專利名稱:含吡咯－羥吲哚衍生物的孕酮受體調(diào)節(jié)劑及其應(yīng)用的制作方法
背景技術(shù)：
孕酮受體(PR)激動劑和拮抗劑，也稱作PR調(diào)制劑，已被描述成可用于避孕和許多其它適應(yīng)癥。
美國專利6,562,857描述了作為PR激動劑的化合物。它們以下式化合物或其可藥用鹽為特征 其中T是0或者不存在；R1和R2各自獨(dú)立地是氫，烷基或取代的烷基；或者R1和R2合起來形成一個環(huán)并一起含有-CH2(CH2)nCH2-；n是1至5；R3是氫；R4是氫或鹵素；R5是氫或烷基；R6是氫或烷基。
需要的是新穎的PR調(diào)制劑，它們可作為避孕藥使用而無需孕激素激動劑或雌激素激動劑。
發(fā)明概要在一個方面，本發(fā)明提供了PR調(diào)制劑。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種式I化合物，其中R1至R9定義如下。
在又一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明化合物的方法。
在另一方面，本發(fā)明提供了含有本發(fā)明化合物的藥物組合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物在激素替代療法和使動情期同步中的應(yīng)用，以及用于處理避孕、激素腫瘤病、痛經(jīng)、功能不良性子宮出血、經(jīng)前綜合癥和經(jīng)前焦慮癥的癥狀，周期相關(guān)癥狀的用途和用于引發(fā)閉經(jīng)。
在又一方面，本發(fā)明提供了含有本發(fā)明化合物的試劑盒。
本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)被進(jìn)一步描述在以下對其優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)說明中。
發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明制備的化合物是孕酮受體(PR)拮抗劑，它們可用于各式各樣的用途。當(dāng)用于避孕時，PR拮抗劑可按照無需共施藥的方案施用，即，在沒有孕激素激動劑或雌激素激動劑的條件下施用。因此，本發(fā)明提供了沒有孕激素激動劑或雌激素激動劑的副作用的用藥方案。或者是，這種PR拮抗劑也可按照與諸如孕激素激動劑或雌激素激動劑等藥物共施用的方案給藥。
本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽、前藥或互變異構(gòu)體 其中，R1是氫，烷基，取代的烷基，環(huán)烷基，取代的環(huán)烷基，C3-C6烯基，取代的C3-C6烯基，C3-C6炔基，或取代的C3-C6炔基；R2和R3獨(dú)立地選自氫、烷基或取代的烷基；或者R2和R3合起來形成一個環(huán)并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-，其中n是0(即，一個化學(xué)鍵)、1、2或3；R4是氫或鹵素；R5是氫；R6是氫或鹵素；R7是氫，烷基，取代的烷基，或鹵素；R8是氫；R9是氫，烷基，取代的烷基，或COORA；RA是烷基或取代的烷基。
本發(fā)明還提供了式I化合物或其可藥用的鹽、前藥或互變異構(gòu)體
其中，R1是氫，烷基，取代的烷基，環(huán)烷基，C3-C6烯基，或C3至C6炔基；R2和R3獨(dú)立地選自氫、烷基或取代的烷基；或者R2和R3合起來形成一個環(huán)并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-，其中n是0(即，一個化學(xué)鍵)、1、2或3；R4是氫或鹵素；R5是氫；R6是氫或鹵素；R7是氫，烷基或鹵素；R8是氫；R9是氫，烷基，取代的烷基，或COORA；RA是烷基或取代的烷基。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，R1是氫或烷基，R2和R3合起來形成一個環(huán)并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-，其中n是1或2。在另一實(shí)施方案中，R2或R3，或者二者，是C1-C6烷基。例如，R2或R3之一，或二者都可是乙基。在另一實(shí)例中，R2或R3，或者二者，是甲基。在另一實(shí)施方案中，R9是取代的或未被取代的C1-C6烷基。例如，R9可以是甲基或乙基。在另一實(shí)例中，R9是被苯基取代的C1-C2烷基。在又一實(shí)施方案中，R9是COORA。在一個實(shí)例中，RA是叔丁基。
最好是，在結(jié)構(gòu)中含有鹵素的情形，該鹵素是F。然而，也可以選擇其它的鹵素，例如Cl、I或Br。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，R6是F。在另一實(shí)施方案中，R4是F。
在R1和/或R9是取代的烷基的情形，該烷基最好是被鹵素、腈或苯環(huán)取代。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，在R1是環(huán)烷基的情形，它是C3-C6環(huán)烷基。
優(yōu)選R4和R6中至少有一個是鹵素，更優(yōu)選是氟。優(yōu)選R6是鹵素，更優(yōu)選是氟。R1優(yōu)選是氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基或C3-C6烯基，更優(yōu)選是氫、C1-C4烷基、烯丙基或環(huán)戊基，更加優(yōu)選的是氫或烯丙基，最好是氫。R2和R3優(yōu)選獨(dú)立地選自氫和C1-C6烷基，更優(yōu)選選自氫和C1-C4烷基，最好是獨(dú)立地選自氫、甲基和乙基。或者，R2和R3代表-CH2-(CH2)n-CH2-，其中n優(yōu)選是0、1或2，更優(yōu)選是1或2。R7優(yōu)選是氫、鹵素或C1-C6烷基；更優(yōu)選是氫或C1-C4烷基，最好是氫。R9優(yōu)選是C1-C6烷基，更優(yōu)選是C1-C4烷基，最優(yōu)選是甲基。
根據(jù)本發(fā)明使用的化合物可以含有一個或多個不對稱中心，因此會產(chǎn)生旋光異構(gòu)體和非對映體。在不管立體化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表述時，化合物可包括旋光異構(gòu)體和非對映體；外消旋物和被拆分的對映異構(gòu)純的R和S立體異構(gòu)體；R和S立體異構(gòu)體的其它混合物；以及它們的可藥用鹽。
這里使用的術(shù)語“烷基”是指直鏈和支鏈的飽和脂族烴基，有約1-8個碳原子，最好是約1-6個碳原子(即，C1、C2、C3、C4、C5或C6)。
這里使用的術(shù)語“烯基”是指有一個或多個碳-碳雙鍵并含有約3至約8個碳原子的直鏈或支鏈烷基。術(shù)語烯基優(yōu)選指有1或2個碳-碳雙鍵和3至約6個碳原子的烷基。
這里使用的術(shù)語“炔基”是指有一個或多個碳-碳三鍵并含有3至約8個碳原子的直鏈或支鏈烷基。術(shù)語炔基優(yōu)選指有1或2個碳-碳三鍵和3至約6個碳原子的烷基。
術(shù)語“取代的烷基”、“取代的烯基”和“取代的炔基”分別指有一個或多個取代基的烷基、烯基和炔基，這些取代基包括但不限于鹵素，CN，OH，NO2，氨基，芳基，雜環(huán)基，芳基，烷氧基，芳氧基，烷氧基，烷基羰基，烷基羧基，氨基和芳硫基，這些基團(tuán)可以任選地被取代。
這里使用的術(shù)語“酰基”指羰基取代基，即一個C(O)(R)基團(tuán)，其中R是一個直鏈或支鏈的飽和的脂族烴基，包括但不限于，烷基、烯基和炔基。該R基優(yōu)選有1至約8個碳原子，更優(yōu)選有1至約6個碳原子。術(shù)語“取代的?；敝副?個或多個基團(tuán)，包括鹵素、CN、OH和NO2，取代的?；?。
這里使用的術(shù)語“芳基”指一種芳族體系，它可包括一個單環(huán)或多個稠合或連接在一起的芳族環(huán)，其中至少一部分稠合或連接的環(huán)形成共軛的芳族系。芳基包括但不限于苯基、萘基、聯(lián)苯基、蒽基、四氫萘基、菲基、茚基、苯并萘基、芴基和咔唑基。
術(shù)語“取代的芳基”指被一個或多個取代基取代的芳基，這些取代基包括鹵素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷氨基和芳硫基，它們可以任選地被取代。取代的芳基優(yōu)選被1至約4個取代基取代。
這里使用的術(shù)語“雜環(huán)”是指穩(wěn)定的4-7元單環(huán)或多環(huán)的雜環(huán)，可以是飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的。雜環(huán)在其骨架中有碳原子和一個或多個雜原子，包括氮、氧和硫原子。雜環(huán)在其環(huán)的骨架中優(yōu)選有約1-4個雜原子。當(dāng)雜環(huán)在環(huán)的骨架中含有氮或硫原子時，該氮或硫原子可以被氧化。術(shù)語“雜環(huán)”也指其中一個雜環(huán)與一個芳基環(huán)稠合的多環(huán)。該雜環(huán)可以通過雜原子或碳原子與芳基環(huán)連接，只要所形成的雜環(huán)結(jié)構(gòu)是化學(xué)上穩(wěn)定的。
許多雜環(huán)基團(tuán)是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于，含氧環(huán)、含氮環(huán)、含硫環(huán)、含混合雜原子的環(huán)、稠合的含雜原子的環(huán)及它們的組合。含氧環(huán)包括但不限于呋喃基、四氫呋喃基、吡喃基、吡喃酮基和二氧雜環(huán)己烯基環(huán)。含氮環(huán)包括但不限于吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、吡啶基、哌啶基、2-氧代哌啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、氮雜環(huán)庚三烯基、三嗪基、吡咯烷基環(huán)。含硫環(huán)包括但不限于噻吩基和二硫雜環(huán)戊二烯基環(huán)。含混合雜原子的環(huán)包括但不限于氧硫雜環(huán)戊烯基、唑基、噻唑基、二唑基、三唑基、二唑基、噻唑基、嗪基、噻嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基亞砜、氧雜環(huán)庚三烯基、硫雜環(huán)庚三烯基和二氮雜環(huán)庚三烯基環(huán)。稠合的含雜原子環(huán)包括但不限于苯并呋喃基、硫茚基、吲哚基、苯并吡咯基、4-氮茚基、吡喃并吡咯基、異吲唑基、吲哚并嗪基、苯并唑基、苯鄰甲內(nèi)酰胺基、苯并吡喃基、喹啉基、異喹啉基、苯并二唑基、二氮雜萘基、苯并噻吩基、吡啶并吡啶基、苯并嗪基、呫噸基、吖啶基和嘌呤基環(huán)。
這里使用的“取代的雜環(huán)”指有一個或多個取代基的雜環(huán)基團(tuán)，這些取代基包括鹵素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷氨基和烷硫基，它們可以任選地被取代。取代的雜環(huán)基團(tuán)優(yōu)選有1-4個取代基。
這里使用的術(shù)語“芳硫基”指S(芳基)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)是經(jīng)由硫原子，并且芳基可以任選地被取代。這里使用的術(shù)語“烷氧基”指O(烷基)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)是經(jīng)由氧原子，并且烷基可任選地被取代。這里使用的術(shù)語“芳氧基”指O(芳基)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)經(jīng)由氧原子，并且芳基可任選地被取代。
這里使用的“烷羰基”指C(O)(烷基)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)經(jīng)由羰基部分的碳原子，并且烷基可任選地被取代。
這里使用的術(shù)語“烷基羧基”指C(O)O(烷基)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)經(jīng)由羧基部分的碳原子，烷基可任選地被取代。
這里使用的術(shù)語“氨基烷基”指仲胺和叔胺，其中連接點(diǎn)經(jīng)由氮原子，且烷基可任選地被取代。多個烷基可以相同或不同。
這里使用的術(shù)語“鹵素”指Cl、Br、F或I基團(tuán)。
本發(fā)明化合物包括該結(jié)構(gòu)的互變異構(gòu)形式，只要其具有所畫出的結(jié)構(gòu)的生物活性特性。另外，本發(fā)明化合物可以以由藥學(xué)或生理學(xué)可接受的酸、堿、堿金屬和堿土金屬衍生的鹽的形式使用。
可藥用的鹽可以由有機(jī)和無機(jī)酸形成，例如，乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和已知可藥用的類似酸。鹽也可以由無機(jī)堿形成，優(yōu)選堿金屬鹽，例如，鈉、鋰或鉀鹽，以及有機(jī)堿，例如銨，一、二和三甲銨，一、二和三乙胺，一、二和三丙銨(異和正)，乙基二甲基銨，芐基二甲銨，環(huán)己銨，芐銨，二芐胺，哌啶，嗎啉，吡咯烷，哌啶，1-甲基哌啶，4-乙基嗎啉，1-異丙基吡咯烷，1，4-二甲基哌嗪，1-正丁基哌啶，2-甲基哌啶，1-乙基-2-甲基哌啶，一、二和三乙醇銨，乙基二乙醇胺，正丁基單乙醇胺，三(羥甲基)甲銨，苯基單乙醇胺等。
生理上可接受的堿金屬鹽和堿土金屬鹽可包括但不限于酯和氨基甲酸酯形式的鈉、鉀、鈣和鎂鹽。其它的常規(guī)“前藥”形式也可以使用，它在以這種形式釋放出時在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性部分。
這些鹽及本發(fā)明的其它化合物可以是酯、氨基甲酸酯和其它常規(guī)的“前藥”形式，它們在以這種形式服用時，在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性部分。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，該前藥是酯類。例如見B.Testa和J.Caldwell，“Prodrugs RevisitedThe‘Ad Hoc’Approach as a Complement toLigand Design”，Medicinal Research Review，16(3)233-241，ed.，John Wiley & Sons(1996)。
如本文所述，式I化合物和/或其鹽、前藥或互變異構(gòu)體，是按照所述的用于避孕、治療或預(yù)防的目的的方案服用的。
這里所討論的化合物也包括通過細(xì)胞或患者對本發(fā)明化合物進(jìn)行加工形成的唯一產(chǎn)物“代謝物”。代謝物最好是在體內(nèi)形成。
本發(fā)明化合物容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員按照以下方案由市售的起始物或可以用文獻(xiàn)方法制備的起始物制備。這些方案說明了本發(fā)明代表性化合物的制備方法。這些方法或本領(lǐng)域已知的其它方法的變化，容易被本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)其中提供的信息加以利用。
方案1 按照方案1，適當(dāng)取代的羥吲哚(1)用合適的堿(通常2或更多摩爾當(dāng)量)和烷基化試劑處理以得到3，3-取代的羥吲哚(2)。合適的堿包括烷基鋰、叔丁醇鉀、六甲基二硅雜氮烷鈉鹽和類似的堿。堿也可以與一種添加劑聯(lián)合使用。通常本發(fā)明化合物用正丁基鋰作為堿在氯化鋰存在下于無水THF中制備。烷基化試劑通常是烷基鹵化物(例如溴或碘化物)，但也可以是三氟甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。如果使用一當(dāng)量的烷基化試劑，則形成的羥吲哚是單取代的。如果用2當(dāng)量，則羥吲哚是二取代的。如果烷基化試劑是雙功能的(例如在烷基鏈的兩端各有一個鹵基或其它離去基團(tuán))，則生成一個螺環(huán)。
隨后將3，3-取代的羥吲哚(2)溴化，得到溴化的化合物(3)。溴化反應(yīng)宜用溴在例如二氯甲烷或乙酸等溶劑中進(jìn)行，可以用添加劑如乙酸鈉將其緩沖。溴化也可以用N-溴代丁二酰亞胺或溴化吡啶完成。然后在鈀催化劑和合適的偶合配偶物作用下將溴化物(3)轉(zhuǎn)化成化合物(4)。該偶合配偶物可以由吡咯(5)和二異丙基氨基化鋰及硼酸三烷基酯原位形成，或者可以是預(yù)形成的一代硼酸(6)。鈀源通常是四(三苯膦)合鈀(O)或其它合適的來源，例如在三丁基膦存在下的二亞芐基丙酮合鈀(Fu，G.C等，Journal of thd AmericanChemical Society，2000，122，4020，對于供選擇的催化劑體系，還參見Hartwig，J.F.等，Journal of Organic Chemistry，2002，67，5553)。反應(yīng)中還要求有堿，通常的選擇是碳酸鈉或鉀、氟化銫、氟化鉀、磷酸鉀或一種叔胺堿，例如三乙胺，但也可以用其它堿。溶劑的選擇包括THF，二甲氧基乙烷，二烷，乙醇，水和甲苯。根據(jù)偶合配偶物和試劑的反應(yīng)活性，如果需要，該反應(yīng)可在最高達(dá)溶劑的沸點(diǎn)下進(jìn)行，或者甚至在微波輻射下加速反應(yīng)。
當(dāng)想要R1是取代的烷基時，則在R1是H時將化合物(4)用合適的堿(例如氫化鈉、叔丁醇鉀或碳酸銫)在溶劑如THF或DMF中處理，隨后用合適的烷基化試劑處理。該烷基化試劑通常是烷基鹵化物，或是烷基磺酸酯(例如甲苯磺酸酯，甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯)。
方案2 另一方法可以用來制備R9為氫的化合物(4)。這一方法需要在上述條件下用式(7)的吡咯硼酸偶合溴化物(3)?；衔?8)隨后可以轉(zhuǎn)化成腈(9)。這最適宜通常與氯磺酰異氰酸酯反應(yīng)，隨后用DMF處理來進(jìn)行，但是也有其它方法可供采用。然后除去碳酸叔丁酯保護(hù)基團(tuán)以得到產(chǎn)物(4)，R9＝H。見方案2。
當(dāng)羥吲哚(1)無市售商品時，它可以按照方案3制備。例如，2，6-二氟苯胺(10)在乙酸中于氧化劑如過硼酸鈉作用下被氧化成化合物(11)。化合物(11)隨后通過在合適的溶劑(通常為DMF)中于堿(氫化鈉或碳酸烷基酯)存在下加入丙二酸二烷基酯(通常為二甲酯或二乙酯)轉(zhuǎn)化成化合物(12)。然后將化合物(12)用含水強(qiáng)酸(鹽酸)水解和脫羧基，得到化合物(13)?；衔?13)隨后被還原(氫氣和過渡金屬催化劑，例如碳載鈀，或者利用在鹽酸或乙酸中溶解的金屬如錫、鋅或鐵還原)?；厥盏漠a(chǎn)物是羥吲哚(14)。如果條件溫和，有時會分離出中間體羧酸(15)。在這種情況通過在沸騰的乙醇里用對甲苯磺酸處理可以將環(huán)閉合。
或者是，化合物(1)至(3)可以按照美國臨時專利申請No.60/676,149和60/676,381中描述的方法制備，上述專利申請?jiān)谶@里全文引用作為參考。
如果有適當(dāng)取代的起始物(10)，則這一方法對于其它的取代型式也有效。
方案3 在一項(xiàng)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物的制備方法是(a)將任選被取代的羥吲哚烷基化；(b)將步驟(a)的產(chǎn)物溴化；和(c)將步驟(b)的產(chǎn)物與2-氰基吡咯偶合。任選被取代的羥吡咯具有以下結(jié)構(gòu)，其中R4至R6見以上說明。
步驟(a)的產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)，其中R2至R6定義如上。
步驟(b)的產(chǎn)物通常具有以下結(jié)構(gòu)，其中R2至R6定義如上 用來制備3，3-取代的羥吲哚的氰基吡咯具有以下結(jié)構(gòu)，其中R7至R9定義如上 或者，該氰基吡咯通過二異丙基氨基化鋰、硼酸三烷基酯及下式結(jié)構(gòu)的吡咯反應(yīng)來制備，其中R7至R9定義如上 在另一實(shí)施方案中，一種制備本發(fā)明化合物的方法包括(a)5-溴代羥吲哚和含保護(hù)基團(tuán)的吡咯硼酸偶合；(b)將步驟(a)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成腈；和(c)從步驟(b)的產(chǎn)物中除去保護(hù)基團(tuán)。該吡咯硼酸任選地具有以下結(jié)構(gòu)，其中R7和R8定義如上 另外，步驟(b)的產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)，其中R2至R8定義如上 在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種制備本發(fā)明化合物的方法，其中包括(a)將任選被取代的以下結(jié)構(gòu)的羥吲哚烷基化，其中R4至R6定義如上。
(b)將步驟a)的產(chǎn)物溴化，形成以下結(jié)構(gòu)的化合物，其中R2至R6定義如上。
(c)將步驟b)的產(chǎn)物與以下結(jié)構(gòu)的2-氰基吡咯偶合，其中R7至R9的定義如上。
或者是，步驟b)的產(chǎn)物與作為二異丙基氨基化鋰、硼酸三烷基酯和下式結(jié)構(gòu)的吡咯反應(yīng)的產(chǎn)物的2-氰基吡咯偶合，其中R7至R9定義如上 本發(fā)明包括含有一種或多種本發(fā)明化合物和一種可藥用載體或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明還包括治療方法，該方法包括對哺乳動物施用藥學(xué)有效量的上述一種或多種作為孕酮受體拮抗劑的化合物。
本發(fā)明化合物可用于避孕方法、激素替代療法及治療和/或預(yù)防良性和惡性腫瘤病。本發(fā)明化合物和藥物組合物的具體應(yīng)用包括治療和/或預(yù)防子宮肌層肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、良性前列腺肥大；子宮內(nèi)膜、卵巢、乳房、結(jié)腸、前列腺、垂體、腦膜瘤和與激素有關(guān)的其它腫瘤的癌和腺癌；痛經(jīng)；功能不良性子宮出血；經(jīng)前綜合癥和經(jīng)前焦慮癥的癥狀；周期相關(guān)癥狀，以及用于引發(fā)閉經(jīng)。本發(fā)明的孕酮受體拮抗劑的其它應(yīng)用包括使家畜的動情期同步化。
術(shù)語“周期相關(guān)癥狀”是指在月經(jīng)周期的黃體期內(nèi)產(chǎn)生的與婦女月經(jīng)周期有關(guān)的心理和身體癥狀。已報道過大多數(shù)婦女有周期相關(guān)癥狀的經(jīng)歷。這些癥狀一般在月經(jīng)開始后消失，而且患者在剩余的卵泡期內(nèi)沒有癥狀。該癥狀變化的周期本質(zhì)是周期相關(guān)癥狀的特點(diǎn)。
約95％的婦女發(fā)生周期相關(guān)癥狀，她們經(jīng)歷隨月經(jīng)周期產(chǎn)生的身體或情緒的某些變化。這些婦女中僅約三分之一發(fā)生中等到嚴(yán)重的周期相關(guān)癥狀。婦女們在月經(jīng)前的癥狀在數(shù)目、類型、嚴(yán)重程度和型式方面各不相同。所有各類周期相關(guān)癥狀的一個共同點(diǎn)是在月經(jīng)之后兩周直至排卵，這些癥狀減少或者消失。
術(shù)語“周期相關(guān)癥狀”是指與婦女月經(jīng)周期有關(guān)的心理癥狀(例如，情緒變化、易怒、焦慮、不專心、或性欲減退)和身體癥狀(例如，痛經(jīng)、乳房壓痛、胃氣脹、疲勞或食物渴求)。周期相關(guān)癥狀發(fā)生在排卵之后，但在月經(jīng)之前，通常在月經(jīng)期開始時或之后不久終止。周期相關(guān)癥狀包括但不限于痛經(jīng)和中等至嚴(yán)重的周期相關(guān)癥狀。
在本發(fā)明中使用的PR拮抗劑適宜配制成用任何合適的途徑遞藥，例如，利用任何合適的遞藥裝置，包括例如透皮貼劑、局部用乳膏或凝膠、陰道環(huán)等，經(jīng)皮膚、粘膜(鼻內(nèi)、頰、陰道)、口腔、腸道外等遞藥。
當(dāng)化合物被用于以上用途時，它們可以與一種或多種可藥用的載體或賦形劑例如溶劑、稀釋劑等結(jié)合，并且可以以諸如片劑、膠囊劑、可分散的粉劑、粒劑或含有例如約0.05-5％懸浮劑的混懸劑、含有例如約10-50％糖的糖漿劑，以及含例如約20-50％乙醇的酏劑等形式口服，或者以滅菌的注射溶液或在等滲介質(zhì)中含0.05-5％懸浮劑的混懸劑形式腸道外施用。這些藥物制劑可以含例如約25-90％的與載體結(jié)合的活性成分，更常見的是含約5-60％重量。
所用的活性成分的有效劑量可以隨所用的具體化合物、施藥方式和所治療的癥狀的嚴(yán)重程度而變。然而，一般來說，當(dāng)本發(fā)明化合物以每kg動物體重約0.5-500mg的日劑量施用時會得到令人滿意的效果，最好是以每天1-4次分劑量給藥，或者是以緩釋形式給藥。對于大多數(shù)大型哺乳動物，總?cè)談┝繛榧s1-100mg，最好是約2-80mg。適合內(nèi)服的劑型含有與固體或液體可藥用載體充分混合的約0.5-500mg活性化合物。這種用藥方案可以調(diào)節(jié)以得到最佳的治療效果。例如，可以每天施用幾次分劑量，或者根據(jù)治療狀況的緊急需要按比例減小劑量。
這些活性化合物可以口服以及通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑施用。固體載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和高嶺土，而液體載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子表面活性劑和食用油，例如玉米油、花生油和芝麻油，要適合活性成分的本質(zhì)和所希望的具體施用方式?？梢杂欣匕谒幬锝M合物制備中常用的輔劑，例如增香劑、著色劑、防腐劑和抗氧化劑，如維生素E、抗壞血酸、BHT和BHA。
從容易制備和服用的角度，優(yōu)選的藥物組合物是固體組合物，特別是片劑和硬灌裝膠囊和液體灌裝膠囊。理想的是化合物口服給藥。這些化合物也可以腸道外或腹腔內(nèi)施用。游離堿或可藥用鹽形式的這些化合物的溶液劑或混懸劑可以在適當(dāng)?shù)鼗煊斜砻婊钚詣┤缌u丙基纖維素的水中制備。分散體也可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油中的混合物中制備。在通常的貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以阻止微生物生長。
適合注射用的藥物形式包括無菌水溶液或分散體，以及用來臨時配制無菌注射液或分散體的無菌粉末。在所有情形，該形式必須是無菌的，并且必須能流動到容易注射出去的程度。它必須在制備和貯存條件下是穩(wěn)定的，而且必須被保藏以防止諸如細(xì)菌和真菌等微生物的污染作用。載體可以是包括例如水、乙醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、它們的合適混合物及植物油等的溶劑或分散介質(zhì)。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括只服用本發(fā)明的PR拮抗劑的循環(huán)方案。在另一實(shí)施方案中，該循環(huán)方案包括聯(lián)合施用本發(fā)明的PR拮抗劑和雌激素或孕激素，或二者。特別理想的孕激素可選自在美國專利6,355,648、6,521,657、6,436,929、6,540,710和6,562,857及美國專利申請公開號2004-0006060-A1中描述的那些。本領(lǐng)域中已知還有其它孕激素，容易進(jìn)行選擇。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了與PR激動劑(即，孕激素)tanaproget 5-(4，4-二甲基-2-硫代-1，4-二氫-2H-3，1-苯并嗪-6-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈聯(lián)合施用的方案。
本發(fā)明還包括連續(xù)進(jìn)行28天的用藥方案。這些方案可以是連續(xù)的，或者可以包括一個該周期的終止部分，例如0至7天，其間不施用孕激素、雌激素或抗孕激素。例如參見美國臨時專利申請No.60/585,883和60/676,135中所述的方案，這些文獻(xiàn)并入本文中作為參考。
這里所述的用藥方案可用于避孕，或用于本文所述的任何其它適應(yīng)癥。當(dāng)為了避孕而用藥時，可以將組合物配制成口服劑量單元。
當(dāng)用于避孕時，本發(fā)明的PR拮抗劑可以單獨(dú)地或與雌激素聯(lián)合地施用于生育期婦女。對于周期的前14-24天，服用一種促孕劑，劑量范圍優(yōu)選為其孕激素活性等于每天約35-150μg左炔諾孕酮，更優(yōu)選其活性等于每天約35-100μg左炔諾孕酮。然后可以在周期的第14-24天的任何一天開始單獨(dú)地或與雌激素聯(lián)合地服用PR拮抗劑1-11天。在這些聯(lián)合用藥中，抗孕激素可以按每天約2-50μg的劑量施用，雌激素可以按每天約10-35μg的劑量施用。在口服用藥時，一種裝有28片的包裝或試劑盒中應(yīng)包括一種安壁劑藥片，用來在不服用本發(fā)明的PR拮抗劑或者孕激素或雌激素的那些天服用。
在本發(fā)明的一項(xiàng)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物可以單獨(dú)地或者與雌激素聯(lián)合地在一個28天周期的前18-21天服用，然后單獨(dú)地或與雌激素聯(lián)合地服用本發(fā)明化合物1至7天。在本發(fā)明的聯(lián)合用藥和制劑中使用的雌激素優(yōu)選是炔雌醇。
可用于本發(fā)明的促孕劑包括但不限于tanaproget，左炔諾孕酮，炔諾孕酮，去氧孕烯，3-酮基去氧孕烯，炔諾酮，孕二烯酮，乙酸炔諾酮，諾孕酯，奧沙特隆，醋酸環(huán)丙孕酮，曲美孕酮，地諾孕素，屈螺酮，諾美孕酮或(17-脫?；?諾孕酯。優(yōu)選用于本發(fā)明聯(lián)合用藥的孕激素是左炔諾孕酮、孕二烯酮和曲美孕酮。
本發(fā)明的28天周期口服用藥方案的實(shí)例包括在前21天只服用促孕劑，其日劑量等于孕激素活性為約35-100μg左炔諾孕酮。然后從第22至第24天按日劑量約2-50mg服用本發(fā)明的PR拮抗劑化合物，隨后從第25至第28天不服藥或服用安慰劑。最好是將各有關(guān)的活性成分的日劑量結(jié)合成一個單一的組合日劑量單元，總計每28天周期28個日劑量單元。
在另一實(shí)施方案中，可以在頭21天共服一種促孕劑和一種雌激素(例如炔雌醇)，前者的日劑量的孕激素活性等于約35-150μg左炔諾孕酮，優(yōu)選等于約35-100μg左炔諾孕酮，后者的日劑量為約10-35μg。隨后可如上所述地從第22至第24天服用本發(fā)明的PR拮抗劑，日劑量為約2-50mg，接著從第25至第28天不服藥或服用安慰劑。
本發(fā)明范圍內(nèi)的又一方案包括從第1天至第21天共服一種促孕劑(例如左炔諾孕酮)和一種雌激素(例如炔雌醇)，前者日劑量的孕激素活性等于約35-100μg左炔諾孕酮，后者的日劑量為約10-35μg。隨后從第22至第24天，共服一種本發(fā)明的PR拮抗劑(2-50mg/天)和日劑量為約10-35μg的一種雌激素(如炔雌醇)。從第25至第28天，可以不服藥或者服用安慰劑。
本發(fā)明還包括設(shè)計用于本文所述方案的藥物制劑的試劑盒或包裝。這些試劑盒優(yōu)選被設(shè)計成在28天周期內(nèi)每日口服，最好是每天口服一次，并且安排成標(biāo)示出在28天周期的每天要服用的單一口服制劑或聯(lián)合的口服制劑。最好是每只試劑盒中包含著每一天指定要服用的口服藥片，優(yōu)選一片口服藥中就包含著所示聯(lián)合用藥日劑量的各成分。
根據(jù)上述方案，一28天的試劑盒中可包含(a)初始階段的14-21個日劑量單元的促孕劑，其孕激素活性等于約35-150μg左炔諾酮，最好是孕激素活性等于約35-100μg左炔諾酮；(b)第二階段的1至11個日劑量單元的本發(fā)明PR拮抗劑化合物，每個日劑量單元含有日劑量為約2-50mg的抗孕激素化合物；和(c)任選地，第三階段的口服和可藥用的安慰劑，供該周期內(nèi)不服用抗孕激素、孕激素或雌激素的其余各天使用。
在這種試劑盒的一項(xiàng)實(shí)施方案中，初始階段包括前一段中所述的21個日劑量單元，第二階段包括供第22至24天用的本發(fā)明PR拮抗劑化合物的3個日劑量單元，任選存在的第三階段包括供第25至第28天用的口服可藥用安慰劑的4個劑量單元。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的28天周期包裝方案或試劑盒包括第一階段的18-21個前段中所述的日劑量單元，最好是21個，并且還包含作為雌激素的炔雌醇，日劑量為約10-35μg；第二階段的1-7個、最好是4個加上所述的日劑量單元；以及在28天周期內(nèi)不服用促孕劑、雌激素或抗孕激素的其余0-9天的各天內(nèi)，或約4天內(nèi)，任選服用的安慰劑。
在另一個本發(fā)明的28天包裝用藥方案或試劑盒中包含(a)第一階段的18-21個日劑量單元，各含日劑量的孕激素活性等于約35-150μg左炔諾孕酮，優(yōu)選等于約35-100μg左炔諾孕酮的本發(fā)明的促孕劑，以及日劑量為約10-35μg的炔雌醇；(b)第二階段的1至7個日劑量單元，每個日劑量單元含有濃度為2-50mg的本發(fā)明的抗孕激素和濃度為約10至約35μg的炔雌醇；和(c)任選地，一種可藥用的口服安慰劑，用于28天周期中不服用促孕劑、雌激素或抗孕激素的其余0-9天的各天。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，所述的包裝或試劑盒中含有第一階段的21個日劑量單元；用于第22至24天的第二階段3個日劑量單元，各劑量單元中含有濃度為2-50mg的本發(fā)明的抗孕激素和濃度為允10-35μg的炔雌醇；以及任選地，用于第25至第28天第三階段的4個可藥用的口服安慰劑日劑量單元。
在所述的各用藥方案和試劑盒中，最好是方案中各藥物活性組分的日劑量在它被服用的各具體階段內(nèi)保持固定。還應(yīng)理解，所述的日劑量單元是按照所述的次序服用，第一階段之后依次是第二和第三階段。為提高各方案的順應(yīng)性，試劑盒中還優(yōu)選包含用于周期最后幾天的所述安慰劑。還優(yōu)選各包裝或試劑盒中包含指示用于28天周期的那一天的可藥用包裝，例如本領(lǐng)域已知的帶標(biāo)干的泡眼包裝或標(biāo)度盤分配器包裝。
這里使用的術(shù)語抗促孕劑、抗孕激素和孕酮受體拮抗劑應(yīng)理解為同義詞。類似地，孕激素、促孕劑和孕酮受體激動劑應(yīng)理解為是指相同活性的化合物。
可以調(diào)節(jié)用藥方案以提供最佳的治療效果。例如，可以每日服用幾次分劑量的各個組分，或者可以根據(jù)治療狀況的緊急需要按比例地增大或減小劑量。在本文的說明中，提到的日劑量單元也可包括在所考慮的周期的每天內(nèi)服用的分劑量單元。
從容易制備和服用的角度，理想的藥物組合物是固體組合物，特別是片劑和硬灌裝膠囊或液體灌裝膠囊。最好是口服本發(fā)明化合物。
這些活性化合物也可以通過陰道環(huán)施用。陰道環(huán)的使用宜與28天周期合拍。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，將環(huán)插入陰道，在其中保留3周。在第4周內(nèi)取出陰道環(huán)，月經(jīng)發(fā)生。下一周插入一個新環(huán)并戴上另外3周，直至下一周期開始。在另一實(shí)施方案中，每周放入陰道環(huán)，連續(xù)更換3周。然后在接下的一周里不放環(huán)，放入新環(huán)則開始新的周期。在又一實(shí)施方案中，陰道環(huán)放入更長或更短的時間。
為了在陰道環(huán)中使用，按照先前為經(jīng)由陰道環(huán)釋放避孕化合物所述的類似方式配制PR拮抗劑化合物。例如見美國專利5,972,372，6,126,958和6,125,850。
在本發(fā)明的另一方面，PR拮抗劑化合物經(jīng)由透皮貼劑釋放。貼劑的使用宜與28天周期合拍。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，貼劑通過適當(dāng)?shù)恼辰Y(jié)劑敷在皮膚上，在那里保持一周，每周更換，總計3周。在第4周不施用貼劑，月經(jīng)發(fā)生。下一周敷上新的貼劑開始新用藥方案。在另一實(shí)施方案中，貼劑原位保留更長或更短的時間。
本發(fā)明還提供了裝有本發(fā)明化合物的試劑盒和遞藥裝置，用于如本文所述的多種其它治療用途，例如，激素替代治療，良性和惡性腫瘤病或周期相關(guān)病的治療和/或預(yù)防。這些試劑盒除本發(fā)明化合物外還包含各種組分，例如，用來供應(yīng)本發(fā)明化合物、稀釋劑、小瓶、注射器、包裝等的說明。這些試劑盒可以任選地修改成適應(yīng)所選擇的應(yīng)用，例如，激素替代治療、治療和/或預(yù)防子宮肌層肌瘤、子宮內(nèi)膜異位、良性前列腺肥大；子宮內(nèi)膜、卵巢、乳房、結(jié)腸、前列腺、垂體、腦膜瘤和其它激素依賴性腫瘤的癌癥和腺癌，周期相關(guān)癥狀，或用于使家畜動情期同步化。
提供以下實(shí)施例用以說明本發(fā)明，而不是對其范圍的限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，雖然在以下實(shí)施例中概述了具體的試劑和條件，但是可以進(jìn)行預(yù)定包括在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種修改。
實(shí)施例實(shí)施例15-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈A.2，6-二氟硝基苯在攪拌下向過硼酸鈉四水合物(65g，422mmol)在冰乙酸(250mL)中的80℃懸浮液慢慢加入在冰乙酸(50mL)中的2，6-二氟苯胺(11.0g，85mmol)。將溫度在80-90℃保持1小時。冷卻后的反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取2次，合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉稀溶液洗，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。殘余物用硅膠柱色譜法(己烷THF，9∶1)純化，產(chǎn)物用己烷洗，得到2，6-二氟硝基苯(7.0g)，使用前不作進(jìn)一步檢驗(yàn)。
B.2-(3-氟-2-硝基苯基)丙二酸二甲酯向2，6-二氟硝基苯(5.0g，31.44mmol)在無水DMF(50mL)中的溶液加入碳酸鉀(4.41g，32mmol)和丙酸二甲酯(3.6mL，31.44mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至65℃，攪拌24小時。冷卻至室溫后，該混合物用稀鹽酸中和，用乙醚萃取，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。自己烷/乙酸乙酯(95/5)中結(jié)晶，得到2-(3-氟-2-硝基苯基)丙二酸二甲酯(4.6g，54％)。HRMSC11H10FNO6的計算值271.0492；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)272.0576。
C.(3-氟-2-硝基苯基)乙酸將2-(3-氟-2-硝基苯基)丙二酸二甲酯(12g，44mmol)在200mL 6N鹽酸(6N，200mL)中加熱回流4小時。將混合物冷卻，用250mL水稀釋，用乙醚萃取，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。自己烷/乙酸乙酯(95/5)中結(jié)晶，得到(3-氟-2-硝基苯基)乙酸(7.6g，54％)，使用前不作進(jìn)一步檢驗(yàn)。
D.7-氟-1，3-二氫吲哚-2-酮將(3-氟-2-硝基苯基)乙酸(9.6g，48mmol)溶于乙酸(100mL)，在10％鈀/碳(1.3g)上于50psi下氫化24小時。經(jīng)Celite(R)(硅藻土)度劑過濾，蒸除溶劑。然后將混合物溶于乙醇(100mL)，加入對甲苯磺酸(50mg)，將混合物加熱回流1小時。將其冷卻，倒入水中，用乙酸乙酯萃取，干燥(MgSO4)后蒸發(fā)。得到的固體用己烷/乙酸乙酯(95/5)研制，得到7-氟-1，3-二氫吲哚-2-酮(6g，83％)。HRMSC8H6FNO的計算值，151.0433；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，152.0515。
E.7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將7-氟-1，3-二氫吲哚-2-酮(7.3g，48mmol)和氯化鋰(6.67g，158mmol)溶在THF(200mL)中，然后將溶液冷卻至-78℃，于15分鐘內(nèi)慢慢加入正丁基鋰(2.5M，40mL，100mmol)。20分鐘后在-78℃下加入甲基碘(6mL，96mmol)，將混合物溫?zé)嶂潦覝亍?4小時后，將該混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。急驟色譜法純化(SiO2，己烷/乙酸乙酯9∶1，然后8∶2)得到7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(4.1g，48％)；HRMSC10H10FNO計算值，179.0831；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，180.0831。
F.5-溴-7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮室溫下將7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(4.1g，22.9mmol)溶在二氯甲烷(100mL)和乙酸(2mL)中。加入溴(1.2mL，23mmol)，將溶液攪拌24小時。將反應(yīng)混合物倒入硫代硫酸鈉溶液中，用乙醚萃取，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)。粗產(chǎn)物用己烷研制，得到5-溴-7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(4.84g，82％)HRMSC10H9BrFNO計算值，256.9852；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M-H]-)，255.9781。
G.5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈在氮?dú)庀聦?-溴-7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫吲哚-2-酮(5.16g，20.0mmol)、1-甲基-5-氰基-2-吡咯硼酸(5.4g，36mmol)、KF(3.83g，66mmol)和Pd2(dba)3-氯仿加成物(516mg，0.500mmol)加到一只200mL園底燒瓶中。將燒瓶密封，用氮?dú)獯迪?分鐘。加入THF(50mL)，將混合物用氮?dú)庠俅迪?分鐘。用注射器加入三叔丁基膦(10％重量的己烷溶液)(2.97mL，1.00mmol)，將混合物在25℃激烈攪拌5小時。用250mL EtOAc稀釋，經(jīng)硅膠塞過濾，用200mL EtOAc充分洗，濃縮后得到粗制的棕/黑半固體。用急驟色譜法純化(20％丙酮/己烷)，得到標(biāo)題化合物(4.5g，80％)，為灰白色固體。HRMSC16H14FN3O計算值，283.1121；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M-H]-)，282.1034。
分析HPLC主產(chǎn)物＝98.9％，在210-370nm窗口；99.2％，在286nm(最大吸收)；RT＝8.7分，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/Can+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，XterraRP18儀器3.5μ，150×4.6mm。
實(shí)施例25-(4-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈A.2-(2-氟-6-硝基苯基)丙二酸二甲酯向2，3-二氟硝基苯(9g，56mmol)在DMF中的溶液加入碳酸鉀(13.8g，100mmol)和丙二酸二甲酯(6.88mL，60mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至65℃并攪拌24小時。將混合物冷卻，用稀鹽酸中和，用乙醚萃取，有機(jī)層用硫酸鎂干燥，減壓濃縮。粗產(chǎn)物自己烷/乙酸乙酯(95/5)中重結(jié)晶，過濾，得到2-(2-氟-6-硝基苯基)丙二酸二甲酯(6.6g，43％)。
B.(2-氟-6-硝基苯基)乙酸將2-(2-氟-6-硝基苯基)丙二酸二甲酯(6.5g，23.98mmol)在200mL 6N鹽酸中回流24小時。抽氣過濾收集固體，干燥，得到3.3g標(biāo)題化合物，產(chǎn)率54％。
C.4-氟-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將(2-氟-6-硝基苯基)乙酸(3.3g，16.6mmol)溶于乙酸(20mL)，在鈀/碳(10％，0.5g)上于50psi下氫化24小時。經(jīng)Celite試劑過濾除去催化劑，用甲醇洗該試劑，合并的有機(jī)相隨后蒸發(fā)。將反應(yīng)混合物溶在乙醇(100mL)中，加入50mg對甲苯磺酸，將該混合物加熱回流1小時。將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)。得到的固體用己烷/乙酸乙酯(95∶5)研制，得到1.7g(67％)4-氟-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮HRMS[M+H]+＝152.0515。
D.4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將4-氟-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(3.4g，22.5mmol)和氯化鋰(2.7g，60mmol)溶在THF(100mL)中，然后將溶液冷卻至-78℃，于15分鐘內(nèi)慢慢加入正丁基鋰(7mL，2.5M己烷溶液，15mmol)。加入甲基碘(3.08mL，50mmol)，將混合物溫?zé)嶂潦覝亍?4小時后，將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮。急驟色譜法(SiO2，己烷/乙酸乙酯，9∶1然后8∶2)得到4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(1.0g，25％)。
E.5-溴-4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(1g，22.9mmol)于室溫下溶在二氯甲烷(DCM)(50mL)和乙酸(2mL)中。加入溴(0.386mL，7.5mmol)，將溶液攪拌24小時。將反應(yīng)混合物倒入硫代硫酸鈉溶液中，用乙醚萃取，合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥后蒸發(fā)。粗產(chǎn)物用己烷研制，得到5-溴-4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(1.25g，87％)HRMS[M-H]-255.9781。
F.5-(4-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈將5-溴-4-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(1.25g，4.86mmol)和四(三苯膦)合鈀(O)(0.4g)溶在乙二醇二甲醚(40mL)中并攪拌15分鐘。加入N-甲基-5-氰基吡咯硼酸(2.0g，13.33mmol)和碳酸鉀(3.48g，25mmol)，隨后加水(20mL)。將混合物加熱回流(24小時)，然后倒入水中，用稀鹽酸中和，用乙酸乙酯萃取。用硫酸鎂干燥該溶液，然后減壓濃縮。急驟色譜法(SiO2，己烷/THF，7∶3)得到5-(4-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈(0.060g，5％)HRMSC6H14FN3O計算值，283.1121；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，284.1121。
分析HPLC保留時間＝8.8分，純度＝100％在210-300nm，100％在274nm(最大吸收)，85/15-5/95(甲酸胺緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6nm。
實(shí)施例35-(7′-氟-2′-氧-1′，2′-二氫螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-5′-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈A.7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′-(1′H)-酮將7-氟羥吲哚(1.28g，8.50mmol)和氯化鋰(0.899g，21.3mmol)懸浮在80mL THF中，冷卻至0℃。慢慢加入正丁基鋰(8.5mL，16.9mmol)，將混合物攪拌20分鐘，然后加入二溴乙烷(0.73mL，8.5mmol)。將混合物溫?zé)嶂?5℃并攪拌16小時。加入NH4Cl飽和水溶液以猝滅反應(yīng)，然后用乙醚稀釋。有機(jī)相用水、鹽水洗，用MgSO4干燥后濃縮。急驟色譜法(10％丙酮/己烷)得到0.54g(36％)7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′(1′H)-酮，為白色固體。HRMSC10H8FNO3計算值，177.0590；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，178.0659。
分析HPLC保留時間6.6分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，5μl注入量。
B.5′-溴-7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′(1′H)-酮7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′(1′H)-酮(0.54g，3.05mmol)溶于20mL CH2Cl2中，依次加入乙酸鈉(0.28g，3.36mmol)和溴(0.173mL，3.36mmol)。將混合物在25℃攪拌16小時，然后用乙醚稀釋，用Na2S2O3、碳酸氫鈉、水、鹽水洗，用MgSO4干燥后濃縮。用急驟色譜法(15％丙酮/己烷)純化，得到5′-溴-7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′(1′H)-酮(0.64g，82％)，為白色固體。
分析HPLC保留時間8.4分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，5μl注入量。
C.5-(7′-氟-2′-氧-1′，2′-二氫螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-5′-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈將5′-溴-7′-氟螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-2′-(1′H)-酮(0.60g，2.3mmol)、1-甲基-5-氰基-2-吡咯硼酸(0.63g，4.2mmol)、KF(0.44g，7.6mmol)和Pd2(dba)3一氯仿加成物(60mg，0.058mmol)加到一只小瓶中，然后用氮吹洗。加入THF(5.5mL)，混合物用氮吹洗5分鐘。經(jīng)注射器加入三叔丁基膦(10％重量的己烷溶液)(0.342mL，0.115mmol)，將混合物在25℃激烈攪拌2.5小時。用100mL EtOAc稀釋后經(jīng)硅膠塞過濾并濃縮。用急驟色譜法純化(25％丙酮/己烷)，得到標(biāo)題化合物(0.53g，83％)，為白色固體。MP 228-231℃。
分析HPLC保留時間8.6分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，5μl注入。
實(shí)施例45-(7-氟-1，3，3-三甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈A.7-氟-1，3，3-三甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將7-氟羥吲哚(1.51g，10mmol)和氯化鋰(1.06g，25mmol)懸浮在30mL THF中，冷卻至0℃。慢慢加入正丁基鋰(10mL，20mmol)，將混合物攪拌20分鐘。加入碘甲烷(1.24mL，20mmol)，將混合物在0℃攪拌1小時，然后溫?zé)嶂?5℃并攪拌16小時。用飽和NH4Cl水溶液猝滅反應(yīng)，用乙酸乙酯稀釋。有機(jī)相用水、NaCl飽和水溶液洗，用MgSO4干燥后濃縮。急驟色譜法(5％丙酮/己烷)得到標(biāo)題化合物0.12g(7％)，為白色固體。
HRMSC11H22FNO計算值，193.0903；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，194.0976。
B.5-溴-7-氟-1，3，3-三甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮將7-氟-1，3，3-三甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(0.10g，0.52mmol)溶于5mL CH2Cl2中，依次加入乙酸鈉(47mg，0.56mmol)和溴(0.029mL，0.56mmol)。將混合物在25℃攪拌16小時，然后直接加在硅膠柱上。用250mL CH2Cl2和250mL 5％丙酮/CH2Cl2洗脫該柱，得到標(biāo)題化合物(116mg)，為白色固體(82％)。
HRMSC11H11BrFNO計算值，271.0008；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，272.0088。
分析HPLC保留時間9.4分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，5μl注入。
C.5-(7-氟-1，3，3-三甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈將5-溴-7-氟-1，3，3-三甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(0.10g，0.36mmol)、1-甲基-5-氰基-2-吡咯硼酸(95mg，0.63mmol)、KF(69mg，1.19mmol)懸浮在1mL二烷中。加入Pd2(dba)3一氯仿加合物(3.1mg，0.003mmol)和Pd(P(t-Bu)3)2(4.6mg，0.009mmol)，將混合物在45℃激烈攪拌6小時。用100mL EtOAc稀釋，經(jīng)硅膠塞過濾后濃縮。用急驟色譜法(2％丙酮/己烷)純化，得到標(biāo)題化合物(30mg，28％)，為棕黃色固體。
HRMSC17H16FN3O計算值，297.1277；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，298.1366。
分析HPLC保留時間9.4分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，12mL/分，5μl注入。
實(shí)施例55-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-2-甲腈A.2-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯一只小瓶中裝有5-溴-7-氟-3，3-二甲基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮(1.0g，3.5mmol)、1-叔丁氧羰基-2-吡咯硼酸(1.12g，5.3mmol)、KF(0.67g，11.5mmol)和Pd2(dba)3一氯紡加成物(54mg，0.053mmol)并在氮?dú)夥障路胖?。加入THF(8mL)，將混合物用氮吹洗5分鐘。經(jīng)注射器加入P(t-Bu)3(10％重量的己烷溶液，0.370mL，0.126mmol)，將混合物在25℃攪拌16小時。用EtOAc將混合物稀釋，經(jīng)硅膠塞過濾后濃縮。用急驟色譜法(500mL 25％己烷/CH2Cl2，然后500mL 100％CH2Cl2，然后500mL 5％乙酸乙酯/CH2Cl2)純化，得到標(biāo)題化合物(1.06g，88％)，為無色晶體。
HRMSC19H21FN2O3+H計算值，345.16145；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，345.1629。
分析HPLC保留時間10.0分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持10分鐘，1.2mL/分，5μl注入。
B.2-氰基-5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯在攪拌下向2-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(1.0g，2.9mmol)的溶液中加入氯磺酰異氰酸酯(0.28mL，2.3mmol)。將混合物在25℃攪拌2小時，然后加入DMF(0.21mL，2.9mmol)，將混合物再攪拌1小時，用乙酸乙酯稀釋后，用NaHCO3、水、飽和NaCl水溶液洗，用MgSO4干燥，然后濃縮。急驟色譜法(2％MeOH/CH2Cl2)純化，得到0.23g(21％)標(biāo)題化合物，為白色固體。
HRMSC20H20FN3O3+H計算值，370.15670；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，370.1554。
分析HPLC保留時間9.5分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm，40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，注入5μl。
C.5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-2-甲腈將2-氰基-5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(0.18g，0.5mmol)溶于10mL二甲基乙酰胺中，溶液在180℃加熱1小時。將該混合物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水、NaCl飽和水溶液洗，用MgSO4干燥后濃縮。急驟色譜法(25％丙酮/己烷)純化，得到0.121g(91％)標(biāo)題化合物，為白色固體。
HRMSC15H12FN3O+H計算值，270.10426；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，270.1053。
分析HPLC保留時間8.7分，210-370nm，XterraRP18儀器，3.5μ，150×4.6mm 40℃，85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)10分鐘，保持4分鐘，1.2mL/分，5μl注入量。
實(shí)施例65-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈烷基化的通用步驟向5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈(0.10g，0.35mmol)在無水THF(2mL)中的溶液加入叔丁醇鉀(1M THF溶液，1mL，1mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。隨后用注射器加入合適的烷基化試劑(烷基碘或烷基溴)(0.5mmol)。將所形成的混合物攪拌過夜，然后蒸發(fā)并用硅膠柱色譜法(EtOAc/己烷，梯度洗脫)純化。
化合物用高分辨質(zhì)譜法和HPLC鑒定。使用的HPLC條件XterraRP18柱，3.5μ，150×4.6mm，流速1.2mL/分，流動相成分85/15-5/95(甲酸銨緩沖，pH＝3.5/ACN+MeOH)；檢測210-370nm。
用此步驟制備了以下化合物A.[5-(5-氰基-1-甲基-1H-吡咯-2-基)-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-1-基]乙酸乙酯產(chǎn)量0.087g烷基化試劑溴乙酸甲酯(0.047mL)分析HPLC純度99.7％分析HPLC保留時間9.2分HRMSC19H18FN3O3+H計算值，356.14050；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，356.142。
B.5-(1-乙基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.0723g烷基化試劑乙基碘(0.040mL)
分析HPLC純度99.9％分析HPLC保留時間9.8分HRMSC18H18FN3O+H計算值，312.15067；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，312.1524；(δ＝6ppm)C.5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-丙-2-炔-1-基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.050g烷基化劑劑丙炔基溴(0.045ml)分析HPLC純度95.9％分析HPLC保留時間9.5分HRMSC19H16FN3O+H計算值，322.13502；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，322.135。
D.5-[7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-(2-苯基乙基)-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.041g烷基化試劑苯乙基溴(0.067mL)分析HPLC純度100％分析HPLC保留時間10.8分HRMSC24H22FN3O+H計算值，388.18197；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，388.1806。
E.5-(1-芐基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.0766g烷基化試劑芐基溴(0.059mL)分析HPLC純度100％分析HPLC保留時間10.5分HRMSC23H20FN3O+H計算值，374.16632；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，374.1685；(δ＝6ppm)。
F.5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-丙基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.070g烷基化試劑碘丙烷(0.049mL)
分析HPLC純度100％分析HPLC保留時間10.3分HRMSC19H20FN3O+H計算值，326.16632；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，326.1652。
G.5-(7-氟-1-異丁基-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.0662g烷基化試劑2-甲基碘丙烷(0.060mL)分析HPLC純度100％分析HPLC保留時間10.6分HRMSC20H22FN3O+H計算值，340.18197；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，340.1838。
H.5-(7-氟-1-異丙基-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.055g烷基化試劑異丙基碘(0.049mL)分析HPLC純度98.8％分析HPLC保留時間10.3分HRMSC19H20FN3O+H計算值，326.16632；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，326.1661。
I.5-(1-烯丙基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.077g烷基化試劑烯丙基碘(0.045mL)分析HPLC純度99.6％分析HPLC保留時間9.9分HRMSC19H18FN3O+H計算值，324.15067；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，324.1512。
J.5-(1-環(huán)己基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.0037g烷基化試劑環(huán)己基磺(0.064mL)
分析HPLC純度94.3％分析HPLC保留時間11.2分HRMSC22H24FN3O+H計算值，366.19762；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，366.1978。
K.5-(1-環(huán)戊基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈產(chǎn)量0.034g烷基化試劑環(huán)戊基碘(0.057mL)分析HPLC純度100％分析HPLC保留時間10.9分HRMSC21H22FN3O+H計算值，352.18197；實(shí)驗(yàn)值(ESI，[M+H]+)，352.187；(δ＝6ppm)。
實(shí)施例7藥理學(xué)這里示例說明用來測定本發(fā)明化合物的活性的三類試驗(yàn)。
A.孕激素和抗孕激素對T47D細(xì)胞中堿性磷酸酶活性的影響(T47D堿性磷酸酶試驗(yàn))預(yù)期本發(fā)明的分子在3μM或更低的濃度下會在T47D堿性磷酸酶試驗(yàn)中以拮抗劑方式顯示活性。
1.試劑培養(yǎng)基DMEMF12(1∶1)(GIBCO，BRL)，補(bǔ)充了5％(v/v)活性炭洗提的胎牛血清(未加熱失活)、100U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)。
堿性磷酸酶試驗(yàn)緩沖液I.0.1M Tris-HCl，pH 9.8，含0.2％Triton X-100，II.0.1 M Tris-HCl，pH 9.8，含4mM磷酸對硝基苯基酯(Sigma)。
2.細(xì)胞培養(yǎng)和處理將冷凍的T47D細(xì)胞在37℃水浴中解凍，在培養(yǎng)基中稀釋至280,000細(xì)胞/mL。向96孔板(Falcon，Becton Dickinson Labware)的每孔中加入180μl稀釋的細(xì)胞懸浮液。然后每孔中加入20μl稀釋在培養(yǎng)基中的參比或試驗(yàn)化合物。當(dāng)試驗(yàn)孕激素拮抗劑活性時，在1nM的孕酮存在下加入?yún)⒈鹊目乖屑に鼗蛟囼?yàn)化合物。將細(xì)胞在37℃于5％CO2增濕的氣氛中溫育24小時。為進(jìn)行高流量篩選，各化合物將在0.3μg/mL一個濃度進(jìn)行試驗(yàn)。根據(jù)文庫中化合物的平均分子量為300g/mol，此濃度約為1μM。隨后在劑量-響應(yīng)試驗(yàn)中試驗(yàn)各活性化合物以確定EC50和IC50。
3.堿性磷酸酶試驗(yàn)在處理結(jié)束時，從板中除去培養(yǎng)基。向各孔中加入50μl試驗(yàn)緩沖液I。將板在滴定板振蕩器中搖動15分鐘。然后向各孔中加入150μl緩沖液II。在405nM的試驗(yàn)波長下每隔5分鐘測定光密度共30分鐘。
4.劑量-響應(yīng)數(shù)據(jù)分析對于參比和試驗(yàn)化合物，得到一條反映劑量-酶反應(yīng)速率(斜率)的劑量-響應(yīng)曲線。使用平方根-轉(zhuǎn)化數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析的對激動劑和拮抗劑模式非線性劑量響應(yīng)曲線擬合分析。采用Huber權(quán)重法降低異常值的影響。由再轉(zhuǎn)換的數(shù)值計算EC50和IC50值。在單劑量和劑量響應(yīng)研究中都使用JMP軟件(SAS Institute，Inc.)進(jìn)行單向方差分析和非線性劑量響應(yīng)分析。
5.參比化合物孕酮和曲美孕酮是參比的孕激素，RU 486是參比的抗孕激素。所有的參比化合物都以全劑量響應(yīng)曲線方式試驗(yàn)并計算出EC50和IC50值。
T47D細(xì)胞堿性磷酸酶試驗(yàn)
B.成熟的卵巢切除大鼠中的孕激素和抗孕激素活性(大鼠蛻膜化試驗(yàn))此試驗(yàn)用來評價孕激素和抗孕激素對大鼠子宮脫膜化的影響并比較各種試驗(yàn)化合物的相對效力。
1.方法和試劑將試驗(yàn)化合物溶在100％乙醇中并與玉米油(載體)混合。然后將混合物加熱(～80℃)蒸除乙醇，制備試驗(yàn)化合物在油(MazolaTM)中的貯備液。隨后將試驗(yàn)化合物用100％玉米油或10％的乙醇/玉米油稀釋，再用其處理動物。比較這兩種載體未發(fā)現(xiàn)蛻膜響應(yīng)有差別。
2.動物切除卵巢的成熟雌性Sprague-Dawley大鼠(約60天齡和230g)由Taconic(Taconic Farms，NY)經(jīng)手術(shù)后得到。卵巢切除在處理前至少10天進(jìn)行，以便減少循環(huán)的性甾體。將動物在12小時明/暗周期下飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)鼠食，隨意飲水。
3.處理將大鼠稱重，處理前隨機(jī)地分成4或5只一組。通過在頸背部皮下注射施加在0.2mL載液中的試驗(yàn)化合物，或用管飼法施加0.5mL。動物每天處理1次，共7天。為試驗(yàn)抗孕激素，在整個處理期間對動物施用試驗(yàn)化合物和EC50劑量的孕酮(5.6mg/kg)。一組動物只接受EC50劑量的孕酮作為正對照。
4.用藥根據(jù)每kg平均組體重的mg數(shù)配制劑量。在所有研究中，均包括一個接受載體的對照組。劑量響應(yīng)曲線的確定采用按半對數(shù)增加的劑量(例如0.1、0.3、1.0、3.0mg/kg)進(jìn)行。
5.誘導(dǎo)蛻膜在第3次注射后約24小時，通過用一只鈍的21G針頭刮擦子宮系膜對側(cè)腔上皮，在被麻醉的大鼠的一個子宮角誘發(fā)蛻膜化。對側(cè)的子宮角不被刮擦，作為未受到刺激的對照物。在第一次處理后約24小時，用CO窒息處死大鼠并測量體重。取下子宮和修整掉脂肪。分別稱量蛻膜的子宮角(D-horn)和對照的子宮角(C-horn)。
6.結(jié)果分析在激動劑模式中，利用D-horn/C-horn計算蛻膜的子宮角重量的增加，用對數(shù)轉(zhuǎn)換找到最大的方差正態(tài)性和齊性。使用Huber M估算器將劑量響應(yīng)曲線擬合和單向方差分析(ANOVA)中的異常轉(zhuǎn)換觀察值的權(quán)重下調(diào)。從轉(zhuǎn)換值計算出EC50。在拮抗劑模式中，推薦使用最大似然Box-Cox轉(zhuǎn)換進(jìn)行對原始響應(yīng)(D-horn/C-horn)的方根轉(zhuǎn)換。使用Huber權(quán)重法將對劑量響應(yīng)曲線擬合和單向ANOVA觀察到的異常轉(zhuǎn)換值權(quán)重下調(diào)。從再轉(zhuǎn)換的數(shù)值計算出IC50。對于單向ANOVA和非線性劑量響應(yīng)分析均使用JMP軟件(SAS Institute，Inc.)。
7.參比化合物所有的孕激素或抗孕激素參比化合物均以全劑量-響應(yīng)曲線方式試驗(yàn)，計算對蛻膜響應(yīng)的EC50或IC50。
C.食蟹猴月經(jīng)誘發(fā)1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計以單一劑量的形式，或以劑量響應(yīng)示例的形式，對照合適的對照物(只有載體)測定服用化合物的作用。當(dāng)化合物以單一劑量試驗(yàn)時，對該劑量使用一組4只動物。在劑量響應(yīng)研究中，每次實(shí)驗(yàn)包括最高達(dá)5組動物(一個對照組和4組用不同劑量化合物處理的動物)。實(shí)驗(yàn)組每組包括3-4只動物，因?yàn)檫@一樣本大小是文獻(xiàn)中常用的，并且根據(jù)我們自己的經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)是合適的。將動物在其月經(jīng)周期的黃體中期用試驗(yàn)化合物每天處理1或2次，共4天，以試驗(yàn)化合物對生殖參數(shù)月經(jīng)的影響。
2.步驟首先，通過觀察月經(jīng)時間對動物依據(jù)其生殖周期性進(jìn)行鑒定。只使用有兩個接連的正常周期的動物來評價試驗(yàn)化合物。每天肉眼檢查陰道出血來確定月經(jīng)。
在每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，每天用試驗(yàn)化合物以靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或口服方式對動物施用1或2次。對各給藥途徑確定合適的載體，并經(jīng)由計劃修正案來指定?？诜d體是2％Tween-80或20％Tween-80/0.5％甲基纖維素水溶液。對照動物只用載體處理。使用的最大劑量體積如下管飼10mL/kg，靜脈內(nèi)10mL/kg，皮下1.5mL/kg，肌內(nèi)0.2mL/kg。效力被定義為避孕化合物誘發(fā)的月經(jīng)提前。
3.對照實(shí)例5-(3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈在堿性磷酸酶試驗(yàn)中是PR拮抗劑(IC50＝10nm)，并且在大鼠蛻膜試驗(yàn)中很有效力(ED50＝0.2mg/kg，口服)。但在食蟹猴月經(jīng)誘發(fā)試驗(yàn)中在5mg/kg的劑量下無活性(化合物的用藥量未超過5mg/kg)。5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈在T47D堿性磷酸酶試驗(yàn)中(IC50＝3.4nm)和大鼠蛻膜試驗(yàn)中(ED50＝0.1mg/kg，口服)也具有活性。然而，在如上所述的食蟹猴月經(jīng)誘發(fā)試驗(yàn)中，它在5mg/kg(口服)的劑量誘發(fā)5只動物的4只月經(jīng)提前。
當(dāng)用5-(3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈或5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈以0.25mg/kg的劑量對食蟹猴靜脈內(nèi)施用時，測定到以下關(guān)鍵的藥物動力學(xué)參數(shù)對于5-(3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈，在動物中觀察到的平均半壽期(t1/2)為2.1小時，暴露值(AUC0-∞)為343ng*hr/mL。對于5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈(0.25mg/kg，靜脈內(nèi))，觀察到的動物內(nèi)的半壽期(t1/2)為8.8小時，暴露值(AUC0-∞)為578ng*hr/mL。因此，從以上數(shù)據(jù)顯然可見，在5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈中存在的R6＝氟基團(tuán)大大改善了分子的藥物動力學(xué)性能。這一改善的藥物動力學(xué)性能在食蟹猴月經(jīng)誘發(fā)試驗(yàn)中轉(zhuǎn)化成活性的顯著提高。
本說明書中引用的所有出版物均在本文引用作為參考。雖然已參照特別優(yōu)選的實(shí)施方案對本發(fā)明作了描述，但應(yīng)理解，可以在不偏離本發(fā)明精神的情況下進(jìn)行修改。這些修改都將包括在所附權(quán)利要求
的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物或其可藥用的鹽 其中，R1是氫，烷基，取代的烷基，環(huán)烷基，C3-C6烯基，或C3-C6炔基；R2和R3各自獨(dú)立地選自氫，烷基和取代的烷基；或者R2和R3合起來形成一個環(huán)，并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-；n是0、1、2或3；R4是氫或鹵素；R5是氫；R6是氫或鹵素；R7是氫，烷基或鹵素；R8是氫；R9是氫，烷基，取代的烷基，或COORA；RA是烷基或取代的烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中R1是氫或烷基；R2和R3合起來形成一個環(huán)，并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-；n是1或2。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中R2和R3是烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3的化合物，其中R2或R3是甲基或乙基。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中R1是氫；R2和R3是烷基；或R2和R3合起來形成一個環(huán)，并且一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-；n是0至2；R4是氫；R6是氟；R7是氫；和R9是烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求
3的化合物，其中R9是甲基或COORA，RA是叔丁基。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中該化合物是選自5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基吡咯-2-甲腈；5-(4-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7′-氟-2′-氧-1′，2′-二氫螺[環(huán)丙烷-1，3′-吲哚]-5′-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7-氟-1，3，3-三甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；2-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯；2-氰基-5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯；5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1H-吡咯-2-甲腈；[5-(5-氰基-1-甲基-1H-吡咯-2-基)-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-1-基]乙酸甲酯；5-(1-乙基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-丙-2-炔-1-基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-[7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-(2-苯基乙基)-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(1-芐基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7-氟-3，3-二甲基-2-氧-1-丙基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7-氟-1-異丁基-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(7-氟-1-異丙基-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(1-烯丙基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(1-環(huán)己基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈；5-(1-環(huán)戊基-7-氟-3，3-二甲基-2-氧-2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲腈。
8.一種藥物組合物，其中含有權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的一種化合物或其可藥用的鹽，以及一種可藥用的載體或賦形劑。
9.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物產(chǎn)生避孕作用。
10.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物提供激素替代治療。
11.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物治療激素腫瘤病。
12.權(quán)利要求
11的應(yīng)用，其中與激素有關(guān)的腫瘤病選自子宮肌瘤，子宮內(nèi)膜異位，良性前列腺肥大，子宮內(nèi)膜、卵巢、乳房、結(jié)腸、前列腺、垂體和腦膜瘤的癌和腺癌。
13.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物使所述哺乳動物的動情期同步化。
14.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物治療痛經(jīng)。
15.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物治療功能不良性子宮出血。
16.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物引發(fā)閉經(jīng)。
17.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物治療經(jīng)前綜合癥和經(jīng)前焦慮癥的癥狀。
18.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的鹽在制備對哺乳動物施用的藥物中的應(yīng)用，其中藥學(xué)有效量的該化合物治療周期相關(guān)癥狀。
19.權(quán)利要求
18的應(yīng)用，其中所述的癥狀是心理癥狀。
20.權(quán)利要求
19的應(yīng)用，其中所述的心理癥狀包括情緒變化、易怒、焦慮、不專心或性欲減退。
21.權(quán)利要求
18的癥狀，其中所述的癥狀是身體癥狀。
22.權(quán)利要求
21的應(yīng)用，其中所述的身體癥狀包括乳房壓痛、脹氣、疲勞或食物渴求。
23.權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備對生育期的女性接連施用28天的一種藥物中的應(yīng)用，按照步驟其中包括(a)第一階段的14-28個促孕劑日劑量單元，其孕激素性等于約35-100μg左炔諾孕酮；(b)第二階段的1-11個所述化合物日劑量單元，其日劑量為約2-50mg；和(c)任選的第三階段的一種可藥用的口服安慰劑日劑量單元，用于連續(xù)的28天中不服用抗孕激素、孕激素或雌激素的其余各天；其中第一、第二和第三階段的總?cè)談﹩卧扔?8。
24.權(quán)利要求
24的應(yīng)用，其中促孕劑是tanaproget。
25.權(quán)利要求
23的應(yīng)用，其中第一階段還包括按日劑量10-35μg共服一種雌激素。
26.權(quán)利要求
25的應(yīng)用，其中雌激素是炔雌醇。
27.權(quán)利要求
25的應(yīng)用，其中第一階段包括18-24天。
28.權(quán)利要求
27的應(yīng)用，其中第一階段包括21天。
29.權(quán)利要求
25的應(yīng)用，其中第二階段包括3天。
30.權(quán)利要求
25的應(yīng)用，其中第三階段包括4天。
31.一種適合每天口服的藥用試劑盒，其中包括(a)第一階段的14-21個促孕劑日劑量單元，其孕激素活性等于約35-150μg左炔諾孕酮；(b)第二階段的1-11個權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的抗孕激素日劑量單元，每個日劑量單元含有日劑量為約2-50mg的所述抗孕激素化合物；和(c)第三階段的可藥用口服安慰劑的日劑量單元；其中第一、第二和第三階段的日劑量單元的總數(shù)等于28。
32.一種制備權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物的方法，包括(a)將一種任選被取代的羥吲哚烷基化；(b)將步驟(a)的產(chǎn)物溴化；和(c)使步驟(b)的產(chǎn)物與2-氰基吡咯偶合。
33.根據(jù)權(quán)利要求
32的方法，其中被任選取代的羥吲哚具有以下結(jié)構(gòu)
34.根據(jù)權(quán)利要求
32的方法，其中步驟(a)的產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)
35.根據(jù)權(quán)利要求
32的方法，其中步驟(b)的產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)
36.根據(jù)權(quán)利要求
32的方法，其中所述的氰基吡咯具有以下結(jié)構(gòu) 或者該氰基吡咯是二異丙基氨基化鋰、硼酸三烷基酯及具有以下結(jié)構(gòu)的吡咯的反應(yīng)產(chǎn)物
37.一種制備權(quán)利要求
1的化合物的方法，包括(a)使5-溴取代的羥吲哚和含保護(hù)基團(tuán)的吡咯硼酸偶合；(b)將步驟a)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成腈；和(c)除去步驟b)的產(chǎn)物中的保護(hù)基團(tuán)。
38.根據(jù)權(quán)利要求
37的方法，其中所述的5-溴取代的羥吲哚具有以下結(jié)構(gòu)
39.根據(jù)權(quán)利要求
37的方法，其中所述的吡咯硼酸具有以下結(jié)構(gòu)
40.根據(jù)權(quán)利要求
37的方法，其中步驟(b)的產(chǎn)物具有以下結(jié)構(gòu)
41.一種制備權(quán)利要求
1的化合物的方法，包括(a)將結(jié)構(gòu)如下的任選取代的羥吡咯烷基化 其中R4是氫或鹵素；R5是氫；R6是氫或鹵素；(b)將步驟a)的產(chǎn)物溴化，形成以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中R2和R3各自獨(dú)立地選自氫，烷基和取代的烷基；或R2和R3合起來形成一個環(huán)，并一起含有-CH2-(CH2)n-CH2-；n是0，1，2或3；和(c)將步驟b)的產(chǎn)物與以下結(jié)構(gòu)的2-氰基吡咯偶合 其中R7是氫，烷基或鹵素；R8是氫；R9是氫，烷基，取代的烷基或COORA；RA是烷基或取代的烷基；或者該氰基吡咯是二異丙基氨基化鋰、一種硼酸三烷基酯和以下結(jié)構(gòu)的吡咯的反應(yīng)產(chǎn)物
42.一種在哺乳動物中避孕的方法，其中對生育期的女性施用有效量的權(quán)利要求
1至7中任一項(xiàng)的化合物。
專利摘要
提供了可作為孕酮受體拮抗劑使用的吡咯－羥吲哚衍生物及其制備方法。描述了含這些衍生物的藥物組合物及其在避孕和與激素有關(guān)的病癥中的應(yīng)用。
文檔編號C07D403/04GK1993123SQ20058002680
公開日2007年7月4日 申請日期2005年7月6日
發(fā)明者A·芬索姆, C·C·麥科馬斯, E·G·梅倫斯基, M·A·馬雷拉, J·E·弗魯貝爾, G·S·格魯布 申請人:惠氏公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan