法樣本以及用于對(duì)照孕齡(周數(shù)相同)、母親年齡(相差3年以內(nèi))和冷凍貯存時(shí)間(相差在一個(gè)月之內(nèi))的"o例未悉病的樣本進(jìn)行^f，所有樣本都取自于未患槺尿病的懷單胎的白人孕婦.為了i^^rit檢出率中有一定傾向的固定俯差，采用了有效組的概念.有效^U—組獨(dú)立于基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)，有效組中由病人得到的結(jié)^用于建誠(chéng)準(zhǔn)數(shù)銀而朋來(lái)與基準(zhǔn)數(shù)振膽以縱檢出率.這另一個(gè)有效組包括26個(gè)附加的被確^21三染色體的病例(總共S5鋪例)和隨城取的由1S9個(gè)對(duì)照樣^aj^的組.對(duì)照樣**似地也取自未患糖尿病的懷單胎的白人孕婦.所有的研究包括;W體血液中下列^4ir標(biāo)值購(gòu)七個(gè)不簡(jiǎn)的測(cè)定方法的43S8個(gè)判定，指標(biāo)洲定方法MSAITM接免疫吸附測(cè)定法(EL工SA)未受損加GLISA未受揭HOO+游離0—BOGEiISA游商P—hc^;felt免疫M(jìn)法(r工a)游離。一笠0&RIAUE二種方法,埯免疫^(guò)法和RIA每項(xiàng)指標(biāo)值均成為在巿場(chǎng)上可得到的計(jì)算機(jī)軟件統(tǒng)計(jì)軟件包"統(tǒng)計(jì)分祈系統(tǒng)"(sas研究所公司)±&行^判別處，線性判別式處理中的一^Jfc,以趙一腿準(zhǔn)數(shù)據(jù)，痏人的孕齡她當(dāng)f變量加入，然后分別對(duì)每個(gè)單獨(dú)的變景和各變?cè)ゲ婚y的組^Mt線性判別式處理.以J/3(J5為患唐氏錄^￡危險(xiǎn)率的截止值將病^分為患病或未患病病例.把劃為患病的未悉病病例考慮是假陽(yáng)性牟，每個(gè)病人患唐氏錄合癥的危險(xiǎn)率來(lái)用貝葉斯定朱悉病和未悉病病例的多變量概率密度函數(shù)以及通常以1/8o0作為先驗(yàn)危險(xiǎn)率來(lái)計(jì)算.聯(lián)合協(xié)方差矩l^于每個(gè)概率密度函數(shù).有關(guān)初始研究組的結(jié)果顯示在田J至3的表J3中，田5至7的表5—7是根據(jù)對(duì)有敏中瘸人的分類將到的鍤呆..田4所示的表4、田8和田9是根裙初始研究組和所有悉病病例得出的.由瀏^T法得到的結(jié)呆被分析，以確定患痏和未患病病例之間各項(xiàng)指標(biāo)值之問(wèn)是否存在明顯的差異，表l(田l)表示患病病例與未悤病病例之問(wèn)除UE外的所有指標(biāo)都表現(xiàn)出明顯的差別，此外，確定了各項(xiàng)指標(biāo)的假陽(yáng)性率和發(fā)現(xiàn)豐，見表2(田2)^擁量未受禍耳0G及游離p—HC仔亞單位的ECCh測(cè)定法將到最離的發(fā)現(xiàn)率，可議^t將4^單獨(dú)的指標(biāo)組合成復(fù)舍指標(biāo)來(lái)進(jìn)一夢(mèng)提離發(fā)現(xiàn)率,其中一種復(fù)^fe括測(cè)量未受損HC&^和游離？一且0G亞單位的BOa灘定法，它在表3(田3)所示的復(fù)合中產(chǎn)生最商的發(fā)現(xiàn)牟.單獨(dú)對(duì)HCG的3和a亞單位的評(píng)估表明a—亞單位在悉瘸和未患病病例之岡沒有明顯差異(2=0,23)而3—亞單位在患辨病例中有明顯增加(P-0001)正知本領(lǐng)域?qū)lA員所^的，概率Pifiit表明一^觀察到的結(jié)果以至少這樣的極大值的可能性是偶然發(fā)生的來(lái)衡量科學(xué)研究中證據(jù)的強(qiáng)弱.P值越小，.說(shuō)明觀察不是偁然出現(xiàn)的證據(jù)越強(qiáng)，困S表示iO多、50%和90多游離P—HC奪隨孕齡的曲線，發(fā)現(xiàn)在未患病妊錄中，隨著孕齡增加有連續(xù)下降的趨勢(shì)，對(duì)胎兒唐氏綜余度病例中游離e—HO&含量的^#辨示了*(J多下降到未患病病人購(gòu)平均值之上，悉病和未患病病例中游離e—HC(J的^t都遵循對(duì)數(shù)高斯^(P-O7S'和0S6),田9菡出了這種分審，表5(田5)給出了單獨(dú)依靠游離P—HOG亞單位和游離CI一HOG亞單位的發(fā)現(xiàn)率數(shù)據(jù).表S中顯示了游離P—HCG有離的發(fā)現(xiàn)率.用A:PP和游離e—BCG的組^行分析可得到更離的發(fā)現(xiàn)率.通過(guò)將游離e—H0G的對(duì)數(shù)和MSAI"P的對(duì)數(shù)結(jié)合到上述軟件包"統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"(SAS研究所公司)的線性判別式處理中，可得到如表6(圖6)所示的更優(yōu)越的發(fā)現(xiàn)豐.與其對(duì)數(shù)相反，用游離e—HOO含豕和ATP舍量也可得到離的發(fā)現(xiàn)率，對(duì)數(shù)據(jù)的進(jìn)一步分析表明AI1P和游離e—H0Q"都與年齡無(wú)關(guān)(T-0*39《和P-0,52JT4,對(duì)四個(gè)不兩年餘組的AIP和游離p—E0G賴作Kruskal—Wallis試驗(yàn)(年齡=30,3J35,3$40和40)),此外,游離e—亞單位舍和AIFP^l的相關(guān)系數(shù)(r)與翠沒有顯著差別(未患病和患病辨例^3為r-0P-0,39,r--0.o6,P-0.81),在我們的數(shù)據(jù)中,發(fā)現(xiàn)的基梯果肯定了這#"^*實(shí)，即游離的P—亞單位絲氏綜合癥的發(fā)現(xiàn)率達(dá)到教離有幫助，實(shí)際上釆用只測(cè)量游離e—BOG的M^法所產(chǎn)生的發(fā)現(xiàn)率和假陽(yáng)性率分別為6S4《和5。2多.這些比率與其它人利用三種^法的組合的報(bào)導(dǎo)相差不大.因此,如前面指出過(guò)的那樣，^a數(shù)目是本發(fā)明我們關(guān)于游離e—H0O作用的發(fā)現(xiàn)恨振如下，(a)單獨(dú)看對(duì)唐氏綜M發(fā)現(xiàn)率:m最大的是辨離e—狂0(J灘定法，(t)對(duì)未損H0a分子的測(cè)定得到更低的發(fā)現(xiàn)率,(c)淵4未受損H0&分子與游離e—H0G組合的測(cè)定法將到一個(gè)比只測(cè)4未受損E0G分子洲定法更離的發(fā)現(xiàn)率，^經(jīng)證實(shí)，胎録氏練合癥的患病率隨母^^齡而増加，因此，如前所逸為了用本發(fā)明在臨床應(yīng)用中得到病人兵體的悉病危險(xiǎn)率，.將隨母體年齡而異的先驗(yàn)危險(xiǎn)率代入到多變量判別式分析處理中.由于AEP和游離e—BO0的舍均與##年齡無(wú)關(guān)，因此，我們對(duì)我們的數(shù)據(jù)作了分析,以找出有多少未患病和患病的婦女在對(duì)每4^周的年齡給定一個(gè)先驗(yàn)危險(xiǎn)率滅下具有陽(yáng)性的結(jié)呆，J^值患根據(jù)美頃分汰活耍孕婦年餘M為奮査中的傻陽(yáng)性率和炙敏度，如表7(田7)所示，at^arit表明有可能達(dá)到*0-的發(fā)現(xiàn)率和S55的假陽(yáng)性率.對(duì)刺2所描述的樣本作進(jìn)一步分析以發(fā)現(xiàn)各指標(biāo)的其它組合的發(fā)現(xiàn)率.3W體地說(shuō)，以兩樣的危險(xiǎn)*止值和先驗(yàn)的危險(xiǎn)率對(duì)4^標(biāo)的不閥組合(指標(biāo)中值的倍數(shù)及M標(biāo)的對(duì)私在加入J^加入員下)進(jìn)行鉤2的線性判別式處理-利用基準(zhǔn)數(shù)據(jù)和有效數(shù)m行線性判別式處理，結(jié)果歸納于田Jo的表s中，例3下例說(shuō)明游離e—Hcg的一步測(cè)定法和二步^法的準(zhǔn)備工作以及它們?cè)诒景l(fā)明方法中的應(yīng)用.游離e—Hoo—步瀏定法的準(zhǔn)備工作1.在^96井的傲滴定平皿上覆並一層對(duì)人絨毛膜促性腺激素(b0g)分子的游離e亞單位特異的"捕獲"抗體.抗體可以是單克隆或多克隆抗體.用來(lái)覆並平皿的抗體濃n每^o，但如需要，也可以不閎，平加在41D下培養(yǎng)至少16小時(shí)，2.用合O0S夷吐溫20的:PH72的磷酸鹽鍵沖液沖洗平皿，也可用其它合適的絲疑沖液，然后用含3多擁動(dòng)物蛋白和0,05-吐溫20的p且7J2的褲l^;疑沖液將平皿"阻隔"，也可使用本領(lǐng)械專JlA員所熟悉的其它溶濃，如J-的牛血清蛋白溶液.將30O微升的膽琉溶液加到每個(gè)并中，讓平皿在蠱濕下培養(yǎng)l小時(shí).也可用另外的阻隔方法，如"涂釉法".3.然后如前所艦清洗平皿，將"O做含有麟離曰一b0g並單特異的生物棄化的抗^38試粳沖液加到每個(gè)井中i所用的測(cè)試疑沖^t舍有3-水解動(dòng)物蛋白和舍有O0S-吐溫2O的24pe72的鱗戰(zhàn)疑沖液，但也可用本領(lǐng)械專iiA員么^的^r一些合適的溶液.抗體根據(jù)操作者的吝歡可以A單充隆、也可以是多克隆的，可以是與BWP^M^t氣化物聘成堿性褲酸lWMt樣的生物柰外的一種物質(zhì)結(jié)合了的抗體s測(cè)試緩沖液中抗體的濃度被調(diào)蹇到達(dá)到最佳吸收率.4.取2O粉的樣品本加入每付中，樣本可以是i測(cè)試疑沖艱，作為證實(shí)測(cè)試性能的空白，一種用于標(biāo)準(zhǔn)化未知樣品值的游離/1-HCG溶滾，成由懷孕到中期三個(gè)月的孕婦體內(nèi)取出的血清樣本.將平皿渦旋30秒鐘，然后放在P為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上，在室溫下培養(yǎng)30分鐘.s.然后如前所aM清洗平皿，將含有結(jié)合了JN^過(guò)氣化物聘的鏈球苗觸物柰蛋白的J00辦測(cè)試疑沖絲入4H^中，如^J^用的第二種抗體與除生物素以外的一種物質(zhì)結(jié)合的，則不f2t—步驟,測(cè)試緩沖液中的鏈球苗抗生物柰蛋自"Ht氣化物誨的濃J^每^2O餓克，將平加在室溫下放ft在P為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上S規(guī)6.如前所述地清洗乎亞，將一種200傲升的鄰一次^U質(zhì)溶紗入每錯(cuò)中，這種基質(zhì)溶液也可用本領(lǐng)械內(nèi)專肚員^的一些適,當(dāng)辨染劑中的任一種代替，並取決于與笫二種抗體結(jié)合的物質(zhì)是什么.k后將平皿放在P:為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)桊上在窒溫下置于暗處培養(yǎng)87.然后，將i00t^的稀琉酸(1OH)加入每個(gè)井中以中止該基質(zhì)的反應(yīng).5在492n邁下aat分光光度3^^定每^:的吸收率，P—石GG的二步,法的準(zhǔn)備工作J在W96井的#3定平誠(chéng)上llt一屢對(duì)A^4Ji促性腺激素(hc&)分子的游離e—亞單位特異的"擁獲*抗體，抗體既可以是單克隆的，也可以是多克隆的，用于盡平皿的抗體密:*0sS傲充,但如需要-也可不同-乎加在4t下至少培養(yǎng)i6小時(shí),2.用合O0S夷吐溫20的:PH7,2的璘酸鹽疑沖歡清洗平皿，也可用其它適當(dāng)?shù)那逑匆蓻_液.然后，用含3多水解動(dòng)物蛋白和00S多吐溫20的EH72的璘&疑沖液將平皿"阻隔"，也可^本領(lǐng)域抆術(shù)人員所,的其它溶私如！多的牛血清蛋白溶液，將30O微升的阻隔溶液加到每個(gè)井中，讓平皿在盡濕下培養(yǎng)l小時(shí)，也可用其它阻隔方法，如"涂釉法"..3.然后，如前所述地清洗平皿，將一種J00it^的測(cè)試緩沖^P入每4^中，所用的測(cè)試緩沖^t含3夷水解動(dòng)物蚤白和0.05多吐溫20的SH72的磷酸鹽緩沖私也可用本領(lǐng)域?qū)kA員所^^的一些合^液中的任河一種.4然后將20做樣柳入每錯(cuò)中,樣本可以是，作為證實(shí)測(cè)試性能的空白的測(cè)試緩沖私一種用于標(biāo)準(zhǔn)化未知樣本值的游離e一E0&溶私^^懷孕到中期三個(gè)月的婦女體內(nèi)取出的血清樣本，將平孤渦旋3O秒鐘，然后放在P,為200特/分的旋轉(zhuǎn)器上在蠱溫s然后，如前所述地清洗平皿，將iooM含有對(duì)游離e—HbG亞單位特異的生物素化辨抗體的測(cè)試疑沖^P入4M^井中.根據(jù)操作者的窨5fe抗體可以是單充隆的戎多克隆的，也可狄與WP辣M:氧化物^械性褲酸l^樣的生物素外的物質(zhì)結(jié)合了的—、調(diào)節(jié)抗體的濃A以達(dá)到最敏牧率.將平順旋3o秒鐘,然后放在p為多p0轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上在盡溫下堆養(yǎng)30^HK6然后如前所a^4^平風(fēng)，將！o0*舍有結(jié)合了辣^氣化物聘的^苗^^物素蛋白的測(cè)試疑沖^>入到#^井中，如果所用的第二種抗^除生物素以外的一種物質(zhì)結(jié)舍了的，則不m—步驟，測(cè)試疑沖液中m窗M物素蛋白一過(guò)栽，酶6^^4H!fc升2o傲克，將平皿在盡濕下置于p為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上5分鐘，7.然后如前所述地清洗平皿，將:to0#^的一種鄰一次^氣基質(zhì)溶#入每個(gè)井中，這種基質(zhì)溶液也可以用本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員公知的一些適當(dāng)染剤中的^T一種代替，並取決于與笫二種抗體相結(jié)合的物質(zhì)，然后M皿放在p為200轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)器上，在室溫下置于暗^yt養(yǎng)s^4K8然后，將10o傲升的稀琉酸(1,0b〉加入每+井中以中止M質(zhì)的反應(yīng).9.在492n邊下ifct^光度測(cè)量絲定每^的吸收率，這兩種鵬法用來(lái)執(zhí)行本發(fā)明的方法.用了17s例病人樣本來(lái)研究胎JUt氏綜余&與母體血液中游離e—ho&^之間的關(guān)系，對(duì)從己知懷有患康氏綜^&胎兒的孕婦體內(nèi)取得的2i52例S知的、未患病樣本進(jìn)行了分析，所*#本均取自懷單胎的未患糖尿病的白人孕婦.然后,我們用2lisa測(cè)定法錄病人樣本以得到msapp的定量仏解獨(dú)地用一步艦法和二步敝法得出游離e—hog的舍量，由絲洲定^fr^到的msa3^值和游離e—h0g值成為在市場(chǎng)上可得到購(gòu)計(jì)算*1^件統(tǒng)計(jì)數(shù)件乜《統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)"上進(jìn)行的線性判別式處理中的一個(gè)變量以建立一組基準(zhǔn)數(shù)振.病人的孕餘也作為一個(gè)變*#入判別式處理中.對(duì)一切孕齡及孕齡在i4至J6周之間的判別式員結(jié)果歸納如下，一切孕餘儂陽(yáng)性舉發(fā)現(xiàn)率對(duì)照悉病-J)25226"22S8，2多33,3突"8-2)+L0g(A;pP)"J多138-2"33，3多236"61724至2<$周假陽(yáng)性率發(fā)現(xiàn)率對(duì)照悉病IiOg(P--!)2044，S多73,7%/。4-2)9S-2)+L0g(Ayi0試-2"54.6爽S.3多",6多96注，所有分析均包括孕齡.在后面帶餘的分析中，另外兩組樣本值為260和3J6的結(jié)果^*一2*^-步法處理,一2表示二步法處理.發(fā)現(xiàn)率指顯示陽(yáng)性測(cè)試法果的浙兒唐氏雄A度的百分豐.假陽(yáng)性豐指顯示陽(yáng)性測(cè)試結(jié)果的正常胎兒的百分比*對(duì)照指被分析的未患辨樣本的數(shù)目^j指被分析的悉病樣本的數(shù)貝—對(duì)一切懷孕周ife^.懷孕i4至i6周孕婦利用游離e的一步a^法和a:pe的組舍可得到最離的發(fā)現(xiàn)率和條低的假陽(yáng)性率，我們的結(jié)果進(jìn)一步支持了在孕婦血清檢i方案中以可行而有效的方絲行唐氏綜錄檢査的良好效能，該良好效能包括，(04戰(zhàn)入性方法，(》)低假陽(yáng)性率和高發(fā)現(xiàn)率,(0)朋^*賴立的指標(biāo),(a)對(duì)血樣無(wú)苛刻限制(一夭的什么時(shí)侯,進(jìn)食憤禮個(gè)人習(xí)慣等)及(e)與其^前檢査方法的相容性，我們的結(jié)^fe明，雖然^比其它方法更少的生物化學(xué)分析法，在麿氏綜^fe的檢査中有可能得到更離的發(fā)現(xiàn)率，在唐氏綜合&檢査中，僅僅使用最有效的指標(biāo)就能對(duì)絕大部分悉嚴(yán)重精神發(fā)有遲鐵的最^NA原因的)^l在，妊被中提供非ftA性檢査傳應(yīng).對(duì)于本領(lǐng)域的專業(yè)人員來(lái)說(shuō)，顯然，改變判斷陽(yáng)性結(jié)果的危險(xiǎn)卑截止值，或?qū)ρ芯繉?duì)象的不同小組采用不詞的先l^fc險(xiǎn)率，將改變對(duì)病人進(jìn)行判別式處理的結(jié)果.因此，應(yīng)當(dāng)明確，本發(fā)明包括了所有落在下列扭利要求書范圍之內(nèi)的改進(jìn).特別地，本發(fā)明涉及如下實(shí)施方案h—種確定^a是否處在懷有患唐氏錄^S^兒明顯危險(xiǎn)中的方法,包括,瑰4孕婦母體血液中A^^l促性腺激柰的游離P亞舉位的《#*,的孕齡代入-^率密度函數(shù)中，由此將所說(shuō)的孕婦的所說(shuō)游離e亞單位合量和所說(shuō)的孕婦孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比f(wàn)c以確定所說(shuō)孕婦懷有患唐氏錄合^臺(tái)兒的危險(xiǎn)率.2,—種^孕婦是否處于懷有患唐氏綜合^^兒明顯危險(xiǎn)中的方法，包fe,艦孕婦母體血液中A^鄉(xiāng)促性麟素的游離e亞單位，測(cè)戰(zhàn)絲胎x^氏綜械危險(xiǎn)率增加的征兆，3.如實(shí)施方案2所述的方法，其中^括i^孕婦血液中的a—胎兒蛋白，人絨4^促,激素中游離e亞單iiRa—胎兒蛋白的測(cè)4結(jié)果^yMJSP氏綜合癥危險(xiǎn)率增加的征兆.4.—種確定孕婦是否處在懷有患唐氏錄舍,、兒明顯危險(xiǎn)中的方法,包括，測(cè)量孕婦母體血液中A^頓促性腺激素中游離e亞單位的合量，並將該測(cè)量值與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確定孕婦懷嗜患唐氏錄4^胎兒的危險(xiǎn)率.s.—種確定孕婦是否處于懷有患唐氏綜合劍&兒明顯危除中的方法，包括，用^^A絨頓促性腺激素中游離e亞單位的鵬法測(cè)量孕婦母體血液中一種被分析物的合量，並將賴被分析物的測(cè)量結(jié)果與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確定孕婦懷有患唐氏錄^fe胎兒的危險(xiǎn)率.(5.如實(shí)施方案4戎5所述的方法，其中還包括，測(cè)量孕婦母體血液中ar"胎兒蛋白自，並將這一《*結(jié)*^孕婦的孕餘與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比&7*如實(shí)施方案4、5或(S所述的方法，其中比較步驟包括將測(cè)Jt結(jié)果ft^到由線性判別式^l的由一組基準(zhǔn)數(shù)振產(chǎn)生的一個(gè)概率密度函數(shù)中.S.如實(shí)施方案4、S、6戎7所迷的方私其中比較步驟包括將測(cè)4結(jié)果的對(duì)數(shù)與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較，9.一個(gè)用于執(zhí)行實(shí)施方案J至《中任一個(gè)用于確定孕婦是否處于懷有患唐氏綜舍&^;Uttm法的測(cè)妙法，儲(chǔ)i用于測(cè)試孕婦血液中A^4^促性膝激素中游離e亞單位的手段.J0.—種測(cè)量人體血液中人鍵毛澳促性腺激素的游離P亞單位含囊的測(cè)定法.!1一種設(shè)備，包括《朋于接收孕婦母體血液中A^狄促性腺激素的游離e亞單位含量的測(cè)試結(jié)果的裝置和用于將測(cè)試結(jié)果與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)裙進(jìn)行比較以確定胎兒染色體異常的計(jì)算機(jī)裝置.12.如實(shí)施方案Ji所述的設(shè)備，其中的胎兒染色##常是指13，用來(lái)確定孕婦是否處在懷有悉唐氏錄^J會(huì)兒明顯危險(xiǎn)中的設(shè)備,包括，適用于接收孕婦母體血波中A^4^促性脈激素的游離P亞單位含量的測(cè)試結(jié);^裝置，及計(jì)算M置，用來(lái)計(jì)算一M準(zhǔn)數(shù)據(jù)，和的孕婦的孕齡f^一^Nfc率密度函數(shù)中，由此將所說(shuō)孕婦的游離e—亞舉位值和所說(shuō)孕婦的孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較以確^f說(shuō)孕婦懷有患唐氏錄^&Ji兒的危除率，i4,用來(lái)^孕婦是否處在懷有患唐氏練"^fe^兒明顯危險(xiǎn)的設(shè)備包括，適用于接收用一種.A^毛胰促性腺激素的游離e亞單位測(cè)定^#到的孕婦母體血液中某一被分祈物詢?yōu)?值的對(duì)t,及計(jì)算機(jī)^t,用來(lái)計(jì)P組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)^用于將所說(shuō)的被分析物舍4的鵬值和所說(shuō)孕婦的孕齡代入一個(gè)概率密度函數(shù)中，由此將所說(shuō)孕婦的游離e亞單位的合量和所說(shuō)孕婦的孕齡與一絲準(zhǔn)數(shù)據(jù)比私以確定孕婦懷有患唐氏錄a胎兒的危險(xiǎn)率.js如實(shí)施方案i3戎i4所述的設(shè)備，其中a^fe括，適用于接收孕婦母體血液中a—胎兒蛋白合ft的測(cè)量值的裝置，及其中的計(jì)算^ft還將a—胎兒蛋白的測(cè)試結(jié)果代入該概率密度函數(shù)中，由此將該孕婦的a—胎兒蛋白值與一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)振相比釔i6.如實(shí)施方案l3、f4戎JIS所說(shuō)的設(shè)備，其中該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)是由4^1,偟的對(duì)數(shù)計(jì)算得到的，及這些測(cè)4結(jié)果的對(duì)|^于將孕婦^#標(biāo)的合囊與該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較.權(quán)利要求1.一種用以執(zhí)行可用于評(píng)價(jià)孕婦是否應(yīng)該接受唐氏綜合癥診斷試驗(yàn)的篩選方法的設(shè)備，包括適用于接收孕婦母體血液中人絨毛膜促性腺激素游離β亞單位含量的測(cè)量結(jié)果的裝置；和計(jì)算機(jī)裝置，用于將所述孕婦血液中人絨毛膜促性腺激素游離β亞單位含量和所述孕婦的孕齡與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較，該比較是通過(guò)將所述孕婦的人絨毛膜促性腺激素游離β亞單位含量的所述測(cè)量結(jié)果和所述孕婦的孕齡代入到利用多變量判別式分析法展開的基準(zhǔn)數(shù)據(jù)的概率密度函數(shù)中，由此將所述孕婦的人絨毛膜促性腺激素游離β亞單位含量和所述孕婦的孕齡與該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)比較。2.權(quán)利要求1的設(shè)備，其中所述接收裝置還適用于接收所迷孕婦的a-胎兒蛋白含量，且所述的計(jì)算機(jī)裝置將所述oc-胎兒蛋白的含量與所述基準(zhǔn)數(shù)據(jù)相比較。3.權(quán)利要求1或2的設(shè)備，其中所述計(jì)算機(jī)裝置由懷有患唐氏綜合癥胎兒的孕婦和懷有正常胎兒的孕婦的母體血液中人絨毛膜促性腺激素游離P亞單位含量計(jì)算得到一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)。4.權(quán)利要求l、2或3的設(shè)備，其中所迷計(jì)算機(jī)裝置由懷有患唐氏綜合癥胎兒的孕婦和懷有正常胎兒的孕婦的母體血液中a-胎兒蛋白含量計(jì)算得到一組基準(zhǔn)數(shù)椐。5.權(quán)利要求1、2、3或4的設(shè)備，其中所述裝置由所述含量的測(cè)量數(shù)椐的對(duì)數(shù)計(jì)算得到該組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)。6.權(quán)利要求l、2、3、4或5的設(shè)備，其中所述裝置比較所迷測(cè)量結(jié)果的對(duì)數(shù)以便將所迷的孕婦中含量與該組基準(zhǔn)數(shù)椐比較。全文摘要一種用于確定孕婦是否處于懷有患唐氏綜合癥胎兒明顯危險(xiǎn)的方法和設(shè)備。該方法包括測(cè)量孕婦母體血液中人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位的含量。將人絨毛膜促性腺激素的游離β亞單位含量單獨(dú)地或與其它指標(biāo)一起地與一組基準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。一個(gè)計(jì)算機(jī)化的設(shè)備、最好用由一組標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)通過(guò)線性判別分析處理得到的一個(gè)概率密度函數(shù)、來(lái)進(jìn)行判斷。文檔編號(hào)G06F19/00GK101329354SQ20081008124公開日2008年12月24日申請(qǐng)日期1990年1月17日優(yōu)先權(quán)日1989年1月17日發(fā)明者詹姆斯·尼古拉斯·馬克里申請(qǐng)人:Jn馬克里技術(shù)有限責(zé)任公司