一種制備抗疲勞的中藥提取物的方法
【專利說明】
[0001] 本申請是申請人崔銀方提出的發(fā)明專利申請(發(fā)明名稱為:一種抗疲勞的中藥提 取物及其制備工藝和應(yīng)用，申請?zhí)枮椋?014103992846，申請日為：2014年8月14日）的分案申 請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明屬于中藥材提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種制備抗疲勞的中藥提取物的方法。
【背景技術(shù)】
[0003] 隨著社會的發(fā)展，生活壓力、就業(yè)壓力增加，越來越多的人在生活和工作中感到疲 勞，疲勞是一種亞健康狀態(tài)，嚴重影響生活質(zhì)量。臨床應(yīng)用于緩解體力疲勞的藥物和補品很 多，但這些品種有的含有激素，毒副作用較大，而且不方便服用。
[0004] 還亮草(Delphinium anthriscifolium Hance)，別名魚燈蘇，毛茛科翠雀屬一年 生草本。高30~70厘米；葉片菱狀卵形或三角狀卵形，2~3回羽狀全裂；總狀花序具2~15 花，花淡青紫色;朞莢果。分布于廣東，廣西，貴州，湖南，江西，福建，浙江，江蘇，安徽，河南， 山西南部。生于海拔200-1200米間丘陵或低山的山坡草叢或溪邊草地。易于種植，分布范圍 廣，有較高的藥用價值，目前被用于中風半身不遂，風濕筋骨疼痛，尚無文獻報道還亮草或 其提取物具有抗疲勞的功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種以還亮草作為原料制備的抗疲勞中藥提取物及其制 備工藝和應(yīng)用。
[0006] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗研究并不懈探索，最終獲得了如下 技術(shù)方案： 一種抗疲勞的中藥提取物，所述的中藥提取物為還亮草的甲醇浸提物。需要說明的是， 本發(fā)明所述的中藥材還亮草選用毛茛科翠雀花屬植物還亮草Delphinium anthriscifolium Hance的全草，可以為剛采摘的鮮品，也可以為曬干后的干品。
[0007] -種上述抗疲勞的中藥提取物的制備工藝，該工藝包括如下步驟:將還亮草用體 積濃度為72-78%的甲醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍干燥，即得。
[0008] 優(yōu)選地，如上所述抗疲勞的中藥提取物的制備工藝，其中所述的浸提步驟為:將還 亮草在體積濃度為72-78%的甲醇溶液中振蕩0.5-1.5h，然后在室溫下放置40-200h。
[0009] 優(yōu)選地，如上所述抗疲勞的中藥提取物的制備工藝，其中所述的濃縮步驟在42°C 以下進行。
[0010] 優(yōu)選地，如上所述抗疲勞的中藥提取物的制備工藝，其中甲醇溶液的用量為還亮 草質(zhì)量的3-6倍(v/w)。
[0011] 優(yōu)選地，如上所述抗疲勞的中藥提取物的制備工藝，其中該工藝具體包括如下步 驟:將還亮草研成粉末，浸泡于體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液中并進行振蕩0.8-1.2h， 隨后在室溫下放置60-96h后進行過濾，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，得 還亮草的甲醇浸提物。
[0012] 本發(fā)明通過設(shè)計試驗觀察小鼠負重游泳時間，檢測小鼠負重游泳后血漿中乳酸的 含量，證實了還亮草提取物具有提高小鼠運動耐力、降低運動后小鼠血清血中乳酸的作用。 本發(fā)明試驗還證明還亮草提取物組小鼠運動后肝糖元含量明顯高于空白對照組，血清尿素 氮明顯低于空白對照組，說明還亮草提取物有較好維持肝糖元含量，提高動物對運動負荷 的適應(yīng)能力?；诖搜芯拷Y(jié)果，本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制藥用途，即：上述的還 亮草提取物在制備抗疲勞的藥物中的應(yīng)用。
[0013] 疲勞最主要的表現(xiàn)是運動耐力的下降，運動耐力是反映機體疲勞最直接的指標， 運動時間的長短可反映動物運動疲勞的程度;而乳酸是機體內(nèi)糖無氧酵解的產(chǎn)物，體內(nèi)乳 酸的積累，是引起運動性疲勞的一個重要原因，而本發(fā)明涉及的中藥提取物具有提高機體 運動耐力、降低運動后機體血清血中乳酸的作用。另外，糖是肌肉組織的重要能量來源，糖 元耗竭可影響運動能力，大量的研究表明，隨著肌糖元消耗的不斷增加，肌體為維持血糖水 平，將動用肝糖元而導致肝糖元的減少。因此，肝糖元的含量是反映疲勞程度的敏感指標。 運動后肝糖元含量越高，證明抗疲勞功效越好。當糖、脂肪分解代謝不能獲得足夠能量來源 時，蛋白質(zhì)分解代謝增強并伴隨血清尿素氮產(chǎn)生增多，機體血清尿素氮含量隨運動負荷的 增加而增加，而本發(fā)明所制備的還亮草提取物具有較好維持肝糖元含量，提高動物對運動 負荷的適應(yīng)能力。
【具體實施方式】
[0014] 以下是本發(fā)明還亮草提取物干粉的制備實施例和效果試驗例，對本發(fā)明做進一步 說明。但是，本發(fā)明的保護范圍并不受限于以下實施例，凡是基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的 技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015] 實施例1還亮草提取物的制備 將Ikg還亮草干品研成粉末，浸泡于4L體積百分濃度為75%的甲醇水溶液中并進行振 蕩Ih，隨后在室溫下放置72h后進行過濾，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥， 粉碎成細粉，過100目篩，得還亮草提取物干粉。
[0016] 對比例還亮草提取物的制備 將Ikg還亮草干品研成粉末，用4L體積百分濃度為75%的甲醇水溶液加熱回流提取2 次，合并2次濾液，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細粉，過100目 篩，得還殼草提取物干粉。
[0017] 實施例2還亮草提取物對小鼠抗疲勞試驗研究 健康昆明種小鼠108只，體重18g~22g，雌雄各半。預(yù)飼7d后，隨機分為如下三組，空白 對照組、試驗A組、試驗B組，每小組36只。并進行如下灌胃處理：以體質(zhì)量為基準，空白對照 組灌胃0.9%生理鹽水，劑量為0.15ml/10g;試驗A組灌胃本發(fā)明實施例1制備的還亮草提取 物，試驗B組灌胃對比例制備的還亮草提取物，劑量均為1.72g/kg/d，每天上午9點和下午5 點左右各灌胃一次，共給藥30d。實驗期間動物自由攝食和飲水，末次灌胃前一天晚上停食。
[0018] (1)運動耐力實驗 末次灌胃后30min，各組分別隨機取12只小鼠置于游泳箱中游泳。水深40cm，水溫(25土 1)°C，距鼠尾尖Icm處，用細棉繩系5%體重的鉛皮。記錄小鼠入水至頭部全部入水持續(xù)8s不 能浮出水面為止的時間，即小鼠負重游泳時間，以此考察還亮草提取物水提物對小鼠負重 游泳時間的影響。
[0019] 還亮草提取物對小鼠負重游泳時間的影響結(jié)果見表1。根據(jù)表1的試驗結(jié)果可看 出，各組小鼠的體質(zhì)量無明顯差別，但是試驗A組小鼠負重游泳時間均高于對照組和試驗B 組，差異具有極顯著意義(P<〇.01)。這說明通過浸提得到的還亮草提取物具有延長小鼠負 重游泳時間的功效。
[0020] 表1各組小鼠體雷和負雷游泳時間比較
與空白對照組比較，·ρ<0.05，*·ρ<0.01; 與試驗B組比較，ΑΡ<0.05，▲~<0.01。
[0021 ] (2)小鼠運動后肝糖元和血清尿素測定 末次灌胃后30 min，各組分別隨機取12只小鼠，在溫度為（25±1)°C的水中不負重游 90min，休息60min后采血。拔眼球采全血（不加抗凝劑）置4 °C冰箱約3h，血凝固后，2000r/ min離心15min，取血清測定血清尿素含量。采血結(jié)束后，立即處死動物，取肝臟經(jīng)生理鹽水 漂洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟l〇〇mg，測定肝糖元含量。
[0022] 還亮草提取物對小鼠肝糖元、血清尿素含量的影響結(jié)果見表2。根據(jù)表2的試驗結(jié) 果可看出，試驗A組小鼠的肝糖元水平大幅度高于對照組和試驗B組(P<0.01)，血清尿素水 平顯著低于對照組和試驗B組(P<0.05)。這說明通過浸提得到的還亮草提取物具有提升小 鼠運動后肝糖元含量和降低小鼠運動后血清尿素含量的功效。
[0023] 表2各組小鼠運動后肝糖元和血清尿素含量比較
與空白對照組比較，*Ρ<0.05，··Ρ<0.01; 與試驗B組比較，ΑΡ<0.05，▲~<0.01。
[0024] (3)小鼠運動后血乳酸的測定 末次灌胃后30min，各組分別隨機取12只小鼠，第1次眼眶采血備用，然后在溫度為(25 ±1)°C的水中不負重游泳IOmin后，立即第2次采血，離心后取血清備用。測定游泳前后兩次 血乳酸含量。
[0025]還亮草提取物水提物對血乳酸含量的影響結(jié)果見表3。根據(jù)表3的試驗結(jié)果可看 出，通過測試小鼠運動前、運動后的血乳酸含量，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，各給藥組小鼠游泳前 血乳酸的差異不顯著(P>〇.05);然而，試驗A組小鼠游泳后O min血乳酸含量均低于對照組 (P<0.05)和試驗B組(P<0.01)。這說明通過浸提得到的還亮草提取物有抑制小鼠運動后 血乳酸增加的功效。
[0026] 表3各組小鼠運動后血乳酸含量比較
與空白對照組比較，*Ρ<0.05，··Ρ<0.01; 與試驗B組比較，ΑΡ<0.05，▲~<0.01。
[0027] 通過以上試驗發(fā)現(xiàn)，通過浸提得到的還亮草提取物具有延長小鼠負重游泳時間、 提升小鼠運動后肝糖元含量和降低小鼠運動后血清尿素含量，以及抑制小鼠運動后血乳酸 增加的功效。但是通過加熱回流提取得到的還亮草提取物不具有上述生物活性，這可能與 尚溫易破壞還殼草中抗疲勞的活性成分有關(guān)。
【主權(quán)項】
1. 一種制備抗疲勞的中藥提取物的方法，其特征在于包括如下工藝步驟:將還亮草用 體積濃度為72-78%的甲醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍干燥，即得； 所述的浸提步驟為:將還亮草用體積濃度為72-78%的甲醇溶液中振蕩0.5-1.5h，然后 在室溫下放置40-200h; 所述的濃縮步驟在42 °C以下進行； 所述甲醇溶液的用量為還亮草質(zhì)量的3-6倍v/w。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備抗疲勞的中藥提取物的方法，其特征在于:所述抗疲勞的 中藥提取物的制備工藝具體包括如下步驟：將還亮草研成粉末，浸泡于體積百分濃度為 75 %的甲醇水溶液中并進行振蕩0.8-1.2h，隨后在室溫下放置60-96h后進行過濾，將濾液 在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，得還亮草的甲醇浸提物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種制備抗疲勞的中藥提取物的方法，所述的中藥提取物為還亮草的甲醇浸提物。本發(fā)明制備的中藥提取物不僅具有提高機體運動耐力、降低運動后機體血清血中乳酸的作用，而且能夠較好維持肝糖元含量，提高動物對運動負荷的適應(yīng)能力。
【IPC分類】A61K36/71, A61P39/00
【公開號】CN105641082
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】石廷琪
【申請人】青島華之草醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2014年8月14日