一種用于規(guī)模化生產(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及草莓的加工培養(yǎng)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法。
【背景技術(shù)】
[0002]草莓是薔薇科草莓屬多年生草本植物，屬于多倍體植物。草莓果實(shí)為小漿果，鮮艷亮麗，柔軟多汁，酸甜適中，芳香濃郁，是世界上七大水果之一。山東萊陽地區(qū)作為膠東第一大農(nóng)產(chǎn)品出口創(chuàng)匯城市，草莓深受青睞，近年來發(fā)展很快，栽培面積也不斷擴(kuò)大，但用做栽培的草莓苗都是無性繁殖，并隨著病毒侵染面積逐年擴(kuò)大，嚴(yán)重降低了草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。據(jù)報(bào)道，草莓被一種病毒、隱病毒侵染，產(chǎn)量可下降21?35%，兩種以上病毒復(fù)合侵染，產(chǎn)量會(huì)下降43?59%，而且果實(shí)少、品質(zhì)差，酸度增加，含糖量降低。用化學(xué)藥物對(duì)病毒病進(jìn)行防治效果甚微，故生產(chǎn)上多采用無病毒種苗來控制病毒病的蔓延。莖尖脫毒組培是獲得無病毒植株的重要途徑之一。
[0003]目前，草莓苗脫毒主要流程:采用MS培養(yǎng)基，選取田間健壯株匍匐莖尖，清洗殺菌消毒，在超凈工作臺(tái)解剖鏡下剝離莖尖，接入接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)，瓶?jī)?nèi)生根，然后移植營(yíng)養(yǎng)缽培育原原種苗，田間擴(kuò)繁原種苗，田間擴(kuò)繁良種苗，最后用于大田生產(chǎn)。為了種苗脫毒更徹底，部分研究人員利用高溫結(jié)合二次脫毒。
[0004]在此過程中，我們發(fā)現(xiàn)，配置的營(yíng)養(yǎng)劑母液用了一段時(shí)間后，出現(xiàn)了絮狀沉淀。為了不影響脫毒苗繁殖，只得倒掉，重配;另一方面，從田間或溫室采取的匍匐莖材料，在顯微鏡下莖尖剝離后，因?yàn)椴牧咸?，約0.3mm，接種到培養(yǎng)基上后，很快褐化死亡，即使添加Vc抗氧化劑也是如此。
[0005]鑒于以上情況，我們對(duì)草莓的培養(yǎng)流程做了一些改進(jìn)，以期為種苗脫毒工藝提供有益參考，提高脫毒效率，降低生產(chǎn)成本，滿足規(guī)?；旆鄙a(chǎn)要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是要提供一種用于規(guī)模化生產(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，使其可提尚草每的脫毒效率、提尚母液的利用率，節(jié)約成本，可規(guī)t旲化生廣。
[0007]為解決上述問題，本發(fā)明提供一種用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，包括以下步驟:
[0008](A)材料的選擇及初代培養(yǎng):選用健壯的匍匐莖，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面消毒0.5min，再用3%的次氯酸鈉消毒lOmin，無菌水沖洗三次，切取Icm莖尖，接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
[0009](B)莖尖脫毒:半個(gè)月后，將匍匐莖獲得的莖尖組培苗置于36°C培養(yǎng)10天，進(jìn)行第一次脫毒，繼續(xù)接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，二個(gè)月后，重復(fù)脫毒一次；
[0010](C)繼代增殖培養(yǎng):然后再將長(zhǎng)出的組培苗轉(zhuǎn)瓶于繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)；
[0011](D)生根培養(yǎng):當(dāng)苗長(zhǎng)至4一5cm后，轉(zhuǎn)瓶于生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天左右，根長(zhǎng)到4一5條，煉苗3天，種于50孔穴盤，2個(gè)月后，脫毒草莓苗可移植于大田繁殖。
[0012]培養(yǎng)環(huán)境:除莖尖脫毒階段，其余培養(yǎng)環(huán)境均為光照強(qiáng)度控制在2000— 3000LX，溫度控制在20 — 25 °C。
[0013]進(jìn)一步的，所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:改良MSH培養(yǎng)基+2mg/LBA0.lmg/L IBA+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+蒸饋水，PH5.8 ；
[0014]所述的繼代培養(yǎng)基為改良MSH培養(yǎng)基+0.3mg/L BA+0.lmg/L IBA+食用白糖30g/L+瓊脂 6g/L，PH5.8;
[0015]所述的生根培養(yǎng)基為:1/2改良MSH培養(yǎng)基+0.5mg/LIBA+食用白糖20g/L+瓊脂6g/L，PH5.80
[0016]進(jìn)一步的，所述的改良MSH培養(yǎng)基包括MS大量元素和微量元素、有機(jī)物21金維他和鐵鹽。
[0017]采用這樣的設(shè)計(jì)后，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0018]經(jīng)過改進(jìn)后的草莓種苗脫毒工藝，不僅可以使培養(yǎng)基的制作更為簡(jiǎn)單，而且不存在母液沉淀問題，同時(shí)增加了培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分，更有利于繁殖材料的增殖;而且減少了材料的褐化，在不添加任何抗氧化劑的情況下，材料的褐化率也降低了。
[0019]本發(fā)明方法在操作方法、生產(chǎn)成本等方面都明顯優(yōu)于以往的組培脫毒快繁，所建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定、周期較短，能夠滿足規(guī)?；摱究旆鄙a(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0020]本發(fā)明提供一種用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，包括以下步驟:
[0021](A)材料的選擇及初代培養(yǎng)::選用健壯的匍匐莖，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面消毒0.5min，再用3%的次氯酸鈉消毒lOmin，無菌水沖洗三次，切取Icm莖尖，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基上；
[0022](B)莖尖脫毒:半個(gè)月后，將匍匐莖獲得的莖尖組培苗置于36°C培養(yǎng)10天，進(jìn)行第一次脫毒，接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，二個(gè)月后，重復(fù)脫毒一次；
[0023](C)繼代增殖培養(yǎng):然后再將長(zhǎng)出的組培苗轉(zhuǎn)瓶于繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)；
[0024](D)生根培養(yǎng):當(dāng)苗長(zhǎng)至4一5cm后，轉(zhuǎn)瓶于生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天左右，根長(zhǎng)到4一5條，煉苗3天，種于50孔穴盤，2個(gè)月后，脫毒草莓苗可移植于大田繁殖。
[0025]培養(yǎng)環(huán)境:除莖尖脫毒階段，其余培養(yǎng)環(huán)境均為光照強(qiáng)度控制在2000— 3000LX，溫度控制在20 — 25 °C。
[0026]所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良MSH培養(yǎng)基+2mg/LBA+0.lmg/L IBA+蔗糖30g/L+瓊月旨6g/L+蒸餾水，PH5.8;
[0027]所述的繼代培養(yǎng)基為改良MSH培養(yǎng)基+0.3mg/L BA+0.lmg/L IBA+食用白糖30g/L+瓊脂 6g/L，PH5.8;
[0028]所述的生根培養(yǎng)基為:1/2改良MSH培養(yǎng)基+0.5mg/LIBA+食用白糖20g/L+瓊脂6g/L，PH5.80
[0029]所述的改良MSH培養(yǎng)基包括MS大量元素和微量元素、有機(jī)物21金維他和鐵鹽。
[0030]我們利用該工藝分別在草莓品種(美13、甜查理、甜寶、卡姆露莎)，紅薯品種(徐薯22，、煙薯25、紫薯東風(fēng)6號(hào)、濟(jì)黑I號(hào))和芋頭進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果顯示所有品種長(zhǎng)勢(shì)明顯優(yōu)于以往的培養(yǎng)體系，繁殖系數(shù)提高了 10% — 30%;剝離莖尖過程中，莖尖再?zèng)]出現(xiàn)過褐化死亡，褐化率為O。
[0031]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容做出些許簡(jiǎn)單修改、等同變化或修飾，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，其特征在于，包括以下步驟: (A)材料的選擇及初代培養(yǎng):選用健壯的匍匐莖，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面消毒0.5min，再用3 %的次氯酸鈉消毒I Omin，無菌水沖洗三次，切取I cm莖尖，接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上； (B)莖尖脫毒:半個(gè)月后，將匍匐莖獲得的莖尖組培苗置于36°C培養(yǎng)10天，進(jìn)行第一次脫毒，繼續(xù)接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，二個(gè)月后，重復(fù)脫毒一次； (C)繼代增殖培養(yǎng):然后再將長(zhǎng)出的組培苗轉(zhuǎn)瓶于繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)； (D)生根培養(yǎng):當(dāng)苗長(zhǎng)至4一5cm后，轉(zhuǎn)瓶于生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天左右，根長(zhǎng)到4一5條，煉苗3天，種于50孔穴盤，2個(gè)月后，脫毒草莓苗可移植于大田繁殖。 培養(yǎng)環(huán)境:除莖尖脫毒階段，其余培養(yǎng)環(huán)境均為光照強(qiáng)度控制在2000 — 3000LX，溫度控制在 20 — 25 °C。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，其特征在于，所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:改良MSH培養(yǎng)基+2mg/L BA+0.1mg/L IBA+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+蒸餾水，PH5.8; 所述的繼代培養(yǎng)基為改良MSH培養(yǎng)基+0.3mg/L BA+0.1mg/L IBA+食用白糖30g/L+瓊脂6g/L，PH5.8; 所述的生根培養(yǎng)基為:1/2改良MSH培養(yǎng)基+0.5mg/L IBA+食用白糖20g/L+瓊脂6g/L，PH5.8。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于規(guī)模化生產(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，其特征在于，所述的改良MSH培養(yǎng)基包括MS大量元素和微量元素、有機(jī)物21金維他和鐵鹽。
【專利摘要】本發(fā)明是有關(guān)于一種用于規(guī)?；a(chǎn)的草莓脫毒快繁的組培方法，包括以下步驟：(A)材料的選擇及初代培養(yǎng)：選用健壯的匍匐莖，在超凈工作臺(tái)上用75％的酒精表面消毒0.5min，再用3％的次氯酸鈉消毒10min，無菌水沖洗三次，切取1cm莖尖，接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(B)莖尖脫毒：半個(gè)月后，將匍匐莖獲得的莖尖組培苗置于36℃培養(yǎng)10天，進(jìn)行第一次脫毒，繼續(xù)接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，二個(gè)月后，重復(fù)脫毒一次；(C)繼代增殖培養(yǎng)：然后再將長(zhǎng)出的組培苗轉(zhuǎn)瓶于繼代培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)；(D)生根培養(yǎng)：當(dāng)苗長(zhǎng)至4－5cm后，轉(zhuǎn)瓶于生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天左右，根長(zhǎng)到4－5條，煉苗3天，種于50孔穴盤，2個(gè)月后，脫毒草莓苗可移植于大田繁殖。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105594596
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610020838
【發(fā)明人】石磊, 賀石, 沙逢源, 賀紅, 陳海華, 王建化, 陳永清
【申請(qǐng)人】石磊
【公開日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2016年1月13日