專利名稱：給家禽服用活性微生物組合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于給家禽服用活性微生物組合物的方法，其中，服用可用于家禽生長的活性微生物組合物，以便以高生產(chǎn)量飼養(yǎng)家禽，同時(shí)減少諸如抗生素、抗細(xì)菌劑等的藥品的用量，或者不使用藥品。
背景技術(shù)：
在諸如仔雞的家禽飼養(yǎng)中，為了降低生產(chǎn)成本，通常進(jìn)行每tsubo(大約3.3m2)家禽場飼養(yǎng)40-60只禽的密集飼養(yǎng)。另外，將家禽育肥以實(shí)現(xiàn)快速生長，平均每天增加體重50-55克，以便所述家禽能在孵化后大約2個(gè)月上市。在以上條件下家禽通常受到較大的壓力，它們經(jīng)常會生病，并且，疾病通常會在家禽之間蔓延。在地面飼養(yǎng)中，由于家禽啄食粘有地面上的糞便的飼料，有毒的細(xì)菌很容易傳染到飼養(yǎng)場里的所有家禽上。另外，在開放飼養(yǎng)場中，或者有時(shí)甚至在無窗戶飼養(yǎng)場中，有毒的細(xì)菌也很容易在飼養(yǎng)場中擴(kuò)散。此外，例如，盡管每當(dāng)仔雞上市以后都要對雞舍進(jìn)行消毒，但由于諸如大鼠等周圍地區(qū)的小動物不受這種處理的影響，而這些動物帶有諸如沙門氏菌之類的細(xì)菌，當(dāng)仔雞被再次放入該飼養(yǎng)場時(shí)，會將這些細(xì)菌帶入。
為了保持高產(chǎn)量，同時(shí)避免在飼養(yǎng)期間生長速度等的下降，也為了避免家禽在上述條件下被有毒的細(xì)菌污染，通常要給家禽服用諸如抗生素、和抗細(xì)菌劑之類的各種藥品。
不過，由于有在肉和蛋中存在殘留藥品的可能性，并且還有產(chǎn)生抗所述藥品的細(xì)菌菌株的危險(xiǎn)(已在很多事件中實(shí)際報(bào)導(dǎo)過)，使用者日益要求不使用藥品生產(chǎn)的無藥物畜產(chǎn)品。
另一方面，在不進(jìn)行大量家禽的密集飼養(yǎng)的自然條件下，不可能獲得高的產(chǎn)量。不過，有可能在不使用諸如抗生素、和抗細(xì)菌劑等的藥品的情況下飼養(yǎng)諸如雞等的家禽。在天然狀態(tài)下飼養(yǎng)的雞，即所謂舍養(yǎng)本地雞的肉和蛋由于其安全性和良好的口味，現(xiàn)在有很大的需求，并在市場上以高的價(jià)格銷售。
因此，人們對不會導(dǎo)致有毒細(xì)菌污染，同時(shí)保證高產(chǎn)量的飼養(yǎng)諸如雞等家禽的飼養(yǎng)方法的開發(fā)懷有極大興趣，通過無藥物飼養(yǎng)方法進(jìn)行(在部分或整個(gè)飼養(yǎng)期間，不使用諸如抗生素、和抗細(xì)菌劑等的藥物，以便藥品不會殘留在家禽體內(nèi)，至少在銷售時(shí)是這樣)。
當(dāng)僅僅通過避免使用藥品而進(jìn)行大量家禽的常規(guī)密集飼養(yǎng)時(shí)，家禽容易感染有毒細(xì)菌。因此，在不導(dǎo)致有毒細(xì)菌的污染的前提下，不可能將產(chǎn)量維持在商業(yè)上可接受的水平。
作為不依賴于諸如抗生素和抗細(xì)菌劑之類藥品的減少家禽感染有毒細(xì)菌的方法，有人提出服用可用于各種家禽生長的微生物等。屬于芽孢桿菌屬的細(xì)菌，屬于乳桿菌屬的乳酸菌，和屬于雙歧桿菌屬的細(xì)菌等已知是用作飼料添加劑或作為各種CE(競爭性排它)制劑的有用微生物。這些微生物中的某一些作為家禽的飼料添加劑活性微生物制劑出售。不過，盡管其效果在一定程度上得到認(rèn)可，但還不夠充分。特別是，尚沒有報(bào)導(dǎo)說能進(jìn)行大量家禽的無藥物密集飼養(yǎng)，并通過上述活性微生物制劑獲得商業(yè)上可接受水平的產(chǎn)量。
例如，日本登記專利號2528055和JP-B-3-79988(本文所使用的術(shù)語“JP-B”是指“審查過的日本專利公開”)披露了通過給動物服用含有枯草芽孢桿菌的活性微生物制劑可以實(shí)現(xiàn)體重增加和動物體內(nèi)飼料轉(zhuǎn)化率的提高，并可以獲得諸如腸道功能控制作用等的效果。通過采用所述方法可以進(jìn)行諸如仔雞的無藥物飼養(yǎng)，但僅僅能在不進(jìn)行仔雞的大規(guī)模生產(chǎn)的某些有限的地區(qū)進(jìn)行。不過，在某些地區(qū)經(jīng)常進(jìn)行仔雞飼養(yǎng)，由于仔雞經(jīng)常感染容易通過如上文所述的飼養(yǎng)場擴(kuò)散的有毒細(xì)菌，用這種方式進(jìn)行仔雞的商業(yè)化無藥物飼養(yǎng)是極其困難的。另外，即使能夠用這種方法進(jìn)行仔雞的無藥物生產(chǎn)，家禽的體重增加速度也低于使用藥品的飼養(yǎng)。其結(jié)果是，不能獲得使用藥物飼養(yǎng)的高的產(chǎn)量。
另外，目前市場上銷售的活性微生物制劑存在問題，如在分配步驟中活性細(xì)菌數(shù)的減少，在形成腸道菌群之后定居能力較差，必須長時(shí)間連續(xù)服用所述活性微生物制劑等。特別是，從經(jīng)濟(jì)學(xué)角度考慮，由于在形成腸道菌群之后定居能力較差，而必須連續(xù)長時(shí)間服用活性微生物制劑，這在目前嚴(yán)重妨礙了其實(shí)際應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于給家禽服用活性微生物組合物的方法，以便能進(jìn)行家禽的無藥物飼養(yǎng)，同時(shí)保持良好的產(chǎn)量。
為了解決上述問題，本發(fā)明的發(fā)明人業(yè)已從多種天然來源進(jìn)行了有用細(xì)菌的篩選，并發(fā)現(xiàn)從雞的腸道分離的某些乳酸菌很容易定居在孵化不久的新生雞的腸道中。另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)特別是從雞的回腸中分離的異型發(fā)酵乳酸菌和從雞的盲腸中分離的同型發(fā)酵乳酸菌很容易定居在新生離巢雛的腸道中，并具有多種作用，如抑制有毒細(xì)菌的生長，預(yù)防腹瀉，促進(jìn)生長，提高飼養(yǎng)率，和提高飼料轉(zhuǎn)化率等。另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)乳酸菌可以定居在剛出生不久的新生雞的腸道上，僅僅通過將乳桿菌屬的乳酸菌的活性微生物的懸浮液在孵化之后4天內(nèi)在新生雞上噴灑一次即可。
另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在無藥物家禽飼養(yǎng)的離巢雛期至成型期期間同時(shí)定居有用的乳酸菌和服用芽孢桿菌活性微生物，可以提高最初飼養(yǎng)階段的體重增加，與僅服用一次芽孢桿菌活性微生物相比，可以實(shí)現(xiàn)充分的飼養(yǎng)率，因此，有可能以商業(yè)化有效的高產(chǎn)量通過大量家禽的密集飼養(yǎng)進(jìn)行家禽的無藥物飼養(yǎng)。本發(fā)明的完成基于以上發(fā)現(xiàn)。
因此，本發(fā)明涉及一種給家禽服用活性微生物的方法，包括在新生離巢雛期給家禽服用含有屬于路氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)和約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)的活性細(xì)菌的第一種組合物。
另外，本發(fā)明涉及一種給家禽服用活性微生物的方法，包括在新生離巢雛期給家禽服用含有屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的活性乳酸菌的活性微生物組合物；和給家禽服用含有屬于枯草芽孢桿菌的活性微生物的活性微生物組合物。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式本發(fā)明給家禽服用微生物組合物的方法包括給新生離巢雛服用含有屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的活性乳酸菌的活性微生物組合物(以下通常稱之為“乳酸菌的活性微生物組合物”)。
屬于乳桿菌屬的上述乳酸菌是兼性需氧菌。不僅是從家禽的腸道中分離的細(xì)菌，而且從天然來源分離的其它菌株同樣能有效使用。屬于路氏乳桿菌的菌株的優(yōu)選例子包括路氏乳桿菌CP-720(保藏號FERM BP-6332)，和路氏乳桿菌CP-722(保藏號FERM BP-6334)等。屬于約氏乳桿菌的菌株的優(yōu)選例子包括約氏乳桿菌CP-721(保藏號FERM BP-6333)等。這三種菌株業(yè)已保藏在工業(yè)技術(shù)院生命工學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所(地址1-3，Higashi 1 chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken 305-8566，日本)，保藏日期為1998年4月27日。路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的其它菌株也是已知的，如披露于ATCC細(xì)菌和噬菌體，第19版，1996，p.195-197上的菌株，該文獻(xiàn)被收作本文的參考文獻(xiàn)。
路氏乳桿菌CP-720和CP-722和約氏乳桿菌CP-721的細(xì)菌學(xué)特性如表1所示。
表1

乳酸菌的活性微生物組合物還可以含有屬于除路氏乳桿菌之外的乳桿菌屬的異型發(fā)酵乳酸菌，如短乳桿菌(Lactobacillus brevis)，和布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneti)等，以及屬于除約氏乳桿菌之外的乳桿菌屬的同型發(fā)酵乳酸菌，如加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)，和卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)等，屬于嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophillus)類。乳桿菌的許多不同屬的許多不同菌株是已知的，如披露于ATCC細(xì)菌和噬菌體，第19版，1996，p.192-199上的菌株，該文獻(xiàn)被收作本文的參考文獻(xiàn)。
可用于培養(yǎng)乳酸菌的活性微生物的培養(yǎng)基的優(yōu)選例子包括乳培養(yǎng)基，如牛奶、山羊奶、和馬奶等，其脫脂奶，和用于乳酸菌的培養(yǎng)基，如BL培養(yǎng)基，Briggs肝肉湯培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基，GAM培養(yǎng)基，和TTY培養(yǎng)基等。
所述乳酸菌可以在25-45℃下，優(yōu)選30-40℃下培養(yǎng)6-30小時(shí)，更優(yōu)選10-24小時(shí)。由此獲得的培養(yǎng)液可直接用作乳酸菌的活性微生物組合物，將其儲存在大約5℃下備用。另外，可以通過離心回收所述微生物，與一種保護(hù)劑混合，然后在真空條件下冷凍干燥。所得到的細(xì)菌干粉可以儲存在涼爽遮光的箱中，并通過在使用時(shí)懸浮、混合或溶解所述干粉將其用作乳酸菌的活性微生物組合物。用這種方法制備的干燥微生物粉是比較優(yōu)選的，因?yàn)樗梢越?jīng)受長時(shí)間的儲存。
所述乳酸菌的活性微生物組合物可以含有載體和稀釋劑。所述載體和稀釋劑沒有特別的限制，并可以選自藥理學(xué)上或營養(yǎng)學(xué)上可以接受的載體和稀釋劑。另外，乳酸菌的活性微生物組合物可以含有一種家禽飼料(日糧)。
在本發(fā)明中，屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的微生物可以進(jìn)行合適的突變處理，如接受紫外線、X-射線或輻射，和用誘變化合物(例如，亞硝基胍，丫啶染料)進(jìn)行化學(xué)處理。還可以通過核苷酸的插入、缺失或取代以及自發(fā)突變制備突變型。術(shù)語路氏乳桿菌和約氏乳桿菌包括所述突變型。
術(shù)語“新生離巢雛期”是指孵化不久的雛(例如，雛禽、幼禽、或雛鳥等)，特別是孵化后0-大約4天階段。使用乳酸菌的活性微生物組合物的時(shí)間沒有特別的限定，只要是在新生離巢雛階段即可；不過，優(yōu)選在孵化之后4天之內(nèi)使用所述組合物，更優(yōu)選在孵化之后2天內(nèi)使用，即在腸道菌群定居在離巢雛的腸道中之前的一段時(shí)間。使用的次數(shù)沒有特別限制；不過，使用一次一般即可獲得足夠的效果。隨著使用次數(shù)的增加所獲得的效果會變得更穩(wěn)定和更可靠。不過，使用三次或三次以上從經(jīng)濟(jì)上考慮是不合算的，而所獲得的效果幾乎與使用兩次相同。
盡管沒有特別的限定，乳酸菌的活性微生物組合物的使用可以通過口服進(jìn)行。具體地講，可以通過將所述組合物添加到飲用水或其它食物中并讓離巢雛自由地?cái)z食進(jìn)行口服，或者使用噴霧器等從離巢雛的上方進(jìn)行噴霧。噴霧服用方法是優(yōu)選的，因?yàn)殡x巢雛的習(xí)性是向上張著嘴鳴叫，因此，所述具有高濃度的活性微生物組合物在新生離巢雛階段可以方便地和安全地進(jìn)行口服。
為了完成所述服用，所述乳酸菌的活性微生物組合物的乳酸菌總密度優(yōu)選為106-1010活性微生物/ml，更優(yōu)選107-109活性微生物/ml。另外，所述乳酸菌的活性微生物組合物的服用量優(yōu)選為1×103-1×1010活性微生物/只離巢雛，更優(yōu)選為1×104-1×1016活性微生物/只離巢雛。
在本發(fā)明的方法中，除了上述服用乳酸菌的活性微生物組合物之外，還要服用含有屬于枯草芽孢桿菌的活性微生物的用于家禽的活性微生物組合物(以下通常稱之為“枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物”)。
枯草芽孢桿菌菌株的優(yōu)選例子包括枯草芽孢桿菌C-3102(保藏號FERM BP-1096)，該菌株業(yè)已保藏在工業(yè)技術(shù)院生命工學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所(舊稱發(fā)酵研究所)，(地址1-3，Higashi 1 chome，Tsukuba-shi(舊地址Yatabe-machi，Tsukuba-gun)，Ibaraki-ken305-8566(舊的郵政編碼305)，日本)，保藏日期為1986年6月28日?？莶菅挎邨U菌C-3102的細(xì)菌學(xué)特性業(yè)已披露于日本登記專利號2528055，JP-B-3-79988和美國專利Re.34,837中。枯草芽孢桿菌的很多不同菌株是已知的，如披露于ATCC細(xì)菌和噬菌體，第19版，1996，p.57-63上的菌株，該文獻(xiàn)被收作本文的參考文獻(xiàn)。
在培養(yǎng)枯草芽孢桿菌C-3102時(shí)，可將含有通常被用于培養(yǎng)微生物的碳源、氮源、和無機(jī)物等材料的液體或固體培養(yǎng)基用作培養(yǎng)基。碳源的例子包括可以被同化的物質(zhì)，如葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、和糖蜜等。氮源的例子包括蛋白胨、肉膏、酪蛋白水解物、和硫酸銨等。需要時(shí)將磷酸鹽，鎂、鉀、鈉、鈣、鐵、和錳等的鹽，維生素，氨基酸，消泡劑，和表面活性劑等進(jìn)一步加入用作無機(jī)成分。培養(yǎng)優(yōu)選在需氧條件下進(jìn)行。所述培養(yǎng)基的起始pH優(yōu)選為5-9，更優(yōu)選為6-8；培養(yǎng)溫度優(yōu)選為20-50℃，更優(yōu)選為35-40℃；培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為12小時(shí)至7天。
用這種方法獲得的培養(yǎng)混合物可以直接用作枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物，或者作為其濃縮產(chǎn)物形式使用或作為從它里面分離的細(xì)胞使用，可以直接使用或者在添加諸如填料之類的添加劑之后使用。所述填料沒有特別限制，其例子包括碳酸鈣、脫脂稻殼、玉米粗粉、玉米面、麥麩、和脫脂奶粉等。
所述枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物可以含有一種載體或稀釋劑。所述載體和稀釋劑沒有特別的限制，可選自藥理學(xué)上或營養(yǎng)學(xué)上可接受的載體和稀釋劑。另外，枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物可以含有一種家禽飼料。
在本發(fā)明中，可以對屬于枯草芽孢桿菌的微生物進(jìn)行合適的誘變處理，如接受紫外線、X射線或輻射，和用誘變化合物(例如亞硝酸胍、丫啶染料)進(jìn)行化學(xué)處理。還可以通過核苷酸的插入、缺失或取代以及自發(fā)突變制備突變型。術(shù)語枯草芽孢桿菌包括以上突變型。
服用枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物的時(shí)間沒有特別的限制；不過，為了獲得合適的腸道菌群的定居，優(yōu)選在服用上述乳酸菌的活性微生物組合物之后再服用枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。另外，在新生離巢雛期和育肥期之間的一段時(shí)間不使用抗生素、和抗細(xì)菌劑等的飼養(yǎng)方法中，優(yōu)選在這一時(shí)期服用枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。例如，在仔雞飼養(yǎng)中，可以在新生離巢雛期和育肥期之間的任意階段服用；不過，在進(jìn)行無藥物飼養(yǎng)時(shí)，僅在長成期和育肥期之間服用，以便在仔雞上市時(shí)所述藥物不會殘留在仔雞體內(nèi)，枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物可以在長成期和育肥期服用。
枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物的服用可以通過在將其添加到飼料、或飲用水中之后通過口服攝取完成。
例如，在進(jìn)行服用讓含有枯草芽孢桿菌C-3102的活性微生物組合物與飼料混合時(shí)，所述飼料優(yōu)選具有105-108活性微生物/克的微生物密度，為孢子和/或營養(yǎng)細(xì)胞形式。
本發(fā)明的用于給家禽服用活性微生物組合物的方法不僅可用于密集飼養(yǎng)大量禽的條件下飼養(yǎng)的雛雞，而且可應(yīng)用于在其它條件下飼養(yǎng)的雛雞，并可用于其它家禽，如鴨、鵝、鵪鶉、野鴨、和鴕鳥等，以及觀賞鳥類等。
當(dāng)用于家禽的活性微生物組合物以上述方法服用時(shí)，在腸道中可以形成有利于家禽生長的細(xì)菌的腸道菌群，所述家禽在良好的健康狀況下生長?？梢垣@得各種效果，如有毒細(xì)菌的生長抑制，預(yù)防腹瀉，促進(jìn)生長，和提高飼料轉(zhuǎn)化率等，并使得雛禽的無藥物飼養(yǎng)成為可能。另外，由于有用的細(xì)菌主導(dǎo)著腸道菌群，所述家禽可以在良好的健康狀況下生長，由于明顯改善了產(chǎn)品的質(zhì)量，可以獲得食用家禽的美味肉類和蛋類。另外，所述肉類和蛋類是安全的，并且沒有受到有毒的食品毒性細(xì)菌的污染。
實(shí)施例在對本發(fā)明進(jìn)行一般性說明之后，通過結(jié)合某些特定實(shí)例可以進(jìn)一步理解本發(fā)明，這里所提供的實(shí)施例，僅用于說明目的，其用意不在于限定，除非另有說明。
生產(chǎn)實(shí)施例1將4.5克一份的脫脂乳溶解在50克水中，在100℃下巴氏滅菌10分鐘，然后冷卻到室溫。將一個(gè)接種環(huán)的路氏乳桿菌CP-720接種到由此制備的溶液中，并在37℃下靜止培養(yǎng)24小時(shí)，以便獲得初級引子(乳酸菌1×108活性微生物/克)。接著，將15克初級引子接種到500克業(yè)已在90℃下進(jìn)行過巴氏滅菌的脫脂乳(固體含量重量百分比為9％)中，并在37℃下培養(yǎng)20小時(shí)，獲得二級引子，二級引子含有2×108活性微生物/克。
通過將200克酪蛋白胨、200克酵母膏、100克檸檬酸鈉和200克葡萄糖溶解在20kg水中制備一種培養(yǎng)基，并用1N NaOH溶液調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH，將該培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，在95℃下巴氏滅菌15分鐘，然后冷卻至室溫。然后將3份重量的上述二級引子接種到100份重量的該培養(yǎng)基中，并在37℃下靜止培養(yǎng)20小時(shí)。
對由此獲得的培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以便回收微生物，接著對該微生物進(jìn)行冷凍干燥，使用分散培養(yǎng)基，1kg的溶液含有重量百分比為10％的脫脂乳，和重量百分比為1％的谷氨酸鈉，該溶液事先在90℃下進(jìn)行過巴氏滅菌，因此獲得146克路氏乳桿菌CP-720活性微生物干粉。所述活性微生物干粉含有7.0×1010活性微生物/克。
生產(chǎn)實(shí)施例2
將200克牛肉蛋白胨、60克大豆蛋白胨、100克酵母膏、100克乙酸鈉、40克磷酸氫二鉀、60克檸檬酸二銨和400克葡萄糖溶解在20kg水中制備一種培養(yǎng)基，并用1N NaOH溶液調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH，將該培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，在95℃下巴氏滅菌15分鐘，然后冷卻至室溫。然后，事先用與生產(chǎn)實(shí)施例1的相同方法預(yù)培養(yǎng)過的500克約氏乳桿菌CP-721的二級引子接種到所述培養(yǎng)基中，并在35℃下進(jìn)行18小時(shí)的靜止培養(yǎng)。
對所獲得的培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以便回收微生物，然后使用分散培養(yǎng)基進(jìn)行冷凍干燥，培養(yǎng)基溶液含有重量百分比為10％的脫脂乳，和重量百分比為1％的谷氨酸鈉，該溶液事先在90℃下進(jìn)行過巴氏滅菌，因此獲得141克約氏乳桿菌CP-721活性微生物干粉。所述活性微生物干粉含有6.5×1010活性微生物/克。
生產(chǎn)實(shí)施例3將用與生產(chǎn)實(shí)施例1的相同方法制備的路氏乳桿菌CP-722的二級引子接種到用生產(chǎn)實(shí)施例1所披露的相同方法制備和巴氏滅菌的培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基具有相同的成分組成和重量，并在37℃下靜止培養(yǎng)20小時(shí)。對由此獲得的培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以便收集細(xì)胞，然后將該細(xì)胞使用分散培養(yǎng)基進(jìn)行冷凍干燥，該分散培養(yǎng)基為一種含有10wt％脫脂乳，和1wt％谷氨酸鈉的溶液，該溶液事先在95℃下進(jìn)行過巴氏滅菌，因此獲得151克路氏乳桿菌CP-722活性微生物干粉。該活性微生物干粉含有6.8×1010活性微生物/克。
生產(chǎn)實(shí)施例4將在生產(chǎn)實(shí)施例1-3中獲得的活性微生物干粉合并成一份，并與7份糊精充分混合，以便獲得用于家禽的含有3種乳桿菌菌株的乳酸菌的活性微生物組合物。該活性微生物組合物含有2.0×1010活性微生物/克。
生產(chǎn)實(shí)施例5將200克大豆蛋白胨、10克磷酸氫二鉀和200克糖蜜溶解在10kg水中制備一種培養(yǎng)基，用1N NaOH溶液調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH至7.5，并將該培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐中，在95℃下巴氏滅菌60分鐘，然后冷卻到37℃。然后，將事先預(yù)培養(yǎng)過的100克枯草芽孢桿菌C-3102的培養(yǎng)液接種到該培養(yǎng)基中，并在37℃下有氧攪拌40小時(shí)。對由此獲得的培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以便回收微生物，然后將該微生物與相同重量的脫脂乳混合，并在真空中冷凍干燥，因此獲得750克用于家禽的枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。所述用于家禽的枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物含有1.2×1010活性微生物/克。
實(shí)施例1野外效果試驗(yàn)I(在長成期期間和之后不使用藥物進(jìn)行的試驗(yàn))用Chunky(商標(biāo)名稱，商業(yè)品系)進(jìn)行該試驗(yàn)。為圈養(yǎng)在禽籠中的雛禽(孵化后0天)噴霧提供12克在生產(chǎn)實(shí)施例4中制備的用于家禽的乳酸菌的活性微生物組合物(乳酸菌的總數(shù)為2.0×1010活性微生物/克)，該組合物業(yè)已均勻懸浮在4kg純凈水中。作為提供的飼料，分別將用作幼雛飼料(含有抗生素)的“幼雛早期飼料(Hina Ezuke)”和用于育雛期的“育雛AT(Zenki AT)”用于育雛飼養(yǎng)期(孵化后0-5天)和育雛期(孵化后5-21天)。在從長成期(孵化后21-43天)至育肥期(孵化后43天到上市日)期間使用用于育肥的“Brogoal A”(不含有抗生素)，該飼料業(yè)已與在生產(chǎn)實(shí)施例5中制備的用于家禽的枯草芽孢桿菌的9×105細(xì)胞/克的活性微生物組合物混合(上述所有商品化飼料制品是由Chubu Shiryo生產(chǎn)的)。其它飼養(yǎng)管理是按照家禽飼養(yǎng)場中常規(guī)進(jìn)行的家禽飼養(yǎng)方法進(jìn)行的。該試驗(yàn)的結(jié)果示于表2中。
比較實(shí)施例1用和實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行飼養(yǎng)，所不同的是不進(jìn)行乳酸菌活性微生物組合物的使用，在長成期將用于長成期的“長成期AT(Kohki AT)”(含有抗生素)(由Chubu Shiryo公司生產(chǎn))用作飼料，取代用于育肥目的的“Brogoal A”，在所有階段都不提供枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。其結(jié)果示于表2中。在該實(shí)施例中，“長成期AT(Kohki AT)”是一種具有與“Brogoal A”相同的組成的飼料，抗生素除外。
表2<

飼養(yǎng)率(上市禽數(shù)/投放畜禽的數(shù)量)×100★★飼料轉(zhuǎn)化率(在飼養(yǎng)期間所攝取的飼料總量(g)/增加的總的體重(g))×100★★★生產(chǎn)等級(平均體重×飼養(yǎng)率/飼料轉(zhuǎn)化率×上市時(shí)日齡)×100實(shí)施例1中的平均體重增加值低于比較實(shí)施例1的平均體重增加值大約1％，這被認(rèn)為是由于試驗(yàn)禽類的品質(zhì)所致。就是說，比較實(shí)施例1中禽類的體重是標(biāo)準(zhǔn)(41.9克/禽)，但接近實(shí)施例1中的新生禽類的體重(38.4克/禽)，因此其生長變差。由于實(shí)施例1的其它結(jié)果優(yōu)于比較實(shí)施例1的結(jié)果，其產(chǎn)量得到提高。
實(shí)施例2野外效果試驗(yàn)II(在育雛期期間和之后不使用藥物進(jìn)行的試驗(yàn))使用Chunky(商標(biāo)名稱，商業(yè)品系)進(jìn)行該試驗(yàn)。為圈養(yǎng)在禽籠中的雛禽(孵化后0天)噴霧提供12克在生產(chǎn)實(shí)施例4中制備的用于家禽的乳酸菌的活性微生物組合物(乳酸菌的總數(shù)為2.0×1010活性微生物/克)，該組合物業(yè)已均勻懸浮在4kg純凈水中。作為提供的飼料，將用作幼雛飼料的“幼雛早期飼料”用于育雛飼養(yǎng)期(孵化后0-5天)。并分別將不含抗生素的用于育雛期的“育雛AT(Zenki AT)”和業(yè)已與在生產(chǎn)實(shí)施例5中制備的用于家禽的枯草芽孢桿菌的9×105細(xì)胞/克的活性微生物組合物混合的用于育肥的“Brogoal A”，用于育雛期(孵化后5-21天)，和在從長成期(孵化后21-43天)至育肥期(孵化后43天到上市日)期間使用。其它飼養(yǎng)管理是按照家禽飼養(yǎng)場中常規(guī)進(jìn)行的家禽飼養(yǎng)方法進(jìn)行的。該試驗(yàn)的結(jié)果示于表3中。
比較實(shí)施例2以與實(shí)施例2相同的方法進(jìn)行飼養(yǎng)，所不同的是分別將用于育雛期的“育雛AT(Zenki AT)”和用于長成期的“長成AT(Kohki AT)”用于育雛期和長成期，并且在整個(gè)生長期不提供枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。其結(jié)果示于表3中。
表3

由于在實(shí)施例2中在育雛期期間和之后使用無藥物飼料，而在比較實(shí)施例2中使用含有藥物的飼料，前者的體重增加稍差，其增加值為51.6克/日·禽，但其飼養(yǎng)率為97％，這是良好的，而且生產(chǎn)等級為244，從而證明了經(jīng)濟(jì)的生產(chǎn)結(jié)果。
實(shí)施例3野外效果試驗(yàn)III(不使用藥物進(jìn)行的試驗(yàn))使用Chunky(商標(biāo)名稱，商業(yè)品系)進(jìn)行該試驗(yàn)。為圈養(yǎng)在禽籠中的雛禽(孵化后0天)噴霧提供40克在生產(chǎn)實(shí)施例4中制備的用于家禽的乳酸菌的活性微生物組合物(乳酸菌的總數(shù)為2-0×1010活性微生物/克)，該組合物業(yè)已均勻懸浮在4kg純凈水中。作為提供的飼料，分別將不含抗生素的用于育雛期的“育雛AT(Zenki AT)”和業(yè)已與在生產(chǎn)實(shí)施例5中制備的用于家禽的枯草芽孢桿菌的9×105細(xì)胞/克的活性微生物組合物混合的用于育肥的“Brogoal A”，用于育雛飼養(yǎng)期到育雛期(孵化后0-21天)，和在從長成期至育肥期(孵化后21-上市日)期間使用。其它飼養(yǎng)管理是按照家禽飼養(yǎng)場中常規(guī)進(jìn)行的家禽飼養(yǎng)方法進(jìn)行的。該試驗(yàn)的結(jié)果示于表4中。
比較實(shí)施例3用實(shí)施例3所述相同方法進(jìn)行飼養(yǎng)，所不同的是將用于育雛期的“育雛AT(Zenki AT)”，用于長成期的“長成AT(Kohki AT)”和用于育肥的“Brogoal A”分別用作從育雛飼養(yǎng)期到育雛期階段，長成期(孵化后21-43天)和育肥期(孵化后43天到上市日)的飼料，在整個(gè)生長期不使用枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物，其結(jié)果示于表4中。
表4

實(shí)施例3的試驗(yàn)未與比較實(shí)施例3的試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，而是在比較實(shí)施例3的飼養(yǎng)結(jié)束之后，并且由于在實(shí)施例3的飼養(yǎng)期間寒流襲擊野外，比較實(shí)施例3的最終的生長和飼養(yǎng)率受到寒流的影響。不過，盡管飼養(yǎng)是在整個(gè)生長期間不使用抗生素和抗細(xì)菌劑的情況下進(jìn)行的，實(shí)施例3的生產(chǎn)結(jié)果與比較實(shí)施例3的結(jié)果相同。
另外，沒有進(jìn)行與實(shí)施例1-3相應(yīng)的比較試驗(yàn)，因?yàn)樵谶@種飼養(yǎng)條件下不能獲得正常的生長，其中所達(dá)比較試驗(yàn)的飼養(yǎng)是在沒有藥物并且不服用用于家禽的乳酸菌的活性微生物組合物和用于家禽的枯草芽孢桿菌活性微生物組合物的條件下進(jìn)行的。
實(shí)施例4在實(shí)施例3和比較實(shí)施例3中，在上市的前一天收集禽類的新鮮糞便，用3只禽的糞便作為一個(gè)樣品，測定所述糞便中的大腸菌類和沙門氏菌屬的細(xì)菌。其結(jié)果示于表5中，在這種情況下，沙門氏菌屬的每一種細(xì)菌的血清型為07。
表5<

p＜0.05★★p＜0.01與比較實(shí)施例3比較，在實(shí)施例3中大腸菌類顯著減少，而且，沙門氏菌屬的細(xì)菌的檢測比例也明顯減少。
實(shí)施例5對實(shí)施例3和比較實(shí)施例3中飼養(yǎng)的禽的肉的適口性進(jìn)行比較。由于在對所述肉本身進(jìn)行測試時(shí)，由于各種處理因素而不可能進(jìn)行精確的感官測試，制備全雞湯，并進(jìn)行感官測試。將去掉內(nèi)臟的肉III(在宰殺和放血之后，接著再去掉羽毛、頭、腳和器官之后留下的可食用部分)作為全雞用于該試驗(yàn)，并將一份重量的樣品與4份重量的水和1.8％的鹽混合，并煮沸2小時(shí)。通過漂白的棉花過濾，將濾液(湯)制備成測試雞的重量的3倍，以便調(diào)整湯的濃度。由此獲得的湯的樣品進(jìn)行感官測試，其中，讓38位品嘗師選擇最可口的樣品。其結(jié)果如表6所示。
表6<

>★★p＜0.01與比較實(shí)施例3的禽比較，有大量的品嘗師選擇了實(shí)施例3的禽的適口性，因此，證實(shí)了通過無藥物飼養(yǎng)生產(chǎn)的禽的美味特性。
就此而言，在同時(shí)進(jìn)行的詳細(xì)口味評價(jià)中，實(shí)施例3的禽的湯獲得了好評，從統(tǒng)計(jì)學(xué)上講，其顯著水平為1％，其評價(jià)等級為1(優(yōu)良)，2(味道豐滿)，和3(合適的味道)。
參考實(shí)施例1僅用用于家禽的枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物進(jìn)行完全無藥物的試驗(yàn)。
在大量飼養(yǎng)仔雞的地區(qū)用Chunky家禽進(jìn)行試驗(yàn)。作為飼料，在從育雛飼養(yǎng)期到育雛期(孵化后0-21天)以及在從長成期到育肥期(孵化后21天到上市日)期間分別使用去掉了抗生素的“Broiler GoldStarting Crumble(Broiler Go1d Zenki Crumble)”和“Broiler Finisher(Broiler Shiage)”(不含抗生素等)(這兩種飼料均由Shikoku HaigoShiryo公司生產(chǎn))，這兩種飼料分別混合了1×106在生產(chǎn)實(shí)施例5中生產(chǎn)的用于家禽的枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物，并且添加了維生素和礦物質(zhì)。其它飼養(yǎng)管理是按照在家禽飼養(yǎng)場中常用的家禽飼養(yǎng)方法進(jìn)行的。該試驗(yàn)的結(jié)果示于表7中。
比較實(shí)施例4按照參考實(shí)施例1的方法進(jìn)行飼養(yǎng)，所不同的是在從育雛飼養(yǎng)期到育雛期，長成期(孵化后21-32天)和育肥期(孵化后32天到上市日)分別將 “Broiler Gold Starting Crumble(Broiler Gold ZenkiCrumble)”(含有抗生素)、“Broiler S”(含有抗生素)和“BroilerFinisher(Broiler Shiage)”(均由Shikoku Haigo Shiryo公司生產(chǎn))用作飼料，不提供枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物。其結(jié)果示于表7中。
表7

在參考實(shí)施例1中獲得的飼養(yǎng)率高于比較實(shí)施例4中的飼養(yǎng)率，但在飼養(yǎng)開始期間的體重增加推遲，并且推遲的跡象一直到結(jié)束。因此，其結(jié)果是體重增加在整個(gè)飼養(yǎng)期間一直較低，并且達(dá)到了商業(yè)上無法接受的水平。
另外，沒有進(jìn)行不服用用于家禽的枯草芽孢桿菌的活性微生物組合物、僅提供用于家禽的乳酸菌的活性微生物組合物的無藥物飼養(yǎng)試驗(yàn)，因?yàn)檫@種試驗(yàn)只能在不存在環(huán)境污染的地方進(jìn)行，如在完全衛(wèi)生狀態(tài)下的實(shí)驗(yàn)設(shè)施中進(jìn)行，而不是在常見的家禽飼養(yǎng)場中進(jìn)行。
工業(yè)應(yīng)用性由于服用含有特定活性乳酸菌的用于家禽的活性微生物組合物是在特定時(shí)期進(jìn)行，并結(jié)合服用含有活性枯草芽孢桿菌的用于家禽的活性微生物組合物，本發(fā)明的用于家禽的服用活性微生物組合物的方法可以產(chǎn)生各種效果，如抑制有毒細(xì)菌的生長，預(yù)防腹瀉，促進(jìn)生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率等，并可以高產(chǎn)量進(jìn)行禽類的無藥物飼養(yǎng)，特別是食用禽類的飼養(yǎng)，以高產(chǎn)量生產(chǎn)美味和安全的肉和蛋。因此，本發(fā)明用于給家禽服用活性微生物組合物的方法可用于飼養(yǎng)諸如雞的食用禽類，特別是仔雞等。
很顯然，通過以上說明可以對本發(fā)明進(jìn)行各種改進(jìn)和改變。因此，可以理解的是，在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)，本發(fā)明可以除本文所披露的方式以外的方式進(jìn)行。
本申請的優(yōu)先權(quán)文件日本專利申請?zhí)柶?-145372，申請日1997年6月3日，被收作本文的參考文獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種用于給家禽服用活性微生物組合物的方法，包括在新生離巢雛期給家禽服用含有屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的活性細(xì)菌的第一種組合物；和給所述家禽服用含有屬于枯草芽孢桿菌的活性微生物的第二種組合物。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中所述第一種組合物是在所述家禽孵化之后4天之內(nèi)服用的。
3.如權(quán)利要求1的方法，其中所述第一種組合物是在所述家禽孵化之后2天之內(nèi)服用的。
4.如權(quán)利要求1的方法，其中，路氏乳桿菌是選自下列一組中的至少一員(a)路氏乳桿菌CP-720，保藏號FERM BP-6332及其突變型，(b)路氏乳桿菌CP-722，保藏號FERM BP-6334及其突變型。
5.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述約氏乳桿菌是約氏乳桿菌CP-721，保藏號FERM BP-6333，或其突變型。
6.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物還含有一種載體或稀釋劑。
7.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物還含有一種家禽飼料。
8.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物是口服的。
9.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物是通過噴霧使用的。
10.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物含有106-1010所述細(xì)菌/克。
11.如權(quán)利要求1的方法，其中，給所述家禽服用1×103-1×1010所述細(xì)菌。
12.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第一種組合物僅服用一次或兩次。
13.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述枯草芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌C-3102，保藏號FERM-BP-1096，或其突變型。
14.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第二種組合物還含有一種載體或稀釋劑。
15.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第二種組合物還含有一種家禽飼料。
16.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第二種組合物是口服的。
17.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第二種組合物含有105-1018所述活性枯草芽孢桿菌/克。
18.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述第二種組合物是在服用所述第一種組合物之后服用的。
19.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述家禽是雞、鴨、鵝、鵪鶉、野鴨、鴕鳥、或觀賞鳥類。
20.如權(quán)利要求4的方法，其中，所述約氏乳桿菌是約氏乳桿菌CP-721，保藏號FERM BP-6333，或其突變型，而所述枯草芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌C-3102，F(xiàn)ERM BP-1096，或其突變型。
21.一種用于給家禽服用活性微生物的方法，包括在新生離巢雛期給家禽服用含有屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的活性細(xì)菌的第一種組合物。
22.如權(quán)利要求21的方法，其中，所述路氏乳桿菌是選自下列一組中的至少一員(a)路氏乳桿菌CP-720，保藏號FERM BP-6332，及其突變型，(b)路氏乳桿菌CP-722，保藏號FERM BP-6334，及其突變型。
23.如權(quán)利要求21的方法，其中，所述約氏乳桿菌是約氏乳桿菌CP-721，保藏號FERM BP-6333，或其突變型。
24.用權(quán)利要求21的方法制備的處于新生離巢雛期的家禽。
25.用權(quán)利要求22的方法制備的處于新生離巢雛期的家禽。
26.用權(quán)利要求23的方法制備的處于新生離巢雛期的家禽。
全文摘要
一種用于給家禽服用活性微生物組合物的方法:在新生離巢雛階段服用一種含有屬于路氏乳桿菌和約氏乳桿菌的活性乳酸菌的活性微生物組合物;并服用含有屬于枯草芽孢桿菌的活性微生物的活性微生物組合物。
文檔編號B66C7/12GK1265564SQ98807794
公開日2000年9月6日 申請日期1998年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月3日
發(fā)明者丸田喜義, 宮崎博 申請人:卡爾皮斯株式會社