一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種瓊膠寡糖的應(yīng)用，特別涉及一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng) 用。 (二）
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的變化和部分人的自我預(yù)防保健的意識不 強，使高血脂和脂肪肝等代謝性疾病的發(fā)病率呈上升的趨勢，致使肥胖及相關(guān)代謝性疾病 已成為全球面臨的嚴重公眾健康問題，尤其在發(fā)達及發(fā)展中國家。因此，尋找一種有效地降 血糖血脂、減肥等多功能性物質(zhì)是亟待解決的問題。
[0003] 瓊膠是一種海洋紅藻來源的多糖，主要由半乳糖和3, 6-內(nèi)醚半乳糖以a-(1，3) andP_(1，4)交替連接組成，瓊膠因其特殊的凝結(jié)特性而作為食品添加劑廣泛地應(yīng)用于食 品行業(yè)。瓊膠寡糖是瓊膠經(jīng)過酶降解或是酸降解得到的分子量相對較小的瓊膠，不僅具有 功能性低聚糖的一般特性，還具有許多普通寡糖無法替代的生理功能特性，如較強的抗癌、 抗氧化、抗炎、抗齲齒及抗淀粉老化等活性，是一種極具開發(fā)潛力的新型的海洋功能性低聚 糖。目前關(guān)于瓊膠寡糖（agaro_oligosaccharide，AOS)的研究大多處于結(jié)構(gòu)、制備工藝、抗 氧化活性和促進益生菌增長等方面，而瓊膠寡糖對血脂血糖的影響的研究未見相關(guān)報道。 (三）

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種瓊膠寡糖的新應(yīng)用，即瓊膠寡糖在制備降血脂或皮下脂肪 藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0006] 本發(fā)明提供一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明所述瓊膠寡糖分子量為5~1. 5kDa，結(jié)構(gòu)為-G_[A_G]n-，n為正整數(shù)， 0彡n彡31，G代表D-半乳糖，A代表3, 6-內(nèi)醚半乳糖。
[0008] 進一步，本發(fā)明提供一種瓊膠寡糖在制備降血脂藥物中的應(yīng)用。
[0009] 進一步，本發(fā)明還提供一種瓊膠寡糖在制備降解皮下脂肪藥物中的應(yīng)用。
[0010] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供一種瓊膠寡糖在制 備降脂藥物中的應(yīng)用，開拓了瓊膠寡糖新的應(yīng)用領(lǐng)域；本發(fā)明所述瓊膠寡糖能夠降低血糖， 降解皮下脂肪，緩解修復(fù)高脂飲食誘導的脂肪肝等問題，從而實現(xiàn)降脂減肥的功能；瓊膠寡 糖作為降脂藥物對人體無任何毒副作用，具有良好的應(yīng)用前景。 (四）
【附圖說明】
[0011] 圖1胰島素濃度變化曲線圖。
[0012] 圖2胰島素抵抗能力柱形圖。
[0013] 圖3小鼠肝臟切片照片，A-CT，B-HF，C-HFA。 (五）【具體實施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于 此：
[0015] 實施例1瓊膠寡糖的制備與分子量測定
[0016] (1)瓊膠寡糖的制備
[0017] 將10g瓊膠加入10L蒸餾水中（10mg/ml)加熱溶解后，加入lmol/LHC1水溶液 至HC1終濃度為0?lmol/L，60°C水浴加熱反應(yīng)1小時，反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中加入lmol/ LNaOH水溶液中和反應(yīng)液pH值至7,然后采用截留分子量為200~500的納濾膜過濾除鹽 后，截留液50°C減壓濃縮蒸干，獲得瓊膠寡糖8g，記為瓊膠寡糖A0,結(jié)構(gòu)為式（I)所示。
[0018]
[0019] ⑵瓊膠寡糖A0分子量的測定
[0020] 取瓊膠寡糖A0用0?lmol/LNa2S04水溶液配制5mg/ml溶液，用TSK-GEL G3000PWXL凝膠色譜柱（30cmX7. 8mm)，采用HP1260型高效液相色譜儀分析測定，流動相為 0.lmol/LNa2S04水溶液，柱溫25°C，流速0. 5ml/min，采用示差檢測器（G1362A，安捷倫公 司）和多角度激光散射儀（DOWNHeleosII，美國Wyatt公司）檢測，經(jīng)測量A0的分子量 為5~1. 5kDa，A0的結(jié)構(gòu)為-G-[A-G]n-(n為正整數(shù)，0彡n彡31，G代表D-半乳糖，A代表 3, 6-內(nèi)醚半乳糖）。
[0021] 實施例2瓊膠寡糖A0在降血脂和脂肪中的應(yīng)用 [0022] (1)治療型脂肪肝模型動物實驗
[0023] ①實驗動物及分組：選用健康20±2gICR雄鼠，購于上海斯萊克動物中心。按隨 機分組的方法將小鼠分為三組，每組六只；第一組為正常組（CT)，第二組為模型組（HF)，第 三組為實驗組（HFA)。
[0024] ②實驗方法：取20±2gICR雄鼠30只，20只喂高脂高糖飼料，其余喂正常飼料， 自由取食；6周后眼瞼取血，測定血脂，選取12只血總膽固醇> 3. 5mmol/L為脂肪肝模型小 鼠，隨機分成HF和HFA;造模成功后HF和HFA繼續(xù)以高脂高糖飼料飼養(yǎng)，CT仍以正常飼料 飼養(yǎng)；另，HFA灌胃0. 3g/mL的瓊膠寡糖A0的水溶液，每天兩次，一次0. 5mL，連續(xù)灌胃六周， CT和HF灌以等量的水；每兩周記錄體重一次。高脂高糖飼料質(zhì)量組成為：70%普通飼料， 10%豬油，10%蛋黃，8%白砂糖，2%膽固醇；普通飼料購于浙江省藥檢所。
[0025] ③小鼠檢測材料的取得和測定：a.血清：給小鼠禁食不禁水12h后，眼瞼采血 500yL全血，4°C，4000Xg離心lOmin兩次，小心取出全部血清，使用總膽固醇TCH試劑盒 (購自浙江東歐診斷產(chǎn)品有限公司，型號YZB/浙09502013)按照說明書檢測血清中的總膽 固醇；b.糖耐量和胰島素抵抗：給小鼠禁食不禁水12h后，按照3g/kg小鼠體重的量給小鼠 灌蔗糖，用血糖檢測儀測定0、30、45、60、90、120min的血糖濃度并在0、30、60min時采血，用 ELASE小鼠胰島素檢測試劑盒（杭州肯圖科技有限公司，型號CK-E20353M)檢測胰島素濃 度，并計算出胰島素抵抗為〇_15min血糖曲線下面積和胰島素曲線下面積之積，結(jié)果見圖1 和圖2 ;c.腹脂：小鼠頸椎處死后，解剖取得小鼠腹部脂肪，稱重保存；d.肝臟：取新鮮肝臟 固定在10%甲醛固定液中脫水，HE染色，切片，觀察并拍照，結(jié)果見圖3,其中A-CT，B-HF， C-HFA，其余結(jié)果見表1所示。
[0026] 表1治療型脂肪肝模型各項指標變化綜合表
[0027]
[0028] ④實驗結(jié)果：表1中數(shù)據(jù)均采用SPSS17. 0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計，表1中某些數(shù)值上 方標號"1"表示與〇'比較（?〈0.01)，"2"表示與（：1'比較（?〈0.05)，"3"表示與冊比較 (P〈0.05);由表1可以看出，a.膽固醇：HFA組膽固醇含量有降低的趨勢，與HF相比，差異 顯著（P〈0. 05)，而HF與CT相比差異極為顯著（P〈0. 01) ;b.蔗糖耐量：CT與HF的糖耐量 曲線下面積有一定的差異，可能由于個體差異太大，統(tǒng)計結(jié)果為差異不顯著；而HFA與HF相 比，基本沒有差異；c.空腹胰島素血癥：CT與HF相比差異極為顯著（P〈0.01)，與HFA相比 差異顯著（P〈〇. 05)，HFA與HF相比差異亦極為顯著（P〈0. 01) ;d.胰島素抵抗：CT與HF相 比差異極為顯著（P〈〇. 01)，與HFA相比差異顯著（P〈0. 05)，HFA與HF相比亦有顯著差異 (P〈0.05) ;e.腹脂/體重：CT與HF相比有顯著差異（P〈0.05)，HFA與HF相比亦有顯著差 異（P〈0. 05) 〇
[0029] 上述結(jié)果表明，瓊膠寡糖A0具有降低總膽固醇，空腹胰島素血癥，腹脂等降血脂、 降解脂肪功能，而對血糖的影響沒有明顯的效果。
[0030] (2)預(yù)防型高血脂模型動物實驗
[0031] ①實驗動物及分組：選用五周齡健康的C57BL/6雌鼠，購于上海斯萊克動物中心。 按隨機分組的方法將小鼠分為三組，每組六只：第一組為正常組（FCT)，第二組為模型組 (FHF)，第三組為實驗組（FHFA)。
[0032] ②實驗方法：小鼠正常飼養(yǎng)一周后，按上述方法隨機分組；FCT繼續(xù)以正常飼料飼 養(yǎng)，其余以高脂飼料（D12492,美國）飼養(yǎng)；FHFA組以4g/kg的量給小鼠灌胃0. 4g/mL的A0 水溶液，如小鼠20g，則灌以200yL、0. 4g/mL的A0水溶液，每天一次，連續(xù)灌胃八周。
[0033] ③小鼠檢測材料的取得和測定：a.血清：給小鼠禁食不禁水12h后，眼瞼采血 500yL全血，4°C，4000Xg離心lOmin兩次，小心取出全部血清，使用總膽固醇TCH試劑盒 按照說明書檢測血清中的總膽固醇；b.糖耐量和胰島素抵抗：給小鼠禁食不禁水12h后，按 照3g/kg小鼠體重的量給小鼠灌蔗糖，用血糖檢測儀測定0、30、45、60、90、120min的血糖濃 度并在0、30、60min時采血，用ELASE小鼠胰島素檢測試劑盒檢測胰島素濃度，并計算出胰 島素抵抗為〇_15min血糖曲線下面積和胰島素曲線下面積之積；c.腹脂：小鼠頸椎處死后， 解剖取得小鼠腹部脂肪，稱重保存；結(jié)果見表2所示。
[0034] 表2預(yù)防型高血脂模型各項指標綜合表 [00351
[0036] ④實驗結(jié)果：表2中數(shù)據(jù)均采用SPSS17. 0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計，表2中某些數(shù)值上 方標號"1"表示與〇'比較（?〈0.01)，"2"表示與（：1'比較（?〈0.05)，"3"表示與冊比較 (P〈0. 01)，"4"表示與HF比較（P〈0. 05);由表2可以看出，a.體重：HF與CT相比較有極顯 著差異（P〈〇. 01)，HFA與HA相比亦有極顯著差異（P〈0. 01) ;b.膽固醇：HFA組膽固醇含量有 降低的趨勢，與HF相比，差異極為顯著（P〈0.01)，而HF與CT相比差異極為顯著（P〈0.01); c.甘油三酯：CT與HF相比沒有顯著差異（P>0.05)，而HFA與HF和CT相比差異均極為顯著 (P〈0.01) ;d.低密度脂蛋白（LDL) :CT與HF相比沒有顯著差異（P>0.05)，但HFA與HF相比 有顯著差異（P〈〇. 05) ;e.腹脂/體重：CT與HF相比有顯著差異（P〈0. 05)，HFA與CT相比 亦有顯著差異（P〈〇. 05)，與HF比較卻沒有顯著差異（P>0. 05)。
[0037] 上述結(jié)果亦可看出瓊膠寡糖關(guān)于降血脂、降解皮下脂肪的功能。
【主權(quán)項】
1. 一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述瓊膠寡糖分子量為5~I. 5kDa，結(jié)構(gòu) 為-G-[A-G]n-，n為正整數(shù)，O彡n彡31，G代表D-半乳糖，A代表3, 6-內(nèi)醚半乳糖。3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為瓊膠寡糖在制備降血脂藥物中的 應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為瓊膠寡糖在制備降解皮下脂肪藥 物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng)用，所述瓊膠寡糖分子量為5～1.5kDa，結(jié)構(gòu)為-G-[A-G]n-，n為正整數(shù)，0≤n≤31，G代表D-半乳糖，A代表3,6-內(nèi)醚半乳糖；本發(fā)明提供一種瓊膠寡糖在制備降脂藥物中的應(yīng)用，開拓了瓊膠寡糖新的應(yīng)用領(lǐng)域；本發(fā)明所述瓊膠寡糖能夠降低血糖，降解皮下脂肪，緩解修復(fù)高脂飲食誘導的脂肪肝等問題，從而實現(xiàn)降脂減肥的功能；瓊膠寡糖作為降脂藥物對人體無任何毒副作用，具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61P3/06, A61K31/729, A61K31/702
【公開號】CN105168232
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】王欣, 于廣利, 陳秀霞, 尚慶森, 尹業(yè)師, 李苗苗
【申請人】浙江省農(nóng)業(yè)科學院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月10日